1. MEIOS DE CULTURA

2. MEIO DE CULTURA
DEFINIÇÃO
- São preparados especiais com
finalidade de cultura e isolamento de
microrganismos.
- Uma grande variedade de
processo e de preparações nutrientes
é utilizada para induzir o crescimento
e as reproduções de
microorganismos.

3. MEIOS DE CULTURA
- Não existe um meio de cultura
universal para o crescimento de todos os
microrganismos.
Ex: não existe meio de cultura para
microrganismos como Treponema
pallidum e Micobacterium leprae.
- Estes microrganismos só podem
ser cultivados em animais de laboratório.

4. MEIOS DE CULTURA
NATURAIS
- Lagos
- Oceanos
- Solo
ARTIFICIAIS OU SINTÉTICOS
- São nutrientes preparados no
laboratório para o crescimento de
microrganismos.

5. MEIOS DE CULTURA
APRESENTAÇÃO
Pós

6. MEIOS DE CULTURA
PREPARAÇÃO
- De acordo com o fabricante.
- Técnica de preparação vem
especificada no rótulo dos frascos.
- Pesar e hidratar o meio conforme
as instruções do fabricante.

7. MEIOS DE CULTURA
PREPARAÇÃO

8. MEIOS DE CULTURA
MÉTODOS DE ESTERILIZAÇÃO
1 - Autoclave (calor úmido) 121ºC
por 15 a 20 minutos.
- Vapor fluente

9. MEIOS DE CULTURA
MÉTODOS DE
ESTERILIZAÇÃO
2 – FILTRAGEM
- Produtos termo sensíveis
- Membranas de acetato de
celulose (0,22 μm).

10. RECIPIENTES PARA OS MEIOS
DE CULTURA.
- Placas de petri, tubos de ensaio,
garrafas, frascos, etc...

11. CONSTITUINTES DO MEIO DE
CULTURA
- Água: Principal solvente dos
nutrientes.
- Fontes de Carbono: pode ser do
CO2 ou de nutrientes orgânicos
(carboidratos, lipídeos e proteínas).
- Fonte de energia: Carboidratos
como amido, glicogênio,
monossacarídeos

12. CONSTITUINTES DO MEIO DE
CULTURA
• - Fonte de Nitrogênio “base amino-
proteína”: peptidase: Aminoácidos,
peptídeos, proteínas complexas e
peptona.
• - Fontes de oxigênio, hidrogênio,
fósforo (fosfatos) e enxofre (sulfatos)
- Vitaminas: Complexo B ( biotina e

13. CONSTITUINTES DO MEIO DE
CULTURA
- Sais tamponados: Fósforo
(fosfatos), enxofre (sulfato) e citrato.
- Sais minerais: Cálcio, Ferro,
Magnésio
- Fatores de crescimento: sangue,
soro e extrato de levedura.

14. MEIOS DE CULTURA
- Agentes seletivos: Químicos,
Corantes, e Antimicrobianos
- Indicadores de pH: feno vermelho
- Agentes de gelificação para
meios sólidos: Ágar

15. CLASSIFICAÇÃO
DOS
MEIOS DE CULTURA

16. 1 – DE ACORDO COM A CONSISTÊNCIA
SÓLIDOS
- Usa ágar, um polímero de
galactose como agente solidificante na
concentração de 1,35 a 2,0%.
- Funde-se à 100ºC, Líquido à 40ºC
e sólido à 37ºC.
- São feitos em frascos, placas de
petri e tubos de ensaio.

17. 1 – DE ACORDO COM A
CONSISTÊNCIA
SEMI-SÓLIDOS
- Usa ágar, como agente
solidificante na concentração de 0,2 à
0,75%.
- Funde-se à 100ºC, Líquido à
40ºC e Semi-sólido à 37ºC.
- São feitos em tubos de ensaio

18. 1 – DE ACORDO COM A
CONSISTÊNCIA
LÍQUIDOS
- São os meios isentos de ágar.
- São sempre líquidos mesmo até
a 37ºC e em temperaturas inferiores.
- São feitos em tubos de ensaio

19. CRESCIMENTO MICROBIANO
MEIO SÓLIDO: o crescimento de
bactérias é visualizado pela formação de
colônias.
MEIO SEMI-SÓLIDO: o crescimento
de bactérias é visualizado pela turvação.
Meio muito utilizado para verificar a
motilidade (movimento) da bactéria.
MEIO LÍQUIDO: o crescimento de
bactérias é visualizado pela turvação do
meio.

