 Colorantes y
coloraciones
 Altagracia Jiménez Díaz
QUE SON LOS COLORANTES ?
SON SUSTANCIAS CAPACES DE
TRANSMITIR SU COLOR A OTRAS.
02/09/15
3 Los colorantes
 Algunos colorantes teñirán mejor sólo después de que
la célula haya sido tratada con otra sust...
Colorantes y coloraciones
Clasificación Segun Estructura
Quimica
Colorantes Básicos
 Azul de metileno, azul de
quinoleína
 Verde malaquita
 Safranina
 Cristal violeta
Colorantes Ácido...
Coloraciones
SON INTERCAMBIOS
IONICOS ENTRE EL COLORANTE Y
LA BACTERIA
Coloración
 Coloración positiva: se tiñe lo que queremos observar
 Coloración negativa es cuando no se tiñe lo que
quere...
Pasos previos a toda coloración
 Hacer Frotis dejar Secar y Fijar
Frotis
Secar
Fijar
02/09/15
11 Coloración de Gram
Ideada en 1884 por Hans Christian Joachim Gram (1853-1938), un médico danés con estudios en...
02/09/15
12 Tinción Bacteriológica de Gram.

El equipo para realizar la tinción de
Gram. consta de:
         Colorantes
...
La coloración de Gram
se fundamenta en la
diferencias físico química
de la pared Celular
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Pared celular de las bacterias Gram positivas:
 El peptidoglicano se dispone en varias
capas lo que le otorga...
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15 Pared celular en bacterias Gram negativas
 El LPS es una molécula que contiene tres regiones diferentes: el
l...
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 Entre la membrana externa y la membrana celular se
crea un compartimiento virtual, llamado espacio
periplásm...
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17 Pared celular en bacterias Gram negativas
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18
Pared celular en bacterias Gram negativas
 Su pared celular es más delgada, pero más compleja que la de los
G...
Coloración de Gram
 Es positiva compuesta y diferencial
 Paso 1- Cubrir la preparación con cristal violeta por 1 minuto ...
Colorantes de Gram: Cristal violeta y safranina
Reactivos: Yodo-Lugol
Solvente: Alcohol- cetona
Resultados
Gram+ : color M...
Coloración de Gram
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22 Coloración de Gram. Paso 1.-
 Paso 1.- Cubrir la
preparación con Cristal
Violeta por 60 seg.
 y lavar suavem...
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23 Coloración de Gram.
 Paso 2.- Cubrir la
preparación con Yodo-
Lugol por 60 seg y la...
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24 Coloración de Gram.
 Paso 3.- Cubrir la
preparación con Alcohol-
Cetona durante alg...
02/09/15Altagracia Jimenez Diaz MA
25 Coloración de Gram.
 Paso 4.- Cubrir la
preparación con Safranina
por 60 seg y lava...
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Resultados de la coloración de Gram.
Bacterias teñidas de morado: Gram positivas
Teñidas de rojo: Gram negativ...
Al observar al microscopio la
coloración de Gram
 Reportamos
 La forma
 La disposición
 La capacidad
tintorial
 Se re...
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28 Coloración de Ziehl Neelsen
 La coloración de Ziehl Neelsen al igual que la de Gram es
positiva, compuesta y ...
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 Es una coloración específica para colorear bacterias cuyas
paredes celulares contienen largas cadenas de áci...
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Coloración de Ziehl Neelsen
 REALIZACIÓN
 Preparar un frotis bacteriano.
 Se deja secar al aire y se fija a...
Resultados de la coloración de
Ziehl Neelsen
02/09/15Altagracia Jimenez Diaz MA
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Tinción de ziehl neelsen
Que es la tinción de Ziehl Neelsen?
 Técnica de tinción utilizada para identificar microorganism...
procedimiento
Tinción de ZIEHL NEELSEN
 .  BAANR
Fuscina
fenicada
Decolora
ción con
alcohol
acido
Azul de
metileno
BAAR
 Tinción de la capsula bacteriana.
 Funciones de la capsula bacteriana.
02/09/15
37 Coloración de Cápsula
 La tinta china o la nigrosina dan un fondo oscuro
sobre el cual la cápsula de terminad...
02/09/15
38 Coloración de Cápsula
 Método con tinta china (Método de Gin)
 Técnica
 Colocar unas gota de la sol. De dex...
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Resultado
las capsulas se observan transparentes sobre
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  1. 1.  Colorantes y coloraciones  Altagracia Jiménez Díaz
  2. 2. QUE SON LOS COLORANTES ? SON SUSTANCIAS CAPACES DE TRANSMITIR SU COLOR A OTRAS.
  3. 3. 02/09/15 3 Los colorantes  Algunos colorantes teñirán mejor sólo después de que la célula haya sido tratada con otra sustancia química, que no es un colorante por sí mismo.  Esta sustancia se denomina mordiente; un mordiente habitual es el ácido tánico, el lugol.  El mordiente se combina con un constituyente celular y lo altera de tal modo que ahora sí podrá reaccionar con el colorante.
