1. Licda. Yanira E. Meléndez
Laboratorio Nacional de
Referencia
2012

2. • El diagnostico actual se basa en las mismas técnicas
bacteriológicas que descubrió Koch hace mas de 100
años.
• Se ha tomado conciencia que para lograr su eliminación
es mas importante mejorar los métodos diagnósticos.

3. • Cultivos en medio Solido:
Loweistein Jensen
Ogawa Kudoh

6.  Crecimiento:
Medio en el que crece. Tiempo que tarda en crecer,
morfología de la colonia, producción de pigmentos
con/sin luz…
 Pruebas bioquímicas:
Prueba de la niacina, reducción de nitratos, catalasa,
tween 80.

7. • METODOS CONVENCIONALES.
 Crecimiento de la micobacteria en medios con el
tuberculostàtico correspondiente
 Medios sólidos: Método de las proporciones
(Resultado del estudio: 2-3 meses desde la recogida de la
muestra)

8. PROCEDIMIENTO TECNICAS TIEMPO PROMEDIO
DEL REPORTE DESDE
EL DIA EN QUE SE
PROCESA LA
MUESTRA
EXAMEN DIRECTO Coloración de Kinyoun
Coloración de Ziehl- 24 HORAS
Neelsen
DETECCION DE Lowestein-Jensen
CRECIMIENTO Ogawa- Kudoh 20-25 DÌAS
IDENTIFICACIÓN DE Pbas bioquímicas
LA ESPECIE tradicionales (Niacina, 50-55 DIAS
Catalasa, Reducción de
Nitratos etc)

9. PROCEDIMIENTO TECNICAS TIEMPO
PROMEDIO DEL
REPORTE DESDE
EL DIA EN QUE SE
PROCESA LA
MUESTRA
PRUEBAS DE Método de las
SENSIBILIDAD proporciones 60 DIAS
múltiples

10. PROCEDIMIENTO TECNICAS TIEMPO
PROMEDIO DEL
REPORTE DESDE
EL DIA EN QUE SE
PROCESA LA
MUESTRA
EXAMEN DIRECTO Coloración 24 horas
Auramina/Rodamina
DETECCION DE BACTEC, 15 días
CRECIMIENTO
IDENTIFICACIÓN DE LA BACTEC, Sondas de 18 días
ESPECIE ADN, HPCL

11. PROCEDIMIENTO TECNICAS TIEMPO
PROMEDIO DEL
REPORTE DESDE
EL DIA EN QUE SE
PROCESA LA
MUESTRA
PRUEBAS DE BACTEC 30 días
SENSIBILIDAD

15. Microscopía LED
Una nueva alternativa diagnóstica Qué es un diodo?
Dispositivo semiconductor
de paso de corriente
eléctrica en un solo
sentido
Qué es la microscopía LED?
Es un tipo de microscopìa fluorescente en la cual la fuente lumínica
(halógena o de mercurio) ha sido reemplazada por un diodo emisor de
luz

16. AURAMINA O
ZIEHL NEELSEN
Microscopio de fluorescencia
Microscopio óptico. 800 – 1000
200 – 400
Bacilos de color rojo sobre fondo
Bacilos flourescentes amarillos
Azul y blanco.
Y brillantes sobre fondo oscuro
La “Limitación” más importante de la baciloscopìa es su baja
sensibilidad.
Muy importante: Obtener buenas muestras
Tiempo de observación

17. Medios de cultivo Líquidos:
Radiométricos ( BACTEC ): detecta automáticamente crecimiento
bacteriano, en caldo Milddlebrook 7H12 midiendo la cantidad de CO2
marcado con Carbono Radioactivo (14CO2)

18. Ventajas
*Ahorro de tiempo en la detección del
crecimiento(15 a 20 días)
*Mayor sensibilidad, tanto para el aislamiento del
M. tuberculosis como de otras Micobacterias.
*Posibilidad de identificar M. tuberculosis en 4 a 5
días y de realizar PSD a fármacos de primera
línea en 3 a 6 días.

19. • Necesita utilizar radioisótopos.
• Elevado costo del equipo, reactivo y mantenimiento.
• Uso de jeringas, lo que puede ocasionar
contaminaciones cruzadas entre muestras así como
formación de aerosoles.
• Necesita permiso para manipulación y almacenamiento
del 14C.

