Los avances Científicos en el Diagnostico por    Citotecnología.      Lic. Noel Avalos.
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VIRUS DEL PAPILOMA     HUMANO.
VPH.O Los virus tipos   1, 3 y 5 pueden causar las  verrugas en piernas y brazosO Los tipos   6 y 11 pueden provocar lesio...
VPH
Vacunas para contra el VPH. Vacunas Profilácticas: Inducen la formación de Anticuerpos   humorales que Neutralizan al VPH....
Estudios citológicos en El         Salvador.O Se realizan las citologías cervico-uterinas  convencionales.O Se han hecho e...
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Avances científicos en E.SO El método IVAA.  O Se puede realizar una inspeccion visual    con Acido acetico al 3% o 5%.  O...
Avances científicos en E.S
Avances científicos en E.S.O Se trata de introducir la citología liquida a  nivel publico por las siguientes razones:  O L...
Avances científicos en E.S.  O Limpia el 60% de la inflamación ,moco y    sangre.  O Incrementa en un 64.73% los diagnósti...
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APLICACIÓN DE LAINMUNOCITOQUIMICA A    LA CITOLOGÍA.O Se realizó un estudio descriptivo  trasversal de cohorte, se tomaron...
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PCR en citología.O La muestra fue obtenida una vez realizado el PAP, se colocó el cepillo en un tubo de 15 ml que contenía...
PCR en citología.O Detección y tipificación de VPH por PCR. Se  utilizó una PCR de consenso en nido para los  genes E6/ E7...
PCR en citología.O En cada PCR se incluyeron 2 controles  positivos de VPH de AR y BR (plásmidos  VPH16 y VPH11), un contr...
PCR en citología.O Detección VPH. PCR alto riesgo: 1-3. Muestras citobrush. 4. Control BR (VPH 11). 5. Control AR (VPH 16)...
APLICACIÓN DE LAPATOLOGIA MOLECULAR A PCR      LA CITOLOGIA. Cualquier técnica de PCR puede realizarse sobre material cito...
APLICACIÓN DE LAPATOLOGIA MOLECULAR A    LA CITOLOGIA. CITOLOGIAS NO GINECOLOGICAS La aplicación de técnicas moleculares a...
APLICACIÓN DE LAPATOLOGIA MOLECULAR A    LA CITOLOGIA. FISH o hibridación fluorescente in situ. Se aplica fundamentalmente...
Bibliografia.O   http://www.medicasuis.org/anteriores/volumen20.2/doc3.pdfO   http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_a...
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  1. 1. Los avances Científicos en el Diagnostico por Citotecnología. Lic. Noel Avalos.
  2. 2. Citotecnología.Agrupa a las tecnólogos médicos del áreade anatomía patológica y laboratorio clínico,que se dedican a la lectura del la citologíaginecológica y la no ginecológica, con el finde brindar tamizajes adecuados y óptimospara contribuir a un diagnostico preciso.
  3. 3. Citotecnología.O Citodiagnosis /Citodiagnóstico:también llamado examen citológico o simplemente citología, es el diagnóstico morfológico basado en los caracteres microscópicos de células y componentes extracelulares, desprendidos de los órganos espontáneamente u obtenidos por procedimientos que, en general, son menos invasivos que la biopsia.O Citogenética: Estudio de la estructura y función de los cromosomas celulares.O Citología: Parte de la biología que estudia la célula.O Citólogo/ga: Persona especializada en citología.
  4. 4. Tipos de estudios citológicos:O Citología vaginal: Citología de toma única del fondo vaginal o de cérvix uterino.O Citología triple toma (Wied): Cuando de forma protocolizada se toman muestras de fondo vaginal, cérvix uterino y de endocérvix.O Citología endometrial: Cuando por métodos de sondas o cánulas se realiza toma endouterina.O Citología de secreción: Cuando se obtiene material citológico por medio de la expresión de una glándula o zona anatómica.
  5. 5. Tipos de estudios citológicos:O Citología de excreción. Cuando se realiza de residuos metabólicos, como la orina.O Citología por punción (PAAF). Cuando se obtiene material citológico mediante punción con aguja de una lesión habitualmente no accesible externamente.O Impronta. Cuando se obtienen células por aproximación de un tejido u órgano al portaobjetos.
  6. 6. CITOTECNÓLOGOS:DEFINICIÓN Y FUNCIONESO Es un técnico especialista en el area de laboratorio patológico que examina las células bajo el microscopio para detectar anormalidades o pistas que indican que una célula es maligna, premaligna o enferma.