  4. 4. Colorantes y coloraciones
  5. 5. Clasificación Segun Estructura Quimica
  6. 6. Colorantes Básicos  Azul de metileno, azul de quinoleína  Verde malaquita  Safranina  Cristal violeta Colorantes Ácidos  Eosina  Fucsina ácida  Rosa de Bengala
  7. 7. Coloraciones SON INTERCAMBIOS IONICOS ENTRE EL COLORANTE Y LA BACTERIA
  8. 8. Coloración  Coloración positiva: se tiñe lo que queremos observar  Coloración negativa es cuando no se tiñe lo que queremos observar  Coloración simple ; se adiciona un solo colorante  Coloración compuesta si utiliza mas de un colorante  Propiedad tintorial; es el comportamiento diferente de las bacterias frente a una misma técnica de coloración  Coloración diferencial: se agrega mas de un colorante en diferentes etapas y las estructuras teñidas son diferenciadas por el color y por la forma
  9. 9. Pasos previos a toda coloración  Hacer Frotis dejar Secar y Fijar Frotis Secar Fijar
  10. 10. 02/09/15 11 Coloración de Gram Ideada en 1884 por Hans Christian Joachim Gram (1853-1938), un médico danés con estudios en bacteriología y farmacología.  La coloración de Gram. tiene interés taxonómico ya que divide las bacterias en dos grandes grupos, bacterias Gram positivas que se tiñen de morado y bacterias gram negativas que se tiñen de rojo  La coloración de Gram es positiva compuesta y diferencial.
  11. 11. 02/09/15 12 Tinción Bacteriológica de Gram.  El equipo para realizar la tinción de Gram. consta de:          Colorantes  Cristal Violeta, Safranina.  Mordiente : Yodo-Lugol           Decolorante: Alcohol-Cetona.          Bandeja de tinción.          Asa bacteriológica o hisopo.          Frasco lavador.          Muestra bacteriana sólida (agar), líquida (caldo) o espécimen clínico.
  12. 12. La coloración de Gram se fundamenta en la diferencias físico química de la pared Celular
  13. 13. 02/09/15 14 Pared celular de las bacterias Gram positivas:  El peptidoglicano se dispone en varias capas lo que le otorga grosor a la pared.  Atraviesan el peptidoglicano polisacáridos ácidos, denominados ácidos teicoicos.  Los ácidos teicoicos son de dos clases: poliglicerol fosfato y poliribitol fosfato.  Las funciones primarias de estos polímeros son la estabilización del peptidoglicano y la captura de Mg++.
  14. 14. 02/09/15 15 Pared celular en bacterias Gram negativas  El LPS es una molécula que contiene tres regiones diferentes: el lípido A, el core y el antígeno O.  El LPS constituye una endotoxina, que se libera cuando la bacteria se divide o muere.  Es un potente estimulador de los macrófagos, lo que causa la activa liberación de citoquinas, responsables de las manifestaciones clínicas de las infecciones por bacterias Gram negativas y que varían desde una fiebre hasta el shock séptico.  En esta membrana externa se encuentran las porinas.
  15. 15. 02/09/15 16  Entre la membrana externa y la membrana celular se crea un compartimiento virtual, llamado espacio periplásmico.  El espacio periplásmico es una matriz que incluye al peptidoglicano, enzimas, proteínas captadoras de nutrientes y sustancias de secreción.  La membrana externa contiene numerosas proteínas, siendo las porinas las más abundantes.  Se denominan así, porque forman poros que comunican el exterior con el espacio periplásmico.
  16. 16. 02/09/15 17 Pared celular en bacterias Gram negativas
  17. 17. 02/09/15 18 Pared celular en bacterias Gram negativas  Su pared celular es más delgada, pero más compleja que la de los Gram positivas.  El peptidoglicano se dispone en una sola capa, pero por fuera de ella se encuentra una segunda membrana denominada membrana externa.  La membrana externa es una membrana asimétrica, porque si bien la monocapa interna está formada por fosfolípidos, la monocapa exterior está formada por un tipo especial de lípido, denominado lipopolisacárido (LPS).
  18. 18. Coloración de Gram  Es positiva compuesta y diferencial  Paso 1- Cubrir la preparación con cristal violeta por 1 minuto y lavar con agua.  Paso 2- Cubrir la preparación con Yodo-Lugol por 1 minuto y lavar con agua.  Paso 3- Cubrir la preparación con Alcohol-cetona durante algunos 15 seg y lavar con agua.  Paso 4- Cubrir la preparación con Safranina por 1 minuto y la lavar con agua. Secar y observar
  19. 19. Colorantes de Gram: Cristal violeta y safranina Reactivos: Yodo-Lugol Solvente: Alcohol- cetona Resultados Gram+ : color Morado Gram- : color rojo
  20. 20. Coloración de Gram
  21. 21. 02/09/15 22 Coloración de Gram. Paso 1.-  Paso 1.- Cubrir la preparación con Cristal Violeta por 60 seg.  y lavar suavemente con agua.
