Informe de
Técnicas de
Aglutinación

por

Miguel Angel Figueroa Núñez
Inmunología Clínica
TM. Marcelo Ramirez Sandoval
TABLA DE CONTENIDO
INTRODUCCIÓN
¿QUÉ SON LAS TECNICAS DE AGLUTINACIÓN
SU UTILIDAD EN EL CAMPO CLÍNICO
OBJETIVOS

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INTRODUCCION
¿QUÉ SON LAS TECNICAS DE AGLUTINACIÓN?
Las tecnicas de aglutinación son aquellas que aprovechandose de la cap...
SU UTILIDAD EN EL CAMPO CLÍNICO
Desde la aparición de este método, se han logrado desarrollar diversos test que van desde
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MATERIALES Y MÉTODOS
MATERIALES UTILIZADOS
INSUMOS
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Kit de antisueros para determinar grupo ABO y RH.
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PROCEDIMIENTO

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PRUEBA DIRECTA DE AGLUTINACIÓN EN PLACA PARA LA
DETERMINACIÓN DE GRUPO SANGUÍNEO

PROCEDIMIENTO

a)
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Limpie su de...
DILUCIÓN
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DILUCIÓN
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DILUCIÓN
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DILUCIÓN
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Fig. 3b

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INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
PRUEBA DIRECTA DE AGLUTINACIÓN EN PLACA PARA
LA DETERMINACIÓN DE FACTOR REUMATOIDEO (FR)....
Con respecto a nuestro trabajo, las muestras positivas de factor reumatoide, deben ser
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Inmunologia 1

