Elisa

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Elisa

  1. 1. RANDY ACUÑA THALÍA SUÁREZ JESSICA LIÑAN ESTEFANY JIMENEZ
  2. 2. ELISA
  3. 3. ¿QUE ES INMUNOENSAYO?  Es una prueba que usan complejos antígeno-anticuerpo (también denominados inmuno complejos) para medir la presencia de un analito específico en una muestra.  Los Inmuno ensayos se diferencian de otros tipos de pruebas de laboratorio ya que usan complejos Ac-Ag para generar una señal que pueda medirse.
  4. 4. ELISA  Se trata de una técnica de laboratorio que fue diseñada por científicos suecos y holandeses en 1971, que permite detectar pequeñas partículas llamadas antígenos, que habitualmente son fragmentos de proteínas.
  5. 5. TIPOS DE ELISA Los diferentes tipos de ELISA son: Anticuerpos marcados:  ELISA Directo  ELISA Indirecto  ELISA sándwich  Doble (DAS)  Heterólogo (HADAS) Antígeno marcado: o ELISA competitivo
  6. 6. ELISA DIRECTO Consta de las siguientes etapas:  Fijación al soporte insoluble (“tapizado”) de antígenos específicos.  Lavado con solución salinaTween 20 como agente tensioactivo (ph-7,2) para eliminar los Acs fijados deficientemente o no fijados.  Adición de Ags marcados (“conjugados”) con una enzima; si los Acs reaccionan con los Ags, el complejo quedará solubilizado.
  7. 7. ELISA DIRECTO o Lavado para eliminar los Ags marcados que no hayan reaccionado. o Adición de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora. o Lectura visual o colorimétrica del producto final coloreado.
  8. 8. ELISA INDIRECTO Consta de las siguientes etapas: o Fijación al soporte insoluble de antígenos específicos para los anticuerpos objeto de estudio. o Lavado con solución salina Tween 20 como agente tensioactivo (ph-7,2) para eliminar los Ags fijados deficientemente o no fijados. o Adición de anti-anticuerpos conjugados con una enzima.
  9. 9. ELISA INDIRECTO o Lavado para eliminar los Acs marcados que no hayan reaccionado. o Adición de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora. o Lectura visual o colorimétrica del producto final coloreado.
  10. 10. ELISA SÁNDWICH ELISA Sándwich “DAS” Consta de las siguientes etapas:  Fijación al soporte insoluble de anticuerpos específicos del agente patógeno a detectar.  Adición de la muestra problema (extracto vegetal, sangre, suero, plasma, etc.).  Adición de anticuerpos específicos del antígeno a detectar.  Adición de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora.  Lectura visual o colorimétrica del producto final coloreado. ELISA Sándwich “HADAS” Consta de las siguientes etapas:  Fijación al soporte insoluble de anticuerpos específicos del agente patógeno a detectar.  Adición de la muestra problema (extracto vegetal, sangre, suero, plasma, etc.).  Adición de anticuerpos específicos del antígeno a detectar.  Adición de anticuerpos conjugados con una enzima anti-anticuerpos empleados en el paso anterior.  Adición de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora.  Lectura visual o colorimétrica del producto final coloreado.
  11. 11. ELISA COMPETITIVO  Consta de las siguientes etapas: o Fijación al soporte insoluble de anticuerpos específicos del agente patógeno a detectar. o Adición en concentración conocida de una mezcla de antígenos del anticuerpo utilizado en el paso anterior. o Adición de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora. o Lectura visual o colorimétrica del producto final coloreado de ambas pruebas y comparar los resultados.
  12. 12. Pasos generales de un ELISA 1. Tapizado del pocillo con el antígeno o anticuerpo. 2. Adición de la muestra problema con la mezcla de antígenos o anticuerpos. 3. Unión del antígeno o anticuerpo específico al anticuerpo o antígeno tapizado en el pocillo. 4. Lavado del pocillo para eliminar el exceso de antígeno o anticuerpo no unido. 5. Adición del anticuerpo secundario marcado con la enzima. 6. Unión del anticuerpo secundario al antígeno o anticuerpo. 7. Lavado del pocillo para eliminar el exceso de enzima no unida. 8. Adición del substrato. 9. Unión del substrato a la enzima. 10.Desarrollo del color o coloración.
  13. 13. LECTURA E INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS La lectura de los resultados puede ser valorada tanto visual como colorimétricamente. A simple vista, pueden ser leídos ciertos ensayos rutinarios en los que no haga falta una cuantificación y no se presenten abundantes casos dudosos (el ojo humano no es capaz de discernir una variación de 0,1 de densidad óptica) ya que dicha lectura visual tendrá el inconveniente de la subjetividad y el de diagnosticar equivocadamente los casos límite. No obstante, evita la adquisición de aparatos relativamente costosos como son los lectores de micro placas.
  14. 14. LECTURA E INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS o Una de las grandes ventajas de la técnica ELISA es la posible automatización de la lectura y, por lo tanto, su objetividad. Dicha automatización se puede conseguir con un simple colorímetro o espectrofotómetro de cubeta o con sofisticados equipos de lectura automática de micro placas. o Los resultados finales de la lectura colorimétrica se reflejan numéricamente mediante valores de absorbancia o densidad óptica que se obtendrán a la longitud de onda más adecuada para la coloración final alcanzada.
  15. 15. APLICACIONES CLINICAS o Enfermedades producidas por parásitos • Toxoplasmosis, Triquinosis, Tripanosoma. o Enfermedades producidas por Micoplasmas o Enfermedades producidas por bacterias • Mycobacterium tuberculosis, brucelas, Estreptococos, Salmonela. o Enfermedades producidas por virus • Enfermedad de Newcastle, Peste porcina, Rotavirus, artritis vírica, Leucemia felina. o Otras aplicaciones • Hormonas (GCH, Progesterona, Testosterona) • Cuantificación de inmunoglobulinas (IgG, IgE, IgA) • Inmunopatología (Ac anti-DNA, Factor reumatoide, Inmuno complejos circulantes)

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