REVISTA DE EMBRIOLOGÍA CLÍNICA Y BIOLOGÍA DE LA REPRODUCCIÓNJunio 2012 Vol. 17 Nº 1                          REVISTA      ...
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Introducing Continuous Single Culture                                                                         ™           ...
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  1. 1. REVISTA DE EMBRIOLOGÍA CLÍNICA Y BIOLOGÍA DE LA REPRODUCCIÓNJunio 2012 Vol. 17 Nº 1 REVISTA ACTUALIDAD AULA JOVEN ARTÍCULO I Embriones humanos Lavado seminal en Desequilibrios cromosómicos criopreservados: traslado varones seropositivos en espermatozoides de entre centros de reproducción para el VIH. ¿Está todo individuos portadores de asistida resuelto? translocaciones recíprocas ARTÍCULO II FORMACIÓN CONTINUADA Patrón de movilización del [Ca2+]i, apoptosis y papel Medios de cultivo para fecundación in de la actina en pacientes astenozoospérmicos vitro: ¿qué les falta para ser perfectos? GRUPOS DE INTERÉS: GENÉTICA Y REPRODUCCIÓN IV Recogida de datos de DGP en España: 1 de enero del 2008 a 31 de diciembre de 2009
  2. 2. Asociación para el Estudio de la Biología de la Reproducción CONTROL DE CALIDADEXTERNO DEL LABORATORIO DE EMBRIOLOGÍA CLÍNICAParámetros sometidos a examen: Casos virtuales de pacientes con embriones D+2 a D+5 en los que se evaluará: - Carcaterísticas morfológicas - Clasificación y decisión clínica Comprobación de toxicidad de material. Características específicas: Duración: 1 año. Nº Especímenes: vídeo y material esterilizado. Envío de muestra: Uno. Envío documentación: Uno. Envío de datos: Vía página web. Informes: Valoración por consenso de laboratorios Valoración por consenso de grupo de expertos Proceso de datos: Informatizado. PLAZO MÁXIMO DE INSCRIPCIÓN 15 DE JULIO DE 2012 http://controldecalidad.asebir.com/ Con la colaboración de:
  3. 3. Í N D I C E Junio 2012 Vol. 17 Nº1 EDITA Asociación para el Estudio de la Biología de la Reproducción (ASEBIR). SUMARIO EDITORES Y DIRECTORES CIENTÍFICOSSUMARIO Pág. Dra. Marga Esbert Algam IVI BARCELONA, BarcelonaEDITORIAL 3 Dr. Jorge Cuadros FernándezAdiós a Lynette A. Scott CLÍNICA FIVMADRID, MadridMontse Boada COMITÉ EDITORIALACTUALIDAD 5 Presidente: Dr. Manuel Ardoy VilchesEmbriones humanos criopreservados: HOSPITAL UNIVERSITARIO GREGORIO MARAÑÓN - MadridTraslado entre centros de reproducción asistidaMark Grossmann i Camps, Vicepresidenta Responsable Certificación ASEBIR y Delegados Autonómicos:María Victoria Hurtado de Mendoza Acosta, Dra. Carmen Ochoa MarietaMontse Boada i Palà, Maria Carme Pons Gatell CER. CLINICA COTERO - Santander Secretaría, Publicaciones:ARTÍCULOS 12 Dra. Montserrat Boada PaláDesequilibrios cromosómicos en espermatozoides de individuos INSTITUT UNIVERSITARI DEXEUS - Barcelonaportadores de translocaciones recíprocasAnna Godo, Francesca Vidal, Joan Blanco, Ester Anton Tesorería y Relaciones con la Industria: Dr. Fernando Marina RugeroPatrón de movilización del [Ca2+]i , apoptosis y papel de la actina INSTITUTO DE REPRODUCCION CEFER - Barcelonaen pacientes astenozoospérmicos Vocalía de Grupos de Interés, Investigación y Certificación ASEBIR:Graciela M. Lozano, Águeda Ortiz, Fabián Monllor, Mª Isabel Jiménez, Dr. Josep Santaló PedroJuan Francisco García UNIVERSIDAD AUTONOMA DE BARCELONA - BellaterraAULA JOVEN 28 Vocalía de Congresos y Certificación ASEBIR:Lavado seminal en varones seropositivos para el VIH ¿está todo Dra. Yolanda Mínguez Royoresuelto? IVI MADRID - MadridMª Carmen Galbis, José Remohí, Antonio Pellicer, Nicolás Garrido Vocalía de Docencia y Formación Continuada: Dra. Mª José Torello YbañezDEBATE 40 HOSPITAL QUIRÓN, Barcelona Dr. Ignacio Santiago Álvarez MiguelFORMACIÓN CONTINUADA 44 INST. EXTREMEÑO REPRODUCCIÓN ASISTIDA –IERA -BadajozMedios de cultivo para fecundación in vitro: Dr. Juan Manuel Moreno García¿Qué les falta para ser perfectos? CLINICA VISTAHERMOSA, AlicantePilar Coy Dra. Marga Esbert Algam IVI BARCELONA, BarcelonaGRUPOS DE INTERÉS: GENÉTICA Y REPRODUCCIÓN 54IV Recogida de datos de DGP en España: 1 de enero del 2008 Vocalía Página Web:: Dr. Juan Manuel Moreno Garcíaa 31 de diciembre de 2009 CLINICA VISTAHERMOSA - AlicanteEsther Velilla, Silvia Fernández, Mònica Parriego, Mireia Sandalinas Vocalía de Publicaciones:AGENDA 61 Dr. Jorge Martín Cuadros Fernández CLÍNICA FIV-MADRID, MadridNOTICIAS 62 Dra. Marga Esbert Algam IVI BARCELONA, BarcelonaINFORMACIÓN PARA LOS AUTORES 63 Dra. Montserrat Boada Palá INSTITUT UNIVERSITARI DEXEUS, Barcelona Dr. Josu Franco Iriarte CENTRO SANITARIO VIRGEN DEL PILAR, San Sebastian La Revista de ASEBIR (Asociación para el Estudio de la Biología de la Reproducción) está indexada en las bases de datos ICYT, de ciencia y tecnología, e IME, de Biomedicina, del Consejo Superior de Investigaciones Científicas (CSIC) de España y en las bases de datos LATINDEX, para Iberoamérica y CUIDEN®, de la Fundación Index. PUBLICIDAD Y COLABORACIONES Secretaría ASEBIR C/ Cronos 20, Edificio 4, 1º, 6ª / 28037 Madrid - Tfno: 91 367 89 94 www.asebir.com · asebir@asebir.com DISEÑO, MAQUETACIÓN E IMPRESIÓNImagen de portada: I Practicum ASEBIR de Embriología Clínica. Aula EMB-ASEBIR. GÓBALO: Gráfica · Web · Multimedia · ConsultoríaCentro de Cirugía de Mínima Invasión Jesús Usón (Cáceres) C/ Castillo de Fuensaldaña 4, Oficina 213 | 28232 · Las Rozas · Madrid Tfno - Fax.: 91 626 39 74 | www.gobalo.es · info@gobalo.es Depósito legal: M-18873-1996 | ISSN: 1136-4424 | Soporte válido: 78-R-CM
  4. 4. Introducing Continuous Single Culture ™ (CSC ) ™ Irvine Scientific® CSC™ is the only true continuous single step culture medium that is clinically proven to improve implantation rates over a sequential media system* One Step One Choice• Optimized for use from fertilization through Day 5/6 of development• Used in a continuous culture system• Only one medium to order, inventory and store*Data on file - Shady Grove Fertility Center *Pending CE Mark For more information on all our reproductive products visit www.irvinesci.com or call 1-800-437-5706©2012 Irvine Scientific P/N 10384R Rev. 1
  5. 5. E D I T I TULOI A L T O R Rev Asoc Est Biol Rep Junio 2012 Vol. 17 Nº 1 3ADIÓS A LYNETTE A. SCOTT Lynette Scott, doctora en Biología del Desarrollo y embrióloga clínica de reconocido prestigio mundial, fue directora del laboratorio de reproducción asistida del Fertility Center de New England en Massachussets. A lo largo de su trayectoria profesional, contribuyó enormemente al desarrollo de nuestra profesión centrando su interés en el estudio de parámetros morfológicos para la valoración de la viabilidad embrionaria. Publicó numerosos artículos entre los que destacan los relacionados con la valoración pronuclear y la valoración embrionaria secuencial que han sido de gran valor para sentar las bases de la embriología clínica actual. Su visión avanzada hizo que la idea, hoy por hoy incuestionable, devalorar los embriones secuencialmente para seleccionar los de mejor pronóstico se difundiera yempezara a tomar forma hace ya más de una década.L.Scott colaboró activamente con distintas sociedades científicas no solo americanas sinotambién europeas como ESHRE y ALPHA. Su reciente participación en la conferencia de Consensode Estambul sobre valoración embrionaria es una muestra de ello. En el congreso de ASEBIR deValencia 2009 tuvimos la oportunidad de poder contar también con su presencia ofreciéndonosla ponencia “Oocyte and embryo oxygen comsumption. Can it tell us anything about developmentalpotential?” Ahora, después de su inesperado fallecimiento el pasado 2 de febrero de 2012,valoramos enormemente la suerte que tuvimos de poder contar con su presencia y compartir susexperiencias en nuestro congreso de ASEBIR.En agradecimiento a su trabajo y dedicación, desde la junta directiva de ASEBIR y enrepresentación de la comunidad que constituimos todos los miembros de nuestra sociedadqueremos expresar nuestro respeto y reconocimiento por la labor que L. Scott ha realizado enbeneficio de la ciencia en general y, muy especialmente, de la Embriología Clínica.Hasta siempre Lynette.Montse BoadaSecretaria de la Junta Directiva de ASEBIR
