Diagnóstico  de  Laboratorio de microbiología maestra Altagracia Jiménez
Pasos Importantes Precedentes al Diagnóstico <ul><li>Elección  de la muestra apropiada </li></ul><ul><li>Obtención  adecua...
Enfoques del trabajo de Laboratorio <ul><li>Observación  al microscopio luego de la tinción </li></ul><ul><li>Obtención de...
Hemocultivos <ul><li>Sospecha de septicemia, endocarditis, osteomielitis, meningitis o neumonía. </li></ul><ul><li>Podemos...
Hemocultivos <ul><li>Se necesitan: </li></ul><ul><li>3 muestras de sangre de 10 ml en 24 H </li></ul><ul><li>Se agregan 10...
Cultivo Exudado faríngeo <ul><li>Difteria, faringitis gonococcica o aftas </li></ul><ul><li>Podemos Encontrar: </li></ul><...
Cultivo de Esputo <ul><li>Neumonía, tuberculosis y absceso pulmonar </li></ul><ul><li>Podemos Encontrar: </li></ul><ul><li...
Liquido Cefalorraquídeo (LCR) <ul><li>Meningitis, encefalitis, abscesos cerebrales y empiemas subdurales </li></ul><ul><li...
Liquido Cefalorraquídeo (LCR) <ul><li>Meningitis Sub-Aguda </li></ul><ul><li>Podemos Encontrar: </li></ul><ul><li>Mycobact...
Cultivo de Heces <ul><li>Estos se practican en personas con gastroenteritis. </li></ul><ul><li>Los patógenos bacterianos m...
Medios de cultivos  <ul><li>Para cultivar salmonella y shigella se usan: </li></ul><ul><li>MacConkey. SELECTIVO </li></ul>...
shigella  salmonella campylobacter   campylobacter jeuni
Urocultivos <ul><li>Los cultivos de orina se efectúan cuando se sospecha de pielonefritis o cistisis. </li></ul><ul><li>La...
E. coli Streptococcus faecalis
Cultivo de Exudado genital. <ul><li>Los cultivos de exudado de vía genitales se llevan a cabo en forma primaria en muestra...
Neisseriaea gonorrhoeae treponema pallidum
Cultivo de heridas y Abscesos <ul><li>Gran variedad de microorganismos intervienen en heridas infectadas y abscesos. </li>...
Bacteroides fragilis . Staphylococcu  aureus
Antígeno, Antisuero, Anticuerpo <ul><li>Antigeno  (da lugar a la formacion de aticuerpos) </li></ul><ul><li>Anticuerpos </...
Identificación de  Microorganismos Mediante Antisueros <ul><li>Reacción de  Hinchazón Capsular  (Quellum ng) </li></ul><ul...
<ul><li>Reacción de  Contra inmuno electroforesis </li></ul><ul><ul><li>S. Pneumoniae </li></ul></ul><ul><ul><li>H. Influe...
Identificación de Anticuerpos en Suero mediante uso de Antígenos   Conocidos   <ul><li>Aglutinación  en Portaobjetos o Tub...
Bacilos Gram Negativos  que afectan las Vías Respiratorias
Haemophilus Influenzae <ul><li>Enfermedad:  Meningitis, otitis media y neum onía </li></ul><ul><li>Característica : Son ba...
Enfermedades infecciosas asociadas con especies de  Haemophilus Enfermedad Especies más frecuentes Muestras Meningitis H. ...
<ul><li>Diagnostico de laboratorio:  Frotis teñido  por Gram mas agar chocolate enriquecido con factor X y V. En suero o l...
<ul><li>Estos factores se encuentran en el interior de los hematíes . Es por esto HAEMOPHILUS = atracción por la sangre </...
Legionella Pneumophila <ul><li>Enfermedades:  Neumonía Atípica o enfermedad del legionario. </li></ul><ul><li>Característi...
