SlideShare una empresa de Scribd logo
1 de 3
Descargar para leer sin conexión
38                                                                         Revista Argentina de Microbiología (2006) 38: 38-40
                                                                                                                 ISSN 0325-7541
INFORME BREVE                                                              Revista Argentina de Microbiología (2006) 38: 38-40




                 Detección de Escherichia coli O157:H7
           en carne picada fresca y hamburguesas congeladas
                          M. A. MARZOCCA, P. L. MARUCCI, M. G. SICA, E. E. ÁLVAREZ#

                                Laboratorio Control de Calidad, Cooperativa Obrera Limitada.
                                Santa Fe 391 (8000) Bahía Blanca, Buenos Aires, Argentina.
                             *Correspondencia. E-mail: controlcalidad@cooperativaobrera.com.ar


                                                          RESUMEN
      Escherichia coli O157:H7 es un patógeno emergente asociado a enfermedades transmitidas por alimentos. En el
      año 1982 fue reconocido por primera vez, en los Estados Unidos, como causante de dos brotes de colitis hemorrágica.
      Hoy se sabe que la mayoría de los casos de síndrome urémico hemolítico son ocasionados por este microorganismo.
      El objetivo del trabajo fue detectar su presencia en carne picada fresca y hamburguesas congeladas, muestras
      obtenidas en puntos de venta de nuestra cadena de supermercados en un total de 37 y 43, respectivamente, en el
      período comprendido entre abril de 2003 y agosto de 2004. Las mismas fueron procesadas utilizando el caldo
      selectivo para enriquecimiento EC modificado conteniendo novobiocina, seguido de la aplicación de un método de
      inmunocaptura (TECRA E. COLI O157 IMMUNOCAPTURETM ECOICM 20), y posterior aislamiento en agar MacConkey
      sorbitol suplementado con cefixima y telurito de potasio y un medio cromogénico. Las cepas sospechosas fueron
      caracterizadas a) genotípicamente mediante la detección de los genes de virulencia stx1, stx2, eaeA y EHEC-hlyA
      por PCR e hibridación con sondas genéticas, b) fenotípicamente mediante la determinación del serotipo, sensibilidad
      a los antimicrobianos por el método de difusión de Kirby-Bauer y producción de Stx por ensayo de citotoxicidad
      específica en células Vero. Se aisló E. coli O157:H7 en una sola muestra de carne picada fresca (2,7%) caracteriza-
      da como gen eae (+)/stx2/EHEC-hlyA.
      Palabras clave: Escherichia coli O157:H7, carne picada, hamburguesas

                                                         ABSTRACT
      Escherichia coli O157:H7 detection in fresh ground beef and hamburgers. Escherichia coli O157:H7 is an
      emergent pathogen associated with food transmitted diseases. In 1982, Escherichia coli 0157:H7 was for the first
      time identified as the cause of two hemorrhagic colitis outbreaks in the United States. It is now well known that most
      cases of hemolytic uremic syndrome are caused by these bacteria. The objective of this work was to detect the
      microorganism in fresh ground beef and hamburgers. From April 2003 to August 2004 samples were taken at sale
      points of our supermarket chain, totalling 37 and 43, respectively. These samples were processed using the EC
      selective enrichment broth containing novobiocin, then followed by the application of an immunocapture method
      (TECRA E. COLI O157 IMMUNOCAPTURETM ECOICM 20), and later isolation in MacConkey sorbitol agar with
      cefixime and potassium tellurite, in a chromogenic medium. The suspected strains were genotypically characterized
      by PCR detection of the stx1, stx2, eaeA, and EHEC-hlyA genes, and by a colony blot hybridization assay. Serotyping,
      antimicrobial susceptibility patterns, and production of Stx by a specific citotoxicity assay on Vero cells were also
      determined. E coli O157:H7 was isolated in only one fresh ground beef sample (2,7%), identified as gene eae (+)/
      stx2/EHEC-hlyA.
      Key words: Escherichia coli O157:H7, ground beef , hamburgers




