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La Biopsia embrionaria es una técnica que se utiliza en los laboratorios de reproducción asistida con el ánimo de mejorar la eficacia de los procesos de fecundación in vitro. Actualmente, entre las razones que hacen difícil apreciar el beneficio verdadero de esta técnica es su heterogeneidad metodológica, por lo que se pretende describir y valorar su utilidad a la luz de los conocimientos existentes.

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Biopsia Embrionaria Aspectos Técnicos

  1. 1. A R T Í C U L O S Junio 2007 Vol. 12 • Nº1 17 Biopsia Embrionaria “Aspectos Técnicos” Embryo Biopsy “Technical Aspects” Juan Manuel Moreno Unidad de Reproducción Hospital Clínica Vistahermosa de Alicante. e-mail:lab@urvistahermosa.com RESUMEN La Biopsia embrionaria es una técnica que se utiliza en los laboratorios de reproducción asistida con el ánimo de mejorar la eficacia de los procesos de fecundación in vitro. Actualmente, entre las razones que hacen difícil apreciar el beneficio verdadero de esta técnica es su heterogeneidad metodológica, por lo que se pretende describir y valorar su utilidad a la luz de los conocimientos existentes. Palabras clave: Biopsia embrionaria, transferencia embrionaria, ácido Tyrode, DGP. ABSTRACT The Embryo Biopsy is a technique that is used in the Assisted Reproduction Laboratories with the spirit to improve the efficacy of the In vitro fertilization cycles. At the moment, between the reasons that make difficult to appreciate the true benefit of this technique is its methodological heterogeneity, reason why it is tried to describe and to value his utility to the light of the existing knowledge. Key words: Embryo biopsy, embryo transfer, Tyrode´s acid, PGD. INTRODUCCIÓN La biopsia embrionaria es una técnica mente utilizada no sólo en parejas genéticas o adquiridas (Verlinsky et que consiste en extraer una o dos cé- portadoras de enfermedades genéti- al., 2007), aunque algunas de estas lulas de un embrión en división para cas hereditarias, anomalías cromosó- indicaciones no están exentas de po- analizarlas genéticamente (diagnósti- micas o enfermedades monogénicas lémica tanto desde el punto de vista co genético preimplantacional, DGP) (Renwick and Ogilvie, 2007) sino de su utilidad como desde la ética y así poder seleccionar aquellos em- también para aumentar las tasas de (Coulam et al., 2007; Kuliev and briones libres de una determinada al- implantación en parejas de fecunda- Verlinsky, 2005; Munné et al., 2006; teración genética antes de ser trans- ción in vitro de mal pronóstico (Kuliev Patricio et al., 2007; Twisk et al., feridos al útero. El resultado posibilita and Verlinsky, 2005) tales como pa- 2006). la identificación de anomalías en es- cientes de edad materna avanzada tadios previos a la implantación, evi- (Rubio et al., 2005), con fallos de im- VALORACIÓN DE LOS MÉTODOS DE tando el desarrollo de anomalías ge- plantación (Caglar et al., 2005), abor- REALIZACIÓN DE BIOPSIA néticas y previniendo el aborto espon- tos previos (Munné et al., 2006) o fac- táneo provocado por estas. tor masculino (Donoso et al., 2006). Según la literatura existente, es acon- Incluso, se han incorporado otras in- sejable realizar la microinyección in- La combinación de estos dos proce- dicaciones como la detección de de- tracitoplasmática (ICSI) para generar sos, biopsia y posterior estudio gené- terminados tipos de cáncer (Davis et los embriones que se vayan a biopsiar, tico, surgió en 1990 como alternativa al., 2006), enfermedades degenerati- ya que la ausencia de espermatozoi- al diagnóstico prenatal en parejas con vas y tipaje de HLA para transplante des y células de la granulosa adheri- un elevado riesgo genético de células madre procedentes de das a la zona pelúcida, presentes du- (Handyside et al., 1990). sangre de cordón umbilical en niños rante una fecundación in vitro conven- Actualmente, es una técnica amplia- afectos de patologías hematológicas, cional (FIV), evitarían riesgos de con-