  22. 22. 02/09/15Altagracia Jimenez Diaz MA 23 Coloración de Gram.  Paso 2.- Cubrir la preparación con Yodo- Lugol por 60 seg y lavar suavemente con agua.
  23. 23. 02/09/15Altagracia Jimenez Diaz MA 24 Coloración de Gram.  Paso 3.- Cubrir la preparación con Alcohol- Cetona durante algunos segundos (5-10) y lavar suavemente con agua.
  24. 24. 02/09/15Altagracia Jimenez Diaz MA 25 Coloración de Gram.  Paso 4.- Cubrir la preparación con Safranina por 60 seg y lavar suavemente con agua.  Secar y Observar con lente de 100x (inmersión).
  25. 25. 02/09/15 26 Resultados de la coloración de Gram. Bacterias teñidas de morado: Gram positivas Teñidas de rojo: Gram negativas Podemos observarle la forma, la disposición y la propiedad tintorial.
  26. 26. Al observar al microscopio la coloración de Gram  Reportamos  La forma  La disposición  La capacidad tintorial  Se requiere de un microscopio  Usamos lente de 100 X con aceite de inmersión
  27. 27. 02/09/15 28 Coloración de Ziehl Neelsen  La coloración de Ziehl Neelsen al igual que la de Gram es positiva, compuesta y diferencial.  Colorantes y Reactivos: fucsina básica fenicada - solución de alcohol-ácido (3% de HCl en etanol de 95°) - azul de metileno Esta tinción permite diferenciar a los microorganismos que son ácido alcohol resistentes, de color rojocolor rojo, de los que no lo son, dede color azulcolor azul. Se utiliza en la identificación de mycobacterias.
  28. 28. 02/09/15 29  Es una coloración específica para colorear bacterias cuyas paredes celulares contienen largas cadenas de ácidos grasos.  Por su alto contenido de acido micolico (cera no saponificable) tienen la capacidad de unir el colorante fucsina a su pared de manera que hacen a la célula resistente a la decoloración con alcohol ácido.  Son bacilos ácido-alcohol resistente (BAAR), las mycobacterias, y las nocardias.
  29. 29. 02/09/15 30 Coloración de Ziehl Neelsen  REALIZACIÓN  Preparar un frotis bacteriano.  Se deja secar al aire y se fija al calor.  Cubrir la preparación con carbofucsina.  Calentar la preparación con una lámpara de alcohol durante 5 min. No debe hervir.  Si se evapora, se añade más carbofucsina para que no se seque en ningún momento.  Lavar con agua el resto de colorante.  Decolorar con la mezcla alcohol-ácido por tres minutos  Lavar con agua .  Teñir con azul de metileno 1 min.  Lavar con agua el resto de colorante.  Secar la preparación.  Examinar al microscopio.
  30. 30. Resultados de la coloración de Ziehl Neelsen 02/09/15Altagracia Jimenez Diaz MA 31
  31. 31. Tinción de ziehl neelsen Que es la tinción de Ziehl Neelsen?  Técnica de tinción utilizada para identificar microorganismos patógenos. Del genero Mycobacteriun especies tuberculosis y leparae. Las cuales poseen abundantes ácidos micolicos y cera no saponificable Se fundamenta en la propiedad que poseen algunas células bacterianas de resistir a la decoloración con un alcohol- básico.
  32. 32. procedimiento
  33. 33. Tinción de ZIEHL NEELSEN  .  BAANR Fuscina fenicada Decolora ción con alcohol acido Azul de metileno BAAR
  34. 34.  Tinción de la capsula bacteriana.  Funciones de la capsula bacteriana.
  35. 35. 02/09/15 37 Coloración de Cápsula  La tinta china o la nigrosina dan un fondo oscuro sobre el cual la cápsula de terminados microorganismos como el Cryptococcus neoformans se observará como un halo claro alrededor del microorganismo.
  36. 36. 02/09/15 38 Coloración de Cápsula  Método con tinta china (Método de Gin)  Técnica  Colocar unas gota de la sol. De dextrosa en un tubo.  Tomar una pequeña cantidad del material bacteriológico del cultivo y mezclar con las gotas de dextrosa.  Colocar una gota de tinta china en un porta objetos y añadir una gota de la mezclar anterior y con el extremo de un portaobjetos , hacer un frotis delgado y secar al aire, fijar con alcohol metílico por un minuto.  Teñir por 2 minutos con Cristal violeta o safranina  Lavar con abundante agua, secar y observar al microscopio.
  37. 37. 02/09/15 39 Coloración de Cápsula Resultado las capsulas se observan transparentes sobre fondo negro
  38. 38. Gracias por su atención

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