  1. 1. Informe de Técnicas de Aglutinación por Miguel Angel Figueroa Núñez Inmunología Clínica TM. Marcelo Ramirez Sandoval
  2. 2. TABLA DE CONTENIDO INTRODUCCIÓN ¿QUÉ SON LAS TECNICAS DE AGLUTINACIÓN SU UTILIDAD EN EL CAMPO CLÍNICO OBJETIVOS 2 3 3 MATERIALES Y METODOS 4 MATERIALES UTILIZADOS METODOS OCUPADOS PROCEDIMIENTO Y CONTROL DE CALIDAD 4 4 5 INTERPRETACIÓN 7 RESULTADOS OBTENIDOS INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS IMPORTANCIA EN EL DIAGNOSTICO DE PATOLOGÍAS INMUNOLOGICAS 1 2 7 8 9
  3. 3. INTRODUCCION ¿QUÉ SON LAS TECNICAS DE AGLUTINACIÓN? Las tecnicas de aglutinación son aquellas que aprovechandose de la capacidad de las interacciones antigenos-anticuerpos, se realizan reacciones controladas en donde podemos observar aglutinacion de los elementos en estudio, lo que nos acerca a la cualificación y semicuantificación. Esta unión antígeno-anticuerpo (Ag-Ac) es una interacción reversible en la que están involucrados enlaces no-covalentes. En la interacción in Vitro de un Ag con su correspondiente Ac se distinguen 2 etapas: la interacción primaria no visualizable y la interacción secundaria, que sigue a la anterior y se caracteriza por la aparición de un fenómeno visible como la aglutinación o la precipitación. Por otro lado, no siempre que se produce la interacción primaria Ag-Ac, se produce la interacción secundaria, ya que, para conseguir fenómenos visibles, son indispensables determinadas concentraciones y características de los Ags y Acs. La revolución de esta tecnología que ha sido aprovechada en los distintos campos de las ciencias de la salud, ha sido el paso evidente hacia un diagnostico mas certero y oportuno. Las reacciones de aglutinación, involucran una interacción secundaria entre Ag-Ac (Fig. 2b). Estas generaran la aparición de un aglutinado que se visualiza en grumos. Los principios físico-químicos que controlan la formación de estos aglutinados son los mismos que gobiernan la formación de un precipitado. La gran diferencia entre las reacciones de precipitación y de aglutinación son las características del antígeno: mientras que en las reacciones de precipitación se emplean antígenos solubles, en las reacciones de aglutinación el Ag es particulado. (Fig, 2a) Con un Ag soluble, también es posible diseñar una reacción de aglutinación gracias a que es posible utilizar distintas partículas (partículas inertes ó glóbulos rojos) y realizar un pegado químico o físico-químico del Ag soluble a dichas partículas, generando de esta manera un “Ag particulado” útil para fines diagnósticos. 2
  4. 4. SU UTILIDAD EN EL CAMPO CLÍNICO Desde la aparición de este método, se han logrado desarrollar diversos test que van desde los grupos sanguíneos, la presencia de anticuerpos lupicos (presencia de Lupus Eritematoso Sistémico), Factor reumatoide y otros que han aportado a pruebas de gran relevancia para enfrentar un diagnóstico, con lo cual hoy son parte fundamental de todos los campos clínicos y de gran parte de los laboratorios en las cuales el tecnólogo se desarrolla. Como se menciona anteriormente estos métodos son cualitativos y semicuantitativos, por lo que siempre requieren de cuantificación con técnicas más sensibles y exactas en el caso de positividad y en algunas pueden ser un definitivo resultado de lo que se busca. OBJETIVOS 1. 2. 3 Determinar mediante la reacción de aglutinación Factor Reumatoide utilizando partículas de Látex, en muestras problema. Determinar por la técnica de aglutinación su grupo sanguíneo.
  5. 5. MATERIALES Y MÉTODOS MATERIALES UTILIZADOS INSUMOS        Kit de antisueros para determinar grupo ABO y RH. Micropipeta de 10uL-100uL. Puntas desechables amarillas. Tubos de Khan 75x13 mm. Placas vidrios o de cartón para realizar la reacción de aglutinación. Cronómetro. Guantes. EQUIPOS   Centrifuga. Vortex. METODOS OCUPADOS PRUEBA DIRECTA DE AGLUTINACIÓN EN PLACA PARA LA DETERMINACIÓN DE FACTOR REUMATOIDEO (FR). Factor reumatoide es un autoanticuerpo con especificidad para determinantes antigénicos del fragmento Fc de inmunoglobulina G humana y de ciertos animales. Existe Factor reumatoideo de las tres clases de inmunoglobulinas IgG, IgA, IgM. Las más comunes son clase IgG e IgM. FUNDAMENTOS DEL MÉTODO El FR se detecta mediante una reacción Antígeno-Anticuerpo de aglutinación en placa. El reactivo de látex consiste en una suspensión de partículas de látex estabilizadas con albúmina, a estas partículas están unidas químicamente gammaglobulinas humanas desnaturalizadas, que una vez en contacto con el suero del paciente se produce la reacción (Ag - Ac), visualizándose una aglutinación macroscópica. Los reactivos provistos son para uso diagnóstico “in Vitro”. Los controles han sido ensayados para HIV y HBV, encontrándose no reactivos. No obstante deben ser empleados como si se tratara de material infectivo... Debe usar sus accesorios estándar de protección de bioseguridad (Guantes, Delantal, Anteojos de seguridad) 4
