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Esta técnica permite multiplicar pequeñas cantidades de ADN entre cientos demiles y millones de veces. El tramo destinado ...
Para replicar el ADN, la técnica PCR hizo uso, en un principio, de la ADNpolimerasa de la bacteria Escherichia coliConcept...
FosfodiésterEs un tipo de enlace covalente que se produce entre un grupo hidroxilo (OH-)en el carbono 3 y un grupo fosfato...
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Reacción en cadena de la polimeras (pcr) (3)

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Reacción en cadena de la polimeras (pcr) (3)

  1. 1. Reacción en cadena de la polimeras 1. La PCR (reacción en cadena de la polimerasa) es una técnica de diagnóstico molecular muy sensible, capaz de revelar tan sólo una copia de ADN en una mezcla compleja del mismo. 2. La reacción en cadena de la polimerasa, ya más conocida como PCR, es una técnica que permite replicar entre cientos de miles y millones de veces, en el transcurrir de pocas horas e in vitro, pequeñas cantidades de ADN.El producto que se obtiene al finalizar la reacción es una gran cantidad de unfragmento génico con alto grado de pureza Por su alta sensibilidad, estatécnica permite identificar un gen a partir de un solo cabello, una célulasomática o un espermatozoide.Entre las aplicaciones médicas de la PCR cabe destacar su aporte al desarrollode nuevas estrategias de diagnóstico. Permite detectar agentes infecciososcomo los virus de las hepatitis B y C o regiones del genoma del virus de lainmunodeficiencia humana (HIV).Aplicaciones:Secuenciación de ADN fósilesIdentificación de especies y Control de cruzas entre animalesDiagnóstico prenatal/Diagnóstico pre implantación:Detección de mutaciones
  2. 2. Esta técnica permite multiplicar pequeñas cantidades de ADN entre cientos demiles y millones de veces. El tramo destinado a reproducirse puede tenerdesde cincuenta hasta más de dos mil nucleótidos de longitud. El segmento deADN que sirve de molde para la realización del proceso.MetodologíaLa muestra se calienta, en el primer paso, hasta lograr la separación de las doscadenas que constituyen el ADN "desnaturalización". En el segundo paso, latemperatura se reduce para permitir el "apareamiento" de cada una de doscadenas cortas de nucleótidos (oligonucleótidos) con cada una de las hebrasseparadas del ADN molde. En tercer lugar, una enzima ADN polimerasaextiende los primers, en el espacio comprendido entre ambos, sintetizando lassecuencias complementarias de las hebras del ADN molde.Al cabo del primer ciclo de tres reacciones (desnaturalización, apareamiento,extensión) el tramo de ADN elegido se ha duplicado y el doble de su cantidadoriginal se encuentra disponible para ser nuevamente replicado en un segundociclo.Desnaturalización ocurre en una temperatura de 95º consiste en la separaciónde una cadena de ADN.Apareamiento 60º es la unión de los primers específicos a las cadenascomplementarias En este caso, la temperatura y el tiempo van a depender de 3factores relacionados con los oligonucleótidos: la composición de bases, eltamaño y la concentración.Extensión de 72º la polimerasa sintetice ADN hacia el extremo 5prima - 3primausando nucleótidos libres.
  3. 3. Para replicar el ADN, la técnica PCR hizo uso, en un principio, de la ADNpolimerasa de la bacteria Escherichia coliConceptos:Qué es la E. coli y de dónde viene?E. coli es un tipo de fecales coliformes que se encuentran comúnmente en losintestinos de animales y seres humanos. E. coli es la abreviación deEscherichia coli. La presencia de E. coli en el agua es un fuerte indicio de lareciente contaminación por aguas residuales o desechos de animales. Lasaguas residuales pueden contener muchos tipos de organismos que causanenfermedades.¿Qué son los coliformes fecales?Los coliformes fecales son bacterias que se asocian con desechos humanos oanimales. La presencia de coliformes fecales en el agua pueden no serdirectamente perjudiciales, y no indica necesariamente la presencia de lasheces, sin embargo, sí indica una mayor probabilidad de patógenos dañinos enel agua.Enfermedad: La infección a menudo causa diarrea severa con sangrey calambres abdominales , a veces la infección causa diarrea sin sangre.OligonucleótidosUn oligonucleótido es una molécula compleja formada a su vez porvarios nucleótidos, cada uno de los cuales está compuesto por una basenitrogenada, un hidrato de carbono y un grupo fosfato.Secuencia lineal de nucleótidos unidos por enlaces fosfodiéster, habitualmenteno mayor de 50 nucleótidos.
  4. 4. FosfodiésterEs un tipo de enlace covalente que se produce entre un grupo hidroxilo (OH-)en el carbono 3 y un grupo fosfato.Thermus aquaticus, denominada también Thermophilus aquaticus, esuna bacteria termófila que vive en la proximidad de manantiales de aguacaliente descubierta por danés Christian Gram.Es una bacteria gram-negativa, aerobia y heterótrofa, se denominan bacteriasGram negativas a aquellas bacterias que NO se tiñen de azul oscuroo violeta por la tinción de Gram, y lo hacen de un color rosado tenue: de ahí elnombre de "Gram-negativas" o también "gran negativas".Una primera aproximación a la diferenciación bacteriana,considerándose Bacteria Gram positiva a las bacterias que se visualizan decolor moradas y Bacteria Gram negativa a las que se visualizan de color rosa orojo o grosella.
  5. 5. Web grafía:http://www.freedrinkingwater.com/water-contamination/ecoli-bacteria-removal-water.htmhttp://es.wikipedia.org/wiki/Oligonucle%C3%B3tidohttp://www.cienciahoy.org.ar/hoy23/reaccion.htmhttp://es.wikipedia.org/wiki/Enlace_fosfodi%C3%A9sterhttp://es.wikipedia.org/wiki/Thermus_aquaticushttp://es.wikipedia.org/wiki/Gram-negativahttp://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n_de_Gramhttp://www.scielo.org.ar/scielo.php?pid=S0325-29572006000400013&script=sci_arttexthttp://www.youtube.com/watch?v=Kuy4PDb6bdUhttp://www.monografias.com/trabajos11/tamau/tamau.shtmlhttp://www.slideshare.net/rild27/reaccin-en-cadena-de-la-polimerasahttp://e-ciencia.com/recursos/enciclopedia/Mon%C3%B3merohttp://e-ciencia.com/recursos/enciclopedia/Desoxinucle%C3%B3tido

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