Bordetella Pertussi Enfermedades: Tos ferina.  Características:  bacilos Gram negativos pequeños Hábitat y transmisión:  e...
<ul><li>Diagnostico de Laboratorio:  Frotis teñido por Gram y cultivo en agar Bordet-Gengou, las pruebas serológicas no so...
Bibliografía <ul><li>Enciclopedia Cumbre, novena ediccion. Madrid: España </li></ul><ul><li>Biblioteca de Consulta Microso...
Bibliografía <ul><li>Secretaría de Estado de Salud Pública y Asistencia Social. Programa Nacional de la Tuberculosis.  Mód...
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Diagnóstico de laboratorio de microbiologia ajimenez

  1. 1. Diagnóstico de Laboratorio de microbiología maestra Altagracia Jiménez
  2. 2. Pasos Importantes Precedentes al Diagnóstico <ul><li>Elección de la muestra apropiada </li></ul><ul><li>Obtención adecuada de la muestra evitando contaminación de la Flora Normal </li></ul><ul><li>Transporte rápido de la muestra al laboratorio </li></ul><ul><li>Entrega de la información esencial </li></ul>
  3. 3. Enfoques del trabajo de Laboratorio <ul><li>Observación al microscopio luego de la tinción </li></ul><ul><li>Obtención del cultivo puro por inoculación </li></ul><ul><li>Identificación del Microorganismo mediante reacciones bioquímicas </li></ul><ul><li>Determinar su sensibilidad a varios antibióticos </li></ul><ul><li>“ Algunos procedimientos bacteriológicos se hacen por pruebas serológicas que determinan la presencia de anticuerpos específicos.” </li></ul>
  4. 4. Hemocultivos <ul><li>Sospecha de septicemia, endocarditis, osteomielitis, meningitis o neumonía. </li></ul><ul><li>Podemos Encontrar: </li></ul><ul><li>cocos Gram positivos </li></ul><ul><ul><li>Estafilococo aureus </li></ul></ul><ul><ul><li>Estreptococo pneumoniae </li></ul></ul><ul><li>Bacilos Gram negativos </li></ul><ul><ul><li>E. Coli </li></ul></ul><ul><ul><li>Klebsiella Neumoniae </li></ul></ul><ul><ul><li>Pseudomonas aeruginosa </li></ul></ul>
  5. 5. Hemocultivos <ul><li>Se necesitan: </li></ul><ul><li>3 muestras de sangre de 10 ml en 24 H </li></ul><ul><li>Se agregan 100 ml de un medio de cultivo enriquecido con infusión de cerebro corazón. </li></ul><ul><li>Se observa por turbidez o producción de CO2 por 7 días o mas </li></ul>
  6. 6. Cultivo Exudado faríngeo <ul><li>Difteria, faringitis gonococcica o aftas </li></ul><ul><li>Podemos Encontrar: </li></ul><ul><li>Estreptococos beta hemolíticos Grupo A. </li></ul><ul><li>Se necesitan: </li></ul><ul><li>Hisopo para obtener muestras de la faringe, amigdalas y fosa tonsilar </li></ul><ul><li>Inocular este material en agar sangre de carnero, haciendo estrias </li></ul><ul><li>24 H de incubación a 35° C </li></ul><ul><li>Disco de bacitracina, para determinar microorganismos del grupo A. </li></ul>
  7. 7. Cultivo de Esputo <ul><li>Neumonía, tuberculosis y absceso pulmonar </li></ul><ul><li>Podemos Encontrar: </li></ul><ul><li>Estreptococos pneumoniae </li></ul><ul><li>Bacilo Klebsiella pneumoniae </li></ul><ul><li>Se necesitan: </li></ul><ul><li>Muestra de Esputo en Agar Sangre de carnero (revela colonias características y se identifica con pruebas serológicas o bioquímicas) </li></ul><ul><li>Frotis de la muestra teñido con Gram </li></ul><ul><li>Inducción de esputo, aspirado transtraqueal, lavado bronquial o biopsia pulmonar (con este se evita la flora normal). </li></ul>
