Tecnología Del DNA Recombinante
¿Qué es el DNA Recombinante?
Es una molécula que proviene de la unión artificial de 2
               fragmentos de DNA
   ...
Tecnología del DNA
             Recombinante
   Es una técnica que ha permitido introducir
    material genético foráneo ...
Conceptos
  Enzimas de restricción
( Endonucleasas de restricción) :

    * Son enzimas sumamente específicas y son capac...
   Vectores
     * El vector es el vehículo que transporta el gen o genes
           de interés al organismo hospedador.
...
   Plásmidos
     • Son moléculas de DNA
       bicatenario de carácter
       extracromosómico y
       tienen la capaci...
•   Fagos o Bacteriófagos:

       Los virus más empleados como vectores para
        DNA recombinante son los bacteriófa...
•   Cósmidos:
       Son modernos vectores híbridos que emplean genes
        específicos del fago lambda: la secuencia c...
   Southern Blot
                *Se emplea para identificar fragmentos específicos de ADN
    en una mezcla compleja, po...
   Southern Blot:
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Clase 15. TecnologíA Del Dna Recombinante

  1. 1. Tecnología Del DNA Recombinante
  2. 2. ¿Qué es el DNA Recombinante? Es una molécula que proviene de la unión artificial de 2 fragmentos de DNA *La primera molécula de DNA Recombinante fue creada en 1972 por el biólogo molecular Paul Berg. A través de este DNA podemos distinguir:  DNA Recombinante Natural: Se genera de manera biológica dentro de los organismos  DNA Recombinante Sintético (DNA Quimérico): Es el obtenido por los científicos y usado en ingeniería genética para innovaciones biotecnológicas.
  3. 3. Tecnología del DNA Recombinante  Es una técnica que ha permitido introducir material genético foráneo en un individuo, y hacer que éste organismo incorpore dicho material a su genoma y lo exprese como si fuera suyo.  Esta tecnología se desarrollo a partir del descubrimiento de las enzimas de restricción y su acción sobre los ácidos nucleicos.
  4. 4. Conceptos  Enzimas de restricción ( Endonucleasas de restricción) : * Son enzimas sumamente específicas y son capaces de cortar ambas hebras del DNA en lugares específicos, creando de esta manera una serie de fragmentos. * Trabajan únicamente sobre secuencias específicas de bases nitrogenadas. * La función de las enzimas de restricción es la de proteger al organismo de DNA extraño.
  5. 5.  Vectores * El vector es el vehículo que transporta el gen o genes de interés al organismo hospedador. * permiten la unión de los fragmentos de DNA extraño a su propio DNA por medio de sitios de restricción compatibles * Una vez dentro la célula, el vector se multiplica produciendo varias copias idénticas del gen que transporta. * Debe ser fácil de recuperar.
  6. 6.  Plásmidos • Son moléculas de DNA bicatenario de carácter extracromosómico y tienen la capacidad de Dibujo esquemático de un plásmido en replicarse una bacteria: en verde, el ADN del cromosoma; en rojo, el plásmido autónomamente. • Contienen un número limitado de sitios de restricción. • Poseen genes de resistencia para varios antibióticos. • El vector PBR322 fue uno de los primeros plásmidos usados para la construcción de DNA recombinante.
  7. 7. • Fagos o Bacteriófagos:  Los virus más empleados como vectores para DNA recombinante son los bacteriófagos lambda por su facilidad de incorporar genes de otros individuos a su genoma  La transducción especializada que presentan los fagos lambda hacen que sean usados como vectores.
  8. 8. • Cósmidos:  Son modernos vectores híbridos que emplean genes específicos del fago lambda: la secuencia cos.  Estos vectores se construyen con la secuencia cos más la porción de DNA foráneo insertada en el extremo cohesivo de este fragmento.  El DNA foráneo se une con la secuencia cos y penetra en la célula como un virus, pero una vez que está dentro, se comporta como un plásmido.  Puesto que la mayoría del genoma del fago lambda se elimina, la porción de DNA foráneo que se puede introducir es mucho mayor.
  9. 9.  Southern Blot *Se emplea para identificar fragmentos específicos de ADN en una mezcla compleja, por medio del uso de la electroforesis en gel y la hibridación de sondas especificas. *Inicialmente se digiere el ADN que se quiere estudiar con una o más enzimas de restricción, las cuales cortan puntos específicos de la secuencia, generando fragmentos de varios tamaños. * Posteriormente, estos fragmentos se separan por su tamaño en un gel de agaroza empleando corriente eléctrica y luego se transfieren a una membrana de nylon. *Para la detección del fragmento de interés en la membrana, se utiliza otro fragmento de ADN o ARN que se llama sonda y que contiene la secuencia complementaria al fragmento que se quiere identificar. *La sonda, se marca con un isótopo radiactivo, se agrega a una solución y se incuba con la membrana por varias horas. *Esta hibridización, hace que la sonda se adhiera al fragmento de ADN en la membrana el cual contiene las bases complementarias. *Al exponer la membrana a una película de fotografía, se puede identificar el fragmento y establecer si está o no está contenido en el ADN que se esta estudiando.
  10. 10.  Southern Blot:

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