   Escherichia coli productor de toxina Shiga (STEC)               tan a la población infantil, y las bajas dosis infectivas
es un patógeno emergente asociado a enfermedades                   que caracterizan no sólo a los brotes sino también a los
transmitidas por alimentos, que puede causar enferme-              casos esporádicos (menos de 100 UFC/g), le han per-
dades severas en el hombre como colitis hemorrágica                mitido ser clasificado como uno de los patógenos trans-
(CH), síndrome urémico hemolítico (SUH) y púrpura                  mitidos por los alimentos de más alto riesgo para la sa-
trombocitopénica trombótica. Las cepas STEC produ-                 lud pública (5).
cen potentes citotoxinas denominadas toxinas Shiga                    El ganado vacuno es señalado como el principal
(previamente conocidas como vero citotoxinas) Stx1,                reservorio de STEC, y a la carne picada insuficientemente
Stx2 y variantes de Stx2, las que liberadas en el intesti-         cocida como el vehículo más frecuente de los brotes. El
no pasan a la circulación sanguínea y causan daños a               primer aislamiento descrito en este reservorio fue en Ar-
nivel del endotelio vascular (7, 9). La gravedad de las            gentina, en 1977, en un ternero de menos de tres sema-
enfermedades producidas, especialmente cuando afec-                nas de edad con colibacilosis (11).
Detección de Escherichia coli O157:H7                                                                                       39