  8. 8. Liquido Cefalorraquídeo (LCR) <ul><li>Meningitis, encefalitis, abscesos cerebrales y empiemas subdurales </li></ul><ul><li>Podemos Encontrar: </li></ul><ul><li>Nesseria Meningitidis </li></ul><ul><li>Haemophilus Influenzae </li></ul><ul><li>Estreptococcus pneumoniae </li></ul><ul><li>Se necesitan: </li></ul><ul><li>Prueba de quellung </li></ul><ul><li>Inmunofluorescencia con antisueros específicos </li></ul><ul><li>Agar sangre </li></ul><ul><li>Agar chocolate </li></ul><ul><li>35° C y atmósfera 5% CO2 </li></ul><ul><li>Agregar hematina nicotinamida adenina dinucleotido (determina H. Influenzae) </li></ul>
  9. 9. Liquido Cefalorraquídeo (LCR) <ul><li>Meningitis Sub-Aguda </li></ul><ul><li>Podemos Encontrar: </li></ul><ul><li>Mycobacterium Tuberculosis </li></ul><ul><li>Cryptococcus neoformans </li></ul><ul><li>Se necesitan: </li></ul><ul><li>Tinción Por Acido Resistentes del LCR (posible no observar M. Tuberculosis) </li></ul><ul><li>Se cultiva y las placas se dejan por un mínimo de 6 semanas </li></ul><ul><li>C. neoformans, levadura en forma de yemas con capsula notable </li></ul><ul><li>Tinción de India en LCR </li></ul><ul><li>Prueba Inmunológica, detecta presencia de anfígenos capsulares en LCR, se identifica N. meningitidis, S. Pneumoniae, H. Influenzae, Estreptococo grupo B, C. Neumoformans </li></ul><ul><li>Análisis mas comunes: Aglutinación de partículas de caucho y contrainmunoelectroforesis. </li></ul>
  10. 10. Cultivo de Heces <ul><li>Estos se practican en personas con gastroenteritis. </li></ul><ul><li>Los patógenos bacterianos mas frecuentes causan diarrea como son: </li></ul><ul><li>Shigella. </li></ul><ul><li>Salmonella </li></ul><ul><li>Campylobacter </li></ul><ul><li>E. Coli </li></ul><ul><li>El examen Microscópico se hace de dos formas: </li></ul><ul><li>Tinción con azul metileno. </li></ul><ul><li>Tinción de Gram. </li></ul>
  11. 11. Medios de cultivos <ul><li>Para cultivar salmonella y shigella se usan: </li></ul><ul><li>MacConkey. SELECTIVO </li></ul><ul><li>Agar eosina azul de metileno (EMB). SELECTIVO </li></ul><ul><li>TSI </li></ul><ul><li>Suero contra antigeno O. </li></ul>
  12. 12. shigella salmonella campylobacter campylobacter jeuni
  13. 13. Urocultivos <ul><li>Los cultivos de orina se efectúan cuando se sospecha de pielonefritis o cistisis. </li></ul><ul><li>La causa mas común por la cual ocurren infecciones urinarias son por: </li></ul><ul><li>E. Coli. </li></ul><ul><li>Enterobacter. </li></ul><ul><li>Proteus. </li></ul><ul><li>Streptococcus faecalis. </li></ul><ul><li>Para hacer esta determinación: </li></ul><ul><li>Asa calibrada. </li></ul><ul><li>Diluciones. </li></ul><ul><li>Escrutinio. </li></ul>
  14. 14. E. coli Streptococcus faecalis
  15. 15. Cultivo de Exudado genital. <ul><li>Los cultivos de exudado de vía genitales se llevan a cabo en forma primaria en muestras tomadas de pacientes con escurrimiento genital anormal y/o infectados con enfermedades de transmisión sexual. </li></ul><ul><li>Las bacterias Patógenas mas importantes son: </li></ul><ul><li>Neisseria gonorrhoeae. </li></ul><ul><li>El Diagnostico de LAB. es por examen microscópico de un frotis teñido con Gram. y por cultivo. </li></ul><ul><li>Treponema pallidum. </li></ul><ul><li>No puede cultivarse de modo que se hace con microscopio y serología. </li></ul>
