Medios de cultivo_y_metodos_de_siembra

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Medios de cultivos

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Medios de cultivo_y_metodos_de_siembra

  1. 1. Altagracia JiménezAltagracia Jiménez DíazDíaz Medios de Cultivo yMedios de Cultivo y Métodos de SiembraMétodos de Siembra 1
  2. 2. 2
  3. 3. Medios de Cultivo Formula básica de los medios de cultivo  Clasificación de los medios de cultivo  Métodos de siembra Clasificación de los métodos de siembra Técnicas de siembra 3
  4. 4. Los medios de cultivo son una mezcla equilibrada de nutrientes que en concentraciones adecuadas y con condiciones físicas óptimas permiten un buen crecimiento de los microorganismos. 4
  5. 5. 5
  6. 6. 6
  7. 7. Un medio de cultivo es un sustrato o solución de nutrientes en los que crecen y se multiplican los microorganismos en el laboratorio, con el objeto de aislar diferentes especies bacterianas, proceder a su identificación y llevara cabo una serie de estudios complementarios. 7
  8. 8. Los sustratos energéticos y la materia orgánica sintética (sustratos como proteínas derivados de la celulosa, etc.) pueden suministrarse por sustancias nutritivas contenidas en la maceración de carne y vísceras. Los aminoácidos o péptidos los aportan las peptonas, que contienen todos los productos de degradación de las proteínas, sin vitaminas, y su composición exacta varía según el tipo de sustrato y enzima utilizados, como pepsina, tripsina, papaína, entre otras. Los factores de crecimiento se suministran por maceración y adición de sangre, suero, extracto de levadura, líquido ascítico, etc 8
  9. 9. 9
  10. 10. 10
  11. 11. Los medios de cultivo se clasifican en dos grandes grupos 1.-1.- Medios de cultivo vivos o animados, formado por células vivas; huevo embrionario para el desarrollo de microorganismos muy exigentes (Virus, Chlamydias, Rickettsias). 2.-2.- Medios de cultivo muertos o inanimados, formados por mezclas de sustancias nutritivas para el desarrollo de microbios menos exigentes (Bacterias, Hongos); éstos crecen en medios vivos pero no como una exigencia. 11
  12. 12. l.l. Líquidos.Líquidos. Contienen los nutrientes antes citados, a los cuales se les adiciona una sustancia capaz de mantener el pH adecuado. Entre los más empleados están: el caldo nutritivo y el caldo peptona. Los medios de cultivo pueden clasificarse según su consistencia en: 12
  13. 13. 2. Sólidos.Sólidos. Se obtienen agregando agar, sustancia polisacárida e inerte obtenida de algas marinas del género Gellidium, en una concentración de 1,5 a 2,0%, a un medio líquido determinado. Este conjunto, debidamente esterilizado, se vierte en una caja de Petri o en un tubo de ensayo. Las exigencias nutritivas y las condiciones fisicoquímicas son similares a las de los medios líquidos. Pero a diferencia de ellos, ofrecen la posibilidad de obtener colonias aisladas, siempre que la cantidad del inóculo esté suficientemente diluida. En este caso se observa la existencia de colonias separadas unas de otras. 13
  14. 14. 3.3. Semisólidos.Semisólidos. Son muy semejantes a los medios sólidos, con la diferencia que a estos se les disminuye la concentración del agar agregado a 0,5%. Se utilizan para la conservación de cepas bacterianas y la observación y registro de bacterias móviles . 14
  15. 15. Los medios sintéticos o químicamente definidos: son medios compuestos por productos químicos conocidos y se usan para estudios metabólicos. Ejemplo: agar nutritivo, agar blando, caldo nutritivo, agar eosina azul de metileno, etc. Los medios naturales o químicamente no definidos: son aquellos medios preparados a partir de sustancias naturales animales o vegetales, de composición no rigurosamente constante. Ejemplo: el suero, la leche, la papa, etc. 15
  16. 16. Según su composición y utilización los medios de cultivo se clasifican en: Agar nutritivo 16
  17. 17. Agar sangre 17
  18. 18. Medio de Mac Conkey 18
  19. 19. Eosina Azul de metileno 19
  20. 20. 20
  21. 21. 21
  22. 22. Medio de Stuart 22
  23. 23. 23
  24. 24. Asas Y Agujas Se utilizan para pescar transportar y sembrar el material bacteriológico. Se esterilizan en el mechero al rojo vivo antes y después de las siembras bacteriológicas. 28/08/15 24
  25. 25. El resultado lógico de una siembra, si las condiciones son apropiadas, es el desarrollo de un cultivo microbiano. Las siembras se ejecutan con asas o agujas de platino generalmente. En ocasiones se emplean hisopos de algodón estériles, pipetas, de acuerdo al tipo de estudio a realizar. Para desarrollar una bacteria invitro hay que proporcionarle : 1.Nutrientes con los medios de cultivos que requieran. 2.La atmósfera apropiada 3.La temperatura optima, entre otros. 25
  26. 26. 26
  27. 27. Siembra por diluciónSiembra por dilución El asa o aguja de platino cargados con el material a sembrar se introduce en el seno de los medios de cultivo líquidos y se agita moderadamente. El propósito es el de producir una dilución uniforme del material bacteriológico en el medio líquido o caldo. 27
  28. 28. Métodos De Siembra Medio: Líquidos o caldos Instrumento: Asa Método: Dilución Finalidad: poner la bacteria en suspensión Medio: Líquidos o caldos Instrumento: Asa Método: Dilución Finalidad: poner la bacteria en suspensión 28/08/15 28