  6. 6. PROCEDIMIENTO 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. Para ambas experiencias llevar los reactivos y las muestras a temperatura ambiente antes de usar. Agitar el reactivo de látex antes de usar, vaciando previamente la pipeta del gotero. Crear hoja de trabajo para registrar sus resultados Agregar 25 uL de la muestras o controles.( Colocar en el primer pocillo de la placa 25 ul del control negativo, en el segundo pocillo colocar 25 ul del reactivo de control positivo en los posillos siguientes agregar las muestras a estudiar Agregar 25 uL de reactivo de Látex a cada uno de los pocillos Mezclar con un palillo desechable hasta obtener una suspensión uniforme en toda la superficie del círculo. Inmediatamente disparar un cronómetro, balancear suavemente la placa y observar macroscópicamente el resultado bajo un haz luminoso dentro de los 2 minutos siguientes. Registrar sus resultados negativos y controles. Titular a punto final sus muestras positivas con diluciones seriadas en múltiplo de 2 y hacer reaccionar cada una de estas diluciones con el reactivo de látex e informar título final INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS.    5 Negativo: Suspensión homogénea. Positivo: Aglutinación que aparece dentro de los 2 minutos. Titulo Final: Última dilución con aglutinación.
  7. 7. PRUEBA DIRECTA DE AGLUTINACIÓN EN PLACA PARA LA DETERMINACIÓN DE GRUPO SANGUÍNEO PROCEDIMIENTO a) b) c) d) Limpie su dedo índice con alcohol. Pinche su dedo con lanceta utilizando el lápiz portalanzeta. Deposite cuatro gotas de sangre sobre un portaobjetos, lo más separadas posible. Deje caer una gota de suero anti A, anti B, anti AB y anti RH sobre cada gota de sangre. Mezcle por rotación de la placa. RESULTADOS 1) Esquematice y explique los resultados de aglutinación obtenida e informe el grupo sanguíneo de su muestra de sangre. 2) Informe sobre las características de los grupos sanguíneos ABO-Rh y otros grupos sanguíneos INTERPRETACIÓN RESULTADOS OBTENIDOS PRUEBA DIRECTA DE AGLUTINACIÓN EN PLACA PARA LA DETERMINACIÓN DE FACTOR REUMATOIDEO (FR). CONTROL NEGATIVO MUESTRA 2 SUERO 204 6 CONTROL POSITIVO MUESTRA 3 SUERO 206 MUESTRA 1 SUERO 410 Fig.3a
  8. 8. DILUCIÓN 1/2 DILUCIÓN 1/4 DILUCIÓN 1/16 DILUCIÓN 1/8 Fig. 3b PRUEBA DIRECTA DE AGLUTINACIÓN EN PLACA PARA LA DETERMINACIÓN DE GRUPO SANGUÍNEO GRUPO A GRUPO B GRUPO AB GRUPO RH Fig. 4 7
  9. 9. INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS PRUEBA DIRECTA DE AGLUTINACIÓN EN PLACA PARA LA DETERMINACIÓN DE FACTOR REUMATOIDEO (FR). En esta prueba se realizaron la determinación de 3 muestras problemas con un título de ½ y los controles correspondientes (Negativo y Positivo respectivamente provisto por el kit). De ellos se determino que solo la muestra número 1 (suero 410), era negativa. Por lo que consiguientemente escogí la muestra número 2 (suero 204), para realizar el análisis semicuantitativo a través de diluciones seriadas. En ella se aprecia (Imagen 3b), que aunque débilmente la aglutinación se presenta hasta el 4 título, o sea la dilución 1/16. Por lo que el resultado de la muestra n°2 es mayor que 1/16. Esto quiere decir que concentra gran cantidad de factor reumatoide como antígeno en suero lo que es detectado por los anticuerpos provistos en el kit que al poseer latex, revela su aglutinación en forma de pequeña arenilla blanca. El análisis he interpretación es rápido (menos a 2 minutos). PRUEBA DIRECTA DE AGLUTINACIÓN EN PLACA PARA LA DETERMINACIÓN DE GRUPO SANGUÍNEO En esta prueba a través de una pequeña punción en el pulpejo del dedo, enfrentamos diversas gotas de nuestra sangre a los distintos tipos de anticuerpos que están presentes en la tipificación de la sangre. Lo que nos llevó a la conclusión de que la presencia de aglutinación de la sangre, sería correlativa a la presencia de dichos grupos. Esto nos arrojó que tanto en mi sangre como en la de mi compañera (Bárbara Bustos), solo presentaran aglutinación en el factor Rh de la sangre. Presenciando evidentemente que pertenecemos al grupo O Rh+ (véase en la imagen n°4). IMPORTANCIA EN EL DIAGNOSTICO DE PATOLOGÍAS INMUNOLOGICAS Como sabemos, la importancia de estos screening test es revelar la presencia de Antígenos que nos den luces para un diagnóstico certero. Ya sea en la búsqueda del grupo sanguíneo como la determinación de factor reumatoide en una muestra, estos son de vital importancia, conjunto a la anamnesis a un conjunto de análisis bioquímicos y de inmunología clínica, para obtener un diagnóstico y enfocar un tratamiento certero. 8
  10. 10. Con respecto a nuestro trabajo, las muestras positivas de factor reumatoide, deben ser controladas y semicuantificadas, con tal de llegar un estimado de su concentración, lo que nos puede develar una posible artritis reumatoide o incluso un Síndrome de Sjogren. Ambas enfermedades que deploran la calidad de vida de los que la padecen, pero que al menos con un buen diagnóstico y un tratamiento temprano, puede ayudar a controlar el avance y mejorar la calidad de vida de quienes la padecen. Sumado a esto, es importante destacar como la inclusión de los factores de la sangre se vuelven vitales a la hora de evitar rechazos transfusionales entre individuos y lograr el mejor equilibrio en el caso de implementar esos métodos en urgencias u operaciones de alta importancia. REFERENCIAS 1) Ramirez, Marcelo. Manual de Laboratorio de Inmunología Clínica. Edición 2013. Santiago, Chile. Pags. 3-6. 2) Dugdale, David. Et al. Prueba de aglutinación en látex. Revisión 2013. Medline Plus. EEUU. http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003334. htm 3) H, Tighe. Et al. Factor Reumatoideo (FR). Revisión 2011. Medline Plus. EEUU. http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003548. htm 9

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