20. CRESCIMENTO MICROBIANO
MEIO SÓLIDO
COLÔNIAS: são milhares de células
bacterianas derivadas de uma única célula
bacteriana semeada na superfície do ágar.
TEMPO PARA VISUALIZAÇÃO DAS
COLÔNIAS:
- Maioria dos microrganismos cresce
de 12 à 48 horas.
- Outros exigem semanas e até mêses.

21. CRESCIMENTO MICROBIANO
MEIO SÓLIDO: COLÔNIAS

22. CRESCIMENTO MICROBIANO
MEIO SEMI-SÓLIDO E LÍQUIDO :
TURVAÇÃO

23. CRESCIMENTO MICROBIANO
MEIO SÓLIDO
Exemplos: Ágar Sangue, Ágar
chocolate, Ágar MacConkey, Ágar SS
(Salmonela, Shigella), Ágar VB (Verde-
Brilhante), Ágar CLED (Cisteína
Lactose Eletrólitos Deficientes), Ágar
Base, Ágar Citrato de Simmons, Ágar
Nutriente, Ágar TSI (Triplice Açúcar e
Ferro), Ágar Müller Hinton), etc....

24. CRESCIMENTO MICROBIANO
MEIO SÓLIDO
Ágar Sangue Ágar chocolate

25. CRESCIMENTO MICROBIANO
MEIO SEMI-SÓLIDO
Exemplos: Ágar SIM (Motilidade
Indol Sulfeto) etc....
MEIO LÍQUIDO:
Exemplos: BHI (Infusão de
cérebro e coração), Tetrationato,
Selenito, Uréia, etc...

26. CRESCIMENTO MICROBIANO
MEIO SÓLIDO X MEIO LÍQUIDO
- Meio líquido é impossível afirmar a
existência de mais de uma espécie de
bactérias ou até mesmo quantificar.
- Meio sólido pode-se afirmar a
presença de várias espécies
bacterianas.

27. CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE
CULTURA
2 – TIPOS ou FUNÇÃO
MEIOS COMPLEXOS
- São meios quimicamente
indefinidos, mas tem como função
similar ao ambiente natural da bactéria.
Ex: Ágar sangue, Ágar chocolate.

28. CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE
CULTURA
2 – TIPOS
MEIOS SINTÉTICOS
- São meios de composição química
conhecida. São utilizados para estudo de
necessidades nutricionais de
determinadas bactérias.
Ex: Meio para micobactérias.

29. CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
2 – TIPOS
MEIOS DIFERENCIAIS
- São meios que permitem a distinção
(diferenciação) entre dois ou mais tipos de
bactérias pelas simples observação das
características apresentadas pelas suas colônias
que neles se desenvolvem.
- Os meios diferenciais permitem o
crescimento de várias espécies ao mesmo
tempo, que facilita a discriminação entre os
diferentes microrganismos.

30. CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
2 – TIPOS
MEIOS DIFERENCIAIS
Ex: Mac Conkey
- Permite a distinção entre bactérias
fermentadoras da lactose (lactose
positiva – apresenta colônias rosa) e
bactérias não fermentadora da lactose
(lactose negativa – apresenta colônias
incolores).

31. CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
MEIOS DIFERENCIAIS
Ex: Mac Conkey

32. CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
MEIOS DIFERENCIAIS
Ex: Mac Conkey

33. CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
2 – TIPOS
MEIOS SELETIVOS
- São meios cuja composição promovem
e/ou inibem o crescimento de um
determinado microrganismo ou grupo de
microrganismos.
- Os meios seletivos proporcionam o
meio pelo qual podemos isolar uma
determinada espécie ou categoria de
bactérias.

34. CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
2 – TIPOS
MEIOS SELETIVOS
- São usadas substâncias seletivas
como os corantes tais como cristal violeta,
azul de metileno, eosina e verde brilhante.
Ex. Mac Conkey além de seus
nutrientes contém cristal violeta e sais
biliares que inibe o crescimento de bactérias
Gram- positivas e permitindo o crescimento
de Gram-negativas.

35. CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE
CULTURA
2 – TIPOS
OSERVAÇÃO
- ALGUNS MEIOS SÃO TANTO
DIFERENCIAIS COMO SELETIVOS.
Ex: Ágar Mac Conkey

36. CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
2 – TIPOS
MEIOS DE ENRIQUECIMENTO
- São meios utilizados para isolar um
microrganismo de um meio em que está
presente em pequena quantidade.
- São meios enriquecidos com
sangue, soro ou outros nutrientes.
Ex: Ágar sangue, Ágar chocolate.

37. CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
2 – TIPOS
MEIOS DE ENRIQUECIMENTO
Ex: Tetrationato e Selenito
- São meios usados para amostras
fecais (coprocultura) inibindo o
crescimento da microbiota (bactérias
normais das fezes) e permitindo o
crescimento de Salmonella e Shigella
que são patogênicas.

38. CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
2 – TIPOS
MEIOS DE TRANSPORTE
- São meios utilizados para o
transporte e manutenção de amostras
biológicas como fezes e secreções.
- São meios inertes, pois, permitem a
viabilidade da maioria dos patógenos
sem alterar a sua concentração.

39. CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
2 – TIPOS
MEIOS DE TRANSPORTE
Ex: Meio de Stuart ou Amies
usado para o transporte com swabs.
Ex: Meio Cary-Blair e salina
glicerinada tamponada útil no
transporte de fezes para o isolamento
de shigella e Salmonella.

40. CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
MEIOS DE TRANSPORTE

41. CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
2 – TIPOS
MEIOS DE MANUTENÇÃO
- São meios utilizados para a
preservação das bactérias para a
realização de exames complementares
para estudos futuros como pesquisa
clínica, epidemiológica ou educacional.
Ex: Caldo TSB, caldo nutriente, água
destilada.

42. MEIOS DE MANUTENÇÃO
Métodos de preservação:
Curto período de tempo: temperaturas de
2 a 8 ºC ou de 4 à 10ºC (refrigerador): duração
por semanas. Fazer subculturas em caldo TSB
ou caldo nutriente.
Longo período de tempo: temperaturas de
-70 à -196ºC. Duração por anos (1 até 10
anos).
- Nitrogênio líquido: (-196ºC)
- Freezers: (-70 à -120ºC) temperatura
ultra baixa.
- Liofilização: congelamento à seco.

43. CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
2 – TIPOS
MEIOS DE IDENTIFICAÇÃO
- São meios utilizados na identificação
das bactérias Gram-positivas e Gram-
negativas.
Ex: EPM e MILI para identificação de
Enterobactérias (Gram-negativas) e Rugai
Ágar Bile esculina. Identificação de
Gram-positivas.

44. CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
MEIOS DE IDENTIFICAÇÃO
EPM E MILI RUGAI

45. CONDIÇÕES FÍSICAS PARA A
CULTURA DAS BACTÉRIAS
- TEMPERATURA
- pH
- ATMOSFERA GASOSA
- PRESSÃO OSMÓTICA
- PRESSÃO HIDROSTÁTICA
- LUZ

46. CONDIÇÕES FÍSICAS PARA A CULTURA DAS
BACTÉRIAS
PRESSÃO OSMÓTICA
- Meios hipertônicos: as bactérias
perdem água e sofrem plasmólise ou
enrugamento da célula.
- Meios isotônicos: concentrações
iguais, é o mais recomendado.
- Meios hipotônicos: as células
ganham água e sofrem lise.

47. CONDIÇOES FÍSICAS PARA CRESCIMENTO.
TEMPERATURA
- Psicotróficos: 0 à 7ºC
- Psicrófilos: 0 à 20ºC.
- Mesófilos: 20 à 45°C.
- Termófilos: 45 à 90°C.
A maioria são mesófilas.
- Temperatura ótima: 36,5 a 37°C em
estufa bacteriológica.

48. CRESCIMENTOS DAS BACTÉRIAS
pH
- Acidófilos: pH 0,1 à 5,4
- Neutrófilos: pH 5,4 à 8,5
- Alcalófilas: ph 7,0 à 11,5
A maioria na faixa de 4,0 a 9,0.
- Ideal: próximo da neutralidade 6,8 a
7,2.
- pH próximo do neutro (7,0) para a
maioria das bactérias.