  2. 2. A R T Í C U L O S Juan Manuel Moreno. Biopsia Embrionaria... 18 taminación durante el análisis genéti- el análisis genético. De hecho en un ejecutar, no de muy buenos resultados co posterior (Lissens and Sermon, estudio (Evsikov and Verlinsky, 1998) debido a que el pequeño orificio que 1997; Sermon et al., 1998). donde se biopsiaron células proce- se crea por la aguja de disección, pro- dentes de la masa celular interna del duzca la posterior estrangulación del Hay estudios que demuestran que blastocisto se observó un porcentaje blastocisto cuando intenta eclosionar la biopsia embrionaria en la etapa de elevado de blastocistos con mosaicis- (Cohen et al., 1990). Otro método me- 8 células. mo. Mas recientemente, Coulam cánico, con resultados prometedores es (Coulam et al., 2007) ha demostrado el piezo-micromanipulador que consiste la presencia de un 75% de embriones en un sistema de vibración de alta fre- con una situación de mosaico, discor- cuencia que rompe la zona pelúcida. Sin dantes cuando se hace biopsia de dos embargo su inconveniente principal es células y estudio cromosómico de las que al igual que el láser es un método mismas mediante FISH en día tres; costoso (Nakayama et al., 1999). aunque un tercio de estos embriones anómalos se autocorrigen (Munné et En otro estudio también prospecti- al., 2005) no se puede excluir, en es- vo randomizado (Jones et al., 2006) tos casos, la posibilidad de una diso- donde se evaluó el método químico mía uniparental. Además, hay un es- con ácido de Tyrode y el láser en el tudio experimental para la beta-talase- desarrollo del blastocisto, ambos mé- mia (Kokkali et al., 2007) que sugiere todos dieron un resultado similar al no que la biopsia del trofoectodermo pue- encontrar diferencias significativas en no es perjudicial para el desarrollo Embrión humano en el estadio de 8 células de ser más ventajosa que la biopsia del la proporción de blastocistos obteni- posterior del blastocisto debido a que embrión en división con respecto al re- dos. El método químico, aunque re- el índice mitótico es más alto, com- sultado del diagnóstico al obtener una quiere entrenamiento previo, tiene la pensando así con mayor rapidez la cé- tasa de implantación del 47,6% frente ventaja de estar al alcance de cual- lula perdida y además, la ausencia de al 26,7% procedente de la biopsia y quier laboratorio (Moreno and López, compactación en los embriones per- análisis efectuado en día 3. 2006a) pero debemos tener cuidado mite que dicho estadio celular sea el con el ácido pues corremos el riesgo idóneo para realizar el proceso (Hardy Para poder extraer la célula del de que un volumen excesivo dañe al- et al., 1990; Cieslak-Janzen et al., embrión es necesario realizar previa- guna célula de los embriones. Por otro 2006). mente la eclosión asistida que consis- lado, el láser endurece el área de la te en crear, de manera artificial, un zona pelúcida expuesta (Malter et al., Al parecer, si se extrae una célula orificio en la zona pelúcida del em- 2001), pudiendo dificultar la posterior en el estadio de cuatro células, duran- brión. En la literatura hay descritos va- aspiración de la blastómera. Sin em- te el desarrollo del blastocisto se redu- rios métodos (mecánicos, químicos, bargo, las ventajas de utilizar el láser ce la relación de la masa celular inter- con láser) y cada laboratorio usa uno frente al ácido de Tyrode son la veloci- na con el trofoectodermo (Tarín et al., u otro dependiendo de la experiencia dad y precisión en su ejecución, no es 1992). No obstante, los embriones en del embriólogo que lo realiza y la dis- tóxico y puede que se constituya como el estadio de 6 u 8 células presentan ponibilidad técnica. En cualquier método de elección al reducir la expe- un cierto grado de compactación de- caso, el proceso requiere mucho cui- riencia técnica necesaria para llevarla a bido a la formación de uniones celula- dado en su ejecución para que no se cabo (Joris et al., 2003). En otras pala- res calcio-dependientes. Esto se pue- produzca la lisis de alguna de las cé- bras, puede