  6. 6. A C T U IA U L O A D T II TTULO D TT U I O L L Rev Asoc Est Biol Rep Junio 2012 Vol. 17 Nº 1 5EMBRIONES HUMANOS CRIOPRESERVADOS: TRASLADO ENTRECENTROS DE REPRODUCCIÓN ASISTIDAHUMAN CRYOPRESERVED EMBRYOS: TRANSPORTATION BETWEEN CENTRES OFASSISTED REPRODUCTIONMark Grossmann i Camps1, María Victoria Hurtado de Mendoza Acosta2, Montse Boada i Palà3 y Maria Carme Pons Gatell11 Unitat de Reproducció Assistida de Centro Médico Teknon, Barcelona. 2MasVida Reproducción, Sevilla. 3Servei de Medicina de la Reproducciódel Institut Universitari Dexeus, Barcelona.e-mail: mgrossmann@cmteknon.com RESUMEN Todos los embriones deben tener su proyecto reproductivo, lo que significa que una mujer o pareja son responsables del destino de sus embriones criopreservados y pueden solicitar el cambio de centro de custodia aunque no dispongamos de un único protocolo consensuado de actuación para los traslados. Este trabajo busca sopesar los distintos aspectos del traslado entre centros de los embriones humanos criopreservados. Palabras clave: traslado / embriones criopreservados humanos / protocolos SUMMARY Embryos must have their reproductive project, which means that a woman or a couple are responsible for the fate of their cryopreserved embryos and they may apply for transferring embryos from one centre to another, although we do not have a single Protocol Act in order to transfer embryos between centres. This work seeks to weigh up aspects of the transportation of cryopreserved human embryos between centres. Keywords: transportation / human cryopreserved embryos / guidelinesINTRODUCCIÓN Los últimos datos conocidos del existe riesgo de hiperestimulación registro español de actividad, que no ovárica, los centros de RHA debenTodos conocemos que los embriones es un registro obligatorio, muestra criopreservar todos los embrioneshumanos pueden ser criopreservados para el año 2009 un total de 10.248 obtenidos en espera del momentoen distintos momentos de su desarrollo criotransferencias con una tasa de óptimo para realizar la transferenciapreimplantatorio in vitro (zigotos, embarazo del 32% por transferencia. embrionaria.células o blastocisto) y usando distintos Según los datos comunicados, lasprotocolos (por ejemplo congelación gestaciones a partir de embriones Los embriones quedan bajo la custodialenta con 1,2-propanodiol o con criopreservados representaron un de los centros de RHA porque songlicerol; o vitrificación). Los resultados 17% de las gestaciones registradas las únicas instalaciones capaces dedel proceso de criopreservación, no (SEF, 2009). Otros autores refieren garantizar su continuidad en lassólo dependen del estadio de desarrollo proporciones mayores de hasta un 25% estrictas condiciones requeridas paray del protocolo escogido, sino también de gestaciones conseguidas a partir su correcta conservación pero formande la calidad de los embriones y de la de criotransferencias (Capalbo et al., parte de un proyecto reproductivo y sonexperiencia de los embriólogos. 2011). responsabilidad de la mujer o la pareja.En este sentido, los centros de Conforme a la legislación española Legalmente en España, estereproducción humana asistida vigente los embriones que no se almacenamiento se podrá prolongar(RHA), gracias a la mejora en los transfieran y se consideren aptos deben hasta el momento en que se considereequipamientos, en las condiciones crioconservarse ya que no pueden por los responsables médicos, con elde cultivo y en los conocimientos y destruirse fuera de los supuestos dictamen favorable de especialistasformación de los embriólogos, hoy en legalmente autorizados. independientes y ajenos al centrodía consiguen un muy buen desarrollo correspondiente, que la receptoraembrionario preimplantacional, lo cual En otras ocasiones, por ejemplo cuando no reúne los requisitos clínicamentepermite reducir el número de embriones no se realiza la transferencia en un ciclo adecuados para la práctica de la técnicaa transferir y disponer de embriones de donación de ovocitos (donación de reproducción asistida (Ley 14/2006),“sobrantes” de muy buena calidad. asincrónica) o cuando se dispone de o lo que se ha venido denominando la un elevado número de embriones pero vida fértil de la mujer y que representa un
  7. 7. A C T U IA U L O A D I TTULO D T L I Mark Grossmann i Camps. Embriones humanos criopreservados: Traslado entre centros de reproducción asistida6 período muy largo, que generalmente se sobreentiende que el centro donde • demás, de las consultas tramitadas A considera que finaliza cuando la mujer se tienen los embriones ya está en la asesoría jurídica de ASEBIR alcanza los 50 años de edad. autorizado. se deduce que la mujer o la pareja están en su derecho de solicitar el Algunas veces, por los motivos que • ara mantener la debida protección P traslado de sus embriones y que no se sean, los pacientes deciden trasladar de datos de carácter personal, la les puede negar ese traslado, ya que sus embriones a otro centro distinto mujer o la pareja deberían autorizar ellos son los responsables y el centro de aquel que los criopreservó y los la transferencia entre centros de es el depositario (ASEBIR 2012). conserva. En un reciente estudio información personal (información belga sobre el destino que se da a los parcial de la Historia Clínica, HC) y de PROCEDIMIENTO PASO A PASO embriones criopreservados, Provoost información relativa a los embriones y colaboradores (2012) publican que, criopreservados (información parcial 1 ¿Quién notifica al centro donde tras 15 años de actividad, sólo en 4 de los registros del laboratorio). están los embriones criopreservados, casos sobre 2931 (0,1%) se solicitó el Además, según el Real Decreto el traslado de los mismos? traslado de los embriones desde un 1301/2006, el centro emisor debe centro a otro. identificarse y etiquetar tanto Siempre los pacientes, nunca el el contenedor primario como el centro receptor. Conforme a la De acuerdo a nuestra propia experiencia, contenedor externo (ver apartado 5 confidencialidad exigible en nuestras y aunque en los últimos años las de este artículo). actuaciones, no deberían atenderse solicitudes de traslado de embriones consultas (telefónicas o vía correo a otros centros han experimentado un • demás, el centro de salida debe A electrónico) sobre el número de ligero aumento, las peticiones siguen adoptar las medidas para que la embriones, el estadio, el protocolo siendo poco frecuentes y su práctica no información de carácter personal de criopreservación etc. de un es muy habitual. quede protegida durante el traslado centro de RHA que nos diga que unos si éste lo realizan terceras partes (Ley determinados pacientes desean un Quizás por ello, cómo llevar a cabo 15/1999). traslado de embriones. todos los pasos del proceso de traslado puede ser motivo de confusión ya que • l centro receptor debe identificarse E Es la mujer o la pareja la que, por escrito, no disponemos de un único protocolo y emitir acuse de recepción para deben comunicar al centro donde tiene de actuación consensuado ¿Dónde completar la trazabilidad a la que sus embriones que desean efectuar un empiezan y acaban las responsabilidades ambos centros están obligados (Real traslado. En esa comunicación debería del centro que custodia los embriones, Decreto 1301/2006). notificarse el centro de destino que del que los recibe o de quién efectúe recibirá los embriones, y para cumplir el traslado? ¿Qué documentación sería trazabilidad se entiende, según Por con la ley de autonomía del paciente necesaria? la definición dada en el Artículo 2.1 y con la LOPD, se