20. • Basado en el mismo principio, pero el marcador ha sido
sustituido por Rutenio que emite fluorescencia detectable
a medida que disminuye la tensión parcial de O2, usa
tubos con caldo Milddlebrook 7H9
• Tiene una lectura automatizada
• Aprobado como Gold Estándar
• Buena concordancia con PS en medio sólido y BACTEC
460

21. VENTAJAS
Mayor sensibilidad.
Menor tiempo
DESVENTAJAS
Mas costoso.
Dependencia del proveedor
Mayor preparación de
personal

25. Ventajas
• Bajo costo
• Detecta 100 bacilos en una muestra
• Puede ser utilizado para determinación de resistencia a
Rifampicina directamente de la muestra de
expectoración
• Acorta el tiempo 2 días
Desventajas
• Mayor frecuencia de contaminaciones

26. Sistema de Medio base Mezcla Sistema Detección de M. Detección de Otras
cultivo antibiótica de tuberculosis otras característica
detecció media (rango) Micobacterias s
n en días media (rango)
en días
Bactec 4 ml de PANTA 14CO2 10(4-30) 13 (3-30) Radiomé-
12 B 7H12 trico
más
POES

27. POES :Contiene esterato de polioxietileno ,
sustancia que favorece el crecimiento.
PANTA : Polimixina B, Anfotericina B, Ac. Nalidixico,
Trimetroprima, Azlociclina. Este suplemento al agregarse al
medio 12B inhibe el crecimiento de gérmenes
contaminantes.

28. • ADN: Molécula que tiene toda la información
genética de cada individuo
• PCR: Reacción en cadena de la polimerasa
• Descubierta en 1985 por Karry Mullis (USA)
• La enzima ADN polimerasa permite fabricar una
cadena de ADN complementaria a otra ya
existente
• Técnica muy sensible y rápida

29. NUCLEO
CELULA
CROMOSOMA
ADN

30. • Este ensayo es basado en la
transcripción mediada por un
sistema de amplificación
(TMA). El mycobacterial
rRNA.
• EL RNA amplicon producido
es detectado en solución
usando luminometrico. Esta
aprobado solo para muestras
respiratorias

31. • 1- La detección del ADN del
complejo MTB en muestras de
esputo o sedimento concentrado ya
sea de esputo o LBA, BAAR + o
BAAR -
• 2- La detección de la mutación del
gen rpoB /región 81bp que esta
asociada a la resistencia a la
rifampicina en pacientes de alto
riesgo
• 3- La prueba MTB/RIF-Xpert® esta
indicada en pacientes :
• con sospecha clínica de TBC
• pacientes que no han recibido
tratamiento,
• pacientes con menos de 7 días de
tx. o pacientes que no han recibido
tx en los últimos 60 días

32. • 1). Primer instrumento de
diagnóstico molecular
homologado por la FDA
• 2). El sistema GeneXpert
es el único en combinar una
preparación de muestra
abordo con PCR en tiempo
real
• 3). Resultados de
muestras no procesadas en
aproximadamente 2 horas.

33. • 1). Se monitoriza ciclo a ciclo el producto amplificado, a
través de una señal de fluorescencia en el momento en que
se está dando la reacción de PCR
• 2). La señal de fluorescencia incrementa en proporción al
producto amplificado
• 3). La señal fluorescente será colectada en la fase
exponencial de la PCR ciclo a ciclo.
• 4). La medición puede ser graficada en forma logaritmica o
lineal.

40. Baciloscopia Cultivo en L GeneXpert Metodo de
J las
Proporciones
Positiva Positivo Positivo Sensible/
Resistente
Positiva Negativo Positivo No aplica
Negativa Positivo Negativo Sensible
/Resistente
Negativa Negativo Positivo No aplica

41. 1 Provenir del sitio de la lesión a investigar
Muestra Biológica 2 Cantidad
Adecuada suficiente
3 Envase adecuado
y limpio
6 Transporte
4 Identificación
5 Conservación
(tiempo de
entrega)

42. Muestra biológica adecuada
+
Técnica correcta
Resultado confiable y útil

43. • Los cultivos de bacteriología solo captan:
LA PUNTA DEL ICEBERG
La transmisión se da no solo por
pacientes infectados,
sino que también por pacientes colonizados