estandarizar una técnica de solucionar utilizando un medio que lulas del embrión y reste posibilidades que actualmente no está normalizada. bloquee las uniones entre las células de éxito. Además, se ha valorado si la (Dumoulin et al., 1998) y permita rea- eclosión asistida provocaba algún Varios estudios relacionan el tama- lizar la extracción de forma correcta. efecto perjudicial en los embriones y ño del orificio en la zona pelúcida con Sin embargo, para algunos autores se demostró que la técnica no afecta el incremento de la frecuencia de ge- esto puede provocar la despolariza- en la tasa de anomalías cromosómicas melos monocigóticos (Hershlag et al., ción de las células interfiriendo en el en los nacidos vivos (Ma et al., 2006). 1999; Schieve et al., 2000) por lo que desarrollo posterior del embrión se aconseja no realizar aberturas muy (Antczak and Van Blerkom, 1999; Un estudio prospectivo randomiza- pequeñas que puedan causar la her- Edwards and Beard, 1997; Tarín and do (Makrakis et al., 2006) que compa- niación del blastocisto. Handyside, 1993). Otra posibilidad es raba los métodos mecánicos y el láser Tampoco son recomendables las realizar la biopsia en la etapa de blas- dio como resultado una tasa de im- aberturas muy grandes ya que se co- tocisto, en los días 5 y 6 de desarrollo. plantación significativamente más alta rre el riesgo de la salida de algún blas- Se obtendría un mayor número de cé- en el grupo del láser, además de una tómero que comprometa la capacidad lulas que permitiría una mayor fiabili- tasa de embarazo a término mayor de desarrollo del embrión. La abertura dad en el diagnóstico aunque se dis- aunque no significativa. Puede que el del orificio debe ser aproximadamente ponga de menos tiempo para realizar método mecánico, aunque fácil de _ partes el diámetro del blastómero a
  3. 3. A R T Í C U L O S Junio 2007 Vol. 12 • Nº1 19 biopsiar. sión negativa al aspirar posteriormen- observando diferencias significativas te el blastómero. A continuación, se en la tasa de implantación posterior Una vez realizado el orificio, la cé- acerca la micropipeta a la abertura de (Van de Velde et al., 2000; Parriego et lula puede extraerse mediante aspira- la zona pelúcida, se expulsa ligera- al., 2003), aunque hay autores que re- ción del blastómero o desplazamiento mente medio para expandir la abertu- comiendan extraer dos células para del mismo, sea con líquido o ejercien- ra que bloquearemos con ayuda de la evitar un posible error de diagnóstico do presión con la micropipeta contra micropipeta. Posteriormente, se aspi- (Coulam et al, 2007). Sin embargo, en la zona pelúcida. Nosotros, al igual ra el blastómero de forma suave, reali- este estadio se activa el genoma em- que la mayoría de los centros, biopsia- zando un movimiento de arriba para brionario (Tarín and Handyside, 1993; mos utilizando la aspiración con líqui- abajo, de tal manera que éste pueda Fraude et al., 1988; Mottla et al., do (Moreno and López, 2006b) pues adaptarse a la luz de la micropipeta y 1995) y la aspiración de dos células se controla mejor el proceso sin llegar no se rompa. Para ello, se debe pre- afectaría a dicha diferenciación pu- a dañar la célula extraída ni al embrión sionar el blastómero al tiempo que lo diendo dar lugar a blastocistos con biopsiado (Cieslak-Janzen et al., aspiramos poco a poco una menor proporción en el número 2006). de células de la masa celular interna y del trofoectodermo, comprometiendo Para realizar el proceso de biopsia así su capacidad de implantación. es necesario usar un medio suple- A veces, es necesario separar la mentado con un 10% de HSA para micropipeta intentando arrastrar el Los resultados de un ciclo de DGP evitar que el embrión y el blastómero blastómero hacia el exterior del em- también van a estar influenciados por extraído se fijen a la placa. Además, brión pero en este caso hay que evitar el número de embriones que se pue- debe llevar como solución amortigua- la aspiración porque se corre el riesgo dan analizar en cada caso. Por ello, dora HEPES