recomienda que los X) de ese Real Decreto, la capacidad pacientes firmen una autorización para Este trabajo busca sopesar los distintos para ubicar, localizar e identificar la entrega, al centro de destino, de sus aspectos del traslado de los embriones las células y/o tejidos en cualquier datos personales, también la de los humanos y comentarlos desde la óptica paso del proceso desde la donación, datos de laboratorio relacionados con la de distintos centros. la obtención, el procesamiento, criopreservación de sus embriones, así la evaluación, el almacenamiento como una autorización para comentar, MARCO LEGAL y la distribución hasta llegar al entre profesionales de cada centro, los receptor o hasta ser desestimados detalles del caso si fuese preciso. De cara a organizar un traslado de y/o destruidos, o que lleva consigo la embriones entre centros, deberíamos capacidad de identificar al donante, 2 Una vez comunicado el deseo de tener en cuenta los siguientes requisitos el establecimiento de tejidos y la traslado ¿quién lleva la iniciativa? de la legislación española: instalación que recibe, procesa o almacena los tejidos o células, así El centro que recibe los embriones • odos los embriones deben tener T como la capacidad de identificar al debe llevar la iniciativa porque, en su proyecto reproductivo lo que receptor o receptores en los que se definitiva, es el centro que tiene interés significa que una mujer o una pareja apliquen los tejidos o células. La en el traslado. En este contexto “llevar son responsables del destino de sus trazabilidad cubre, asimismo, la la iniciativa” significa organizar el embriones (Ley 14/2006). capacidad de localizar e identificar traslado de los embriones de forma cualquier dato relevante de los adecuada y guiar a los pacientes sobre • l centro receptor debe estar E productos y materiales que van a estar los pasos del proceso. En el caso de los autorizado por las autoridades en contacto directo con las células traslados hacia centros situados fuera sanitarias correspondientes (Real y/o tejidos y que puedan afectar a la de España, entendemos que también Decreto 413/1996 y normativas de calidad y seguridad de los mismos. es el centro receptor quien asesorará y las distintas CCAA). Obviamente, se gestionará el proceso.
  8. 8. A C T U IA U L O A D T II TTULO D TT U I O L L Rev Asoc Est Biol Rep Junio 2012 Vol. 17 Nº 1 73 Tipo de contenedor y quién lo aporta condiciones de mantenimiento frente El centro emisor, junto con los embriones a imprevistos. Esto es particularmente debe incluir un documento que vinculeEs el centro que recibe los embriones el necesario en los trasportes de larga el código de identificación de lasque, a priori, debe aportar el contenedor distancia. pajuelas con la mujer o la pareja, y enadecuado para el traslado. el que también se detalle el número de 4 ¿Quién transporta los embriones? embriones criopreservados entregados,El depósito más apropiado es la bombona el estadio de desarrollo y la calidad, la“en seco”, aquella cuyas paredes Éste es un punto de debate recurrente fecha de criopreservación y el protocoloabsorben el N2L y evitan los derrames al cuando se plantea un traslado ¿pueden utilizado. También debe indicarse eltiempo que mantienen las condiciones los propios pacientes realizar ese origen de los gametos (propios o deadecuadas de frío. La mayoría de casas traslado? Ésta es la opción fácil si no donante), las serologías y un resumencomerciales especializadas tiene en tenemos en cuenta el alto grado de de la HC por si, al final, esos embrionescatálogo contenedores que cumplen la exigencias que se contempla en el Real que se trasladan pasasen a disposiciónreglamentación internacional aplicable Decreto 1301/2006 para realizar el del banco de embriones del centroal trasporte de mercancías peligrosas transporte del material biológico que receptor. Además, sería recomendablepor carretera (ADR), por vía aérea nos obliga a garantizar en todo momento que ese documento también(IATA) o ferroviaria (RID) y cada centro su trazabilidad, también incluida en incorporase, a modo de recomendación,debe conocer cuál es la autonomía dicha norma, y si no tenemos en cuenta las instrucciones para la descongelaciónde sus bombonas de traslado (ver las los riesgos de manipular contenedores de los embriones entregados.especificaciones de cada fabricante). que contengan N2L sin las debidas precauciones. Pero si atendemos a la Adecuando los requerimientos del RealConsideramos que el centro receptor es responsabilidad del centro para con los Decreto 1301/2006 a nuestro material,el que debería proveer el contenedor de embriones se ve claramente que éstos la información que debería adjuntarsetraslado no solo porque es el que tiene sólo pueden entregarse a personal es la siguiente:mayor interés en llevar a cabo el traslado especializado. En esta misma líneasino por otras dos razones. De un lado, se manifestó la Asesoría Jurídica de 1.º El establecimiento de tejidos debeporque recupera el contenedor al final ASEBIR cuando se le planteó la cuestión disponer de un sistema de etiquetadodel trayecto, pero además también de quién debía realizar el transporte: que garantice que las etiquetas o losporque, tratándose de su contenedor, la conclusión no puede ser otra que documentos cumplen con los siguientesconoce su estado de conservación y la de descartar que el transporte de requisitos de información:limpieza. Téngase en cuenta que las embriones congelados pueda realizarseespecificaciones sobre cómo limpiar los por los propios pacientes o por alguien i) El etiquetado del contenedor primariocontenedores de transporte (Castilla no profesional (ASEBIR 2012). de las células/tejidos debe mostrar:y Magán, 2003), pueden variar segúncada tipo de contenedor no existiendo Y por personal especializado se entiende 1) l número de identificación o código Eun protocolo único de manera que cada personal de los propios centros de RHA del tejido/célula, el tipo de células ocentro debería responsabilizarse de que acompañan el contenedor o bien tejidos y el lote cuando esto últimomantener en buenas condiciones sus transportistas especializados. proceda.propios recipientes. La primera opción sería la mejor, al 2) a identificación del establecimiento LAlternativamente, las empresas menos en traslados de corta distancia… de tejidos.especializadas en el transporte de la segunda, con servicio puerta amaterial biológico disponen de puerta, sería la elegible entre ciudades 3) La fecha de caducidad.contenedores adecuados, tanto distantes.del recipiente primario como del 4) el caso de que sea para uso Encontenedor secundario de protección. Evidentemente el centro receptor debe autólogo, esto debe ir especificado: identificar la empresa transportista «para uso autólogo». Además, seEl centro emisor, que es quien tiene con la suficiente antelación e incluso mostrará el código de identificaciónla custodia de los embriones, puede algunos centros de RHA piden la del donante/receptor.retrasar la entrega o negarse a hacerla identificación previa de la persona físicasi considera que las condiciones para que recogerá el contenedor, de cara a 5) n el caso de donaciones dirigidas, se Eel transporte no son las apropiadas, trasladar custodias. identificará el receptor.por ejemplo si se recibe un contenedorsin la temperatura adecuada o sin N2L. 5 Documentación que acompaña el 6) Cuando se conozca que las célulasEl centro emisor debería asegurarse traslado de los embriones /tejidos son positivos paraque el contenedor que recibe está algún marcador de enfermedadsuficientemente frio antes de introducir Sin lugar a dudas el traslado de infecciosa, deberán ir identificadoslas pajuelas. Así se garantizará la embriones criopreservados debe quedar como muestras de riesgo: «riesgomáxima duración posible de las exhaustivamente documentado. biológico».
