Pruebas bioquímicas de     identificación  Bioq. María de los Ángeles Sosa
Pruebas de Identificación            rápidas1.Prueba de la catalasa2.Prueba de la coagulasa3.Prueba de PYR4.Prueba de oxid...
Pruebas de Identificación para             Cocos Gram +1.   DNasa2.   Prueba del manitol salado3.   Bilis esculina4.   CAM...
catalasa
Prueba de la catalasaFundamento: Detecta la presencia de la enzima  catalasa.Procedimiento: En portaobjetos colocar sobre ...
coagulasa
Prueba de la coagulasaFundamento: Detecta un factor de agregación “clumping   factor” en la superficie de la bacteriana.Pr...
Prueba de PYR
Prueba del PYR:Fundamento: detecta la enzima pirrolidonil arilamidasa se utilizacomo sustrato el reactivo L-pirrolidonil- ...
DNAsa
Prueba de la DNAsaFundamento: El S. aureus produce una DNAasatermoestable que hidroliza DNA. La producción deDNAsa puede d...
Manitol salado
Agar Manitol salado   Fundamento: el medio contiene manitol (1%), cloruro de sodio (7,5   %), rojo de fenol y peptonas.   ...
Bilis Esculina
Prueba de la bilis-esculina:Fundamento: Se basa en la capacidad de ciertas bacterias(estreptococos del grupo D) para hidro...
Prueba de CAMPFundamento: Los estreptococos grupo B secretan el factor CAMPque interactúa con la ß-hemolisina secretada po...
Prueba de CAMP
Prueba del hipurato de sodioFundamento: Ciertas cepas son capaces de hidrolizar el hipuratode sodio. La producción de hipu...
Hidrólisis de hipurato
Prueba de la susceptibilidad a       la Novobiocina Fundamento: Se basa en que ciertas bacterias son sensibles a la novobi...
Prueba de la Bacitracina:Fundamento: Se basa en que ciertas bacterias son sensibles a labacitracina.Procedimiento: Se inoc...
Prueba de la Bacitracina
Prueba de la optoquina
Pruebas de Identificación para          enterobacterias1. Prueba OF2. Prueba de la oxidasa o citocromooxidasa3. TSI4. SIM ...
OxidasaNEG   POS
CITOCROMOOXIDASA O     PRUEBA DE LA OXIDASAFundamento: El sistema citocromooxidasa, se halla enmicroorganismo aerobios, mi...
Prueba OF
PRUEBA DE OXIDACIÓN            FERMENTACIÓN (O-F)Fundamento: Determinan el metabolismo oxidativo o fermentativode un hidra...
Triple Azúcar Hierro
TSI (TRIPLE AZÚCAR HIERRO           AGAR)Fundamento: Sirve para detectar lafermentación de hidratos de carbono. El medioco...
TSI (TRIPLE AZÚCAR HIERRO           AGAR)Interpretación:Fermentación de la glucosa (alcalino/ácido)Primero los microorgani...
Consideraciones del TSIEs importante respetar el tiempo de lectura, porque si el caso 1 selee antes de las 24hs. se va a i...
SIM
SIM (SULFHÍDRICO – INDOL –        MOVILIDAD)Fundamento: Es un medio semi-sólido transparente que pone enevidencia la movil...
SIM      SH2+ Ind+   SH2+ Ind-   SH2- Ind+   SH2- Ind-      Mot+        Mot-        Mot+        Mot-
Prueba de VP y RM
ROJO DE METILO – VOGES        PROSKAUER:Fundamento: El acido pirúvico, un compuesto fundamental formado en lafermentación ...
ONPG
ONPG (O-NITROFENIL-β-      GALACTOPIRANÓSIDO)Fundamento: Lo microorganismos lactosa (+) tienen β-galactosidasa ypermeasa, ...
Citrato
CITRATOFundamento: Sirve para poner de manifiesto aquellosmicroorganismos que utilizan el citrato como únicafuente de carb...
UreasaPositivo   Negativo
UREA:Fundamento: Sirve para poner de manifiesto aquellosmicroorganismo que poseen la enzima ureasa.Procedimiento: El medio...
Fenilalanina               (-)   (+)
FENIL-ALANINA-DESAMINASA:Fundamento: Sirve para poner de manifiesto aquellosmicroorganismo que poseen la enzima FENIL-ALAN...