  16. 16. Neisseriaea gonorrhoeae treponema pallidum
  17. 17. Cultivo de heridas y Abscesos <ul><li>Gran variedad de microorganismos intervienen en heridas infectadas y abscesos. </li></ul><ul><li>Los abscesos de cerebro , pulmones y abdomen a menudo se relacionan con anaerobios como: </li></ul><ul><li>Bacteroides fragilis. </li></ul><ul><li>Cocos Gram. Positivos (Staphylococcus aureus y Streptococcus pyogenes). </li></ul><ul><li>Clostridium perfringens (Heridas traumáticas). </li></ul><ul><li>Staphylococcuaureus (Heridas quirúrgicas). </li></ul><ul><li>Pasteurella multocida , Rabdovirus ( mordedura de perro) </li></ul>
  18. 18. Bacteroides fragilis . Staphylococcu aureus
  19. 19. Antígeno, Antisuero, Anticuerpo <ul><li>Antigeno (da lugar a la formacion de aticuerpos) </li></ul><ul><li>Anticuerpos </li></ul><ul><ul><li>Bacteriolisinas </li></ul></ul><ul><ul><li>Opsoninas </li></ul></ul><ul><ul><li>Aglutininas </li></ul></ul><ul><ul><li>Precipitinas </li></ul></ul><ul><ul><li>Hapteno o Bloqueante </li></ul></ul><ul><li>Antisuero (contiene anticuerpos – Inmunidad Pasiva) </li></ul>
  20. 20. Identificación de Microorganismos Mediante Antisueros <ul><li>Reacción de Hinchazón Capsular (Quellum ng) </li></ul><ul><ul><li>S. Pneumoniae </li></ul></ul><ul><ul><li>H. Influenzae tipo B </li></ul></ul><ul><ul><li>N. Meningitidis Grupos A y B </li></ul></ul><ul><li>Prueba de Aglutinación en Porta Objetos </li></ul><ul><ul><li>Salmonella </li></ul></ul><ul><ul><li>Shigella </li></ul></ul><ul><li>Aglutinación de Latex </li></ul><ul><ul><li>Varias especies de Estreptococcus </li></ul></ul><ul><ul><li>Cryptococcus Neoformans </li></ul></ul><ul><ul><li>H. Influenzae tipo B </li></ul></ul><ul><ul><li>N. Meningitidis </li></ul></ul>
  21. 21. <ul><li>Reacción de Contra inmuno electroforesis </li></ul><ul><ul><li>S. Pneumoniae </li></ul></ul><ul><ul><li>H. Influenzae </li></ul></ul><ul><ul><li>N. Meningitidis </li></ul></ul><ul><ul><li>Estreptococcus Grupo B </li></ul></ul><ul><li>Análisis Inmunosorbente con Enzima Enlazada ( ELISA ) </li></ul><ul><ul><li>Infecciones Bacterianas </li></ul></ul><ul><ul><li>Infecciones Virales </li></ul></ul><ul><ul><li>Infecciones Micoticas </li></ul></ul><ul><li>Pruebas con Anticuerpo Fluorescente </li></ul><ul><ul><li>Anticuerpo Antinuclear </li></ul></ul>
  22. 22. Identificación de Anticuerpos en Suero mediante uso de Antígenos Conocidos <ul><li>Aglutinación en Portaobjetos o Tubo </li></ul><ul><ul><li>Fiebre Tifoidea </li></ul></ul><ul><ul><li>Peste </li></ul></ul><ul><ul><li>Leptospirosis </li></ul></ul><ul><li>Pruebas Serológicas para Sífilis </li></ul><ul><ul><li>Sin Treponema (VDLR, RPR) </li></ul></ul><ul><ul><li>Treponémicas (Usan T. Pallidum) prueba FTA-ABS , TPI. </li></ul></ul><ul><ul><ul><li>Se cultiva el antígeno en testículos de conejo </li></ul></ul></ul><ul><ul><ul><li>Se inhibe el movimiento de las espiroquetas </li></ul></ul></ul>
  23. 23. Bacilos Gram Negativos que afectan las Vías Respiratorias