    Los brotes alcanzan el máximo número durante los              glucuronidasa negativa fueron enviadas al Servicio de
meses más calurosos del año, a raíz del aumento de la             Fisiopatogenia del Instituto Nacional de Enfermedades
portación en el ganado vacuno y en los vehículos de trans-        Infecciosas-ANLIS Dr. Carlos G. Malbrán, para su carac-
misión (5).                                                       terización genotípica y fenotípica. Las mismas consistie-
    Según la Organización Panamericana de la Salud                ron en la detección de los genes de virulencia stx1, stx2,
(OPS), en muestro país el SUH es endémico, aproxima-              eaeA y EHEC-hlyA por PCR e hibridación con sondas
damente trescientos casos nuevos son comunicados                  genéticas, del serotipo con antisueros específicos, pro-
anualmente por las unidades de nefrología hospitalarias.          ducción de Stx por ensayo de citotoxicidad en células Vero
La incidencia estimada es de 9,2 casos por cada 100.000           (6) y sensibilidad a los antimicrobianos por el método de
niños menores de 5 años, y más de 7.000 casos han                 difusión de Kirby-Bauer para ampicilina, amicacina,
sido registrados desde 1965 (10).                                 ciprofloxacina, colistina, cloranfenicol, gentamicina, ácido
    La Región Sanitaria I de la Provincia de Buenos Ai-           nalidíxico, nitrofurantoína, estreptomicina, tetraciclina y
res, cuya cabecera es la ciudad de Bahía Blanca, notifi-          trimetoprima-sulfa metoxazol (8).
có durante el año 2004 al Sistema Nacional de Vigilan-                Se aisló E. coli O157: H7 en una de las muestras de
cia Epidemiológica (SI.NA.VE) 5 casos de SUH: uno en              carne picada en el frigorífico (2,7%), correspondiente a
un menor de un año y los 4 restantes en niños cuyas               un aislamiento efectuado en el mes de enero. Esta cepa
edades oscilaban entre 2 y 4 años (12).                           fue caracterizada como gen eae (+) / stx2 / EHEC-hlyA y
    El objetivo del trabajo fue detectar la presencia de E.       fue sensible a los antimicrobianos ensayados.
coli O157:H7 en carne picada fresca y hamburguesas                    La detección de E. coli O157:H7 en alimentos se pue-
congeladas, muestras obtenidas en puntos de venta de              de efectuar utilizando métodos de cultivos directos, o
la cadena de supermercados en un total de 37 y 43, res-           empleando previamente una inmunoconcentración a fin
pectivamente, en el período comprendido entre abril de            de elevar la sensibilidad de los mismos. Chapman et al.
2003 y agosto de 2004. Las muestras de carne picada               han efectuado estudios comparativos utilizando técnicas
fresca fueron trituradas, 16 en el frigorífico de la empre-       de inmunoconcentración y han corroborado el incremen-
sa (categoría Ciclo II) y 21 en los puntos de venta perso-        to de sensibilidad con respecto al uso de cultivos direc-
nalizada de las sucursales. Las muestras de hamburgue-            tos o enriquecimiento y subcultivos posteriores (3). La
sas congeladas fueron retiradas de los puntos de venta            metodología recomendada por el United States De-
(góndolas de alimentos congelados).                               partment of Agriculture/Food Safety and Inspection
    Se realizó un enriquecimiento de 25 g del alimento en         Service (USDA/FSIS), es la concentración con partícu-
225 ml de caldo EC modificado (Biokar BK149) con el               las inmunomagnéticas para alimentos crudos y listos para
agregado de 20 µg/ml de novobiocina (Biokar BS03308).             su consumo, la cual posee un límite de detección de me-
Se incubó a 42 °C durante 6 h. Luego se utilizó el test de        nos de 1 UFC/g sobre un tamaño de muestra de 65 g
concentración por inmunocaptura TECRA (E. COLI O157              (14). Con fines investigativos, trabajando con muestras
IMMUNOCAPTURETM ECOICM 20) (3) de acuerdo a las                   de carne picada fresca inoculadas previamente, se pudo
especificaciones del fabricante, que consistió en captu-          recuperar dicho microorganismo cuando se utilizaron las
rar las cepas de E. coli O157 presentes en una alícuota           partículas inmunomagnéticas frente a un inóculo de 1
(4 ml) del caldo de enriquecimiento de la muestra con un          bacteria por cada 10 g, pero no se detectó la presencia
hisopo que posee anticuerpos anti-O157 purificados en             de E. coli O157:H7 en todas aquellas muestras inocula-
su superficie. Se incubó a 41-43 °C durante 30 a 40 min,          das con 1 bacteria por cada 100 g (13).
se efectuó un lavado del hisopo y se transfirió a un me-              Entre los años 2001 y 2002 se han efectuado distintos
dio de cultivo provisto, en el cual E. coli O157 captura-         trabajos de investigación con el objetivo de detectar la pre-
dos se multiplicaron hasta niveles detectables. Para ello         sencia de E. coli O157:H7 en diferentes productos cárnicos,
se incubó a 41-43 °C por 4 h. El caldo se agitó en vórtex         utilizándose la técnica de concentración, y los mismos han
por 20 segundos para liberar a E. coli O157 y posterior-          arrojado los siguientes resultados: carne picada 3,8%,
mente se aisló en agar MacConkey sorbitol (CT-SMAC                embutidos frescos 4,8% y embutidos secos 3,3% (4).
base, Biokar, BK147HA) con el agregado del suplemen-                  En función de todos estos estudios no cabe duda que
to selectivo cefixima-telurito (Biokar, BS03708) en una           las técnicas de detección de E. coli O157:H7 se han ido
proporción de 50 ng/ml y 25 mg/ml, respectivamente, y             optimizado notablemente y lo seguirán haciendo en el
en CHROMagarTM O157. Ambos medios se incubaron a                  futuro. También es una realidad, que la única manera de
37 °C durante 18 h.                                               minimizar los casos de SUH y de todas aquellas patolo-
    Las colonias presuntivas aisladas, en su mayoría del          gías producidas por este microorganismo en la pobla-
medio cromogénico, fueron caracterizadas bioquímica-              ción pasa por la aplicación de las medidas educativas y
mente previa coloración de Gram con las pruebas de agar-          preventivas, en los distintos ámbitos que estén
hierro-tres azúcares (TSI), citrato, utilización de triptofano,   involucrados con la producción y consumo de productos
rojo de metilo, ortonitrofenil β-galactopiranósido (ONPG)         cárnicos. En los EEUU se espera que para el año 2010
y β-glucuronidasa. Las cepas identificadas como E. coli β-        la incidencia de infecciones por STEC O157 sea de 1
40                                                                            Revista Argentina de Microbiología (2006) 38: 38-40


