Cómo montar las preparaciones en el laboratorio de Anatomía Patológica

1. PROCESO DE TEJIDOS Y CITOPREPARACIÓN
UNIDAD DIDÁCTICA 17
MONTAJE Y CONSERVACIÓN DE PREPARACIONES.
1.- INTRODUCCIÓN.
2.- LÁMINAS CUBREOBJETOS.
2.1.- Delgadez.
2.2.- Indice de refracción.
2.3.- Superficie.
2.4.- Conservación y limpieza.
3.- MEDIOS DE MONTAJE.
4.- TIPOS DE MEDIOS DE MONTAJE.
4.1.- No miscibles en agua.
4.2.- Miscibles en agua.
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2. PROCESO DE TEJIDOS Y CITOPREPARACIÓN
1.- INTRODUCCIÓN.
El montaje de una preparación consistente en su impregnación con una sustancia
transparente e inactiva para que no se altere su visualización microscópica ni su estructura
histológica, seguida de un recubrimiento con una fina lámina de cristal denominada
cubreobjetos.
2.- LÁMINAS CUBREOBJETOS.
Para realizar un buen montaje los cubreobjetos deben tener las siguientes características:
2.1.- Delgadez.
Deben ser de un grosor de 0.16-0.17 mm. Si son más finos se rompen con facilidad,
mientras que si el grosor es mayor dificulta el examen con aceite de inmersión.
2.2.- Índice de refracción.
Debe ser de alrededor de 1.5 sobre toda la extensión del cubreobjetos.
2.3.- Superficie.
Debe ser lo más plana posible.
2.4.- Conservación y limpieza.
Antes de usar los cubreobjetos deben ser lavados con alcohol y secados suavemente con un
trapo seco. Durante su manipulación se tendrá cuidado para que no se rompan pues por su
delgadez y características del cristal son muy cortantes y penetran fácilmente a través de
la piel.
3.- MEDIOS DE MONTAJE.
Son productos que sirven para unir de forma rápida y duradera la preparación del
portaobjetos y el cubreobjetos. Deben reunir las siguientes características:
a) Ser químicamente neutros.
b) Ser totalmente transparentes.
c) No deben alterarse con el paso del tiempo.
d) Poseer un índice de refracción entre 1.4 y 1.6 que permita revelar al máximo las
diferencias entre el medio y las estructuras a estudiar.
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3. PROCESO DE TEJIDOS Y CITOPREPARACIÓN
4.- TIPOS DE MEDIOS DE MONTAJE.
4.1.- Medios no miscibles en agua.
Son los más usados ya que son baratos, de fácil conservación y con índice de refracción
adecuado. Al ser insolubles en agua obligan a una deshidratación previa de la preparación
seguida de un solvente de medio de montaje. Los pasos a realizar tras la tinción son los
siguientes:
¾ Deshidratación en alcohol absoluto, o con alcoholes a concentraciones crecientes.
¾ El corte se sumerge en dos o tres baños puros del disolvente del medio de montaje.
(generalmente utilizaremos xilol).
¾ Se procede al montaje colocando en el centro del cubre objetos bien limpio la
resma a utilizar.
¾ Se deposita el cubre en el centro de la preparación. La resma de montaje se
disuelve y se extiende con rapidez.
Entre estos medios no miscibles, los más importantes son:
Balsamo de Canadá. Es una resina natural de índice de refracción 15. Sus principales
inconvenientes son los siguientes:
¾ Tarda mucho en secar.
¾ Con el tiempo adquiere cierta coloración amarillenta.
¾ Algunos colorantes básicos, por ejemplo anilinas básicas, pierden su brillantez al
cabo del tiempo con el uso de esta resina.
¾ Actualmente es poco utilizada.
Aceite de Cedro. Posee las mismas características que el anterior y también es de poco
uso actualmente.
Resinas sintéticas y semisintéticas. Hoy día están sustituyendo a las resinas naturales. Su
composición es variada llevando muchas de ellas una mezcla de resina y disolvente. Son
quimicamente neutras y secan con rapidez a diferencia de las naturales. Algunos de los
productos comerciales más utilizados son el DPX, ENTELLAN, EUPARAL, CLARITE, etc.,
todos ellos poseen un índice de refracción de 1.5-1.6 y no suelen alterar los colorantes,
aunque pueden presentarse algunos problemas con el Azul de Metileno y el Van Gieson.
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4. PROCESO DE TEJIDOS Y CITOPREPARACIÓN
4.2.- Medios miscibles en agua.
Son de uso muy limitado ya que la conservación con ellos es peor y su utilización más
delicada. Entre ellos cabe destacar:
¾ Glicerina pura: suele alterar con facilidad los colorantes básicos, no es muy
utilizada.
¾ Glicerina gelatinada: Tiene el inconveniente de que con el tiempo distorsiona la
hematoxilina, no es muy utilizada.
¾ Jarabe de levulosa: Presenta los inconvenientes de las anteriores por lo que
tampoco es muy utilizada.
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