  9. 9. A C T UT U L O A D I A L I D Mark Grossmann i Camps. Embriones humanos criopreservados: Traslado entre centros de reproducción asistida8 S i, por razones de espacio, no es 2) dentificación del centro de implante I correcta entrega de los embriones en posible incluir la información referida de tejidos o establecimiento de tejidos destino (fecha y hora de la recepción y en los puntos 4) y 5), ésta deberá ser destino, incluyendo la dirección, el persona que recibe los embriones). facilitada en un documento añadido al teléfono y la persona de contacto. contenedor primario. Dicho documento Y finalmente, el centro receptor de los deberá ir embalado junto al contenedor 3) constatación de que el paquete La embriones debería emitir un acuse de primario de forma que se asegure que contiene tejidos o células humanas y recibo en el que constara el material permanecen juntos. que debe ser manejado con cuidado. recibido. ii) La información que se detalla a 4) se envían células vivas y el Si De esta manera, el centro emisor puede continuación puede figurar en la etiqueta mantenimiento de la viabilidad documentar los embriones hasta el o bien en un documento adjunto: es básico para el éxito del injerto, centro de nuevo destino, mientras como es el caso de los progenitores que el centro receptor dispone de 1) escripción, definición y, si fuera D hematopoyéticos, células precursoras, información suficiente para almacenar relevante, las dimensiones del tejido o gametos o células embrionarias, debe los embriones. producto celular. añadirse en un lugar bien visible el anuncio de: «NO IRRADIAR». 6 Comprobación del material 2) Morfología y datos funcionales cuando entregado sea relevante. 5) Recomendaciones para las condiciones de transporte (posición, temperatura En alguna rara ocasión ha sucedido 3) echa de distribución de las células / F etc). que la persona que va a transportar el tejidos. contenedor con los embriones solicita 6) nstrucciones de seguridad. I revisar el contenido antes de aceptar la 4) Determinaciones biológicas que se custodia. Este es un punto delicado y de han llevado a cabo en el donante y sus 7) Métodos de congelación o difícil resolución. En primer lugar, como resultados. descongelación o cualquier otra profesionales realizando un trabajo manipulación necesaria cuando ello altamente especializado y con los 5) Recomendaciones de almacenamiento. sea de aplicación. mejores estándares de calidad, actuar de buena fe y en beneficio de los pacientes 6) Instrucciones para la apertura El centro emisor debe identificar la es nuestra obligación, y con ello debería del contenedor, para el embalaje persona que retira los embriones y bastar para convencer. Por otro lado, y para cualquier manipulación o conservar en la HC los datos de esta la localización de las pajuelas con los reconstitución. persona. Es recomendable que exista embriones y su traspaso al contenedor un Documento de entrega-retirada de de traslado deberían realizarse con un 7) Fechas de caducidad después de los embriones criopreservados para testigo o controller interno, propio del la apertura o manipulación del su traslado a otro Banco de Embriones centro emisor, y con ello debería bastar. contenedor. autorizado donde se especifica el día Si no fuese así, se podría acordar la y hora en el que son entregados los revisión del contenido en el momento 8) Instrucciones para la comunicación de embriones. En el caso de que vengan de pasar las pajuelas desde el banco efectos o reacciones adversas. los propios pacientes acompañando el al contenedor, pero ello sólo tendría transporte, ellos firmarán conforme sentido si la persona que recibe el 9) resencia de residuos potencialmente P se exime al centro de cualquier contenedor es también embriólogo/a. peligrosos (antibióticos, óxido de responsabilidad, especialmente Admitir como controller a una persona etileno, etc). referidas al traslado, mantenimiento, ajena no sería recomendable pues puede proceso de descongelación y sus comportar una alteración innecesaria iii) Etiquetado externo para el contenedor resultados. En caso de que venga una del orden y estabilidad del laboratorio de envío o transporte. persona autorizada, ésta traerá una de RHA. autorización firmada por los pacientes, Para el envío, el contenedor primario entregará fotocopia de su DNI y firmará Normalmente, la comprobación del debe ir incluido en un contenedor de la retirada de los embriones. contenido se llevaría a cabo en el transporte adecuadamente etiquetado. Esta laboratorio del centro receptor y en las etiqueta contendrá, al menos, la siguiente Para el transporte debería completarse condiciones adecuadas. Y es entonces información: un formulario de declaración de material cuando en caso de que se detecte alguna biológico y de los riesgos asociados anomalía, éstas deberían consignarse. 1) dentificación del establecimiento de I al tipo de transporte. Las empresas En ningún caso es aceptable que se tejidos de origen, incluyendo la dirección, especializadas disponen de estas fichas abra el contenedor fuera de las áreas de el teléfono y la persona de contacto. de declaración de productos biológicos. embriología ya que ello pone en riesgo la Y si se usa una empresa especializada, viabilidad de los embriones trasladados. ésta debería comunicar por escrito la
  10. 10. A C T U IA L I D A D T TULO Rev Asoc Est Biol Rep Junio 2012 Vol. 17 Nº 1 9Procediendo de esta manera, todos los embriones de una misma con los embriones es suficiente paralas pajuelas con los embriones mujer o una misma pareja a menos que decidir ante una petición de donación acriopreservados sufren únicamente exista una razón de peso para proceder terceros, si son donables o no.dos momentos de estrés coincidiendo de otra forma. Aceptar particionescon los dos cambios de contenedor. aumenta la posibilidad de abandono Y en este contexto surge la duda deAunque parezca innecesario, queremos de los embriones y sólo complica la la “seroteca” que se exige en el Realrecordar que esos cambios de ubicación gestión de los bancos de embriones Decreto 1301/2006, y que comodeben realizarse lo más rápidamente criopreservados, sin aportar ninguna mínimo debe conservarse durante dosposible, sobre todo con los soportes ventaja a la mujer o la pareja. años desde la última transferencia. Sipara embriones vitrificados ya que las existe suero de la paciente que solicitapajuelas para criopreservación tienen OTRAS CONSIDERACIONES el traslado y no queda ningún otroun volumen de 0,3 ml lo que les otorga material criopreservado en el centromayor resistencia a los cambios de a) En caso de que los pacientes emisor, entendemos que, para cumplirtemperatura, mientras que los soportes no puedan acudir al centro emisor con los requerimientos legales, unapara vitrificación se cargan con sólo 1 o (pacientes extranjeros, etc.) deberán muestra del suero debería enviarse2 µl. enviar el original de consentimiento también al centro receptor. de traslado debidamente firmado ySi se hacen bien los cambios de ubicación con fotocopias de sus documentos de d) En el caso de entregar embrionesde las pajuelas y si el contenedor de identidad. Lo mejor sería concretar la para investigación, el protocolo paratransporte está correctamente enfriado fecha para la recogida cuando se firman el traslado de los embriones deberíay no hay demora en el transporte, no los consentimientos ya que, aunque ser similar al que aquí se ha descritosería necesario incorporar, dentro del parezca incomprensible, se ha dado e igualmente, en estos casos, deberíacontenedor, un control de temperatura. el caso de venir a la firma y después recibirse acuse de recibo del centro transcurrir meses antes de retirar los receptor para poder mantener la7 ¿Cómo se traspasa la custodia? embriones. Por un lado han firmado que trazabilidad exigida. retiran los embriones pero por otro ladoEs importante que la mujer o la no se los llevan, lo que da pie a que los CONCLUSIONESpareja entiendan que el traslado pacientes se desentiendan del tema y elde los embriones es un proceso con centro quede con la custodia de unos 1. El traslado de embrionesriesgos asociados y que comporta la embriones “abandonados”. criopreservados es una operación detransferencia de custodia durante el riesgo y así debe informarse a la mujertraslado. b) Es importante minimizar el tiempo de o la pareja. traslado y evitar posibles retenciones enLa custodia se transfiere con la entrega aduanas u otras oficinas intermediarias. 