caso/100.000 personas, gracias a los Sistemas de Vigi-                5. Doyle MP, Zhao T, Meng J, Zhao S. Escherichia coli
                                                                         O157:H7. En: Doyle, Beuchat, Montville, editores. Micro-
lancia Epidemiológica (2) y a los controles en puntos
                                                                         biología de los alimentos. Fundamentos y fronteras. Zara-
estratégicos de la industria cárnica para los animales en                goza, España, Editorial Acribia S A, 2001, p. 177-98.
pie, las operaciones durante el sacrificio y la obtención             6. Gómez D, Miliwebsky E, Fernández Pascua C, Baschkier
de la carne picada, en respuesta a notificaciones de la                  A, Manfredi E, Zotta M, et al. Aislamiento y caracterización
                                                                         de Escherichia coli productor de toxina Shiga en hambur-
FSIS (15). Por otra parte, la National Association of State
                                                                         guesas supercongeladas y quesos de pasta blanda. Rev
Public Health Veterinarians (NASPHV) ha publicado en                     Argent Microbiol 2002; 34: 66-71.
marzo de 2005 un compendio de medidas para prevenir                   7. Karmali MA. Infection by verotoxin-producing Escherichia
las enfermedades asociadas con animales en lugares                       coli. Clin Microbiol Rev 1989; 2: 15-38.
                                                                      8. National Committee for Clinical Laboratory Standards.
públicos (1).
                                                                         Perfomance standards for antimicrobial disk susceptibility
   En el Cono Sur de América, las infecciones por E. coli                test, 7th edition, 2000; Approved standards M100-S10.
enterohemorrágico son endémicas, y esto obedece fun-                     Wayne, Pa, USA.
damentalmente a la falta de programas de vigilancia de                9. O’ Brien AD, Holmes RK. Shiga and Shiga-like toxins.
                                                                         Microbiol Rev 1987; 51: 206-20.
brotes de toxo-infecciones alimentarias en toda esta re-
                                                                     10. Organización Panamericana de la Salud. Organización Mun-
gión. Sin embargo, tanto en Argentina como en Chile y                    dial de la Salud (OPS/OMS). IV Reunión de la Red de Vigi-
Uruguay, se estableció que en el SUH se observa una                      lancia de Enfermedades Emergentes del Cono Sur. Asun-
menor participación del serogrupo O157 con relación a                    ción, Paraguay 2001. Disponible en: http://www.paho.org
                                                                     11. Ørskov F, Ørskov I, Villar JA. Cattle as reservoir of vero-
las cepas no O157 (10).
                                                                         toxin-producing Escherichia coli O157:H7. Lancet 1987; ii:
                                                                         276.
                                                                     12. Sistema Nacional de Vigilancia Epidemiológica (SI.NA.VE).
BIBLIOGRAFÍA                                                             Disponible en http://www.direpi.vigia.org.ar
                                                                     13. Tanaro JD, Lound LH, Ledri SE, Scarpin MI, Schimpf MC,
 1. Centers for Disease Control and Prevention. Compendium               Casse JS et al. Desarrollo y aplicación de una metodolo-
    of measures to prevent diseases associated with animals              gía de aislamiento de Escherichia coli O157:H7 en el Mu-
    in public settings, 2005. MMWR 2005; 54: 5-10.                       nicipio de Gualeguaychú. Rev Argent Microbiol 2002; 34:
 2. Centers for Disease Control and Prevention. Preliminary              205-12.
    food net data on the incidence of infection with pathogens       14. United States Department of Agriculture. Food Safety and
    transmitted commonly through food-10 sites, USA 2004.                Inspection Service, Office of Public Health and Science.
    MMWR 2005; 54: 352-6.                                                Detection, isolation, and identification of Escherichia coli
 3. Chapman PA, Cerdan Malo AT, Siddons CA, Harkin M.                    O157:H7 and O157:NM (nonmotile) from meat products.
    Use of commercial enzyme immunoassays and immu-                      USA, 2002, p. 1-13.
    nomagnetic separation systems for detecting Escherichia          15. United States Department of Agriculture. Food Safety and
    coli O157 in bovine fecal samples. Appl Environ Microbiol            Inspection Service. Office of Policy Program Development
    1997; 63: 2549-53.                                                   and Evaluation. Regulations and Directives Development.
 4. Chinen I, Tanaro JD, Miliwebsky E, Lound LH, Chillemi G,             Federal Register Publications. Escherichia coli O157:H7
    Ledri S, et al. Isolation and characterization of Escherichia        contamination of beef products. Docket N° 00-022N 2000.
    coli O157:H7 from retail meats in Argentina. J Food Prot             Disponible en: http://www.fsis.usda.gov/OPPDE/rdad/
    2001; 64: 1346-51.                                                   FRPubs/docs_00-022N.htm