  24. 24. Haemophilus Influenzae <ul><li>Enfermedad: Meningitis, otitis media y neum onía </li></ul><ul><li>Característica : Son bacilos o cocobacilos Gram negativos, pequeños e inmóviles, Exclusivo de los humanos La forma más virulenta es la Haemophilus influenzae capsulada tipo b (Hib), por su componente capsular polirribosol-ribitol-fosfato (PRP)*. </li></ul><ul><li>Puede adoptar dos formas encapsulada y no encapsulada. </li></ul><ul><li>Requiere de dos factores para su crecimiento: </li></ul><ul><ul><li>Factor X (protoporfirinas) </li></ul></ul><ul><ul><li>Factor V (nicotinamida adenina dinucleótido  NAD) </li></ul></ul>
  25. 25. Enfermedades infecciosas asociadas con especies de Haemophilus Enfermedad Especies más frecuentes Muestras Meningitis H. Influenzae tipo b LCR, sangre Epiglotitis Sangre, secreciones laríngeas Faringitis aguda, laringotraqueobronquitis Hisopado o secreciones laríngeas Neumonía Esputo, aspirados traqueales, lavados bronquiales Bacteriemia Sangre Otitis media H. influenzae no tipificable Drenaje conducto auditivo, miringotomía Bronquitis Esputo, aspirados traqueales, lavados bronquiales Sinusitis aguda H. influenzae no tipificable H. parainfluenzae Aspirado senos paranasales Tracto genital, obstétricas, perinatales Uretrales, endocervicales, sangre, LCR Conjuntivitis, fiebre purpúrica brasileña H. influenzae var aegyptus Hisopado conjuntival Endocarditis H. aphrophilus H. papaphrophilus H. parainfluenzae Sangre Chancro blando H. ducreyi Hisopado ulceral y endocervical, aspirado bubones
  26. 26. <ul><li>Diagnostico de laboratorio: Frotis teñido por Gram mas agar chocolate enriquecido con factor X y V. En suero o liquido cefalorraquideo puede identificarse un antigeno capsular </li></ul><ul><li>En el Agar Chocolate, las colonias que se desarrollan, son lisas, humedas, transparentes u opacas, convexas y pueden producir un olor caracteristico debido a la produccion de Indol. Las cepas capsuladas tienen apariencia brillante y mucosa. </li></ul>
  27. 27. <ul><li>Estos factores se encuentran en el interior de los hematíes . Es por esto HAEMOPHILUS = atracción por la sangre </li></ul><ul><li>Como necesitan medios de cultivos enriquecidos se les denomina bacterias exigentes. </li></ul><ul><li>Hábitat Y transmisión: forman parte de la flora, naso-oro-faringea normal y se transmiten mediante gotitas respiratorias </li></ul><ul><li>Tratamiento: Ampicilina y Cloramfenicol para la meningitis. Ceftriaxona o Cefuroxima contra la resistencia </li></ul><ul><li>Prevención: Vacuna Hib, Rifampicina </li></ul><ul><li></li></ul>Especie Hemólisis Factor X Factor V Glucosa Sacarosa Lactosa Manosa H. influenzae – + + + – – –
  28. 28. Legionella Pneumophila <ul><li>Enfermedades: Neumonía Atípica o enfermedad del legionario. </li></ul><ul><li>Características: </li></ul><ul><ul><li>Bacilos Gram Negativos </li></ul></ul><ul><ul><li>Proliferan en medios enriquecidos con hierro y cisteina </li></ul></ul><ul><li>Hábitat y transmisión : Vias respiratorias superiores; se trasmite por las micro gotitas de saliva de una persona a otra. </li></ul><ul><li>Patogenia: solo tiene endotoxinas, no se conocen toxinas, enzimas o factores de virulencia. </li></ul><ul><li>Diagnstico de Laboratorio: frotis teñido con impregnación argéntica o anticuerpo fluorescente, cultivo en agar carbon extracto de levadura con hierro y cisteina. </li></ul><ul><li>Tratamiento: Eritromicina </li></ul><ul><li>Prevención: no se dispone vacuna para su tratamiento. </li></ul>
  29. 29.
