O documento descreve uma pesquisa sobre o gene AGAMOUS (AG) em Arabidopsis thaliana. AG codifica fatores transcricionais responsáveis pelo desenvolvimento do terceiro e quarto verticilos florais. Os objetivos foram demonstrar que a microesporogênese é induzida por AG através da ativação do gene SPL, e que SPL pode induzir a microesporogênese na ausência de AG. Experimentos com mutantes ag-1 e plantas transgênicas expressando AG e SPL confirmaram que SPL age como mediador da ação de AG

1. Grupo:
Ana Paula Miranda
Fernanda Azevedo
Lívia Villela
Renata Toledo

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Introdução
A família de genes MADS-box
codifica fatores transcricionais
que controlam vários processos
em angiospermas, da raiz até o
desenvolvimento de flores e
frutos.
Em Arabidopsis, o gene AG
(AGAMOUS) codifica fatores
transcricionais responsáveis pelo
desenvolvimento do 3º e 4º
vertilos florais.

3. Objetivos
• Demonstração que a Microesporogênese é
induzida por AG através da ativação do gene
SPL, um regulador da Esporogênese.
• SPL pode induzir a Microesporogênese na
ausência da função de AG.

4. ag-1 35S::AG-GR
• ag-1-null / 35S::AG-GR
• Sem tratamento / DEX contínuo / DEX único
Fenótipo mutante
Sépatala- pétala –pétala
Estames e Carpelos
funcionais – flores
35S::AG
Pétalas com
estruturas
estaminóides

5. ag-1 35S::AG-GR
• ag-1-null / 35S::AG-GR
• A maior parte das pétalas produzidas no 3º verticilo
possuem lóculos nas laterais contendo grãos de pólen
aparentemente normais.

6. Microarranjo
• Identificação de SPL, que codifica um fator
transcricional putativo. Sua atividade implica
no padrão de formação de óvulos e nos
primórdios da microesporogênese.
• Em mutantes de spl, a diferenciação primária
de células esporogênicas, assim como a
formação das paredes das anteras, são
bloqueadas.

7. RT-PCR
• Confirmação da indução de SPL pela atividade
de AG.
D - DEX
M - Mock
C - Ciclohexamida

8. Indução Direta
• O domínio MADS reconhece a sequência especifica
[CC(A/T)6GG], denominada CArG-box, na região
regulatória dos seus genes alvo.
• EMSA

9. Gene Repórter GUS
• Avaliar se o sítio de ligação de AG (detectado na
região 3´) é necessário para indução AG-dependente
de SPL.
• Plantas selvagens com SPL-GUS.

10. Comparação do padrão de
expressão de AG e SPL

11. Expressão de SPL em ag-mutants

12. SPL e Microesporogênese
• Ag-1 mutant / 35S::SPL-GR
• Sem tratamento / DEX contínuo
Mesmo padrão de
Single DEX ag-1
35S::AG-GR
Fenótipo AG-mutant
*
ausência da atividade de AG, supondo que SPL age como um mediador central par

13. SPL e Microesporogênese
• Com a expressão ectópica de SPL-GR, a formação de
lóculos foi observada em ag1-mutants apenas nas
laterais dos orgãos do 3º vertilo. Nunca no 2º das
flores tratadas com DEX.
• Outro fator verticilo-específico deve estar envolvido
na indução da microesporogênese.

14. Conclusões
• Proteínas homeóticas florais controlam genes alvo
com diversas funções no desenvolvimento dos
órgãos;
• A interação de AG com SPL mostra uma
probabilidade de que AG ative outros reguladores
que realizam parte de suas funções;
• Evidências diretas de que genes homeóticos de
plantas controlam a organogênese como parte de
sua hierarquia regulatória.