                                                 Recibido: 4/07/05 – Aceptado: 9/01/06

Más contenido relacionado

Destacado

News zur Entstaubung Infa aktuell 2-2014
News zur Entstaubung Infa aktuell 2-2014News zur Entstaubung Infa aktuell 2-2014
News zur Entstaubung Infa aktuell 2-2014Infastaub GmbH
 
Silva josé luis problemas de aprendizaje (2)
Silva josé luis problemas de aprendizaje (2)Silva josé luis problemas de aprendizaje (2)
Silva josé luis problemas de aprendizaje (2)jose luis silva maya
 
Quartr - Présentation 2013
Quartr - Présentation 2013Quartr - Présentation 2013
Quartr - Présentation 2013Nicolas Gut
 
World Usuability Day 2013 - Prévention personnalisée et engagement du patient...
World Usuability Day 2013 - Prévention personnalisée et engagement du patient...World Usuability Day 2013 - Prévention personnalisée et engagement du patient...
World Usuability Day 2013 - Prévention personnalisée et engagement du patient...Ignilife
 
L'installation d'un portie de villa
L'installation d'un portie de villaL'installation d'un portie de villa
L'installation d'un portie de villakissingerman
 
Deutschland
DeutschlandDeutschland
Deutschlandceumarta
 
Utilisation de l'imagerie aéroportée dans l'évaluation des îlots de chaleur a...
Utilisation de l'imagerie aéroportée dans l'évaluation des îlots de chaleur a...Utilisation de l'imagerie aéroportée dans l'évaluation des îlots de chaleur a...
Utilisation de l'imagerie aéroportée dans l'évaluation des îlots de chaleur a...ACSG - Section Montréal
 
C Lculo Manual De Subredes
C Lculo Manual De SubredesC Lculo Manual De Subredes
C Lculo Manual De SubredesEspol
 
Martin Schön: Produktive Googlemail-Features: Labels Chat Kontakte Todo Termi...
Martin Schön: Produktive Googlemail-Features: Labels Chat Kontakte Todo Termi...Martin Schön: Produktive Googlemail-Features: Labels Chat Kontakte Todo Termi...
Martin Schön: Produktive Googlemail-Features: Labels Chat Kontakte Todo Termi...Martin Schön
 
Presentazione Autorità Tedesche
Presentazione Autorità TedeschePresentazione Autorità Tedesche
Presentazione Autorità Tedescheeledan
 
Figaronron - Expo Lego 15 (11-04-2009)
Figaronron - Expo Lego 15 (11-04-2009)Figaronron - Expo Lego 15 (11-04-2009)
Figaronron - Expo Lego 15 (11-04-2009)Figaronron Figaronron
 

Destacado (20)

News zur Entstaubung Infa aktuell 2-2014
News zur Entstaubung Infa aktuell 2-2014News zur Entstaubung Infa aktuell 2-2014
News zur Entstaubung Infa aktuell 2-2014
 
Silva josé luis problemas de aprendizaje (2)
Silva josé luis problemas de aprendizaje (2)Silva josé luis problemas de aprendizaje (2)
Silva josé luis problemas de aprendizaje (2)
 
¿A DÓNDE VOY?
¿A DÓNDE VOY?¿A DÓNDE VOY?
¿A DÓNDE VOY?
 
