La implantación de las BPL y el aseguramiento de la calidad, obliga a normalizar todas las operaciones que se realizan en el laboratorio. Por ellos se sugiere la unificación de procedimientos e instrucciones de trabajo que proporcione uniformidad y consistencia a los análisis y en este caso, a los recuentos empleados como técnica para cuantificar microorganismos y disminuir los riesgos de error por parte de personas que realizan el ensayo.

1. Andrés Felipe Sabogal Osorio
METODOS DE
RECUENTO

2. La expresión de resultados para cada
método se debe clasificar dependiendo si es
un recuento en medio solido o medio
liquido.
• En el medio solido se deberá considerar el
numero de colonias en total y en el medio
liquido se calculara empleando el NMP.

3. RECUENTO EN PLACA
Es la técnica directa mas utilizada en el
mundo, debido a su confiabilidad y
facilidad, siendo una herramienta
importante en la cuantificación de
microorganismos presentes en una
muestra.

4. • Para considerar un recuento se debe
contar mínimo con 15 colonias y máximo
300.
• En caso de tener varias diluciones dentro
del rango, estas deben ser consecutivas.
• Para un resultado mas confiable se
deberán hacer las siembras mínimo por
duplicado

5. • Para el conteo debe evitarse hacer
estimaciones de las poblaciones
empleando el método de división de caja.
• En caso de tener cajas contaminadas se
deben descartar.
• El resultado obtenido al contar por
segunda vez las colonias de una caja
determinada debe presentar:

6. 1. Una diferencia máxima del 5% en caso
de haber realizado el recuento la misma
persona.
2. Una diferencia máxima del 10 % en caso
de que el recuento lo haya realizado otra
persona.

7. • Los resultados obtenidos mediante
formulas se deben redondear a dos cifras
significativas.
• El resultado de los microorganismos se
expresa por gramo en caso de que el
análisis se practico a una muestra solida y
mililitro para una muestra liquida

8. • La expresión de incontable, solo se debe
limitar a cajas que debido a su
concentración de colonias impide su
recuento, si en todas las diluciones
sembradas sucede esto implica que no se
realizaron las diluciones correctas

9. • N=_____∑C__________
V (n1+0,1*n2)*d
N: Número de microorganismos por gramo o mililitro
C = es la suma de las colonias contadas en todas las cajas de
Petri que contienen 2 diluciones sucesivas, donde por lo
menos una de ellas contiene 15 colonias como mínimo.
V= es el volumen del inóculo aplicado en cada caja en
mililitros
n1 = el número de cajas retenidas en la primera dilución
n2 = el número de cajas retenidas en la segunda dilución
d = es el factor de dilución correspondiente a la primera
dilución retenida.

10. • Ejemplo
10-1: Caja 1: incontable Caja 2: Incontable.
10 -2: Caja 1: 168 Caja 2: 215
10 -3 : Caja 1: 14 Caja 2: 25
N=168+215+14+25 = 422 = 19182
(2+(0.1*2))*10-2 0.022
Rta :19x 103 UFC/g o ml de la muestra analizada.

11. • Recuento a colonias inferiores a 15
N= ___∑C ___
V*n * d
10-1: Caja 1: 318 Caja 2: 302
10 -2: Caja 1: 12 Caja 2: 13
N= 12+13 = 25 = 1250
1*2*10-2 0.02
Rta: 12 x 102 UFC/g o ml de la muestra analizada.

12. CALCULO DEL RECUENTO ESTÁNDAR EN
PLACA ESTIMADO
• En caso en el que ninguna de las cajas
tenga el rango, el valor se da como el
recuento estándar en placa estimado. La
caja con mayor dilución se le realizaran
divisiones radiales ( máximo 8) y se
contaran las colonias en la sección radial
seleccionada.

14. • En caso de que hacer un conteo
estimado en 1/8 de la caja y este
supere las 200 colonias se informara
como >1600 de la dilución empleada.

15. • Ejemplo
10-1: Caja 1: >1600 Caja 2: >1600(descartada)
10 -2: Caja 1: >1600 Caja 2: >1600(descartada)
10 -3 : Caja 1: >1600 Caja 2: >1600
• Resultado
>1600x103 = >16x105 UFC/g o ml de la
muestra analizada, Conteo estimado.

16. METODO TRADICIONAL
• Para este método la cantidad de colonias
deben estar en el rango establecido por el
ensayo, se promedia y se informa teniendo
en cuenta el inverso de la disolución
empleada.

17. • Si una sola dilución esta dentro del rango
se deberá promediar y multiplicar por el
inverso de la dilución. Se deberá
multiplicar por 10 en el caso de utilizar la
técnica de recuento en superficie debido
a que el volumen sembrado es de 0,1 ml.

18. 10-1: Caja 1: 310 Caja 2: 324.(incontable)
10 -2: Caja 1: 156 Caja 2: 152
10 -3 : Caja 1: 15 Caja 2: 26 (incontable)
Resultado:156 +152 /2 : 154
PROFUNDIDAD: 154x 103: 15 x 103 UFC/g o
ml de la muestra analizada
SUPERFICIE: 15 x 104 UFC/g o ml de la
muestra analizada

19. • Si dos diluciones se encuentran dentro del
rango se promedian y se les adicionan los
ceros de la dilución respectiva. Luego se
debe hacer una división entre la mas
diluida sobre la mas concentrada.

20. Si el valor de esta división da mayor a 2 se
tomara la dilución mas concentrada, por el
contrario si da menor de 2 se hará un
promedio de los resultados de las dos
diluciones dentro del rango y se informara

21. 10-1: Caja 1: 280 Caja 2: 280
10 -2: Caja 1: 31 Caja 2: 33
10 -3 : Caja 1: 3 Caja 2: 2 (incontable)
PROMEDIOS
10-1 :280X 101: 2800
10-2:32X102::3200
DIVISIÓN
3200/2800: 1.14 < 2: PROMEDIO
2800+3200/2:
Resultado 30x 102 UFC/g o ml

22. GOTAS EN SUPERFICIE
• Es empleado con fines experimentales ya
que este método, disminuye la cantidad
de medio y cajas de Petri. No solo es mas
usado por motivos económicos, también
tiene algunas ventajas comparadas con el
método estándar.

23. • Se puede emplear con medios opacos
• Se puede emplear para microorganismos
que se inactivan con el calor debido al agar
fundido
• Se deben emplear volúmenes de 0,02 a 0,1
ml
• El rango de conteo debe estar entre 20 y
80 colonias

24. • Ejemplo
• (Inoculo de 0,02ml) se debe tomar la caja
entre el rango, en caso de tener replica
se deberá hacer promedio, el resultado
se multiplica por el inverso de la dilución
empleada. Posteriormente se ajustara a
un volumen de 1ml y se multiplicara por
el factor de corrección

25. • 10-1: Caja 1: incontable Caja 2: Incontable.
• 10 -2: Caja 1: 168 Caja 2: 215
• 10 -3 : Caja 1: 33 Caja 2: 35
•
• 33+35=34x 103 UFC/0,02
• Factor de corrección
• 34x 50 x 103=17x105 UFC/g o ml de la muestra
analizada
Factor de corrección