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Prelaboratorio de practica 2 de analisis quimico forense
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Para los estudiantes de Quimica Legal y Analisis Toxicologico 2012

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Prelaboratorio de practica 2 de analisis quimico forense Prelaboratorio de practica 2 de analisis quimico forense Document Transcript

  • Universidad de El Salvador Facultad de Química y FarmaciaDepartamento de análisis químico e instrumental Química legal y análisis toxicológico . CICLO 1 - 2012 PRELABORATORIO DE PRACTICA #2 ANÁLISIS DE MANCHAS DE SANGRE, SEMEN Licdo. Juan Agustín Cuadra Soto
  • REGLAMENTO DE HIGIENE Y SEGURIDAD PARA LOS LABORATORIOS DE LA FACULTAD DE QUÍMICA Y FARMACIA DE LA UNIVERSIDAD DE EL SALVADOR • INDISPENSABLE «CAMARA DE GASES». • NO SE COMENZARA NINGUNA ACTIVIDAD SIN LA PRESENCIA DEL DOCENTE RESPONSABLE. • INDUMENTARIA BASICA INDISPENSABLE. • PROHIBIDO EL USO DE CUALQUIER INSTRUMENTO ELECTRONICO DE MUSICA O CELULARES QUE PUEDAN GENERAR DISTRACCION. • COLOCAR LOS DESECHOS EN LOS CONTENEDORES CORRESPONDIENTES A LA NATURALEZA DEL TOXICO. • TODO ESTUDIANTE QUE IRRESPETE EL REGLAMENTO SE SOMETERA A UNA SANCION LA CUAL ESTA ESPECIFICADA EN EL REGLAMENTO GENERAL.
  • REGLAMENTO INTERNO DE HIGIENE Y SEGURIDAD PARA EL LABORATORIO DE QUIMICA LEGAL Y ANALISIS TOXICOLOGICO (REVISION 2010)• INDISPENSABLE «CAMARA DE GASES».• NO SE COMENZARA NINGUNA ACTIVIDAD SIN LA PRESENCIA DEL DOCENTE RESPONSABLE.• INDUMENTARIA BASICA INDISPENSABLE.• PROHIBIDO EL USO DE CUALQUIER INSTRUMENTO ELECTRONICO DE MUSICA O CELULARES QUE PUEDAN GENERAR DISTRACCION.• COLOCAR LOS DESECHOS EN LOS CONTENEDORES CORRESPONDIENTES A LA NATURALEZA DEL TOXICO.• TODO ESTUDIANTE QUE IRRESPETE EL REGLAMENTO SE SOMETERA A UNA SANCION LA CUAL ESTA ESPECIFICADA EN EL REGLAMENTO GENERAL.
  • OBJETIVOS:Explicar las reacciones de orientación parala identificación de manchas tanto de sangrecomo de semen.Explicar las reacciones de certeza en laidentificación de manchas de tanto desangre como de semen.Indicar como se puede reconocer si lamancha de sangre encontrada es de origenhumano.Utilizar adecuadamente los reactivoscorrespondientes para identificar lasmanchas de sangre.Determinar el grupo sanguíneo.Aplicar los reactivos adecuados para lainvestigación de manchas de semen.Reconocer un espermatozoide e identificarcorrectamente las partes que los forman.
  • REACTIVOS MATERIAL Y EQUIPO• Reactivo de Meyer • Porta objetos, cubreobjetos.• Reactivo de Medinger • Agitador• Reactivo de Nippe • Tubos de ensayo• Reactivo de Gabriel • Frasco lavador Bertrand • Caja de Petri• Solución salina (capsula de porcelana; vidrio de• Reactivo antisuero: reloj) Seraciones Anti A, B, AB • Mechero• Almacenar: 28°C • Papel indicador• Reactivo de Florence. • Papel filtro• Metanol al 80° • Gotero• Solución de Eritrosina 0.5% • Microscopio en amoniaco • Incubadora• Solución de azul de metileno al 0.05% • Pinza de sostén• Metanol Absoluto. • Bandeja de Tinción• Etanol • Refrigeradora• Amoniaco.
  • Previamente alanálisis revisar y anotar las condiciones en que se recibe lamuestra, extraerl a sin romper el sello de lainstitución que lo remite.
  • DETERMINACIONDE MANCHAS DE SANGRE REACCIONES DE ORIENTACION
  • Preparar la muestra con agua destilada lo mas concentrada posible «solución muestra»La preparación de la muestra en el Laboratorio se realizade la siguiente manera:
  • REACCION DE MEYER (KASTLE-MEYER) 1 mL de Agregar 3solución de gotas de Mancha amoniaco, par a alcalinizar. Utilizar papel pH. Agregar 1 mL de reactivo Agregar 3 gotas de agua oxigenada de 10 volúmenes La formación de una coloración roja. «posible presencia de sangre»
  • REACCION DE MEDINGER (PIERRE MEDINGER) Tomar una Impresión de la mancha con papel filtro húmedo. «llevar un testigo, con agua destilada»Extender el papel (mx y testigo) sobre una capsula de porcelana.Previamente rutorulada 10 mL de Reactivo + 16 gotas de H2O2 10 vol. Dividirlo en dos. (5 mL en capsula de porcelana).
