El documento discute los retos que enfrentan los países en desarrollo debido a virus que afectan el cultivo de papa. Estos virus disminuyen los rendimientos agrícolas en climas cálidos donde hay más presión de infección. Se necesitan métodos sensibles y económicos como la hibridación de ácidos nucleicos y la reacción en cadena de la polimerasa de transcripción inversa para detectar virus latentes y desarrollar semillas resistentes que mejoren la producción agrícola.

2. • La papa es el 4to cultivo alimenticio más importante en los países
en desarrollo.
• Esta siendo afectado por enfermedades de virus de papa y esto
disminuye en rendimiento en estos paises.
• Para su control= Desarrollo de técnicas de detección apropiada de
los virus + Tecnología de producción de semillas en estas
regiones.
• Se plantean métodos para la deteccion de virus y viroides en
tubérculos de semillas latentes y los insectos vectores.
-Hibridación de ácidos nucleicos (NASH)
-La reacción en cadena de la polimerasa de transcripción inversa
(RT-PCR)

3.  Paises en desarrollo estan en
las zonas tropicales del mundo.
En Climas mas calidos
-Gran # de huésped alternativos
para los virus
-Sus vectores estan presente
durante todo el año.
= Mayor presión de la infección en
climas Templados.
• Métodos de Control de virus
necesita de:
-Protocolos de detección
*Simples
*Económicos
*Sensibles
• Virus de Interés
1.
2.
3.
4.
5.
PLR (enrollamiento de la hoja de papa)
PVY
PVX
PVA
PSTVd (la deformación fusiforme del
tubérculo de papa)

4. • En 1980 la tecnología de detección de virus dio un salto
gracias a:
-Técnicas de clonación de genomas
-Secuenciación
-Amplificación in vitro
• Enfoques
*Utilizacion de la totalidad de genomas viral para la
detección de virus.
*Utilización de multiples segmentos de genoma para
fabricación de sondas de detección específicas o
generales.

5. • Se basa en:
El principio de la formación
de un dupex (hibridación)
entre un “mensajero”, ácidos
nucleicos (sonda) y el ácido
nucleico del virus o viroide
(objetivo).
• Sonda lleva una etiqueta
(radioactiva o no
radioactiva)
• Hibridación  se puede
realizar en una solución o
un soporte solido
(membrana de nitrocelulosa
Protocolo típico para NASH
1- Preparación de las muestras y la
aplicación a las membranas
2- La inmovilización de la muestra y la
prehibridación
3- Hibridación con una sonda
4- La eliminación de exceso de sonda a
través del lavado
5- La detección de la sonda hibridada por
agentes colorimétricos o
quimioluminiscentes

6.  tiene una cadena extra de RNA
• Para la preparación de sondas de ADNc de cadena sencilla, el
ARN es transcripto de forma inversa con la RNA dependiente de
ADN polimerasa. (transcriptasa inversa).
*El ADNc se inserto en un plásmido de ADN bacteriano y se clonó
fuente ilimitada de sondas de ADN caracterizado.

7. NASH
1- Un medio de soporte sólido fue desarrollado para la
detección a gran escala de PSTVd.
PSTVd.
-Tiene ARN Circular de 341 a 361 nt.
-Provoca síntomas leves y graves o dependiendo de la
variedad de papa.
Modificaciones de la NASH para PSTVd.
2- se han desarrollo utilizando ARN monomerico de PSTVd
con cadenas para la sintesis de sondas de cDNA o cRNA.

8. • PVY
- Es la especie tipo del genero
Potyvirus, familia Potyviridae es el
grupo de los virus de plantas más
grande y económicamente más
importantes.
- Tiene una particula en forma de
vara flexuosa y un genoma de ARN
de cadena simple en sentido
positivo de aproximadamente 9,7 kb
con una proteina ligada al genoma
(VPg) en su extremo 5´y una cola
de poli A en su extremo 3´.
• Se determino las
secuencia completa de
tres aismlamientos.
1. PVYN Una cepa de
necrosis venal en
tabaco 9704 nt
2. PVYNTN una cepa
de necrosis mancha
anular en tuberculo de
papa9703 nt
3. PVYO una cepa
común 9698 nt

9. • PLRV
Pertenece la grupo de Luteovirus,
contiene una molecula de ARN
de cadena simple en sentido
positivo de 5882 o 5883 nt y tiene
un VPg en el extremo 5´.
Tiene superposición de al menos
4 marcos de lectura.

10. 1. Cuando se utilizaron sondas de 0.56, 1.2, 2.5 y 3.25 kb
clonado a partir del extremo 3´del genoma PVYN la
sensibilidad con una sonda de mayor tamaño de 3.25
kb fue suficiente para detectar 5 pg de ARN.
2. La sonda mas pequeña de 0.56 kb necesita 1.000 pg
de ARN o mpas. Para mayor sensibilidad  sondas de
gran tamaño.