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UNIVERSIDAD DE LOS ANDES
CONSEJO DE ESTUDIOS DE POSTGRADO
POSTGRADO DE BIOTECNOLOGIA EN MICROORGANISMOS
M.V. MSc. Datty Rosales-Zambrano
Tutor: Pablo García-Lugo
Mérida, Enero 2015
 Introducción
 Generalidades de Enfermedades
transmitidas por alimentos (ETA´s)
 Principales Patógenos asociados de
ETA´s.
 Patógenos de origen animal
 Prevención y Control de ETA`s
INTRODUCCION
 Rol de la Industria alimentaria en salud
publica.
 Alimento es un excelente vehículo de
microorganismos.
 Responsables a diario de morbi mortalidad
en el mundo.
 Epidemiologia cambiante (BASICO)
 La leche es una de las vías mas importantes.
 Actúan microorganismos flora normal del
animal o patógenos .
Generalidades de las ETA´s
 Problema mundial
 Incremento en los últimos 50 años
 Alrededor de 250 enfermedades,
implicados virus, bacterias y
parásitos.
 Impacto de la Globalización.
Numero estimado de enfermos y fallecidos por año, causados por
infección con patógenos bacterianos asociados con alimentos
PATOGENO
CASOS
(103)
MUERTES
(103)
ALIMENTOS
Campylobacter
jejuni
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Aves, leche cruda y
agua no tratada
Salmonella (no
tifoidea)
2000 0.5-2
Huevos, carne aves,
productos frescos,
otros alimentos
crudos
Escherichia coli.
O157:H7
725 0.1-0.2
Carne molida, leche
cruda, lechuga, agua
no tratada, jugo de
sidra/manzana
Listeria
monocytogenes
1.5 0.25-0.5
Alimentos listos
para comer (quesos
frescos, alimentos
deli, pates.
 Signos Clínicos ETA´s:
 Diarrea
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 Fiebre
 Choque séptico
 Hepatitis
 Cefaleas
• E. coli 0157:H7 : síndrome urémico hemolítico
(SHU)
 Listeria monocitigenes: abortos, meningitis
 Salmonella: sepsis, artritis reactiva.
 Campylobacter: síndrome de Guillian-Barre
 70 % diarreas agudas.
 Últimos 9 años 6332
reportes de brotes:
 6 % Andina
 63 % Caribe
 4 % Centro América
 10 % NA
 17 % Cono Sur
 Detección de microorganismos:
 Planta de alimentos: sensibilidad método.
 Bacteriología Clásica en función de
Métodos Moleculares.
 Pulse Net (CDC).
Salmonella sp.
 Serotipos limitados:
 S. dublin
 S. cholerasuis
 S. abortusequi
 Baja morbilidad
 Alta mortalidad
 Serotipos generales:
 S. typhimurium
 Alta morbilidad
 Baja mortalidad
(Hoelzer et al., 2011)
 Incremento a partir de los 90`s
 Serotipos específicos:
• S. paratyphi
• S. gallinarum bv gallianrum
• S. gallinarum bv pullorum
• S. typhi
Distribución de los 20 serotipos de Salmonellas animales, basados en
datos de USA del 2006. Salmonella typhi fue excluida de los análisis
porque esta es un serotipo de hospedador limitado adaptado a los
humanos y primate no humanos. (Hoelzer et al., 2011).
Bovinos
Cerdos
Cabras/Oveja
s
Caballos
Perros/Gatos
Roedores
Animales Silv
Gallinas
Patos
Aves
Silvestres
Reptiles
Peces
 Mas brotes por Salmonellas entéricas.
 82 % asociados a huevos grado A.
 Una vez establecida difícil de erradicar
(roedores y estiércol).
 94 millones de casos al año
 155.000 muertes
 Distribución: 55 % alimentarios, 14 %
viajes, 13 % ambientales, 9 % transmisión
humano-humano, 9 % zoonosis.
Campylobacter jejuni
•Flora saprofita de animales
domésticos
•Aves portadoras sanas
•Reconocido como patógeno
emergente.