Lisina Decarboxilasa
AMINOÁCIDOS:         DESCARBOXILASAS:Fundamento: Las descarboxilasas son enzimas sustrato-específicas (presentes o no en l...
Lisina Hierro Agar (LIA)LIA – SH2 -   LIA + SH2 -   LIA + SH2 -
LIA:Agar de ensayo para la demostración simultánea de lisina decarboxilasa(LD) y de la formación de hidrogeno sulfurado (H...
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  1. 1. Pruebas bioquímicas de identificación Bioq. María de los Ángeles Sosa
  2. 2. Pruebas de Identificación rápidas1.Prueba de la catalasa2.Prueba de la coagulasa3.Prueba de PYR4.Prueba de oxidasa
  3. 3. Pruebas de Identificación para Cocos Gram +1. DNasa2. Prueba del manitol salado3. Bilis esculina4. CAMP5. Hidrólisis del hipurato6. Voges –ProskauerPruebas de sensibilidad a ATB1. Disco de Optoquina2. Disco de novobiocina3. Disco de Bacitracina
  4. 4. catalasa
  5. 5. Prueba de la catalasaFundamento: Detecta la presencia de la enzima catalasa.Procedimiento: En portaobjetos colocar sobre una colonia unas gotas de H202 3 %.H202 H20 + 02 Liberación de burbujas rápida y sostenida indica la producción de oxígeno molecular = prueba (+)Consideraciones: No Agar sangre (peroxidasa en los eritrocitos).
  6. 6. coagulasa
  7. 7. Prueba de la coagulasaFundamento: Detecta un factor de agregación “clumping factor” en la superficie de la bacteriana.Procedimiento: se coloca una colonia sospechosa de pertenecer a una especie de Staphylococcus y se emulsifica en una gota de plasma de conejo.Interpretación: “arracimamiento” bacteriano en 1 minuto = prueba (+).Si el resultado es negativo ensayar la producción de coagulasa en tubo.Consideraciones: Utilizar plasma con EDTA y no citratado, ya que organismos capaces de metabolizar el citrato (Enterococcus spp.) pueden dar resultados falsos (+). Las pruebas (-) luego de 4 hs de incubación a 35ºC, dejar a temperatura ambiente y leer luego de 18- 24 hs a fin de evitar la fibrinólisis que producen algunas cepas al ser incubadas en forma prolongada a 35ºC.
  8. 8. Prueba de PYR
  9. 9. Prueba del PYR:Fundamento: detecta la enzima pirrolidonil arilamidasa se utilizacomo sustrato el reactivo L-pirrolidonil- beta-naftilamida (PYR), parala identificación rápida de enterococos.Procedimiento: Realizar un alto inóculo (2 MacFarland) e introducirun disco de PYR.Tiempo y Tº de incubación: 30 minutos a 35º C.Tiempo de lectura: 5 minutos.Interpretación:Disco rosado o rojo (+)Disco y/o solución amarillo a incoloro (-).Consideraciones: Algunas especies de Staphylococcus y losestreptococos del grupo A dan, también, una prueba positiva.
  10. 10. DNAsa
  11. 11. Prueba de la DNAsaFundamento: El S. aureus produce una DNAasatermoestable que hidroliza DNA. La producción deDNAsa puede determinarse incorporando ácidodesoxirribonucleico (DNA) en agar nutritivo .Procedimiento: Se inocula el microorganismo enmanchas densas sobre agar DNA y después de 18 a 24hs de incubación. Revelar con HCl al 1%, que precipitael DNA nativo del medio. Interpretación: colonias rodeadas por una zona claradonde el ADN ha sido despolimerizado e hidrolizado =prueba (+)
  12. 12. Manitol salado
  13. 13. Agar Manitol salado Fundamento: el medio contiene manitol (1%), cloruro de sodio (7,5 %), rojo de fenol y peptonas. Procedimiento: Sembrar la cepa e incubar 18 a 24 hs a 35ºC. Interpretación:Crecimiento y virajeS. aureusCrecimiento sin viraje.S. epidermidisConsideraciones: La alta concentración de sal inhibe otros microorganismos excepto enterococos (por lo tanto usar la placa para identificación, no para aislamiento).