Quartr - Présentation 2013
Quartr - Présentation 2013Quartr - Présentation 2013
Quartr - Présentation 2013
 
World Usuability Day 2013 - Prévention personnalisée et engagement du patient...
World Usuability Day 2013 - Prévention personnalisée et engagement du patient...World Usuability Day 2013 - Prévention personnalisée et engagement du patient...
World Usuability Day 2013 - Prévention personnalisée et engagement du patient...
 
Stages
StagesStages
Stages
 
L'installation d'un portie de villa
L'installation d'un portie de villaL'installation d'un portie de villa
L'installation d'un portie de villa
 
Deutschland
DeutschlandDeutschland
Deutschland
 
Utilisation de l'imagerie aéroportée dans l'évaluation des îlots de chaleur a...
Utilisation de l'imagerie aéroportée dans l'évaluation des îlots de chaleur a...Utilisation de l'imagerie aéroportée dans l'évaluation des îlots de chaleur a...
Utilisation de l'imagerie aéroportée dans l'évaluation des îlots de chaleur a...
 
Enlace Ciudadano Nro. 292 - Cartera Castigada
Enlace Ciudadano Nro. 292 - Cartera CastigadaEnlace Ciudadano Nro. 292 - Cartera Castigada
Enlace Ciudadano Nro. 292 - Cartera Castigada
 
Resumen de herpes virus
Resumen de herpes virusResumen de herpes virus
Resumen de herpes virus
 
C Lculo Manual De Subredes
C Lculo Manual De SubredesC Lculo Manual De Subredes
C Lculo Manual De Subredes
 
Martin Schön: Produktive Googlemail-Features: Labels Chat Kontakte Todo Termi...
Martin Schön: Produktive Googlemail-Features: Labels Chat Kontakte Todo Termi...Martin Schön: Produktive Googlemail-Features: Labels Chat Kontakte Todo Termi...
Martin Schön: Produktive Googlemail-Features: Labels Chat Kontakte Todo Termi...
 
Enlace Ciudadano Nro. 294 - Desarrollo petrolero del suroriente
Enlace Ciudadano Nro. 294 - Desarrollo petrolero del surorienteEnlace Ciudadano Nro. 294 - Desarrollo petrolero del suroriente
Enlace Ciudadano Nro. 294 - Desarrollo petrolero del suroriente
 
Presentazione Autorità Tedesche
Presentazione Autorità TedeschePresentazione Autorità Tedesche
Presentazione Autorità Tedesche
 
Voici, Madame Pereira
Voici, Madame PereiraVoici, Madame Pereira
Voici, Madame Pereira
 
Document nbi -_fd_cgt_sante_-_avril_2014
Document nbi -_fd_cgt_sante_-_avril_2014 Document nbi -_fd_cgt_sante_-_avril_2014
Document nbi -_fd_cgt_sante_-_avril_2014
 
Escale santé n°5
Escale santé n°5Escale santé n°5
Escale santé n°5
 
Figaronron - Expo Lego 15 (11-04-2009)
Figaronron - Expo Lego 15 (11-04-2009)Figaronron - Expo Lego 15 (11-04-2009)
Figaronron - Expo Lego 15 (11-04-2009)
 
Food
FoodFood
Food
 

Más de egrandam

Microbiología como ciencia
Microbiología como cienciaMicrobiología como ciencia
Microbiología como cienciaegrandam
 
Normas microbiologicas de los alimentos y asimilados.Enero 2012
Normas microbiologicas de los alimentos y asimilados.Enero 2012Normas microbiologicas de los alimentos y asimilados.Enero 2012
Normas microbiologicas de los alimentos y asimilados.Enero 2012egrandam
 