•Consumo de aves, leche cruda y
agua no potable.
•Síndrome de Guillian-Barre
Clase: Epsilonproteobacteria
Orden: Campylobacteriales
Familia: Campilobacteraceae
Genero: Campylobacter
Especies:
C. jejuni
C. coli
C. fetus
•Gram negativo
•Micro aerofilico
•Mesófilo
•Móvil
•Flagelado
•Medios de cultivos complejos y
altamente selectivo
Infecciones asociadas a leche bovina no pasteurizada en USA,
1980-1985
Sharp et al, 1987
Escherichia coli
•Gram negativo
•Flagelado
•No esporulado
•Anaerobio facultativo
•Leche reservorio de STEC
(Momtaz et al., 2012)
• Clasifican:
Factores de virulencia
Stx1, Stx2,
eae, ehly.
Patotipos.
Clase: Gammaproteobacterias
Orden: Enterobacteriales
Familia: Enterobacteraceae
Genero: Escherichia
• Serotipo O157:H7. Zoonótico
• 1982 primer brote grande en USA
•Primera causa de diarrea hemorrágica
• Síndrome Urémico Hemolítico:
Mortalidad 3-5 %
Falla renal crónica 12 %
•Alimentos:
Carne molida, lechuga, leche
cruda y agua.
Listeria monocytogenes
• Infección no común en humano
•Fatal:
Feto
RN
Pacientes IC
•Afecta SNC (Invasiva)
•Bacteremia alta mortalidad 20 %
•Gastroenteritis (No invasiva)
•Psicrófila
•Intracelular facultativa (Goulet et
al., 2013)
Clase: Bacilli
Orden: Bacillales
Familia: Lactilobacilaceae
Genero: Listeria
Especies:
L. monocytogenes
L. ivannovii
L. inoccua
L. welchschimeri
L. seeligeri
L. marthi
L. grayi
Mecanismos Potenciales para atravesar la
barrera HE: A) Lm esta extracelular B) Modelo
troyano
 Periodo de incubación ~ 30 días
 Leche cruda, queso fresco, leche mal
pasteurizada, ensalada repollo.
 TOLERANCIA CERO (0)
Yersinia enterocolitica
• Bacteria ubicua
• Psicrófila
• Transmisión oro fecal mas común
• Puede estar en: vegetales, agua sin tratar (Bari et al., 2011)
• Cultivo difícil, lento, CVNC.
• En Finlandia (30 %) y Alemania (43 %) presentan Acs:
¿Posible enfermedad SC??? (Fredriksoon-Ahomaa et al., 2006).
Clase: Gammaproteobacterias
Orden: Enterobacteriales
Familia: Enterobacteraceae
Genero: Yersinia
Especies Zoonoticas:
Y. enterocolitica
Y. pestis
Y. pseudotuberculosis
 Encefalopatía Espongiforme Bovina
 Toxoplasma gondii
 Trichinella spiralis
 Brucella spp
Ciclo Transmisión Toxoplasma gondii
Ciclo Transmisión Trichinella spiralis
Ciclo Transmisión Brucella sp.
•
 No hay manera de asegurar la salud de los
animales entre las inspecciones
 Periodo de incubación
 No todos los microorganismos pueden ser
detectados rutinariamente
 Pequeños productores no acopian leche
 Consumo de leche cruda, no se reportan
brotes esporádicos.
 Consumo de leche cruda ha incrementado
(White et al., 1982).
Según OMS
 Mycobacterium bovis
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 Pseudomona aureginosa
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 Streptococcus agalactiae
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de la leche
 Comensales
 Mastitis
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(Angulo et al., 2009)
 Tamaño de finca
 Número de
animales
 Prácticas de
manejo
 Muestreo
 Ubicación
geográfica
 Estaciones.
(Oliver et al., 2005)
 Leche pasteurizada en comparación con
leche cruda.
 Listeria, Salmonella y E. coli EP,
frecuentemente aislada del ganado y
ambientes.