2. Hasta la fecha, y por falta de unde los embriones, es decir, el centro Aunque los embriones criopreservados único protocolo, cada centro de RHAemisor recibe el contenedor y es pueden trasladarse entre centros de ha establecido sus propios requisitosresponsable de los embriones hasta que RHA, se trata de material biológico muy y el traslado de embriones se realizael contenedor se entrega a la persona sensible a los cambios de temperatura, frecuentemente de forma improvisadaque hará el traslado y que firma la mucho más en el caso de los embriones en aras de la “buena fe” de las partesrecepción del mismo. vitrificados. implicadas y atendiendo al bien de los pacientes.Esta persona que realiza el traslado (o Nuestra recomendación para el trasladoen su defecto la empresa para la que de embriones vitrificados es que éstos Consideramos que sería enormementetrabaja) es responsable de los embriones se trasladen sumergidos en N2L, aunque beneficioso aprobar un protocolohasta que entrega el contenedor en el somos conscientes que ello conlleva estandarizado común que sirva decentro de recepción y obtiene la firma restricciones en determinados medios modelo para todos, que no induzca ade aceptación de los embriones. de transporte, como el aéreo. dudas y miedos a los pacientes y facilite la labor de los centros. Emplazamos aA partir de ese momento los embriones c) En principio los embriones se ASEBIR a abordar el asunto del trasladoquedan bajo la custodia del centro trasladan por deseo de la mujer o de embriones criopreservados, tantoreceptor. la pareja y para uso propio, y si más para la elaboración de un modelo adelante los donan, es responsabilidad de protocolo único como para un8 ¿Todos los embriones se trasladan? del centro receptor disponer de toda la modelo de Consentimiento Informado información necesaria para determinar ya que éste es uno de los vacíos queDe la misma manera que queda claro si los embriones son aptos para ser actualmente tenemos.que un centro de RHA no puede donados a otras personas o sólo puedennegarse al traslado de unos embriones, donarse para investigación. Por lo tanto,parece lógico establecer que, cuando el centro receptor debe asegurarsese autorice un traslado, éste incluya de que la información recibida junto
  11. 11. A C T UT U L O A D I A L I D Mark Grossmann i Camps. Embriones humanos criopreservados: Traslado entre centros de reproducción asistida10 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS Ley 15/1999, de 13 de diciembre, de carretera en territorio español. BOE 113, protección de datos de carácter personal. 12/05/2006, p.18187-18281. ASEBIR 2012. Cuadernos ASEBIR de BOE 298, 14/12/1999, p.43088-43099. Embriología. Selección de Consultas a la Real Decreto 1301/2006 de 10 de noviembre, Asesoría Jurídica de ASEBIR (II) p.4-6. Ley 41/2002, de 14 de noviembre, básica por el que se establecen las normas de reguladora de la autonomía del paciente y calidad y seguridad para la donación, la Capalbo A, Rienzi L, Buccheri M, Maggiulli R, de derechos y obligaciones en materia de obtención, la evaluación, el procesamiento, Sapienza F, Romano S, et al. The worldwide información y documentación clínica. BOE la preservación, el almacenamiento y la frozen embryo reservoir: methodologies to 274, 15/11/2002, p.40126-40132. distribución de células y tejidos humanos achieve optimal results. Ann NY Acad Sci y se aprueban las normas de coordinación 2011; 1221:32-39:9. Real Decreto 413/1996, de 1 de marzo, y funcionamiento para su uso en humanos. que establece los requisitos técnicos y BOE 270, 11/11/2006, p.39475-39502. Castilla JA, Magán R. Editores en Seguridad funcionales precisos para la autorización biológica en el laboratorio de Reproducción y homologación de los centros y servicios SEF. Informe anual SEF 2009. www. Asistida. Aula de Formación en Embriología sanitarios relacionados con las técnicas registrosef.com Clínica nº 4. Granada 2003 p.86 y ss. de reproducción humana asistida. BOE 72, 23/03/1996, p.11256-11260. Provoost V, Pennings G, De Sutter P, Van Ley 14/2006 de 26 de mayo, sobre técnicas de Velde A, Dhont M. Trends in embryo de reproducción humana asistida. BOE 126, Real Decreto 551/2006, de 5 de mayo, disposition decisions: patients’ responses 27/05/2006, p.19947-19956. por el que se regulan las operaciones de to a 15-year mailing program. Hum Reprod transporte de mercancías peligrosas por 2012; 27:506-514.
  12. 12. A R TT IÍ I C U LL O T TTULO O U I Anna Godo. Desequilibrios cromosómicos en espermatozoides de individuos portadores de translocaciones recíprocas12 DESEQUILIBRIOS CROMOSÓMICOS EN ESPERMATOZOIDES DE INDIVIDUOS PORTADORES DE TRANSLOCACIONES RECÍPROCAS CHROMOSOMAL IMBALANCES IN SPERMATOZOA FROM RECIPROCAL TRANSLOCATION CARRIERS Anna Godo, Francesca Vidal, Joan Blanco, Ester Anton* * Unitat de Biologia Cel·lular, Departament de Biologia Cel·lular, Fisiologia i Immunologia. Facultat de Biociències. Universitat Autònoma de Barcelona. 08193 Bellaterra (Cerdanyola del Vallès). e-mail: ester.anton@uab.cat Fecha recepción: 14 Marzo 2012 Fecha aceptación: 4 Abril 2012 RESUMEN Los portadores de translocaciones recíprocas tienen asociado un riesgo genético reproductivo debido a la producción de gametos portadores de alteraciones cromosómicas. Estas alteraciones se pueden cuantificar en espermatozoides mediante estudios de hibridación in situ fluorescente. Normalmente se realizan estudios de segregación y de efecto intercromosómico en espermatozoides de un mismo individuo, pero siempre de forma independiente. En consecuencia, las anomalías resultantes de estos dos eventos no pueden relacionarse directamente. El objetivo de este trabajo es hallar la relación entre los modos de segregación del tetravalente y la producción de espermatozoides con anomalías numéricas. Se han estudiado espermatozoides de tres individuos portadores de translocaciones recíprocas, siguiendo un protocolo de análisis secuencial basado en la realización de dos rondas de hibridación consecutivas con un lavado intermedio: la primera para detectar las anomalías numéricas y la segunda para evaluar el resultado de la segregación en los gametos aneuploides/diploides. Los resultados han demostrado que los espermatozoides portadores de anomalías numéricas presentan una clara desviación del patrón de segregación estándar. En concreto, los espermatozoides aneuploides/diploides presentan un incremento de modos de segregación que implican procesos de no disyunción en el tetravalente; así como una disminución de la segregación equilibrada. Este hecho podría explicarse por la existencia de errores en el punto de control que actúa durante la transición de las fases metafase I y anafase I que permitirían la progresión de espermatocitos con alteraciones cromosómicas. Rev Asoc Est Biol Rep 2012; 17(1):12-16. Palabras clave: FISH, translocación recíproca, ICE, anomalías cromosómicas numéricas, patrón de segregación, espermatozoides. SUMMARY Carriers of reciprocal translocation entail a particular reproductive risk as a consequence of the production of unbalanced gametes. Sperm fluorescent in situ hybridization studies are a useful tool to estimate the frequency of abnormal gametes. Usually, segregation and interchromosomal effect studies are performed in these individuals. Nevertheless, both studies are carried out independently and consequently, anomalies cannot be directly related. The aim of this work was to establish if there is a relationship between the occurrence of specific segregation modes and the production of numerical abnormalities in the same spermatozoa. Semen samples of three reciprocal translocations carriers were analyzed by a sequential fluorescent in situ hybridization protocol based on two successive hybridization rounds and probes washing off in-between. Spermatozoa with numerical abnormalities were detected in the first round, and the second round allowed the segregation analysis in the aneuploid/diploid gametes. Results have shown that spermatozoa with numerical abnormalities show a clear deviation of the standard segregation pattern. In particular, aneuploid/diploid spermatozoa display significant increases of segregation modes that imply quadrivalent non-disjunctions, whereas balanced modes are reduced. A plausible explanation for this deviation might be a failure in the metaphase I-anaphase I checkpoint that would allow the progression of spermatocytes with an abnormal chromosomal content. Rev Asoc Est Biol Rep 2012; 17(1):12-16. Keywords: FISH, reciprocal translocation, ICE, chromosome numerical abnormalities, segregation pattern, spermatozoa.