  14. 14. Bilis Esculina
  15. 15. Prueba de la bilis-esculina:Fundamento: Se basa en la capacidad de ciertas bacterias(estreptococos del grupo D) para hidrolizar la esculina en presenciade 1-4% de sales biliares.Procedimiento: Se inocula el microorganismo en la superficie deun pico de flauta. Incubar 24 hs. Interpretación: La beta glucosidasa escinde la esculina en glucosay esculetina. Esta ultima es soluble en el medio y forma uncomplejo de color negro con Fe 3+ .La hidrólisis de esculina seobserva como un oscurecimiento del medio (color negro) en 24 hsde incubación a 35ºC, raramente se requieren 48 hs de incubaciónhasta que la hidrólisis sea aparente.Consideraciones: Es importante que el medio contenga 40% debilis, ya que algunos productos contienen menos cantidad lo quelleva a confundir algunos estreptococos viridans con enterococos
  16. 16. Prueba de CAMPFundamento: Los estreptococos grupo B secretan el factor CAMPque interactúa con la ß-hemolisina secretada por una cepa ß-hemolítica de S. aureus (ATCC 25923) lo que causa unacrecentamiento o sinergismo de la hemólisis.Procedimiento: En placa de agar sangre sembrar una estría de lacepa de S. aureus y perpendicularmente a ésta (lo más cercaposible, sin llegar a tocarla) sembrar la cepa de estreptococo enestudio.Tiempo y Tº de incubación: Incubar 24 hs a 35ºC en aerobiosis(en CO2 aumentan los falsos positivos).Interpretación: El sinergismo se observa como un área de ß-Hemólisis en forma de “punta de flecha” en la zonade desarrollo más cercana a ambas estrías.
  17. 17. Prueba de CAMP
  18. 18. Prueba del hipurato de sodioFundamento: Ciertas cepas son capaces de hidrolizar el hipuratode sodio. La producción de hipuricasa resulta en la hidrólisis delhipurato de sodio con la formación de benzoato de sodio y glicina.Procedimiento: Inocular un tubo con medio hipurato de sodio con elmicroorganismo. Incubar 24 hs a 35ºC. Centrifugar. Pipetear 0.8 mlel sobrenadante. Agregar 0.2 ml de cloruro férrico 7%.Inocular un tubo con 0.4 ml de medio hipurato de sodio con elmicroorganismo. Incubar 2 hs a 35ºC. Agregar 0.2 ml de Ninhidrina.Interpretación:La formación de un precipitado denso y persistente por 10 minutos= prueba (+) Benzoato de sodioLa aparición de un color púrpura profundo = prueba (+) glicina.
  19. 19. Hidrólisis de hipurato
  20. 20. Prueba de la susceptibilidad a la Novobiocina Fundamento: Se basa en que ciertas bacterias son sensibles a la novobiocina. Procedimiento: Se inocula el microorganismo en agar Mueller Hinton según técnica de Kirby-Bauer, utilizando discos de Novobiocina (5 µg). Interpretación: Sensible: inhibición del desarrollo con un diámetro mayor o igual a 16 mm Staphylococcus R Micrococcus S Consideraciones: Kirby Bauer (Difusión en disco) Inoculo sin incubación previa Tiempo de lectura: 24 hs. Tº de incubación: 33º a 35º
  21. 21. Prueba de la Bacitracina:Fundamento: Se basa en que ciertas bacterias son sensibles a labacitracina.Procedimiento: Se inocula el microorganismo en AS según técnicade Kirby-Bauer utilizando discos de Bacitracina (0.04 U).Interpretación: Sensible: Cualquier zona de inhibición deldesarrollo.Consideraciones: Kirby Bauer (Difusión en disco)Inoculo sin incubación previaTiempo de lectura: 18 a 24 hs.Tº de incubación: 33º a 35º en CO2Recordar que el uso de discos de Bacitracina en forma directa enlas placas primarias de cultivo puede dar como resultado un 40% a50% de falsos negativos.