49. CRESCIMENTOS DAS
BACTÉRIAS
LUZ
- Bactérias fotossintetizantes
- Bactérias inibidas pela luz.

50. CRESCIMENTO DAS BACTÉRIAS
PRESSÃO HIDROSTÁTICA
- Água dos oceanos e lagos
exercem pressão hidrostática.
- Bactérias barófilas: vivem em
alta pressão “profundidade”.

51. CRESCIMENTOS DAS BACTÉRIAS
ATMOSFERA GASOSA
- Microrganismos aeróbios: 21% de
oxigênio.
- Jarra de microaerofilia para
microrganismos que necessitam de CO2.

52. CRESCIMENTOS DAS
BACTÉRIAS
ATMOSFERA GASOSA
- Microrganimos anaeróbios
facultativos: crescem na presença de
ar ou anaeróbiose.
- Microrganimos microaerófilos:
Não resistem á níveis de oxigênio (1-
15%).

53. CRESCIMENTOS DAS BACTÉRIAS
ATMOSFERA GASOSA
- Microrganismos anaeróbios:
Morrem em presença de oxigênio, não
crescem em presença de ar e não
utilizam oxigênio para reações de
produção de energia.
- Jarra de anaerobiose.

54. CRESCIMENTOS DAS BACTÉRIAS
TEMPO
- Aumento no número da população
na cultura: 1→2→4→8→16→……
Progressão geométrica?
1→21
→22
→23
→24
….→2n
n = número de gerações
2n
= número total de células em uma
cultura.

55. CRESCIMENTOS DAS
BACTÉRIAS
TEMPO DE GERAÇÃO DAS
BACTÉRIAS.
- De 30 em 30 minutos.
- PERÍODO DE INCUBAÇÃO
- 24 a 48 horas em estufa
bacterilógica.

56. CRESCIMENTOS DAS BACTÉRIAS
INCUBAÇÃO: Estufa bacterilógica.

57. MEIOS DE CULTURA MAIS
UTILIZADOS.
Ágar sangue de carneiro a 5,0%
- Meio não seletivo e diferencial
que permite o crescimento de bactérias
Gram-positivas e Gram-negativas,
além de permitir a visualização de
hemólise.

58. MEIOS DE CULTURA MAIS
UTILIZADOS.
Ágar sangue de carneiro a 5,0%

59. MEIOS DE CULTURA MAIS UTILIZADOS.
Ágar Mac Conkey
- Meio seletivo e diferencial que
permite o crescimento de bactérias
(bacilos) Gram-negativas, diferenciando
as bactérias em lactose positiva e lactose
negativa. Inibe o crescimento de
bacctérias Gram-positivas.

60. MEIOS DE CULTURA MAISUTILIZADOS.
Ágar Mac Conkey
• - É utilizado para o isolamento de
Enterobactérias (Escherichia coli,
Proteus sp, etc.. e bacilos entéricos não
fermentadores (Shigella e Salmonella).
• - Amostras utilizadas: fezes, urina,
água de esgoto, alimentos , etc...

61. MEIOS DE CULTURA MAIS UTILIZADOS.
Ágar Mac Conkey
- Sua composição contém cristal
violeta e sais biliares que inibe o
crescimento de bactérias Gram-positivas.
- Utiliza a lactose como único
carboidrato como fonte de energia e
carbono.

62. MEIOS DE CULTURA MAIS UTILIZADOS.
Ágar Mac Conkey
- Bactérias fermentadoras de
lactose produzem enzimas como a
beta-galactosidase e lactose permease
que produzem ácido diminuindo o pH e
produzem colônias rosas chamadas de
colônias lactose positiva.
Ex: Escherichia coli

63. MEIOS DE CULTURA MAIS UTILIZADOS.
Ágar Mac Conkey
- Bactérias não fermentadoras de
lactose não produzem enzimas portanto
não produzem ácidos, aumenta o pH do
meio, produzindo colônias incolores,
transparentes ou ambar chamadas de
colônias lactose negativa.
Ex: Salmonella typhi, Shigella
dysenteriae.