  13. 13. A R T T IC U L O Í TULO I Rev Asoc Est Biol Rep Junio 2012 Vol. 17 Nº 1 13INTRODUCCIÓN que el resto de modos de segregación MATERIAL Y MÉTODOS se distribuyen de la siguiente forma:La incidencia de portadores de Adyacente I (33.6% ± 4.4); adyacente Se analizaron muestras de semen procedentestranslocaciones recíprocas en la II (11.7% ± 6.9); 3:1 (6.8% ± 3.5) y 4:0 de tres individuos infértiles portadores depoblación general es aproximadamente (0.6% ± 0.6). Las diferencias observadas translocaciones recíprocas que presentaban1/700 (Nielsen and Wohlert, 1991), no entre diferentes translocaciones han los siguientes cariotipos: 46,XY,t(5;8)obstante en la población de individuos sido atribuidas clásicamente a las (q33;q13) (P1); 46,XY,t(8;14)(q22;q32) (P2)infértiles esta cifra puede elevarse características citogenéticas particulares y 46,XY,t(9;19)(q10;p10) (P3).hasta seis veces (De Braekeleer and Dao, de los cromosomas reorganizados en1991). La fertilidad de estos individuos cada caso. Los tres individuos fueron seleccionadosestá condicionada por la presencia de por presentar ICE positivo en estudiosbloqueos meióticos y/o por la producción El fenómeno de ICE consiste en la previos (Anton et al., 2008). Las muestrasde un cierto porcentaje de gametos producción de gametos con anomalías se procesaron según el protocolo deportadores de anomalías cromosómicas. cromosómicas numéricas no relacionadas FISH en espermatozoides estandarizadoEstas anomalías se originan con los cromosomas reorganizados. en nuestro laboratorio (Sarrate andmayoritariamente como consecuencia Aunque todavía no hay consenso sobre Anton, 2009), que incluye la fijación,de segregaciones desequilibradas de los el origen y relevancia de este fenómeno, descondensación, desnaturalización ycromosomas reorganizados, o bien como se cree que las aneuploidías o diploidías posterior hibridación de las muestras.resultado de un fenómeno denominado producidas son consecuencia de laefecto intercromosómico (ICE). existencia de heterosinapsis entre Se realizaron dos rondas de hibridación regiones desapareadas del tetravalente secuencial con un lavado de sondasEn relación a la segregación de los con otros bivalentes no implicados en intermedio:cromosomas reorganizados, durante la reorganización (Oliver-Bonet et al.,la profase I de la meiosis los cuatro 2005). Estas asociaciones ilegítimas 1. Primera ronda: Se realizaron doscromosomas que comparten segmentos favorecen alteraciones del proceso estudios paralelos de ICE, analizando lashomólogos en un individuo portador meiótico, afectando negativamente aneuploidías y diploidías de los cromosomasde una translocación recíproca adoptan al apareamiento y disyunción de los 18, X, Y por un lado y 13, 21 por otro,una estructura llamada tetravalente. A cromosomas (Burgoyne et al., 2009). La mediante la utilización del AneuVysionlo largo de la anafase I, esta estructura presencia de gametos con incrementos Multicolor DNA Probe Kit (Abbott Molecularpuede resolverse según cinco modos de de al menos un tipo de disomía o diploidía Inc., Des Plaines, IL, USA). El kit consta desegregación: Alternante, adyacente I (ICE positivo) es un fenómeno habitual en dos combinaciones de sondas para realizar(los centrómeros homólogos migran a portadores de translocaciones recíprocas una FISH triple (sondas centroméricaspolos celulares opuestos), adyacente II, (revisado en Anton et al., 2011). para los cromosomas 18, X e Y) y una FISH3:1 y 4:0, (los centrómeros homólogos dual (sondas locus específicas para losmigran al mismo polo). El modo de Los estudios de segregación del cromosomas 13 y 21).segregación alternante es el único que tetravalente y de ICE se realizan de forma 2. Lavado de las sondas: Se eliminaronpuede dar lugar a gametos normales o independiente en distintas fracciones mediante una solución citrato-sódicaequilibrados, mientras que el resto de de la muestra, y no es posible establecer salina en condiciones altamentesegregaciones resultará en gametos relaciones entre los resultados astringentes (0,0625xSSC).desequilibrados para los cromosomas obtenidos. El objetivo de este trabajo es 3. Segunda ronda de hibridación: Sereorganizados. realizar ambos estudios en los mismos utilizaron combinaciones específicas de espermatozoides mediante una FISH sondas para los cromosomas implicadosEn la literatura existen varios estudios secuencial, y así poder determinar si en cada reorganización, que permitieronrealizados con FISH en espermatozoides existe una relación entre la ocurrencia identificar los diferentes productos desobre la frecuencia de gametos de los diferentes modos de segregación segregación del tetravalente. Las sondasequilibrados y desequilibrados del tetravalente y la producción de utilizadas en cada paciente se detallan enen portadores de translocaciones anomalías cromosómicas numéricas. la Tabla I.recíprocas. A pesar de que en algunoscasos se describen valores extremos Tabla I. Combinaciones de sondas utilizadas para los estudios de segregaciónen la frecuencia de segregacionesdesequilibradas, con rangos desde Paciente Cariotipo Sondas19% hasta el 80% (revisado por Morel CEP 8 LSI 8q24 LSI 5pl5.2 P1 46, XY, t (5;8)(q33; q13)et al., 2004), la mayoría de individuos (SA) (SO) (SG)analizados presentan frecuencias que se P2 46, XY, t (8;14)(q22; q32) CEP 8 Tel 14q Tel 8qajustan al patrón estándar de segregación (SA) (SO) (SG)*observado por Anton et al., 2008. LSI9q34 Tel 19q Tel 19p P3 46, XY, t (9;19)(q10; p10)Según éste, la segregación preferente (SA) (SO) (SG)es la alternante, con un porcentaje de SA: Spectrum Aqua, visible con el filtro específico Aqua; SO; Spectrum Orange, visible con el filtro específico46,5% ± 6.5 (media ± DE), mientras Cy3; SG: Spectrum Green, visible con el filtro específico FITC. Todas las sondas son de Vysis, Abbott Molecular Inc., excepto * (Qbiogene Inc., Irvine, CA, USA)
  14. 14. A R TT II IT U LL O T T TTULO O Í CU L O U I Anna Godo. Desequilibrios cromosómicos en espermatozoides de individuos portadores de translocaciones recíprocas14 Referente a los análisis de ICE, las Marzhauser Wetzlar; Isis Fluorescence RESULTADOS muestras P1 y P3 se valoraron de Image System, Metasystems, Germany). forma automática con el sistema Spot- El número de espermatozoides Counting (Spot AX software, Applied El análisis del patrón de segregación analizados se resume en la Tabla II. Imaging, Newcastle, U.K.) (Molina et se realizó de forma diferencial en dos En los estudios de ICE, se valoraron al., 2009) acoplado al microscopio poblaciones de gametos para cada un total de 10706 (P1), 5181 (P2) BX-61 (Olympus, Barcelona, España) individuo: (i) fracción aleatoria de y 12319 (P3) espermatozoides equipado con filtros específicos para espermatozoides (no seleccionados), para los cromosomas X, Y, 18; y de DAPI (4’,6-diamidino-2-phenylindole), y (ii) espermatozoides portadores de 11844 (P1), 4192 (P2) y 10486 (P3) Aqua, FITC (fluorescein isothiocyanate) anomalías numéricas (detectados en los espermatozoides para los cromosomas y Cy3 (cytochrome 3). Este sistema análisis de ICE previos). En este último 13 y 21. En conjunto, se clasificaron permite almacenar información relativa caso, los espermatozoides aneuploides como diploides o aneuploides para a la localización y a los parámetros y diploides se relocalizaron de forma alguno de los