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Uso basico del microscopio optico
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Uso basico del microscopio optico

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  • 1. Uso básico delMicroscopio Óptico Javiera Inostroza Zúñiga Gustavo González Valenzuela
  • 2. Microscopio, del griego: "mikro" = pequeño y"scopeõ" = mirar (para mirar cosas pequeñas)
  • 3. El microscopio óptico básico está compuestopor partes mecánicas, ópticas y de iluminación: Ópticas Iluminación Mecánicas Lente objetivo Fuente de luz Revólver Lente ocular Condensador* Platina Prismas Diafragma Macrométrico Micrométrico Tornillo del carro Tubo Base Pinzas
  • 4. Estructura y partes básicas del microscopio óptico
  • 5. Fundamentos ópticos del microscopio
  • 6. El microscopio utiliza la propiedad de larefracción de la luz para formar imágenes Índice de refracción (n) Agua = 1.3300 Aceite de inmersión = 1.5150 Fluorita = 1.4340 Vidrio (crown) = 1.5200
  • 7. Elementos necesarios para formar unaimagen: Fuente de iluminación Muestra Sistema de lentes
  • 8. La LuzPuede ser descrita mediante dos modelos: Por su forma de propagación, naturaleza ondulatoria (James Clerk Maxwell) Por su forma de interactuar con la materia, naturaleza corpuscular ó fotónica (Albert Einstein)
  • 9. La Luz visibleCorresponde sólo a una pequeña fracción del espectroelectromagnético que va desde longitudes de onda delcolor violeta de 400 nm hasta el rojo de 750 nm
  • 10. Los Lentes convergentes: concentran los rayos del haz de luzhacia el punto del foco. divergentes: dispersan los rayos del haz de luz.
  • 11. Diagrama general del microscopio compuesto
  • 12. Aumento y Poder de Resolución Aumento: relación lineal entre el tamaño de la imagen formada y el objetoAumento lateral del objetivo Aumento angular del ocular Aumento total = aumento objetivo x aumento ocular
  • 13. Aumento Vacío: incremento de la imagen sin que puedapercibirse mayores detalles. Amplificación Amplificación vacía
  • 14. Poder de resolución (d): distancia mínimaentre dos puntos del objeto que permite quese observen separados λ ≈ 560 nmApertura numérica (NA) e Índice derefracción (n)
  • 15. Modo de uso del microscopio Objetivo de menos aumento en el eje central Platina en su posición mas baja Prender Diafragma abierto
  • 16.  Colocar muestra Regular la luz con el diafragma
  • 17. Proceso de enfoque Subir la platina con el macrométrico Observar con objetivo menor Usar micrométrico Una vez enfocado pasar el siguiente aumento
  • 18. Enfocar: Hacer coincidir plano focal del condensador con el del objetivo La muestra debe quedar en el plano focal
  • 19.  Enfocar con micrométrico. * Pasar a lente de inmersión Luego de usar limpiar el objetivo
  • 20. ¿Por qué usar objetivo de inmersión? Angulo de apertura. Angulo de apertura en objetivo seco es mayor en que en inmersión. *Ley de Snell
  • 21. Recomendaciones Estar relajado Mantener distancia con lo oculares Ajustar oculares Ver con ambos ojos
  • 22. Tipos de microscopios Campo claro Campo oscuro Contraste de fases Interferencia Polarización * Fluorescencia
  • 23. Campo claro Usado con más frecuencia Resolución para estructuras mayor a 0,2 μm Células teñidas y con pigmentos Fácil de usar y costo accesible
  • 24. Campo oscuro Estructura iluminada sobre fondo oscuro Para observar células vivas , de pequeño tamaño o que no se pueden teñir. Desventajas: mayor costo por condensador especial, preparación más compleja de la muestra y no permite ver muchas estructuras celulares internas.
  • 25. Campo oscuro fundamentos Condensador especial Apertura numérica del condensador mayor que la del lente objetivo
  • 26. Contraste de fases Facilita la observación de estructuras internas, permite ver células vivas de forma inmediata. Transforma la diferencia entre los distintos índices de refracción de la muestra en diferencias de intensidad lumínica.
  • 27. Contraste de fasesCondensador con anillo de fase y placa defase en el objetivo.
  • 28. Contraste de fasesLa propiedad de dos ondas de interferir entreellas genera imágenes contrastadas.
  • 29. Contraste de fases
  • 30. Contraste de interferencia diferencial (de Nomarski) Filtro polarizador: hace vibrar el haz en un solo plano Prisma Wollaston #1: separa el haz en dos y en planos distintos en 90° Objeto: desfasa el haz que lo atraviesa, y el que no servirá como referencia Prisma Wollaston #2: desfase final de ¼ de longitud de onda (no se interfieren porque están en planos diferentes) Filtro analizador: rota el plano de las dos ondas luminosas, los hace coincidir y se produce la interferencia
  • 31. Contraste de interferencia diferencial (de Nomarski)Determinación dela masapor unidad de superficiedel material observado
  • 32. Microscopio de polarización Identificación de sustancias cristalinas o fibrosas con alto orden molecular *Birrefringente: varios índices de refracción, dependiendo de la orientación molecular del objeto, interacciona de diferente forma con la onda luminosa
  • 33. Microscopio de polarización Polarizador y analizador.
  • 34. Microscopio de polarización