 Vacuno es reservorio E. coli O157:H7
 Excreción fecal de Listeria, Salmonella y E.
coli EP Tanque de leche
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Mamaria
Fecal
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de Campylobacter jejuni y E. coli productora de Shiga-toxina
Oliver, 2005
Estudio del Sistema Nacional de Salud Animal
USA 2002.
 21 estados
 861 tanques
 Coliformes en 818
tanques (95 %)
 Salmonella 22 fincas (2,6
%).
 Listeria 56 fincas (6,5 %)
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Van Kessel,2004
 S. aureus:
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al., 2005).
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○ Aislado Kenia (Ombui et
al., 1992) y Trinidad
(Adesiyun et al., 1992),
en muestras de tanque.
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publica
○ En el año 2002 en
Japón, brote con Leche
descremada con toxina
A. (Asao et al., 2003).
 Campylobacter:
 No común en mastitis
 Excreción en leche en
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 Estiércol de vaca
principal reservorio
 Considerar su uso
como abono en
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Infecciones humanas asociadas con leche cruda de vaca en Europa
1980-1985
Sharp,1987
Siglo XX
 Pasteurización
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Alimentaria Siglo
XXI
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Consideraciones asociadas a
Salud Publica en la IL.
 Contaminación y multiplicación de
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componentes
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CALIDAD
DE
LECHE
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Ordeño
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Normas Básicas en Rutina de Ordeño
 Lavado de los pezones
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equipado
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ordeño instalado adecuadamente para garantizar
higiene.
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 Antes de empezar labores debe estar totalmente
limpio y desinfectado
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y desinfección del equipo e implementos
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preventivas
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correctivas
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Fuentes de agua Introducción y
diseminación
de PZ y CB
Análisis
periódico de las
aguas, Clorinado
y protección de
pozos
No Clorinado.
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efluentes
cerca de los
pozos.
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análisis de
agua.
Instalación del
sistema de
clorinado
Registros de
análisis, fechas de
clorinado.
Limpieza del
equipo de ordeño
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PZ y CB
Correcta
limpieza y
desinfección
post-ordeño
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inadecuada
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superficies
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sistema de
lavado
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sistema de lavado
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del tanque de
enfriamiento
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PZ y CB
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periódico
No a 3-4 C
en los
primeros 30
min
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diariamente
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tanque.
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termómetro
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tanque de
enfriamiento
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adecuada
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diaria
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Conclusiones
 Las ETAs abarcan un
amplio rango de noxas
 Leche, huevos, aves y
agua no tratada,
principales vías de
trasmisión.
 Afectadas por la
globalización , turismo y
cambios de hábitos
 América Latina 70 %
diarreas causadas por
ETAs
 Establecimiento de redes
mundiales para
identificación de
patógenos
 Las bacterias psicrófilas
son un desafío en la
industria alimentaria
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establecidas por
OIE,OMS, FAO, Codex,
Covenin.
 La leche sujeta a
contaminación en muchas
etapas.
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  • 1. DRZ
  • 2. UNIVERSIDAD DE LOS ANDES CONSEJO DE ESTUDIOS DE POSTGRADO POSTGRADO DE BIOTECNOLOGIA EN MICROORGANISMOS M.V. MSc. Datty Rosales-Zambrano Tutor: Pablo García-Lugo Mérida, Enero 2015
  • 3.  Introducción  Generalidades de Enfermedades transmitidas por alimentos (ETA´s)  Principales Patógenos asociados de ETA´s.  Patógenos de origen animal  Prevención y Control de ETA`s
  • 4. INTRODUCCION  Rol de la Industria alimentaria en salud publica.  Alimento es un excelente vehículo de microorganismos.  Responsables a diario de morbi mortalidad en el mundo.  Epidemiologia cambiante (BASICO)  La leche es una de las vías mas importantes.  Actúan microorganismos flora normal del animal o patógenos .
  • 5. Generalidades de las ETA´s  Problema mundial  Incremento en los últimos 50 años  Alrededor de 250 enfermedades, implicados virus, bacterias y parásitos.  Impacto de la Globalización.