  22. 22. Prueba de la Bacitracina
  23. 23. Prueba de la optoquina
  24. 24. Pruebas de Identificación para enterobacterias1. Prueba OF2. Prueba de la oxidasa o citocromooxidasa3. TSI4. SIM (Sulfhídrico- Indol- Movilidad)5. Rojo de metilo - Voges –Proskauer6. ONPG (O-nitrofenil-b-galactopiranosido)7. Citrato8. Ureasa9. Fenil-alanina-desaminasa10.Descarboxilasas
  25. 25. OxidasaNEG POS
  26. 26. CITOCROMOOXIDASA O PRUEBA DE LA OXIDASAFundamento: El sistema citocromooxidasa, se halla enmicroorganismo aerobios, microaerófilos y anaerobios facultativos.Procedimiento: Hacer una suspensión del microorganismo consolución fisiológica (inóculo) en un tubo de vidrio, agregar un disco(disco comercial de papel impregnado de tetrametil-para-difenilamina) se agita y antes de los 2 minutos se debe leer.Interpretación: Un cambio de color del disco a rosado o violeta =prueba (+). Si no hay cambio de color el microorganismo es oxidasanegativo.Consideraciones Esta prueba no puede realizarse con coloniasque provengan de medios de cultivo que contenga hidratos decarbono ni indicadores, por lo que si se la va a realizar se debeincubar los microorganismos en un placa de AS o bien un TSA(tripteina-soya-agar)
  27. 27. Prueba OF
  28. 28. PRUEBA DE OXIDACIÓN FERMENTACIÓN (O-F)Fundamento: Determinan el metabolismo oxidativo o fermentativode un hidrato de carbono o su falta de utilización. Se usa el medioO-F de Hugh y Leifson que contiene peptonas e hidratos decarbono en una relación 1:5. Al ser menor la concentración depeptonas, hay menor producción de productos de oxidación a partirde los AA que tienden a elevar el pH y pueden neutralizar losácidos débiles producidos por los microorganismos nofermentadores.Procedimiento: Se utilizan 2 tubos con el medio O-F, se hace lasiembra con ansa de punta hasta el fondo de los dos tubos. Uno delos tubos queda expuesto al aire, y el otro se cubre con vaselinaestéril.Interpretación:Microorganismos oxidativo: producen ácido solo en el tuboabierto, expuesto al O2 atmosférico. Por lo que solamente el tuboexpuesto al aire atmosférico cambia su color original a amarillo.Microorganismos fermentadores: producen ácido en los 2 tubos.O sea que los dos tubos viran del verde al amarillo.Bacterias sacarolíticas: son inertes a este medio que conserva supH alcalino después de la incubación, conservando su colororiginal.
  29. 29. Triple Azúcar Hierro
  30. 30. TSI (TRIPLE AZÚCAR HIERRO AGAR)Fundamento: Sirve para detectar lafermentación de hidratos de carbono. El mediocontiene: glucosa al 0.1%, lactosa 1%, sacarosaal 1% y peptonas; también tiene un indicadorrojo de fenol y sulfato de hierro para evidenciarla formación de SH2.Procedimiento: El medio se fracciona en picosde flauta con una capa basal profunda (2 cm.por lo menos). Con el ansa en punta se siembrapor punción y estría.El medio no inoculado es anaranjado-rojizo orojo pálido. Incubar 24 hs a 35º C.
  31. 31. TSI (TRIPLE AZÚCAR HIERRO AGAR)Interpretación:Fermentación de la glucosa (alcalino/ácido)Primero los microorganismos empiezan a fermentar la glucosa, produciendoácidos y virando totalmente el medio a color amarillo. Como solamenteutilizan la glucosa, no pueden usar la sacarosa ni la lactosa, cuando laglucosa que se halla en baja concentración se consume (antes de las 24hs)los microorganismos comienzan a utilizar la peptonas con producción deamoníaco que alcaliniza el medio dando un color rojo, pero solamente en elpico, quedando el fondo ácido.Fermentación de glucosa, lactosa y sacarosa (ácido/ácido)Como la lactosa y sacarosa están en una proporción 10 veces mayor que laglucosa, en un período de 24hs., la lactosa y sacarosa, aún no seconsumen quedando ácido el medio o sea totalmente amarillo.3) No fermentación de lactosa, sacarosa ni glucosa (alcalino/alcalino). Unmicroorganismo incapaz de obtener sus nutrientes de los hidratos decarbono, lo obtiene de las peptonas. Cuando las peptonas son degradadaslibran amoníaco y alcalinizan el medio. Produciéndose entoncesintensificación del color.