  7. 7. Funciones.O Nº citología 60 en un lapso de 8 horas.O ArchivoO Escribir informesO Control de calidadO Desarrollar la correlación de los casos para aumentar la calidad del tamizajeO Las funciones pueden cambiar dependiendo del tipo de servicio ya sea publico o privado
  8. 8. Citotecnólogos en El Salvador. Se cuenta con un numero considerable de ellos/as. No se realizar estudios de citología extra-vaginal. Ya que esto es realizado por el patólogo. No se cuenta con una asociación, que respalde el proceso legal de los mismo. Para el control de calidad siempre se necesita al patólogo para sellar el tamizaje.
  9. 9. Trabajo del Citotecnólogo/a O Se realiza el Diagnostico precoz de cáncer, como una herramienta fundamental para evitar el cáncer servicio uterino. O Diagnóstico de vaginitis con estudio de las células y los gérmenes. O Valoración hormonal, pero muy pocas veces se realiza.
  10. 10. Datos del CA de cervico uterino en E.S. En el Lab 2009 240 Central del MSPAS 2008 290 Ins del CA 2005 517 Res de Tumores 2006 258
  11. 11. VIRUS DEL PAPILOMA HUMANO.O Familia Papillomaviridae.O Compuestos de ADN, de 8000 pares de bases.O Su estructura, es compartida por más de 100 tipos secuenciados hasta la fechaO Su actividad transformante se explica principalmente por la actividad de sus oncoproteinas E6 y E7.
  12. 12. VIRUS DEL PAPILOMA HUMANO.O Virus sin envolturaO Capside proteicaO Infecta sólo a células epiteliales.O Son virus DNA compuestos por tres regiones.O Región temprana E (Early), la cual codifica para las proteínas virales (E1, E2, E4, E5, E6 y E7), necesarias para la replicación del DNA viral, la regulación de la trascripción y la transformación e inmortalización celular.O Región Tardía L (Late), que codifica para proteínas estructurales (L1 y L2).O Region reguladora conocida como región larga de control LCR (Long Control Región), que contiene la secuencia de DNA que permiten el control de la replicación y de la expresión del genoma viral.
  13. 13. VIRUS DEL PAPILOMA HUMANO.
  14. 14. VPH.O Los virus tipos 1, 3 y 5 pueden causar las verrugas en piernas y brazosO Los tipos 6 y 11 pueden provocar lesiones verrugosas en los genitales masculinos y femeninos.O Los tipos 16, 18, 31, 33, 35, 45 y 58 pueden provocar alteraciones celulares en la vagina y el cuello uterino; displasias y representan casi el 95% de los casos de canceres cervicouterinos en todo el mundo
  15. 15. VPH
  16. 16. Vacunas para contra el VPH. Vacunas Profilácticas: Inducen la formación de Anticuerpos humorales que Neutralizan al VPH. Vacuna tetravalente recombinante contra los tipos 6, 11, 16 y 18. O Ayudaría al sistema inmunológico a reconocer y destruir el agente antes de que la infección quede completamente establecida
  17. 17. Estudios citológicos en El Salvador.O Se realizan las citologías cervico-uterinas convencionales.O Se han hecho estudios desde el 2002 para ver la sensibilidad y la especificidad con la inspección visual de acido acético (IVAA).O Actualización de coloración de PAP, propuesto por el JICA, en el 2010.O Se esta tratando de introducir la citología liquida a nivel del MSPAS pero esta en proceso de prueba, el alto costo de reactivos
  18. 18. Estudios citológicos en El Salvador.O No se realizan por parte de citotecnólogos/as, lectura de citologías extra-vaginal.O En el ultimo simposio de prevención del Cáncer Cervico-Uterino se habla de tomar medidas para mejores los tamizajes de la detección temprana del cáncer en nuestro país.
  19. 19. Avances científicos en E.SO El método IVAA. O Se puede realizar una inspeccion visual con Acido acetico al 3% o 5%. O No se necesita de material especializado. O Personas con capacitacion tecnica pueden elaborarlo. O Proporciona datos especificos en en un 65%
  20. 20. Avances científicos en E.S
  21. 21. Avances científicos en E.S.O Se trata de introducir la citología liquida a nivel publico por las siguientes razones: O Logra conservar el 100% de la muestra. O Se pueden montar varias laminas por paciente. O No requiere equipo costoso para su procesamiento.
