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Uso básico delMicroscopio Óptico           Javiera Inostroza Zúñiga           Gustavo González Valenzuela
Microscopio, del griego:    "mikro" = pequeño y"scopeõ" = mirar (para mirar      cosas pequeñas)
El microscopio óptico básico está compuestopor partes mecánicas, ópticas y de iluminación:   Ópticas          Iluminación ...
Estructura y partes básicas del microscopio óptico
Fundamentos ópticos del microscopio
El microscopio utiliza la propiedad de larefracción de la luz para formar imágenes             Índice de refracción (n)   ...
Elementos necesarios para formar unaimagen: Fuente de iluminación Muestra Sistema de lentes
La LuzPuede ser descrita mediante dos modelos:  Por su forma de propagación, naturaleza ondulatoria (James Clerk    Maxwel...
La Luz visibleCorresponde sólo a una pequeña fracción del espectroelectromagnético que va desde longitudes de onda delcolo...
Los Lentes convergentes: concentran los rayos del haz de luzhacia el punto del foco. divergentes: dispersan los rayos de...
Diagrama general del microscopio compuesto
Aumento y Poder de Resolución   Aumento: relación lineal entre el tamaño de la   imagen formada y el objetoAumento lateral...
Aumento Vacío: incremento de la imagen sin que puedapercibirse mayores detalles.   Amplificación                 Amplifica...
Poder de resolución (d): distancia mínimaentre dos puntos del objeto que permite quese observen separados                 ...
Modo de uso del microscopio Objetivo de menos  aumento en el eje  central Platina en su posición  mas baja Prender Dia...
 Colocar muestra Regular la luz  con el diafragma
Proceso de enfoque Subir la platina con el macrométrico Observar con objetivo  menor Usar micrométrico Una vez enfoca...
Enfocar: Hacer coincidir plano focal  del condensador con el del  objetivo La muestra debe quedar en  el plano focal
 Enfocar con  micrométrico. * Pasar a lente de  inmersión Luego de usar limpiar el  objetivo
¿Por qué usar objetivo de inmersión? Angulo de apertura. Angulo de apertura en  objetivo seco es mayor  en que en inmers...
Recomendaciones Estar relajado Mantener distancia con  lo oculares Ajustar oculares Ver con ambos ojos
Tipos de microscopios   Campo claro   Campo oscuro   Contraste de fases   Interferencia   Polarización   * Fluoresce...
Campo claro Usado con más  frecuencia Resolución para  estructuras mayor a 0,2  μm Células teñidas y con  pigmentos Fá...
Campo oscuro Estructura iluminada sobre  fondo oscuro Para observar células vivas ,  de pequeño tamaño o que  no se pued...
Campo oscuro              fundamentos Condensador especial Apertura numérica del  condensador mayor  que la del lente ob...
Contraste de fases Facilita la observación de  estructuras internas,  permite ver células vivas de  forma inmediata. Tra...
Contraste de fasesCondensador con anillo de fase y placa defase en el objetivo.
Contraste de fasesLa propiedad de dos ondas de interferir entreellas genera imágenes contrastadas.
Contraste de fases
Contraste de interferencia         diferencial (de Nomarski) Filtro polarizador: hace vibrar el haz  en un solo plano Pr...
Contraste de interferencia     diferencial (de Nomarski)Determinación dela masapor unidad de superficiedel material observ...
Microscopio de polarización Identificación de sustancias  cristalinas o fibrosas con  alto orden molecular *Birrefringen...
Microscopio de polarización Polarizador y  analizador.
Microscopio de polarización
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  1. 1. Uso básico delMicroscopio Óptico Javiera Inostroza Zúñiga Gustavo González Valenzuela
  2. 2. Microscopio, del griego: "mikro" = pequeño y"scopeõ" = mirar (para mirar cosas pequeñas)
  3. 3. El microscopio óptico básico está compuestopor partes mecánicas, ópticas y de iluminación: Ópticas Iluminación Mecánicas Lente objetivo Fuente de luz Revólver Lente ocular Condensador* Platina Prismas Diafragma Macrométrico Micrométrico Tornillo del carro Tubo Base Pinzas
  4. 4. Estructura y partes básicas del microscopio óptico
  5. 5. Fundamentos ópticos del microscopio
  6. 6. El microscopio utiliza la propiedad de larefracción de la luz para formar imágenes Índice de refracción (n) Agua = 1.3300 Aceite de inmersión = 1.5150 Fluorita = 1.4340 Vidrio (crown) = 1.5200
  7. 7. Elementos necesarios para formar unaimagen: Fuente de iluminación Muestra Sistema de lentes
  8. 8. La LuzPuede ser descrita mediante dos modelos: Por su forma de propagación, naturaleza ondulatoria (James Clerk Maxwell) Por su forma de interactuar con la materia, naturaleza corpuscular ó fotónica (Albert Einstein)
  9. 9. La Luz visibleCorresponde sólo a una pequeña fracción del espectroelectromagnético que va desde longitudes de onda delcolor violeta de 400 nm hasta el rojo de 750 nm
  10. 10. Los Lentes convergentes: concentran los rayos del haz de luzhacia el punto del foco. divergentes: dispersan los rayos del haz de luz.