  32. 32. Consideraciones del TSIEs importante respetar el tiempo de lectura, porque si el caso 1 selee antes de las 24hs. se va a interpretar como ac/ac y no lo es. Siel 2 se lee después de las 24hs, los microorganismo ya se quedansin hidratos de carbono, entonces comienzan a utilizar las peptonasy se alcaliniza el medio.Con respecto al sulfhídrico pueden presentarse distintasmodalidades:Pico rojo, fondo amarillo con precipitado negro y formación de gas,esto se puede dar en Salmonella, se lee: alc/ac (SH2) (gas)También se puede ver totalmente amarillo y el fondo negro: se lee:ac/ac (SH2).Además se puede visualizar en el tubo la producción de gas porparte del microorganismo, entonces en el medio se observanburbujas, resquebrajamiento, o si no todo el medio de cultivoaparece levantado.
  33. 33. SIM
  34. 34. SIM (SULFHÍDRICO – INDOL – MOVILIDAD)Fundamento: Es un medio semi-sólido transparente que pone enevidencia la movilidad, la producción de triptofanasa y de SH2. Contiene:Triptofano: la enzima triptofanasa, lo desdobla, produce indol, que se ponede manifiesto con el reactivo de Erlich o KovacCitrato de hierro y amonio: los microorganismos productores de SH2ennegrecen el medio de cultivoSi los microorganismos son móviles, al ser éste un medio semi-sólido seproduce enturbiamiento del medio de cultivo, caso contrario solo crece en lapunción.Procedimiento: se inocula el microorganismo por punción con ansa depunta. Se deja incubar a 35ºC durante 24hs. y luego de este tiempo seagregan unas gotas del reactivo de Erlich o Kovac dejándolo resbalar porlas paredes del tubo.Interpretación:Triptófano (+): observar la interfase, la aparición de un color rojo fucsiabrillante por la formación de un complejo entre el indol y el p-dimetilaminobenzaldehido.M (+) / SH2 (-) enturbiamiento del medioM (+) / SH2 (+), se ennegrece todo el medioM (-) / SH2 (-) se observa crecimiento solamente en la estríaM (-) / SH2 (+), se observa precipitado negro alrededor de la estría (pero noennegreciendo de todo el medio).
  35. 35. SIM SH2+ Ind+ SH2+ Ind- SH2- Ind+ SH2- Ind- Mot+ Mot- Mot+ Mot-
  36. 36. Prueba de VP y RM
  37. 37. ROJO DE METILO – VOGES PROSKAUER:Fundamento: El acido pirúvico, un compuesto fundamental formado en lafermentación de la glucosa, es metabolizado aún mas a través de ciertonumero de vías metabólicas. Una de ellas da como resultado la producciónde acetoína (acetil-metil-carbinol) un producto final de reacción neutra. Enpresencia de oxigeno e KOH al 40%, la acetoína es convertida en diacetiloy el α naftol sirve como catalizador para producir un complejo de color rojo.Procedimiento: Se usa el mismo caldo de enriquecimiento para las dospruebas (2ml), se hace la inoculación del microorganismo, y se lleva aincubar a 35ºC durante como mínimo 24-72hs..Luego se lo divide en dos partes, una para la prueba de RM y otra para lade VP.Rojo de metilo: se agregan 3 gotas del reactivo de metilo, si en lasuperficie del medio aparece un color rojo intenso es RM (+) =microorganismos que utilizan la glucosa fermentándola hasta llegar a un pHmenor a 4,4.VP: Se agrega 0.6 ml de alfa-naftol seguidos de 0,2 ml de KOH al 40%. Esesencial que los reactivos se agreguen en este orden. El tubo se sacudesuavemente y luego se deja quieto de 10 a 15 min. La aparición de colorrojo = prueba (+) (presencia de acetil-metil-carbinol).
  38. 38. ONPG
  39. 39. ONPG (O-NITROFENIL-β- GALACTOPIRANÓSIDO)Fundamento: Lo microorganismos lactosa (+) tienen β-galactosidasa ypermeasa, dos enzimas necesarias para la formación de ácidos a partir dela lactosaLa permeasa es necesaria para que la molécula de lactosa ingrese en lacélula bacteriana.Hay algunos microorganismo que son falsos lactosa (-) por carecer depermeasa, pero sí tienen β-galactosidasa, en realidad son lactosas (+).Esta prueba se hace con los microorganismo que dan lactosa (-)Procedimiento: Hacer un inóculo con SF estéril, agregar un disco de papelcomercial, se agita y antes de los 2 minutos se debe leer.Interpretación: Un color amarillo intenso nos indica que el microorganismoes productor de β-galactosidasa= prueba (+).ConsideracionesSe hace un inóculo del microorganismo en solución fisiológica estéril, seagrega un disco de papel. Se lleva a incubar a 37ºC durante 24hs.