64. MEIO DE CULTURA Mac Conkey
Lactose positiva Lactose negativa

65. IDENTIFICAÇÃO DAS COLÔNIAS
1 - CARACTERÍSTICAS DAS
COLÔNIAS
TAMANHO (mm)
- Grande: maior que 1 mm de
tamanho
- Média: 1 mm de diâmetro
- Pequena: menor que 1 mm de
diâmetro.

66. IDENTIFICAÇÃO DAS COLÔNIAS
COR
- Amarela, Branca, Branca-
acinzentada, Cinza, Rosa, Esverdeada,
Preta, Alaranjada, Creme, Incolor, etc...
ODOR
- Uva, Água sanitária, Fermento de
pão, Vinagre, Queijo, Terra molhada,
Peixe, Caramelo, etc...

67. IDENTIFICAÇÃO DAS COLÔNIAS
DENSIDADE
- Opaca, Translúcida, Transparente
CONSISTÊNCIA
- Brilhante, Cremosa, Seca, Mucóide
PIGMENTO
- Amarelo, Vermelho, Mostarda

68. IDENTIFICAÇÃO DAS COLÔNIAS
BORDA OU FORMA
- Circular (redonda), irregular,
puntiforme, ondulada
ELEVAÇÃO
- Convexa, Achatada, Elevada,
Umbilicada, centro elevado

69. IDENTIFICAÇÃO DAS COLÔNIAS
HEMÓLISE: é a lise (quebra,
rompimento) da hemácia.
Total (beta- hemólise): zona clara ao
redor das colônias.
Parcial (alfa-hemólise): há formação de
um halo esverdeado em volta da colônia,
indicando hemólise parcial das hemácias.
Ausência de hemólise (gama-
hemólise): o meio permanece íntegro em
volta das colônias.

70. Ágar sangue de carneiro a 5,0%
Hemólise

71. Ágar sangue de carneiro a 5,0%
Tipos de hemólise (alfa, beta e
gama)

72. MEIOS DE CULTURA
CONTROLE DE QUALIADE
- Cepas padrão

73. MEIOS DE CULTURA
TÉCNICAS DE SEMEADURA
1 - Semeadura quantitativa com
alça calibrada.

74. MEIOS DE CULTURA
TÉCNICAS DE SEMEADURA
2 - Semeadura por esgotamento.

76. MEIOS DE CULTURA
Inoculação dos meios de cultura.
- INÓCULO: é quando os microrganismos
são colocados em um meio de cultura para
iniciar o crescimento.
Inocular primeiramente os meios menos
seletivos para evitar que substâncias
inibidoras sejam transferidas de um meio para
o outro.
Ex: semear primeiro no ágar sangue ou
ágar chocolate em seguida no mac Conkey.

77. CULTURA: é quando os
microrganismos cresecem e se
multiplicam no meio de cultura.

78. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
BARBOSA, H. R.; TORRES, B. B. Microbiologia básica. São Paulo: Atheneu,
2005.
BLACK, J. G. Microbiologia – fundamentos e aplicações. 4. ed. Rio de
Janeiro: Guanabara Koogan, 2002.
KONEMAN, E. W.; ALLEN, S. D.; JANDA, W. M.; SCHRECKENBERGER, P.
C.; WINN JÚNIOR, W. C. Diagnóstico microbiológico. Texto e atlas
colorido. 5. ed. Rio de Janeiro: MEDSI Ed. Médica e Científica, 2001.
LEVINSON, W.; JAWETZ, E. Microbiologia médica e imunologia. 7. ed.
Porto Alegre: Artmed, 2005.
MINS, C.; PLAYFAIR, J.; RITT, I. WAKELIN, D.; WILLIAMS. R. Microbiologia
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PELCZAR Jr., M. J.; CHAN, E. C. S. KRIEG, N. R. Microbiologia – conceitos
e aplicações. 2. ed. v. 1 e 2. São Paulo: Makron Books do Brasil, 1997.
SPICER, W. J. Bacteriologia, micologia e parasitologia clínicas – um texto
ilustrado em cores. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2000.
THOMAS, C. L. Dicionário médico enciclopédico – Taber. 17. ed. São
Paulo: Manole, 2000.
TORTURA, G. J.; FUNKE, B. R.; CASE, C. H. Microbiologia. 8. ed. São
Paulo: Artmed, 2005.
TRABULSI, L. R.; ALTERTHUM. Microbiologia. 4. ed. São Paulo: Atheneu,