NTE INEN 2260
NTE INEN 2260NTE INEN 2260
NTE INEN 2260egrandam
 
NTE INEN1529 2
NTE INEN1529 2NTE INEN1529 2
NTE INEN1529 2egrandam
 
Tutorial slideshare
Tutorial slideshareTutorial slideshare
Tutorial slideshareegrandam
 
Métodos rápidos y automatizados en alimentos
Métodos rápidos y automatizados en alimentosMétodos rápidos y automatizados en alimentos
Métodos rápidos y automatizados en alimentosegrandam
 
Diagrama de procedimiento de siembra
Diagrama de procedimiento de siembraDiagrama de procedimiento de siembra
Diagrama de procedimiento de siembraegrandam
 
Tabla 9221 NMP series de 5 tubos
Tabla 9221 NMP series de 5 tubosTabla 9221 NMP series de 5 tubos
Tabla 9221 NMP series de 5 tubosegrandam
 
Tablas NMP agua potable
Tablas NMP agua potableTablas NMP agua potable
Tablas NMP agua potableegrandam
 
1-2 test Procedimiento
1-2 test Procedimiento1-2 test Procedimiento
1-2 test Procedimientoegrandam
 
Diagrama fases para un ensayo microbiológico
Diagrama fases para un ensayo microbiológicoDiagrama fases para un ensayo microbiológico
Diagrama fases para un ensayo microbiológicoegrandam
 
Cartilla mohos y levadura petrifilm
Cartilla mohos y levadura petrifilmCartilla mohos y levadura petrifilm
Cartilla mohos y levadura petrifilmegrandam
 
Cartilla para recuento de coliformes alta sensibilidad petrifilm
Cartilla para recuento de coliformes alta sensibilidad petrifilmCartilla para recuento de coliformes alta sensibilidad petrifilm
Cartilla para recuento de coliformes alta sensibilidad petrifilmegrandam
 
Cartilla S.aureus petrifilm
Cartilla S.aureus petrifilmCartilla S.aureus petrifilm
Cartilla S.aureus petrifilmegrandam
 
Cartilla mohos y levaduras petrifilm
Cartilla mohos y levaduras petrifilmCartilla mohos y levaduras petrifilm
Cartilla mohos y levaduras petrifilmegrandam
 
Cartilla de enterobacterias petrifilm
Cartilla de enterobacterias petrifilmCartilla de enterobacterias petrifilm
Cartilla de enterobacterias petrifilmegrandam
 
Campos pulsados
Campos pulsadosCampos pulsados
Campos pulsadosegrandam
 
ETAs y PCR
ETAs y PCRETAs y PCR
ETAs y PCRegrandam
 
PCR alimentos
PCR alimentosPCR alimentos
PCR alimentosegrandam
 

Más de egrandam (20)

Microbiología como ciencia
Microbiología como cienciaMicrobiología como ciencia
Microbiología como ciencia
 
Normas microbiologicas de los alimentos y asimilados.Enero 2012
Normas microbiologicas de los alimentos y asimilados.Enero 2012Normas microbiologicas de los alimentos y asimilados.Enero 2012
Normas microbiologicas de los alimentos y asimilados.Enero 2012
 
NTE INEN 2260
NTE INEN 2260NTE INEN 2260
NTE INEN 2260
 
ISO17025
ISO17025ISO17025
ISO17025
 
NTE INEN1529 2
NTE INEN1529 2NTE INEN1529 2
NTE INEN1529 2
 
Tutorial slideshare
Tutorial slideshareTutorial slideshare
Tutorial slideshare
 
Métodos rápidos y automatizados en alimentos
Métodos rápidos y automatizados en alimentosMétodos rápidos y automatizados en alimentos
Métodos rápidos y automatizados en alimentos
 
Diagrama de procedimiento de siembra
Diagrama de procedimiento de siembraDiagrama de procedimiento de siembra
Diagrama de procedimiento de siembra
 
Tabla 9221 NMP series de 5 tubos
Tabla 9221 NMP series de 5 tubosTabla 9221 NMP series de 5 tubos
Tabla 9221 NMP series de 5 tubos
 