  40. 40. Citrato
  41. 41. CITRATOFundamento: Sirve para poner de manifiesto aquellosmicroorganismos que utilizan el citrato como únicafuente de carbono, el indicador es azul de bromo timol.Procedimiento: El color original del medio es verde, yse encuentra fraccionado en pico de flauta, la siembrase hace por estría, se incuba 24-72hs a 35ºC.Interpretación: Si el microorganismo utiliza citrato, seproduce alcalinización del medio de cultivo pasando éstea color azul intenso, lo cual indica prueba positiva parael citrato.
  42. 42. UreasaPositivo Negativo
  43. 43. UREA:Fundamento: Sirve para poner de manifiesto aquellosmicroorganismo que poseen la enzima ureasa.Procedimiento: El medio fraccionado en pico de flautacontiene urea y rojo de fenol como indicador, el colororiginal del medio es amarillo (o sea ácido) La siembrase realiza con ansa de punta tanto en profundidad comoen la superficie. Se deja incubar 24 hs a 35º C.Interpretación: Si el microorganismo es productor deureasa, desdobla la urea produciendo amoníaco,consecuentemente produce alcalinidad que semanifiesta porque el medio toma un color fucsia.
  44. 44. Fenilalanina (-) (+)
  45. 45. FENIL-ALANINA-DESAMINASA:Fundamento: Sirve para poner de manifiesto aquellosmicroorganismo que poseen la enzima FENIL-ALANINA-DESAMINASA. El medio se prepara con unpico de flauta largo, pues la lectura se hace sobre lasuperficie del medio de cultivo.Procedimiento: Se siembra sobre la superficie delmedio solamente, se incuba 24 hs a 35º C, se revelacon cloruro férrico.Interpretación: El color original es amarillo, si elmicroorganismo es productor de la enzima, al agregarsobre el medio cloruro férrico, ésta se pone demanifiesto, dando a la superficie un color verde intenso.
  46. 46. Lisina Decarboxilasa
  47. 47. AMINOÁCIDOS: DESCARBOXILASAS:Fundamento: Las descarboxilasas son enzimas sustrato-específicas (presentes o no en los microorganismos) capaces dereaccionar con la porción carboxilo (COOH) de AA formandoaminas de reacción alcalina. Esta reacción, conocida comodescarboxilación, forma C02 como producto secundario. Cadadescarboxilasa es específica para un aminoácido.Lisina, arginina y ornitina son los aminoácidos evaluados de rutinaen la identificación de enterobacterias.El medio Moeller es la base (semi-sólida) que se emplea con másfrecuencia. El aminoácido se agrega a la base. El color original eslila.Procedimiento: Se inoculan por punción 2 tubos y se sellan conaceite mineral. Uno de los tubos contiene el AA y el otro no.Interpretación: Si el aminoácido es descarboxilado, se formanaminas alcalinas y el medio pasa a violeta más intenso. Si no esdescarboxilado pero fermenta la glucosa, vira al amarillo por laformación de ácidos
  48. 48. Lisina Hierro Agar (LIA)LIA – SH2 - LIA + SH2 - LIA + SH2 -
  49. 49. LIA:Agar de ensayo para la demostración simultánea de lisina decarboxilasa(LD) y de la formación de hidrogeno sulfurado (H2S) para la identificaciónde enterobacterias.► La lisina puede ser descarboxilada por microorganismos LD positivasque la transforman en la amina cadaverina. Esto produce un viraje alvioleta del indicador de pH púrpura de bromocresol,puesto que ladescarboxilación sólo tiene lugar en medio ácido (pH inferior a6.0). Es necesario que se produzca previamente la acidificación del mediodecultivo, por fermentación de la glucosa. Este medio de cultivo solopuede utilizarse para la diferenciación de bacterias que fermentanglucosa.► Los microorganismos LD negativos, pero fermentadores de la glucosa,producen un viraje al amarillo de la totalidad del medio de cultivo. Laincubación prolongada puede ocasionar alcalinización en la zona de lasuperficie del medio de cultivo y en consecuencia, se produce un viraje alvioleta. La formación de H2S produce una coloración negra debido alsulfuro de hierro producido.

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