que impida cambios de hay grupos que aconsejan cancelar pH durante la realización de la técni- aquellos ciclos en los que se espera ca, e incluso carecer de Ca y Mg para obtener menos de 6 ovocitos, ya que bloquear las uniones entre los blastó- las expectativas de transferencia y meros del embrión y así favorecer la embarazo se reducen considerable- extracción. No obstante, es recomen- mente pues no todos los ovocitos se dable que el embrión no esté más de fecundan, ni todos los embriones son 10 minutos en estos medios ya que aptos para realizar el proceso pueden comprometer el desarrollo in (Vandervorst et al., 1998; Platteau, vitro posterior. 2006). Incluso, durante el proceso al- gún embrión puede dañarse acciden- La biopsia embrionaria se puede talmente, comprometiendo así su des- efectuar con ayuda de un microinyec- arrollo. tor pero nosotros utilizamos un siste- Durante la biopsia se debe presionar el de lisis. Una vez extraído el blastóme- ma bucal blastómero al tiempo quepróximo al em- ro, se deja en el medio lo aspiramos poco a poco. brión. COMENTARIOS FINALES de fabricación propia que nos permite Por último, se devuelve el embrión realizar el proceso de una forma rápi- biopsiado a la placa de cultivo hasta La incorporación de la biopsia em- da, económica y controlada (Moreno obtener el diagnóstico. brionaria a los Laboratorios de and López, 2006b). Mediante acción Fecundación in vitro y posterior estu- controlada con la boca, se aspira en el El número de células a extraer de dio genético parece mejorar en el re- interior de la micropipeta la cantidad cada embrión va a depender de la ca- sultado general de los programas de lidad del embrión a biopsiar y del aná- reproducción asistida pues favorece un embarazo sano evolutivo con un menor gasto psicológico, fisiológico, e incluso económico. Es una técnica ampliamente utilizada no sólo en pa- rejas con cariotipo alterado (Renwick and Ogilvie, 2007) sino también para aumentar las tasas de implantación en parejas de fecundación in vitro de mal pronóstico (Kuliev and Verlinsky, 2005; Rubio et al., 2005; Caglar et al., 2005; Munné et al., 2006; Donoso et al., 2006). Incluso, se han incorpora- suficiente de medio que evite la pre- lisis genético que se vaya a realizar, no do otras indicaciones como la detec- Sistema bucal de fabricación para biopsia Blastómero una vez biopsiado embrionaria
  4. 4. A R T Í C U L O S Juan Manuel Moreno. Biopsia Embrionaria... 20 ción de determinados tipos de cáncer gene expression first occurs betwe- Edwards R, Beard H. Oocyte polarity (Davis et al., 2006), enfermedades de- en four-and eight- cell stages of and cell determination in early mam- generativas y tipaje de HLA para trans- preimplantation development. malian embryos. Mol Hum Reprod plante de células madre procedentes Nature 1988; 332:459-62. 1997; 3:863-905. de sangre de cordón umbilical en ni- ños afectos de patologías hematológi- Caglar GS, Asimakopoulos B, Evsikov S, Verlinsky Y. Mosaicism in cas, genéticas o adquiridas (Verlinsky Nikolettos N, Dietrich K, Al-Hasani the inner cell mass of human blas- et al., 2007). S. Preimplantation genetic diagnosis tocysts. Hum Reprod 1998; for aneuploidy screening in repeated 13:3151-5. Sin embargo, a la luz de los últimos implantation failure. Reprod Biomed estudios, el beneficio real del DGP es Online 2005; 10:381-88. Handyside AH, Kontogianni EH, Ardí materia de controversia. En un meta- K, Winston RM. Pregnancies from análisis realizado por Twisk y colabora- Cieslak-Janzen J, Tur-Kaspa I, biopsied human preimplantation dores (Twisk et al., 2006) se ha con- Ilkevitch Y, Bernal A, Morris R, embryos sexed by Y-specific DNA am- cluido que en los casos de edad mater- Verlinsky Y. Multiple micromanipu- plification. Nature 1990; 344:768-70. nal avanzada, fallos repetidos de FIV, lations for preimplantation genetic abortos de repetición y factor masculi- diagnosis do not affect embryo de- Hardy K, Martin KL, Leese HJ, Winston no su eficacia sigue siendo confusa. velopment to the blastocyst stage. RM, Handyside