  30. 30. Bordetella Pertussi Enfermedades: Tos ferina. Características: bacilos Gram negativos pequeños Hábitat y transmisión: en las vías respiratorias humanas y se trasmite por micro gotitas respiratorias Patogenia: produce 2 toxinas: toxina pertussis, que estimula la adenilactociclasa; y adenilactociclasa extracelular, que inhibe la lisis por facocitosis. Posee fimbrias con proteinas hematoglutinantes, que ayudan a la adherencia al epitelio respiratorio
  31. 31. <ul><li>Diagnostico de Laboratorio: Frotis teñido por Gram y cultivo en agar Bordet-Gengou, las pruebas serológicas no son útiles </li></ul><ul><li>Tratamiento: Eritromicina </li></ul><ul><li>Prevención: La vacuna contiene microorganismos Lisados, tiene efectos secundarios como lesión cerebral, que puede limitar su uso. Se suministra a niños en la combinación de DPT, en combinación con toxoides diftéricos y tetánicos. </li></ul>
  32. 32. Bibliografía <ul><li>Enciclopedia Cumbre, novena ediccion. Madrid: España </li></ul><ul><li>Biblioteca de Consulta Microsoft ® Encarta ® 2005. © 1993-2004 Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos. </li></ul><ul><li>http://es.wikipedia.org/wiki/Protozoo&quot; </li></ul><ul><li>www.primer.ru/std/gallery_std/mycoplasmaceae.htm </li></ul><ul><li>http://es.wikipedia.org/wiki/Protozoo </li></ul><ul><li>www.dp-c.nl/artikel_11.htm </li></ul><ul><li>www.homeoint.org/.../infinitesimal.htm </li></ul><ul><li>iws.ccccd.edu/.../media_SD_list_page.htm </li></ul><ul><li>www.google.com </li></ul><ul><li>Warrem E.Levimson Ernest Jawetz, Microbiología e inmunológica </li></ul><ul><li>Jawetz. Melnich Adelberg: Microbiología Médica </li></ul>
  33. 33. Bibliografía <ul><li>Secretaría de Estado de Salud Pública y Asistencia Social. Programa Nacional de la Tuberculosis. Módulo de capacitación en la aplicación de la estrategia DOTS/TAES en República Dominicana. Módulo 2: Detección, diagnóstico y tratamiento. P35. Santo Domingo, Julio 2002. </li></ul><ul><li>Secretaría de Estado de Salud Pública y Asistencia Social. Dirección Nacional de Laboratorios. Manual de Normas y procedimientos bacteriológicos para Laboratorios. Santo Domingo. </li></ul><ul><li>Departamento de Laboratorio clínico _Microbiológica </li></ul><ul><li>Hospital de Clínicas Facultad de Medicina Monte video Uruguay. </li></ul><ul><li>Manual de toma de muestras para estudio Bacteriológico, </li></ul><ul><li>Parasitológico y Micológico 2004 </li></ul><ul><li>Joaquín Hiciano Francisca. Manual de microbiología Universidad </li></ul><ul><li>Autónoma de Santo Domingo. </li></ul>
  34. 34. GRACIAS!

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