  • 6. Numero estimado de enfermos y fallecidos por año, causados por infección con patógenos bacterianos asociados con alimentos PATOGENO CASOS (103) MUERTES (103) ALIMENTOS Campylobacter jejuni 4000 0.2-1 Aves, leche cruda y agua no tratada Salmonella (no tifoidea) 2000 0.5-2 Huevos, carne aves, productos frescos, otros alimentos crudos Escherichia coli. O157:H7 725 0.1-0.2 Carne molida, leche cruda, lechuga, agua no tratada, jugo de sidra/manzana Listeria monocytogenes 1.5 0.25-0.5 Alimentos listos para comer (quesos frescos, alimentos deli, pates.
  • 7.  Signos Clínicos ETA´s:  Diarrea  Vomito  Fiebre  Choque séptico  Hepatitis  Cefaleas
  • 8. • E. coli 0157:H7 : síndrome urémico hemolítico (SHU)  Listeria monocitigenes: abortos, meningitis  Salmonella: sepsis, artritis reactiva.  Campylobacter: síndrome de Guillian-Barre
  • 9.  70 % diarreas agudas.  Últimos 9 años 6332 reportes de brotes:  6 % Andina  63 % Caribe  4 % Centro América  10 % NA  17 % Cono Sur
  • 10.  Detección de microorganismos:  Planta de alimentos: sensibilidad método.  Bacteriología Clásica en función de Métodos Moleculares.  Pulse Net (CDC).
  • 11.
  • 12. Salmonella sp.  Serotipos limitados:  S. dublin  S. cholerasuis  S. abortusequi  Baja morbilidad  Alta mortalidad  Serotipos generales:  S. typhimurium  Alta morbilidad  Baja mortalidad (Hoelzer et al., 2011)  Incremento a partir de los 90`s  Serotipos específicos: • S. paratyphi • S. gallinarum bv gallianrum • S. gallinarum bv pullorum • S. typhi
  • 13. Distribución de los 20 serotipos de Salmonellas animales, basados en datos de USA del 2006. Salmonella typhi fue excluida de los análisis porque esta es un serotipo de hospedador limitado adaptado a los humanos y primate no humanos. (Hoelzer et al., 2011). Bovinos Cerdos Cabras/Oveja s Caballos Perros/Gatos Roedores Animales Silv Gallinas Patos Aves Silvestres Reptiles Peces
  • 14.  Mas brotes por Salmonellas entéricas.  82 % asociados a huevos grado A.  Una vez establecida difícil de erradicar (roedores y estiércol).  94 millones de casos al año  155.000 muertes  Distribución: 55 % alimentarios, 14 % viajes, 13 % ambientales, 9 % transmisión humano-humano, 9 % zoonosis.
  • 15. Campylobacter jejuni •Flora saprofita de animales domésticos •Aves portadoras sanas •Reconocido como patógeno emergente. •Consumo de aves, leche cruda y agua no potable. •Síndrome de Guillian-Barre Clase: Epsilonproteobacteria Orden: Campylobacteriales Familia: Campilobacteraceae Genero: Campylobacter Especies: C. jejuni C. coli C. fetus •Gram negativo •Micro aerofilico •Mesófilo •Móvil •Flagelado •Medios de cultivos complejos y altamente selectivo
  • 16. Infecciones asociadas a leche bovina no pasteurizada en USA, 1980-1985 Sharp et al, 1987
  • 17. Escherichia coli •Gram negativo •Flagelado •No esporulado •Anaerobio facultativo •Leche reservorio de STEC (Momtaz et al., 2012) • Clasifican: Factores de virulencia Stx1, Stx2, eae, ehly. Patotipos. Clase: Gammaproteobacterias Orden: Enterobacteriales Familia: Enterobacteraceae Genero: Escherichia • Serotipo O157:H7. Zoonótico • 1982 primer brote grande en USA •Primera causa de diarrea hemorrágica • Síndrome Urémico Hemolítico: Mortalidad 3-5 % Falla renal crónica 12 % •Alimentos: Carne molida, lechuga, leche cruda y agua.