cromosomas analizados morfológicos de los núcleos, además automática o manual, según el método un total de 762 (P1), 329 (P2) y 401 (P3) del número e intensidad de las en que se inició el estudio. espermatozoides. En la segunda ronda de señales presentes en cada uno de hibridación (estudio de segregación) se los espermatozoides analizados. La Para la valoración de las muestras se relocalizaron y analizaron los siguientes muestra del individuo P2 se analizó de siguieron los criterios estrictos de porcentajes de espermatozoides forma manual con el microscopio BX-60 valoración, referentes a la intensidad, aneuploides/diploides: 92.4% (Olympus) con un filtro de triple banda el tamaño y la localización de las señales (704/762) (P1), 83.9% (276/329) (P2) y otros específicos para FITC, Cy3, Aqua. de hibridación descritos en nuestro y 94.5% (379/401) (P3). Los productos En cualquier caso (automático o manual) grupo (Blanco et al., 1996). Para cada resultantes de la segregación también se capturaron imágenes y se anotó la individuo, las frecuencias encontradas se valoraron en una fracción aleatoria localización de los espermatozoides se analizaron estadísticamente de espermatozoides en cada individuo: aneuploides o diploides valorados mediante el test χ2 (SSP v2.8, 396 (P1), 100 (P2) y 100 (P3). en cada panel de cromosomas (Spot Claremont, California), considerando AX software; Sensor Control Display, un intervalo de confianza del 95%. Tabla II. Número total de espermatozoides analizados en cada uno de los individuos Paciente Análisis Anomalías Análisis segregación Análisis segregación ICE1 numéricas2 muestra seleccionada3 muestra no seleccionada4 P1 22550 762 704 396 P2 9373 329 276 100 P3 22805 401 376 100 1 Nº total de espermatozoides valorados en los estudios de ICE para los cromosomas 18/X/Y y 13/21 2 Nº de espermatozoides con anomalías numéricas para alguno de los cromosomas X, Y, 13, 18 o 21 encontrados en los análisis de ICE 3 Nº de espermatozoides con anomalías numéricas relocalizados y valorados en el análisis de segregación 4 Nº de espermatozoides valorados al azar en el análisis de segregación Los resultados referentes a la gametos equilibrados de 43.5 ± 2.7% El análisis de los patrones de segregación valoración de los diferentes modos de (media ± DE), siendo la segregación en la población de espermatozoides segregación en las dos poblaciones alternante el modo más representado. portadores de anomalías numéricas de espermatozoides analizadas se Del resto de segregaciones, la que se mostró un cambio en los porcentajes muestran en la Figura 1. observó con mayor frecuencia (media de segregación. Los porcentajes de ± DE) fue la adyacente I (30.8 ± 7.6), gametos equilibrados fueron tan sólo El análisis en la población no seguida de la 3:1 (15.1 ± 1), adyacente de 11.1% (P1); 16.3% (P2) y 6.3% seleccionada muestra un porcentaje de II (7.8 ± 6.5) y 4:0 (0.7 ± 0.6). (P3). En este caso, los productos de
  15. 15. A R T T IC U L O Í TULO I Rev Asoc Est Biol Rep Junio 2012 Vol. 17 Nº 1 15Figura 1. Frecuencias de espermatozoides obtenidas en los análisis de segregación realizados en la muestra seleccionada (portadoresde anomalías numéricas) y no seleccionada de P1, P2 y P3 P1 50 Población 45 no seleccionada 40 Población 35 % espermatozoides seleccionada 30 25 20 15 10 05 00 Alt. Ad. I Ad. II 3:1 4:0 Otras P2 50 45 40 35 % espermatozoides 30 25 20 15 10 05 00 Alt. Ad. I Ad. II 3:1 4:0 Otras P3 50 45 40 35 % espermatozoides 30 25 20 15 10 05 00 Alt. Ad. I Ad. II 3:1 4:0 Otras * indica p-valor 0.05 respecto poblaciones no seleccionadas de espermatozoidessegregación mayoritarios fueron los estándar observado en portadores de en las poblaciones de espermatozoidesdesequilibrados, con valores medios de translocaciones recíprocas, en el que con anomalías numéricas, se detectó(media ± DE) 31.7 ± 28.1 (segregación predominan los gametos equilibrados una reducción significativa de las4:0), 29.9 ± 8.1 (segregación 3:1), 9.2 ± productos de la segregación alternante, segregaciones alternante y adyacente I.4.3 (segregación adyacente I) y 5.2 ± 2.6 seguida de la adyacente I (Anton et al., Por otro lado, en esta misma población, se(segregación adyacente II). La categoría 2008). Por otro lado, los resultados de detectaron incrementos significativos de“otras” incluyó combinaciones de segregación en la población de gametos las segregaciones 3:1, 4:0 y de la categoríasondas no esperadas según los modos portadores de anomalías numéricas “otras”.teóricos de segregación, y se encontró mostraron una clara desviación del patrón.representada por una media de 12.1 ± Al comparar las frecuencias de cada modo de DISCUSIÓN4% espermatozoides. segregación hallado en las dos poblaciones de espermatozoides estudiadas, se La condición aneuploide/diploide seLos resultados de segregación obtenidos evidenciaron diferencias estadísticamente encuentra preferentemente asociada aen la población de espermatozoides no significativas en la mayoría de los la presencia de productos de segregaciónseleccionados se ajustaron al patrón modos de segregación. En concreto, del tetravalente que implican una no
  16. 16. A R TT IÍ T U LL O C U O I Anna Godo. Desequilibrios cromosómicos en espermatozoides de individuos portadores de translocaciones recíprocas16 disyunción (centrómeros homólogos en et al., 2001). En células portadoras de Molina O, Sarrate Z, Vidal F, Blanco J. Fish on el mismo polo celular), especialmente las translocaciones recíprocas, el número sperm:spot-conting to stop counting? Not segregaciones 3:1 y 4:0. En cambio, las de espermatocitos con este tipo de yet. Fertil Steril. 2009;92:1474-1480. segregaciones alternante y adyacente I alteraciones es muy elevado. En esta (los centrómeros homólogos migran a situación, es plausible esperar una Morel F, Douet-Guilbert N, Le Bris MJ, Herry A, polos celulares opuestos) se encuentran frecuencia de gametos con alteraciones Amice V, Amice J, et al. Meiotic segregation of reducidas significativamente. Estos cromosómicas que escapen al SAC translocations during male gametogenesis. resultados sugieren que el fenómeno de proporcionalmente incrementada. Int Journal of Andrology. 2004;27:200-212. ICE y las segregaciones desequilibradas Estos eventos explicarían por qué la 3:1 y 4:0 son sucesos dependientes célula presentaría errores derivados Nielsen J, Wohlert M. Chromosome y que están condicionados por las de una segregación anómala de los abnormalities found among 34,910 newborn interacciones cromosómicas que se cromosomas reorganizados, además children: results from a 13-year incidence establecen durante el proceso meiótico de errores en la disyunción de otros study in Arhus, Denmark. Hum Genet. (heterosinapsis), y por el nivel de cromosomas. 1991;87:81-83. eficiencia de los puntos de control. En consecuencia, los portadores de AGRADECIMIENTOS Oliver-Bonet M, Benet J, Sun F, Navarro J, translocaciones recíprocas producen Abad C, Liehr T, et al. Meiotic studies in two espermatozoides que acumulan Este trabajo se ha realizado con human reciprocal translocations and their anomalías cromosómicas procedentes la financiación de los proyectos association with spermatogenic failure. Hum de dos orígenes distintos. SAF2010-22241, SGR2009-282 y UAB Reprod. 