  22. 22. Avances científicos en E.S. O Limpia el 60% de la inflamación ,moco y sangre. O Incrementa en un 64.73% los diagnósticos de lesiones intraepiteliales de bajo y alto grado . O Disminuye los diagnósticos inflamatorio en un 31.3% O Incrementa los diagnósticos negativos para células malignas en un 34.6%
  23. 23. Que rumbo tomar en los A. C. en E.SO Realizar investigación científica, con la ayuda de países cooperantes.O Tener centros de formación permanente en citología cervico-vaginal.O Capacitar al personal de salud para realizar citologías extra-vaginal.
  24. 24. APLICACIÓN DE LA INMUNOCITOQUIMICA A LA CITOLOGÍA.O Las indicaciones de realización de técnicas inmunocitoquimicas a los estudios citológicos son las mismas que las de las biopsias:O - Apoyo al diagnóstico y tipificación de tumores indiferenciados.O - Localización del tumor primario en lesiones metastásicas.O - Diferenciar los adenocarcinomas de los mesoteliomas.
  25. 25. APLICACIÓN DE LA INMUNOCITOQUIMICA A LA CITOLOGÍA.O A diferencia de las biopsias, no existe estandarización metodológica en la realización de la técnicas inmunocitoquimicas en los estudios citológicos, por lo que se debe ser muy prudente en la interpretación de los resultados y siempre en un contexto clínico y morfológico.
  26. 26. APLICACIÓN DE LAINMUNOCITOQUIMICA A LA CITOLOGÍA.O Aunque la técnica se puede realizar sobre extensiones directas procedentes de citologías convencionales o de medio liquido, ya sean fijadas o teñidas con Papanicolaou, se obtienen mejores resultados con los bloques celulares, ya que el procesamiento es similar al de las biopsias, permiten aplicar varios anticuerpos a las mismas células así como utilizar controles.
  27. 27. APLICACIÓN DE LAINMUNOCITOQUIMICA A LA CITOLOGÍA.O Las técnicas inmunocitoquímicas se pueden realizar sobre cualquier material citológico (PAAF, derrames, cepillados, orinas, etc ), aplicando los mismos paneles de anticuerpos que en las biopsias. En las citologias ginecológicas con sospecha de lesiones de alto grado, preferentemente las que utilizan medio líquido, se puede utilizar P16 ,CINTEC Plus y ProEx C.
  28. 28. APLICACIÓN DE LAINMUNOCITOQUIMICA A LA CITOLOGÍA. O Identificación del virus del papiloma humano de alto riesgo utilizando la prueba inmunohistoquímica Viroactiv-HPV en pacientes con resultados citológicos de células ASCUS en un laboratorio de Patología Medellín-Colombia 2005-2006.
  29. 29. APLICACIÓN DE LAINMUNOCITOQUIMICA A LA CITOLOGÍA.O Se realizó un estudio descriptivo trasversal de cohorte, se tomaron 45 mujeres, pertenecientes principalmente a los estratos socioeconómicos 2 (24 pacientes) 53,33% y 3 (14 pacientes) 31,11% sexualmente activas con resultado de ASCUS en la citología, que accedieron a participar en el estudio y que respondieron las preguntas del formulario propuesto.
  30. 30. APLICACIÓN DE LA INMUNOCITOQUIMICA A LA CITOLOGÍA.De las 45 pacientes, un total de ocho (17,7%)tuvieron alguna anormalidad en la colposcopia. Deestas ocho pacientes, tres (37,5%) no se habíanrealizado una nueva citología de control y mantenían suclasificación de ASCUS, mientras que cuatro (50%) teníanuna citología de control posterior a la colposcopia yposterior al tratamiento normal. Una sola paciente (12,5%)tenía en su citología un resultado igual al de lacolposcopia.
  31. 31. APLICACIÓN DE LAINMUNOCITOQUIMICA A LA CITOLOGÍA.De estas 45 pacientes, solamente dos(4,4%) resultaron positivas para VPH dealto riesgo mediante la prueba ViroactivHPV
  32. 32. APLICACIÓN DE LAPATOLOGIA MOLECULAR A LA CITOLOGIA. O Como sucede con la inmunocitoquímica cualquier técnica de patología molecular se puede aplicar al material citológico. O CITOLOGIAS GINECOLOGICAS La citología en medio líquido permite, tras evidenciar morfológicamente la lesión, la utilización de material para análisis ADN-VPH Las técnicas más empleadas son: - PCR - Captura de Híbridos - Hibridación in situ
  33. 33. PCR en citología. ARTÍCULOS DE INVESTIGACIÓNEstudio comparativo de detección del virus papilomahumano (VPH) en muestras citológicas y biopsias de cuellouterino
  34. 34. PCR en citología.O Pacientes. Se incorporaron al estudio 44 pacientes del Policlínico de Patología Cervical del Hospital Hernán Henríquez Aravena de Temuco, entre junio y agosto de 2002. Todas con antecedentes de lesiones cervicales en citologías o biopsias previas.O Muestras. A cada paciente se les tomo muestra: obtenida mediante cepillado (CB).