  • 18. Listeria monocytogenes • Infección no común en humano •Fatal: Feto RN Pacientes IC •Afecta SNC (Invasiva) •Bacteremia alta mortalidad 20 % •Gastroenteritis (No invasiva) •Psicrófila •Intracelular facultativa (Goulet et al., 2013) Clase: Bacilli Orden: Bacillales Familia: Lactilobacilaceae Genero: Listeria Especies: L. monocytogenes L. ivannovii L. inoccua L. welchschimeri L. seeligeri L. marthi L. grayi
  • 19. Mecanismos Potenciales para atravesar la barrera HE: A) Lm esta extracelular B) Modelo troyano
  • 20.  Periodo de incubación ~ 30 días  Leche cruda, queso fresco, leche mal pasteurizada, ensalada repollo.  TOLERANCIA CERO (0)
  • 21. Yersinia enterocolitica • Bacteria ubicua • Psicrófila • Transmisión oro fecal mas común • Puede estar en: vegetales, agua sin tratar (Bari et al., 2011) • Cultivo difícil, lento, CVNC. • En Finlandia (30 %) y Alemania (43 %) presentan Acs: ¿Posible enfermedad SC??? (Fredriksoon-Ahomaa et al., 2006). Clase: Gammaproteobacterias Orden: Enterobacteriales Familia: Enterobacteraceae Genero: Yersinia Especies Zoonoticas: Y. enterocolitica Y. pestis Y. pseudotuberculosis
  • 22.
  • 23.  Encefalopatía Espongiforme Bovina  Toxoplasma gondii  Trichinella spiralis  Brucella spp
  • 27.
  • 28.
  • 29.  No hay manera de asegurar la salud de los animales entre las inspecciones  Periodo de incubación  No todos los microorganismos pueden ser detectados rutinariamente  Pequeños productores no acopian leche  Consumo de leche cruda, no se reportan brotes esporádicos.  Consumo de leche cruda ha incrementado (White et al., 1982).
  • 30. Según OMS  Mycobacterium bovis  Brucella abortus  Coxiella burnetti  Pseudomona aureginosa  Staphylococcus aureus  Streptococcus agalactiae  Escherichia coli
  • 31. Principales fuentes de contaminación de la leche  Comensales  Mastitis  Ambientales (Angulo et al., 2009)  Tamaño de finca  Número de animales  Prácticas de manejo  Muestreo  Ubicación geográfica  Estaciones. (Oliver et al., 2005)
  • 32.  Leche pasteurizada en comparación con leche cruda.  Listeria, Salmonella y E. coli EP, frecuentemente aislada del ganado y ambientes.  Vacuno es reservorio E. coli O157:H7  Excreción fecal de Listeria, Salmonella y E. coli EP Tanque de leche
  • 34. Frecuencias de aislamiento en leche almacenada en tanque de Campylobacter jejuni y E. coli productora de Shiga-toxina Oliver, 2005
  • 35. Estudio del Sistema Nacional de Salud Animal USA 2002.  21 estados  861 tanques  Coliformes en 818 tanques (95 %)  Salmonella 22 fincas (2,6 %).  Listeria 56 fincas (6,5 %) Frecuencia de Distribución de Coliformes Fecales. Van Kessel,2004
  • 36.  S. aureus:  Cepas enterotoxigenicas: toxinas A-H y toxina de shock toxico (Oliver et al., 2005).  S. aureus ET: ○ Aislado Kenia (Ombui et al., 1992) y Trinidad (Adesiyun et al., 1992), en muestras de tanque. ○ Potencial riesgo de salud publica ○ En el año 2002 en Japón, brote con Leche descremada con toxina A. (Asao et al., 2003).  Campylobacter:  No común en mastitis  Excreción en leche en vacas sanas.  Estiércol de vaca principal reservorio  Considerar su uso como abono en cultivos
  • 37. Infecciones humanas asociadas con leche cruda de vaca en Europa 1980-1985 Sharp,1987
  • 38.
