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Uso basico del microscopio optico
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Uso basico del microscopio optico Uso basico del microscopio optico Presentation Transcript

  • Uso básico delMicroscopio Óptico Javiera Inostroza Zúñiga Gustavo González Valenzuela
  • Microscopio, del griego: "mikro" = pequeño y"scopeõ" = mirar (para mirar cosas pequeñas)
  • El microscopio óptico básico está compuestopor partes mecánicas, ópticas y de iluminación: Ópticas Iluminación Mecánicas Lente objetivo Fuente de luz Revólver Lente ocular Condensador* Platina Prismas Diafragma Macrométrico Micrométrico Tornillo del carro Tubo Base Pinzas
  • Estructura y partes básicas del microscopio óptico
  • Fundamentos ópticos del microscopio
  • El microscopio utiliza la propiedad de larefracción de la luz para formar imágenes Índice de refracción (n) Agua = 1.3300 Aceite de inmersión = 1.5150 Fluorita = 1.4340 Vidrio (crown) = 1.5200
  • Elementos necesarios para formar unaimagen: Fuente de iluminación Muestra Sistema de lentes
  • La LuzPuede ser descrita mediante dos modelos: Por su forma de propagación, naturaleza ondulatoria (James Clerk Maxwell) Por su forma de interactuar con la materia, naturaleza corpuscular ó fotónica (Albert Einstein)
  • La Luz visibleCorresponde sólo a una pequeña fracción del espectroelectromagnético que va desde longitudes de onda delcolor violeta de 400 nm hasta el rojo de 750 nm
  • Los Lentes convergentes: concentran los rayos del haz de luzhacia el punto del foco. divergentes: dispersan los rayos del haz de luz.
  • Diagrama general del microscopio compuesto
  • Aumento y Poder de Resolución Aumento: relación lineal entre el tamaño de la imagen formada y el objetoAumento lateral del objetivo Aumento angular del ocular Aumento total = aumento objetivo x aumento ocular
  • Aumento Vacío: incremento de la imagen sin que puedapercibirse mayores detalles. Amplificación Amplificación vacía
  • Poder de resolución (d): distancia mínimaentre dos puntos del objeto que permite quese observen separados λ ≈ 560 nmApertura numérica (NA) e Índice derefracción (n)
  • Modo de uso del microscopio Objetivo de menos aumento en el eje central Platina en su posición mas baja Prender Diafragma abierto
  •  Colocar muestra Regular la luz con el diafragma
  • Proceso de enfoque Subir la platina con el macrométrico Observar con objetivo menor Usar micrométrico Una vez enfocado pasar el siguiente aumento
  • Enfocar: Hacer coincidir plano focal del condensador con el del objetivo La muestra debe quedar en el plano focal
  •  Enfocar con micrométrico. * Pasar a lente de inmersión Luego de usar limpiar el objetivo
  • ¿Por qué usar objetivo de inmersión? Angulo de apertura. Angulo de apertura en objetivo seco es mayor en que en inmersión. *Ley de Snell
  • Recomendaciones Estar relajado Mantener distancia con lo oculares Ajustar oculares Ver con ambos ojos
  • Tipos de microscopios Campo claro Campo oscuro Contraste de fases Interferencia Polarización * Fluorescencia
  • Campo claro Usado con más frecuencia Resolución para estructuras mayor a 0,2 μm Células teñidas y con pigmentos Fácil de usar y costo accesible
  • Campo oscuro Estructura iluminada sobre fondo oscuro Para observar células vivas , de pequeño tamaño o que no se pueden teñir. Desventajas: mayor costo por condensador especial, preparación más compleja de la muestra y no permite ver muchas estructuras celulares internas.
  • Campo oscuro fundamentos Condensador especial Apertura numérica del condensador mayor que la del lente objetivo
  • Contraste de fases Facilita la observación de estructuras internas, permite ver células vivas de forma inmediata. Transforma la diferencia entre los distintos índices de refracción de la muestra en diferencias de intensidad lumínica.
  • Contraste de fasesCondensador con anillo de fase y placa defase en el objetivo.
  • Contraste de fasesLa propiedad de dos ondas de interferir entreellas genera imágenes contrastadas.
  • Contraste de fases
  • Contraste de interferencia diferencial (de Nomarski) Filtro polarizador: hace vibrar el haz en un solo plano Prisma Wollaston #1: separa el haz en dos y en planos distintos en 90° Objeto: desfasa el haz que lo atraviesa, y el que no servirá como referencia Prisma Wollaston #2: desfase final de ¼ de longitud de onda (no se interfieren porque están en planos diferentes) Filtro analizador: rota el plano de las dos ondas luminosas, los hace coincidir y se produce la interferencia
  • Contraste de interferencia diferencial (de Nomarski)Determinación dela masapor unidad de superficiedel material observado
  • Microscopio de polarización Identificación de sustancias cristalinas o fibrosas con alto orden molecular *Birrefringente: varios índices de refracción, dependiendo de la orientación molecular del objeto, interacciona de diferente forma con la onda luminosa
  • Microscopio de polarización Polarizador y analizador.
  • Microscopio de polarización