  11. 11. Diagrama general del microscopio compuesto
  12. 12. Aumento y Poder de Resolución Aumento: relación lineal entre el tamaño de la imagen formada y el objetoAumento lateral del objetivo Aumento angular del ocular Aumento total = aumento objetivo x aumento ocular
  13. 13. Aumento Vacío: incremento de la imagen sin que puedapercibirse mayores detalles. Amplificación Amplificación vacía
  14. 14. Poder de resolución (d): distancia mínimaentre dos puntos del objeto que permite quese observen separados λ ≈ 560 nmApertura numérica (NA) e Índice derefracción (n)
  15. 15. Modo de uso del microscopio Objetivo de menos aumento en el eje central Platina en su posición mas baja Prender Diafragma abierto
  16. 16.  Colocar muestra Regular la luz con el diafragma
  17. 17. Proceso de enfoque Subir la platina con el macrométrico Observar con objetivo menor Usar micrométrico Una vez enfocado pasar el siguiente aumento
  18. 18. Enfocar: Hacer coincidir plano focal del condensador con el del objetivo La muestra debe quedar en el plano focal
  19. 19.  Enfocar con micrométrico. * Pasar a lente de inmersión Luego de usar limpiar el objetivo
  20. 20. ¿Por qué usar objetivo de inmersión? Angulo de apertura. Angulo de apertura en objetivo seco es mayor en que en inmersión. *Ley de Snell
  21. 21. Recomendaciones Estar relajado Mantener distancia con lo oculares Ajustar oculares Ver con ambos ojos
  22. 22. Tipos de microscopios Campo claro Campo oscuro Contraste de fases Interferencia Polarización * Fluorescencia
  23. 23. Campo claro Usado con más frecuencia Resolución para estructuras mayor a 0,2 μm Células teñidas y con pigmentos Fácil de usar y costo accesible
  24. 24. Campo oscuro Estructura iluminada sobre fondo oscuro Para observar células vivas , de pequeño tamaño o que no se pueden teñir. Desventajas: mayor costo por condensador especial, preparación más compleja de la muestra y no permite ver muchas estructuras celulares internas.
  25. 25. Campo oscuro fundamentos Condensador especial Apertura numérica del condensador mayor que la del lente objetivo
  26. 26. Contraste de fases Facilita la observación de estructuras internas, permite ver células vivas de forma inmediata. Transforma la diferencia entre los distintos índices de refracción de la muestra en diferencias de intensidad lumínica.
  27. 27. Contraste de fasesCondensador con anillo de fase y placa defase en el objetivo.
  28. 28. Contraste de fasesLa propiedad de dos ondas de interferir entreellas genera imágenes contrastadas.
  29. 29. Contraste de fases
  30. 30. Contraste de interferencia diferencial (de Nomarski) Filtro polarizador: hace vibrar el haz en un solo plano Prisma Wollaston #1: separa el haz en dos y en planos distintos en 90° Objeto: desfasa el haz que lo atraviesa, y el que no servirá como referencia Prisma Wollaston #2: desfase final de ¼ de longitud de onda (no se interfieren porque están en planos diferentes) Filtro analizador: rota el plano de las dos ondas luminosas, los hace coincidir y se produce la interferencia
  31. 31. Contraste de interferencia diferencial (de Nomarski)Determinación dela masapor unidad de superficiedel material observado
  32. 32. Microscopio de polarización Identificación de sustancias cristalinas o fibrosas con alto orden molecular *Birrefringente: varios índices de refracción, dependiendo de la orientación molecular del objeto, interacciona de diferente forma con la onda luminosa
  33. 33. Microscopio de polarización Polarizador y analizador.
  34. 34. Microscopio de polarización

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