AH. Human preim- De hecho, los datos disponibles para la Fertil Steril 2006; 85:1826-29. plantation development in vitro is not edad maternal avanzada no demostra- adversely affected by biopsy at the ron ninguna diferencia en las tasas de Cohen J, Elsner C, Kort H, Malter H, 8-cell stage. Hum Reprod 1990; embarazo evolutivo y nacido vivo. Por Massey J, Mayer MP, et al. 5:708-4. tanto, concluían que hasta que no se Impairment of the hatching process demuestre un beneficio significativo following IVF in the human and im- Hershlag A, Paine T, Cooper GW, debemos evitar su uso rutinario. provement of implantation by assis- Scholl GM, Rawlinson K, Kvapil G. ted hatching using micromanipula- CONCLUSIÓN Monozygotic twinning associated tion. Hum Reprod 1990; 5:7-13. with mechanical assisted hatching. La biopsia embrionaria y posterior Fertil Steril 1999; 71:144-6. Coulam CB, Jeyendran RS, Fiddler M, estudio genético son claramente útiles Pergament E. D Discordance para la selección de embriones con sin among blastomeres renders preim- Jones AE, Wright G, Kort HI, Straub RJ, Nagy enfermedades monogénicas y en el ti- plantation genetic diagnosis for ZP. Comparison of laser-assisted hatching paje de HLA para obtener embriones aneuploidy ineffective. J Assist and acidified Tyrode's hatching by evalua- compatibles con hermanos que tengan Reprod Genet 2007; 24:37-41. tion of blastocyst development rates in si- algunas enfermedades hematológicas bling embryos: a prospective randomized susceptibles de recibir trasplantes. Davis T, Song B, Cram DS. trial. Fertil Steril 2006; 85:487-91. Preimplantation genetic diagnosis Sin embargo, en parejas de fecun- of familial adenomatous polyposis. Joris H, de Bos A, Janssens R Devroey P, dación in vitro de mal pronóstico debe- Reprod Biomed Online 2006; Liebaers I, Van Steirteghem A. Comparison mos ser cautos y hacer una correcta 13:707-11. of the results of human embryos biopsy and selección de los casos que se van a be- outcome of PGD alter zona drilling using neficiar del estudio genético. Además, Donoso P, Platteau P, Papanikolaou acid Tyrode médium or a laser. Hum el avance de la técnica debe ir unido al EG, Staessen C, Van Steirteghem A, Reprod 2003; 18:1986-92. desarrollo de los aspectos profesiona- Devroey P. Does PGD for aneuploidy Kokkali G, Traeger-Synodinos J, les, éticos, legales y sociales que ase- screening change the selection of Vrettou C, Stavrou D, Jones GM, guren una accesibilidad, seguridad y embryos derived from testicular Cram DS, et al. Blastocyst biopsy equidad en los procedimientos. sperm extraction in obstructive and versus cleavage stage biopsy and BIBLIOGRAFÍA non-obstructive azoospermic men? blastocyst transfer for preimplanta- Hum Reprod 2006; 21:2390-5. tion genetic diagnosis of beta-tha- Antczak M, Van Blerkom J. Temporal lassaemia: a pilot study. Hum and spatial aspects of fragmentation Dumoulin JCM, Bras M, Coonen E, Reprod 2007; 22:1443-9. in early human embryos: possible ef- Dreesen J, Geraedts JPM, Evers fects on developmental competence JLH. Effect of Ca2+/Mg free me- Kuliev A, Verlinsky Y. Preimplantation and association with the differential dium on the biopsy procedure for diagnosis: a realistic opcion for assis- elimination of regulatory proteins preimplantation genetic diagnosis ted reproduction and genetic practi- from polarized domains. Hum and further development of human ce. Curr Opin Obstet Gynecol 2005; Reprod 1999; 14:429-47. embryos. Hum Reprod 1998; 17:179-83. 13:2880-3. Braude PR, Bolton V, Moor S. Human Lissens W, Sermon K. Preimplantation