  • 39. Siglo XX  Pasteurización  Refrigeración  Clorinado de agua  Ingeniería Industrial  Monitoreo de mariscos Seguridad Alimentaria Siglo XXI
  • 40.  Patógenos conocidos y patógenos emergentes.  Procesos en monitoreo constante:  Clorinado del agua  Beneficio de animales ( bovinos, cerdos, aves, mar)  Radiación de alimentos  Reducción de microorganismos en productos agrícolas crudos
  • 41. Análisis de Puntos Críticos de Control  Años cincuenta  Uso industria alimentos, farmacéutica y cosmética.  Riesgo físico, químico, biológico  Implementación en los años 90´s
  • 42. Componentes de un Sistema de APCC
  • 43. Industria Láctea y Seguridad Alimentaria  El tanque de leche fuente de patógenos  Brotes asociados a leche cruda y pasteurizada  Consumo de leche cruda en explotaciones  Producción de quesos fresco  Leche como contaminante en la planta  Limitaciones y fallas de la pasteurización (Oliver et al.,2005).
  • 44. Consideraciones asociadas a Salud Publica en la IL.  Contaminación y multiplicación de microorganismos  Contaminación con gérmenes patógenos  Alteración fisicoquímica de los componentes  Generación de sabores indeseables  Contaminación con químicos.
  • 45. CALIDAD DE LECHE ORDEÑO TRANSPORTE RECEPCIÓN Maquina de Ordeño Implementos Enfriamiento Estiercol, barro, forrajes Microorganismos leche Ordeñadores Frecuencia de llegada Rapidez de recepción Evaluación de calidad Tipo de envases Densidad de fincas Tanque frio Permanencia en el camión Responsabilidad Frecuencia de recolección Puntos de monitoreo para obtener leche de calidad. Magariños,2001
  • 46. Normas Básicas en Rutina de Ordeño  Lavado de los pezones  Personal debidamente capacitado, sano y equipado  Sala de ordeño bien construida y equipo de ordeño instalado adecuadamente para garantizar higiene.  Integridad del equipo de ordeño  Antes de empezar labores debe estar totalmente limpio y desinfectado  Luego de cada ordeño debe procederse a lavado y desinfección del equipo e implementos  Filtrado de la leche
  • 47. Puntos Críticos de Control para una finca lechera Punto Critico Control PCC Riesgos Medidas preventivas Limite critico Monitoreo Medidas correctivas Registros Fuentes de agua Introducción y diseminación de PZ y CB Análisis periódico de las aguas, Clorinado y protección de pozos No Clorinado. Liberación de efluentes cerca de los pozos. Revisión del análisis de agua. Instalación del sistema de clorinado Registros de análisis, fechas de clorinado. Limpieza del equipo de ordeño Incremento de PZ y CB Correcta limpieza y desinfección post-ordeño Limpieza inadecuada Evaluación de superficies Chequeo del sistema de lavado Evaluaciones del sistema de lavado Funcionamiento del tanque de enfriamiento Incremento de PZ y CB Mantenimiento periódico No a 3-4 C en los primeros 30 min postordeño Tiempo y temperatura diariamente Reparación del tanque. Revisión del termómetro Evaluación anual Limpieza del tanque de enfriamiento Incremento de PZ y CB Correcto proceso de limpieza Drenaje No limpiar con detergentes apropiados, no tiempo ni temperatura adecuada Observación diaria Revisión del sistema de lavado Medición de ATP- bioluminiscencia
  • 48. Conclusiones  Las ETAs abarcan un amplio rango de noxas  Leche, huevos, aves y agua no tratada, principales vías de trasmisión.  Afectadas por la globalización , turismo y cambios de hábitos  América Latina 70 % diarreas causadas por ETAs  Establecimiento de redes mundiales para identificación de patógenos  Las bacterias psicrófilas son un desafío en la industria alimentaria  Regulaciones estan establecidas por OIE,OMS, FAO, Codex, Covenin.  La leche sujeta a contaminación en muchas etapas.  Establecimiento de PCC en las fincas mejorara la calidad de la leche.