  29. 29. Siembra por picaduraSiembra por picadura La aguja de platino con el material a sembrar en su punta se introduce el fondo de los medios semi-sólidos, como si se tratara de una punción de los mismos. La aguja se retira por el mismo trayecto que formó cuando penetró, evitando en lo posible los deslizamientos laterales del alambre. El sitio de penetración en el medio debe ser el centro de su superficie libre. El propósito es sembrar las bacterias solamente en el trayecto que crea la aguja. Es utilizado para demostrar la movilidad de las bacterias. 29
  30. 30. Métodos De Siembra Medio: Semisólido Instrumento: Aguja Método: Punción o Picadura Finalidad: observar la Movilidad. Si crece en la línea de siembra es inmóvil. Si crece fuera de la línea de siembra es móvil Medio: Semisólido Instrumento: Aguja Método: Punción o Picadura Finalidad: observar la Movilidad. Si crece en la línea de siembra es inmóvil. Si crece fuera de la línea de siembra es móvil 28/08/15 30
  31. 31. Siembra por estrías en superficieSiembra por estrías en superficie Se puede realizar con la aguja o con el asa, preferentemente con ésta última, en la superficie de los medios sólidos. Estos medios están incluidos en tubos de ensayo y su superficie se dispone inclinado con respecto al eje mayor de los tubos. La estría se comienza en la parte más profunda de la superficie y se termina en la parte más cercana a la boca del tubo. La línea quebrada que resulta no debe quedar ni muy cerrada ni muy abierta. La superficie del medio se aprisiona delicadamente porque de otra forma se rompe y la siembra se deteriora. 31
  32. 32. 28/08/15 32 MÉTODOS DE SIEMBRA Medio: Sólido en tubo Inclinado. Instrumento: Asa o aguja Método: Estría en superficie
  33. 33. Siembra porSiembra por embadurnamientoembadurnamiento Se practica con hisopos estériles. pero puede hacerse también con varillas de cristal, asas o agujas de platino. El propósito es embadurnar la superficie del medio, produciendo una película sobre el mismo. 33
  34. 34. Siembra por estrías por agotamiento en laSiembra por estrías por agotamiento en la superficiesuperficie de placa (para aislar colonias).de placa (para aislar colonias). Mediante este método, las bacterias procedentes de un material puro o mixto, son dispersadas y agotadas en cantidad en forma progresiva sobre la superficie de un medio sólido. El propósito es que las bacterias se siembren aisladas unas de otras y crezcan formando colonias separadas que más tarde se puedan "pescar“ para realizar cultivos puros y otras pruebas adecuadas, siempre se ejecuta sobre medios contenidos en placas de Petri, preferentemente con asa de platino. 34
  35. 35. 35
  36. 36. 28/08/15 36 MÉTODOS DE SIEMBRA Medio de cultivo: TSI Método: Punción y estrías en superficie. Instrumento: Aguja Finalidad: Observar los reacciones (cambios) que ocurren en la superficie y la Profundidad.
  37. 37. 28/08/15 37 Interpretación: Lectura De TSIInterpretación: Lectura De TSI • Amarillo (A): ácido (utilizo el azúcar) • *Rojo (K): alcalino (no utiliza el azúcar) • *Negro: presencia de H2S (H2S+) • *Burbujas o vacíos, con levantamiento del medio: • presencia de H2 + CO2 • H2 + CO2+ • Precipitado negro = H2S • Amarillo (A): ácido (utilizo el azúcar) • *Rojo (K): alcalino (no utiliza el azúcar) • *Negro: presencia de H2S (H2S+) • *Burbujas o vacíos, con levantamiento del medio: • presencia de H2 + CO2 • H2 + CO2+ • Precipitado negro = H2S
  38. 38. TECNICA DE BARRY: siembra previa al vertido del medio en la placa. Para ello se mantiene el medio de cultivo a una temperatura de 45 a 50 ºC; se toman de 20 a 25 ml en un tubo de ensayo y se le adiciona una cantidad de inóculo que oscila entre 0,1 y 0,4 y se homogeneíza la muestra en el tubo mediante un vibrador; a continuación se vierte en la placa de Petri y se deja solidificar. 38
  39. 39. TECNICA DE LOS 4 CUADRANTES: con un rotulador indeleble se dibujan dos líneas perpendiculares en la base de la placa (reverso), que se deben cruzar en el centro de la placa, de forma que esta queda dividida en cuatro cuadrantes iguales. Se toma con el asa de siembra una cantidad de inóculo y se adiciona al extremo superior de uno de los cuadrantes, extendiéndose por todo ese cuadrante en forma de zig-zag. Se realiza la misma operación si flamear en todos los cuadrantes siguiendo un orden, de tal forma que iremos arrastrando el microorganismo problema, observándose en el último cuadrante las colonias más aisladas o separadas. 39
  40. 40. TECNICA DE LOS 3 GIROS : se rotula la placa de forma análoga al caso anterior; se toma inóculo con el asa y se siembra por estría la mitad superior de la placa. Sin flamear se gira la placa unos 90º y se vuelve a sembrar una segunda vez. Se gira de nuevo la placa unos 90º y se repite la operación completándose la siembra. No es una técnica muy utilizada porque no permite buenos aislamientos. 40
  41. 41. Texto:Texto: Microbiología básica para el área de la salud y afines. 2.a edición Hugo Humberto Montoya Villafañe Imágenes :Imágenes : http://www.sciencephoto.com/media/206305/enlarge http://www.medisur.sld.cu/index.php/medisur/announcement/view/7445 http://www.elika.net/consumidor/es/preguntas_patogenos.asp http://www.lookfordiagnosis.com/mesh_info.php? term=Medios+De+Cultivo&lang=2 http://www.biocen.cu/producto/indicemc/veccs1.jpg http://www.flickr.com/groups/microbiolabstraining/pool/23822998@N08/ 41
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