  5. 5. A R T Í C U L O S Junio 2007 Vol. 12 • Nº1 21 genetic diagnosis: current status and manipulator for morphologically low- tards cleavage. Fertil Steril 1992; new developments. Hum Reprod quality embryos in poor-prognosis in- 58:970-6. 1997; 12:1756-61. fertile patients. Fertil Steril 1999; 71:1014-18. Tarín JJ, Handyside AH. Embryos biopsy Ma S, Rowe T, Yuen BH. Impact of as- strategies for preimplantation diagnosis. sisted hatching on the outcome of in- Parriego M, Solé M, Vidal F, et al. One- Fertil Steril 1993; 59:943-52. tracytoplasmic sperm injection: a or two-cell biopsy; does it affect im- prospective, randomized clinical trial plantation potencial in PGD? TWIN- and pregnancy follow-up. Fertil Steril Meeting Alpha-Andrology; 2003, P- Twisk M, Mastenbroek S, van Wely M, 2006; 85:895-900. 31. Heineman MJ, Van der Veen F, Repping S. Preimplantation genetic Makrakis E, Angeli I, Agapitou K, Patrizio P, Bianchi V, Lalioti MD, screening for abnormal number of Pappas K, Dafereras A, Pantos K. Gerasimova T, Sakkas D. High rate chromosomes (aneuploidies) in in vi- Laser versus mechanical assisted hat- of biological loss in assisted reproduc- tro fertilisation or intracytoplasmic ching: a prospective study of clinical tion: it is in the seed, not in the soil. sperm injection (Review). The outcomes. Fertil Steril 2006; 86:1596- Reprod Biomed Online 2007; 14:92- Cochrane Library 2006; 1:1-16. 1600. 5. Van de Velde H, De Vos A, Sermon K, Malter H, Schimmel T, Calderón G, Cohen Platteau P, Staessen C, Michiels A, Staessen C, De Rycke M, Van J. Use of Lasers in assisted Reproduction. Van Steirteghem A, Liebaers I, Annual Review of Preimplantation Devroey P. Which patients with recu- Assche E, et al. Embryo implanta- Embryology 2001:147-156. rrent implantation failure after IVF tion after biopsy of one or two cells benefit from PGD for aneuploidy from cleavage-stage embryos with a Moreno JM, López JJ. Enciclopedia au- screening? Reprod Biomed Online view to preimplantation genetic diovisual de técnicas de reproducción 2006; 12:334-9. diagnosis. Prenat Diagn 2000; asistida: Eclosión asistida. Animatic 20:1030-7. 2006, vol 1. Renwick P, Ogilvie CM. Preimplantation genetic diagnosis for monogenic dise- Vandervorst M, Liebaers I, Sermon K, Moreno JM, López JJ. Enciclopedia au- ases: overview and emerging issues. Staessen C, De Vos A, Van de Velde diovisual de técnicas de reproducción Expert rev Mol Diagn 2007;7:33-43. H, et al. Successful preimplantation asistida: Biopsia embrionaria y fijación para FISH. Animatic 2006, vol 2. Rubio C, Rodrigo L, Perez-Cano I, genetic diagnosis is related to the Mercader A, Mateu E, Buendia P, et number of available cumulus-oocyte Mottla GI, Adelman MR, Hall JI, al.. FISH screening of aneuploidies in complexes. Hum Reprod 1998; Gindoff PR, Stillman RJ, Johnson KE. preimplantation embryos to improve 13:3169-76. Lineage tracing demonstrates that blas- IVF outcome. Reprod Biomed Online tomeres of early cleavage-stage human 2005; 11:497-506. Verlinsky Y, Rechitsky S, Sharapova T, pre-embryos contribute to both tro- Laziuk K, Barsky I, Verlinsky O, et al. phectoderm and inner cell mass. Hum Schieve LA, Meikle SF, Peterson HB, Preimplantation diagnosis for immu- Reprod 1995; 10:384-91. Jeng G, Burnett NM, Wilcox LS. Does nodeficiencies. Reprod Biomed assisted hatching pose a risk for mo- Online 2007; 14:214-23. Munné S, Velilla E, Colls P, Garcia nogygotic twinning in pregnancies Bermudez M, Vemuri MC, Steuerwald conceived through in vitro fertilization? N, et al. Self-correction of chromoso- Fertil Steril 2000; 74:288-94. mally abnormal embryos in culture and implications for stem cell produc- Sermon K, Goossens V, Seneca S, tion. Fertil Steril 2005; 84:1328-34. Lissens W, De Vos A, Vandervorst M, et al. Preimplantation diagnosis of Munné S, Fischer J, Warner A, Chen S, Huntington´s disease (HD): clinical Zouves C, Cohen J. Preimplantation application and analysis of the HD genetic diagnosis significantly redu- expansion in affected embryos. ces pregnancy loss infertile couples: Prenat Diagn 1998; 18:1427-36. a multicenter study. Fertil Steril 2006; 85:326-32. Tarín JJ, Conaghan J, Winston RML, Handyside AH. Human embryo Nakayama T, Fujiwara H,Yamada S, biopsy on the second day after insemi- Tastumi K, Honda T, Fujii S. Clinical nation for preimplantation diagnosis: application of a new assisted hat- removal of a quarter of the embryo re- ching method using a piezo-micro-

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