  35. 35. PCR en citología.O La muestra fue obtenida una vez realizado el PAP, se colocó el cepillo en un tubo de 15 ml que contenía 3 ml de buffer TE pH 7.4 (10 mM Tris.Cl, 1 mM EDTA pH 8). Este material fue procesado de inmediato o mantenido a 4°C por un máximo de 24 h, hasta realizar la extracción del ADN.
  36. 36. PCR en citología.O Detección y tipificación de VPH por PCR. Se utilizó una PCR de consenso en nido para los genes E6/ E7, usando para la primera amplificación los iniciadores LCRs/E7as que producen un segmento de 650 pares de bases (pb). Para la segunda amplificación, que genera fragmentos entre 230-270 pb, se usaron los iniciadores PU1M-PU2R, que permitieron subtipificar los tipos virales en AR (HPV 16, 18, 31, 33, 35, 52) y PU2R-PU-31B en los de BR (HPV 6, 11).
  37. 37. PCR en citología.O En cada PCR se incluyeron 2 controles positivos de VPH de AR y BR (plásmidos VPH16 y VPH11), un control blanco y un control negativo (ADN normal). Los productos PCR se visualizaron mediante electroforesis en geles de agarosa al 2% teñido con bromuro de etidio.O Condiciones de las PCR en nido ("nested"). 30 ciclos (primera amplificación) y 40 ciclos (segunda amplificación), con temperaturas de hibridación de 40° a 55°C
  38. 38. PCR en citología.O Detección VPH. PCR alto riesgo: 1-3. Muestras citobrush. 4. Control BR (VPH 11). 5. Control AR (VPH 16). 6. Blanco. PCR bajo riesgo: 1-3. Muestras citobrush. 4. Control BR (VPH 11). 5. Control AR (VPH 16). 6. Blanco.
  39. 39. APLICACIÓN DE LAPATOLOGIA MOLECULAR A PCR LA CITOLOGIA. Cualquier técnica de PCR puede realizarse sobre material citológico, ya sea fresco, fijado en alcohol o teñido con Papanicolaou. El uso mas generalizado de esta técnica es en: - PAAF de linfomas no Hodgkin - PAAF de sarcomas Material citológico de lesiones inflamatorias para detección de agentes infecciosos y secuencias virales.
  40. 40. APLICACIÓN DE LAPATOLOGIA MOLECULAR A LA CITOLOGIA. CITOLOGIAS NO GINECOLOGICAS La aplicación de técnicas moleculares a las citologías no ginecológicas no es tan generalizada como sucede con el material de biopsias, sin embargo su uso es cada vez mayor, fundamentalmente en el material de PAAF
  41. 41. APLICACIÓN DE LAPATOLOGIA MOLECULAR A LA CITOLOGIA. FISH o hibridación fluorescente in situ. Se aplica fundamentalmente en: - PAAF de tumores pediatricos - PAAF de sarcomas - PAAF de linfomas no Hodgkin - PAAF de carcinomas mamarios ( HER2 Neu ) - Citologias de orina en carcinomas uroteliales ( UroVision FISH TesT ) PAAF de carcinomas pulmonares ( EGFR )
  42. 42. Bibliografia.O http://www.medicasuis.org/anteriores/volumen20.2/doc3.pdfO http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0034- 98872005000600003O Alonso de Ruiz P., Lazcano E., Hernández M.. "Cáncer Cervicouterino. Diagnóstico Prevención y Control". Editorial medica, Panamaricana.O Alonso Patricia, Lazcano Eduardo, Hernandez Mauricio. (2005). Cancer Cervicouterino Diagnostico, Prevención y Control. Mexico: Editorial Medica Panamericana.O Coll, C. (1992). Psicología y currículum. España: Editorial Paidós.O Organización Panamericana de la Salud. (2002). Manual de Procedimientos del Laboratorio de Citología. Washington, D. C.: Organización Mundial de la Salud.O Solomon Diane, Nayar Ritu. (2005). El Sistema Bethesda para informar la citología cervical. Buenos Aires, Argentina: Ediciones Journal Junín 873.O Viguer Jose María, García Raimundo. (1995). Laboratorio y atlas de citología. Madrid, España: McGRAW-HILL -INTERAMERICANA .

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