  • REACCIÓN DE QUIMIOLUMINISCENCIA (PRUEBA DE LUMINOL)Buscar residuos de sangreen el lugar y delimitar elárea. Preparar el reactivo de luminol (5 mL H2O + 5 mL H2O2 10 vol. + 5 mL de Buffer) y colocarlo en un esprayador.Rociar el reactivo en lazona; observar en cámarade luz UV. La prueba se debe de realizar en un zona oscura para observar la luminiscencia.
  • EN EL LABORATORIO SEREALIZARA LA PRUEBA DELUMINOL EN UNA CÁMARA UV
  • DETERMINACIONDE MANCHAS DE SANGREREACCIONES DE CERTEZA
  • FORMACION DE CRISTALES DE HALUROS DE HEMINA (NIPPE)Colocar una gota de la solución muestra y colocarla sobre un porta objeto.Fijar la muestra con ayuda de un mechero.«Controlar que la Temp. no sea mayor que la que pueda soportar el dorso» Agregar unas gotas de reactivo de Nippe sobre la película obtenida. Colocar un cubre objeto y calentar hasta comienzo de ebullición Agregar 1 mL de reactivo de Nippe en la orilla del cubreobjetos y efectuar la observación al microscopio.
  • REACTIVO DE GABRIEL BERTRAND1 gota de la solución muestra se coloca en un portaobjeto con la ayuda de u mechero aplicar calor leve hasta la formación de una película. Agregar 1 gota de reactivo y calentar hasta ebullición y retire. Colocar una gota dereactivo en la orilla del cubreobjetos y observar en el microscopio.
  • PRUEBA DE TIPEO SANGUÍNEO POR AGLUTINACIÓN Depositar 1 gota de hematíes problema; con un POSIBILIDAD DE REACCION hematocrito 35- 40% sobre una ANTI-A ANTI-B ANTI-AB GRUPO placa. SANGUINEO A REPORTAR + - + Añadir una gota A (aproximadamente - + + 50 microlitros de B reactivo. - - - O Mezclar bien la sangre + + + ABcon el reactivo formandoun circulo de unos 2 cm de diámetro, mover la placa lentamente conmovimientos basculares durante 2 minutos.
  • IDENTIFICACIÓN DE MANCHAS DE SEMENPREPARACION DE LA MUESTRASi la muestra no es reciente,
  • REACCIÓN DE BARBERIOSe coloca una gota de la maceraciónde la mancha sobre un portaobjetos . Preparar un blanco Se añade una gota de reactivo y se cubre con un cubreobjetos. Observar al microscopio
  • REACCIÓN DE FLORENCE PREPARACION DE LA MUESTRA Y TECNICACortar un trozo de telacon mancha de semen ymachacarlo en untubo, agregarle unasgotas de agua. Dejarlo en20 min. Colocar 1 gota en un portaobjeto, secar en estufa a 37ºC, dejar que se enfríe. Colocar un cubreobjetos (laminilla) sobre la mancha. Con un gotero agregar el reactivo de Florence
  • ANÁLISIS DE FLUIDO SEMINAL “FOSFATASA ACIDA”• Esta prueba se fundamenta en la detección de la enzima fosfatasa acida. “no es especifica para el fluido seminal” Cortar una mínima Colocar un control porción de la materia positivo y otro hisopo y colocarla en negativo. un soporte limpio. Agregue una o dos gotas de reactivo I a Dejar reposar por 5 cada muestra y a los minutos controles. Agregar una o dos La presencia de un gotas de reactivo II a color azul brillante se cada muestra y los interpreta como controles positivo.
  • EXAMEN MICROSCÓPICO REACTIVOS: • ALCOHOL METILICO AL 80% • SOLUCION DE ERITROSINA AL 0,5% EN AMONIACO • SOLUCION AZUL DE METILENO AL 0.05% • ALCOHOL METILICO ABSOLUTO.El frotis evaporado asequedad a Ta. Ambiente, sefija con 3-5 gotas de alcoholmetílico al 80%, por laorilla, inclinado el porta-objeto, se seca con ayudadel calor Se pone el reactivo de Eritrosina durante 3 minutos, se retira el colorante y se lava ligeramente por el borde con agua destilada, usando el frasco lavador.
  • EXAMEN MICROSCÓPICOColocar una gotade reactivo deazul de metilenodurante 1 minuto. Se retira el colorante, lavand o ligeramente con agua destilada.Se deshidratacon 5 gotas dealcohol metílicoabsoluto. Se observa en el microscopio, donde aparecen los espermatozoides
  • MUCHAS GRACIAS POR SU ATENCION“El trabajo que nuncase empieza es el que tarda más en finalizarse.” PREGUNTAS…..? Sugerencias y comentarios