2005; 20:683-688. CF-180034. AG es beneficiaria de una La heterosinapsis se produce en beca predoctoral PIF 456-01-4/2011. Sarrate Z, Anton E. Fluorescence in situ portadores de translocaciones Queremos agradecer el suministro de hybridization (FISH) Protocol in Human recíprocas entre el tetravalente y las muestras a los centros I.B.Q. Flor de Sperm. J Vis Exp. 2009;31. pii:1405. doi: regiones asinápticas de otros bivalentes Maig y CPC (Barcelona). 10.3791/1405. (Oliver-Bonet et al., 2005). Este mecanismo se ha descrito como una REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS Sciurano R, Rahn M, Rey-Valzacchi G, Solari estrategia que adopta el espermatocito AJ. The asynaptic chromatin in spermatocytes para evitar la activación del punto de Anton E, Vidal F, Blanco J. Reciprocal of translocation carriers contains the histone control de sinapsis y recombinación en translocations: tracing their meiotic variant gamma-H2AX and associates with la etapa de paquiteno (profase I) que behaviour. Genet Med. 2008;10:730-8. the XY body. Hum Reprod. 2007;22:142-50. conllevaría apoptosis (Sciurano et al., 2007). Los resultados obtenidos indican Blanco J, Egozcue J, Vidal F. Incidence Vogt E, Kirsch-Volders M, Parry J, Eichenlaub- que la heterosinapsis podría tener un of chromosome 21 disomy in human Ritter U. Spindle formation, chromosome efecto recíproco, que condicionaría spermatozoa as determined by fluorescent segregation and the spindle checkpoint in tanto la segregación del tetravalente in-situ hybridization. Hum Reprod. mammalian oocytes and susceptibility to como la de otros bivalentes implicados. 1996;11:722-6. meiotic error. Mutat Res. 2008;651:14-29. Por otro lado, durante la transición Burgoyne PS, Mahadevaiah SK, Turner metafase I-anafase I, la presencia del JMA. The consequences of asynapsis for tetravalente en la placa metafásica mammalian meiosis. Nat Rev Genetics. podría implicar una activación 2009;10:207-16. prolongada del punto de control de formación del huso meiótico (SAC) De Braekeleer M, Dao TN. Cytogenetic studies (Vogt et al., 2008). En esta situación, la in male infertility: a review. Hum Reprod. formación de gametos desequilibrados 1991;6:245-250. y con anomalías numéricas se podría originar por dos vías. En primer lugar, Eaker S, Pyle A, Cobb J, Handel MA. Evidence la no reparación de las anomalías for meiotic spindle checkpoint from analysis detectadas podría derivar en la of spermatocytes from Robertsonian- ausencia de citocinesis y la consecuente chromosome heterozygous mice. J Cell Sci. producción de espermatozoides 2001;114:2953-2965. diploides (Egozcue et al., 2000). En segundo lugar, existen indicios de Egozcue S, Blanco J, Vendrell JM, Garcia F, que el punto de control del SAC no Veiga A, Aran B, et al. Human male infertility: es del todo eficiente en la detección chromosome anomalies, meiotic disorders, y eliminación de espermatocitos con abnormal spermatozoa and recurrent alteraciones en la disposición de los abortion. Hum Reprod Update. 2000;6:93- bivalentes en el huso meiótico (Eaker 105.
  17. 17. A R T ÍT CTULO O I U L I I Rev Asoc Est Biol Rep Junio 2012 Vol. 17 Nº 1 17PATRÓN DE MOVILIZACIÓN DEL [Ca2+]i , APOPTOSIS Y PAPEL DELA ACTINA EN PACIENTES ASTENOZOOSPÉRMICOS[Ca2+]i MOBILIZATION, APOPTOSIS AND ROLE OF ACTIN IN ASTHENOZOOSPERMICPATIENTS*Graciela M. Lozano, Águeda Ortiz, Fabián Monllor, Mª Isabel Jiménez, Juan Francisco García.Hospital Materno Infantil. Centro Extremeño de Reproducción Humana Asistida (C.E.R.H.A). C/ Violeta SN. 06010. Badajoze-mail: laoliventina@hotmail.comFecha recepción: 30 Marzo 2012Fecha aceptación: 12 Abril 2012 RESUMEN La astenozoospermia se caracteriza por la disminución o ausencia total de movilidad espermática y es una de las alteraciones más comunes en los pacientes estériles. La señalización de calcio intracelular es una importante llave reguladora de muchos procesos celulares, entre ellos el movimiento espermático. El objetivo de este trabajo es analizar el papel del calcio en las muestras de pacientes astenozoospérmicos estimulando la señal de calcio intracelular con progesterona. Rev Asoc Est Biol Rep 2012; 17(1):17-25 Palabras clave: Astenozoospermia, Calcio, Progesterona, Citoesqueleto, Apoptosis. SUMMARY Asthenozoospermia is characterized by reduced forward motility or absent sperm motility and is a common cause in male infertility. The Calcium signalling is a pivotal key in sperm physiology envolved in the motility of the sperm. We investigated the role of calcium signalling evoked by progesterone. Rev Asoc Est Biol Rep 2012; 17(1):17-25 Key words: Asthenozoospermia, Calcium, Progesterone, Cytoskeleton, Apoptosis.INTRODUCCIÓN progesterona (Kirkman-Browm et como receptores quimiotácticos al., 2002; Bedu-Addo et al., 2007) (Eisenbach et al., 2006). Al mismoEstá bien establecido que la probablemente provocadas por la tiempo, aumentos en la señalización yseñalización del [Ca2+]i juega un interacción de la progesterona con concentración de [Ca2+]i pueden revelarsepapel importante en la fisiología del receptores de superficie presentes en los como señales apoptóticas que induzcanespermatozoide humano, estando espermatozoides (Blackmore et al., 1994). a la célula a una muerte programada.íntimamente relacionado con muchos El equilibrio entre el aumento de laaspectos funcionales de los mismos Esta habilidad de la progesterona para concentración de [Ca2+]i y la capacidad de(Félix, 2005; Jiménez-González et producir un aumento del [Ca2+]i en la célula para responder a estos estímulosal., 2006), tales como el control de la espermatozoides humanos ha sido es crucial para la supervivencia celular.movilidad, incluyendo hiperactivación directamente correlacionada con éxitosy quimiotaxis, donde la señalización de fecundación in vitro (Krausz et al., La astenozoospermia es una causa comúndel [Ca2+]i es imprescindible para 1996; Publicover et al., 2008). de esterilidad masculina caracterizadaproducir el movimiento del flagelo. por una reducción o ausencia total de La progesterona está presente en altas movilidad espermática. Alteraciones deDe hecho, una movilidad anormal concentraciones en el líquido folicular los factores que regulan la movilidadpodría estar relacionada con niveles y es sintetizada antes y después de la espermática y su estructura celular ybajos en la concentración de [Ca2+]i ovulación por células del cúmulo oóforo metabólica son los responsables de este(Luconi, 2003), debido a alteraciones del ovocito. Aunque la capacidad de la defecto, de hecho, en los últimos años,en la entrada capacitativa de calcio progesterona para inducir la RA está bien se ha comprobado que en pacientes con(ECC) a través de canales específicos establecida, parece ser que el aumento astenozoospermia, hay una reducciónpudiendo influir también en la de [Ca2+]i que produce está relacionado de los receptores de progesteronareacción acrosómica (RA) de los con la regulación de la actividad (Gadkar et al., 2002), así como unaespermatozoides (Rossato, 2001). flagelar y de la quimiotaxis (Ulher et relación entre la infertilidad masculina y al., 1992), resultando ser un potente la incapacidad de esos espermatozoidesEl aumento citosólico de calcio se puede quimioatrayente para el espermatozoide para responder a progesterona in vitrofavorecer con dosis micromolares de humano, pudiendo actuar sus receptores (Krausz et al., 1995).

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