Tablas NMP agua potable
Tablas NMP agua potableTablas NMP agua potable
Tablas NMP agua potable
 
1-2 test Procedimiento
1-2 test Procedimiento1-2 test Procedimiento
1-2 test Procedimiento
 
Diagrama fases para un ensayo microbiológico
Diagrama fases para un ensayo microbiológicoDiagrama fases para un ensayo microbiológico
Diagrama fases para un ensayo microbiológico
 
Cartilla mohos y levadura petrifilm
Cartilla mohos y levadura petrifilmCartilla mohos y levadura petrifilm
Cartilla mohos y levadura petrifilm
 
Cartilla para recuento de coliformes alta sensibilidad petrifilm
Cartilla para recuento de coliformes alta sensibilidad petrifilmCartilla para recuento de coliformes alta sensibilidad petrifilm
Cartilla para recuento de coliformes alta sensibilidad petrifilm
 
Cartilla S.aureus petrifilm
Cartilla S.aureus petrifilmCartilla S.aureus petrifilm
Cartilla S.aureus petrifilm
 
Cartilla mohos y levaduras petrifilm
Cartilla mohos y levaduras petrifilmCartilla mohos y levaduras petrifilm
Cartilla mohos y levaduras petrifilm
 
Cartilla de enterobacterias petrifilm
Cartilla de enterobacterias petrifilmCartilla de enterobacterias petrifilm
Cartilla de enterobacterias petrifilm
 
Campos pulsados
Campos pulsadosCampos pulsados
Campos pulsados
 
ETAs y PCR
ETAs y PCRETAs y PCR
ETAs y PCR
 
PCR alimentos
PCR alimentosPCR alimentos
PCR alimentos
 

Escherichia coli O157 :H7

  • 1. 38 Revista Argentina de Microbiología (2006) 38: 38-40 ISSN 0325-7541 INFORME BREVE Revista Argentina de Microbiología (2006) 38: 38-40 Detección de Escherichia coli O157:H7 en carne picada fresca y hamburguesas congeladas M. A. MARZOCCA, P. L. MARUCCI, M. G. SICA, E. E. ÁLVAREZ# Laboratorio Control de Calidad, Cooperativa Obrera Limitada. Santa Fe 391 (8000) Bahía Blanca, Buenos Aires, Argentina. *Correspondencia. E-mail: controlcalidad@cooperativaobrera.com.ar RESUMEN Escherichia coli O157:H7 es un patógeno emergente asociado a enfermedades transmitidas por alimentos. En el año 1982 fue reconocido por primera vez, en los Estados Unidos, como causante de dos brotes de colitis hemorrágica. Hoy se sabe que la mayoría de los casos de síndrome urémico hemolítico son ocasionados por este microorganismo. El objetivo del trabajo fue detectar su presencia en carne picada fresca y hamburguesas congeladas, muestras obtenidas en puntos de venta de nuestra cadena de supermercados en un total de 37 y 43, respectivamente, en el período comprendido entre abril de 2003 y agosto de 2004. Las mismas fueron procesadas utilizando el caldo selectivo para enriquecimiento EC modificado conteniendo novobiocina, seguido de la aplicación de un método de inmunocaptura (TECRA E. COLI O157 IMMUNOCAPTURETM ECOICM 20), y posterior aislamiento en agar MacConkey sorbitol suplementado con cefixima y telurito de potasio y un medio cromogénico. Las cepas sospechosas fueron caracterizadas a) genotípicamente mediante la detección de los genes de virulencia stx1, stx2, eaeA y EHEC-hlyA por PCR e hibridación con sondas genéticas, b) fenotípicamente mediante la determinación del serotipo, sensibilidad a los antimicrobianos por el método de difusión de Kirby-Bauer y producción de Stx por ensayo de citotoxicidad específica en células Vero. Se aisló E. coli O157:H7 en una sola muestra de carne picada fresca (2,7%) caracteriza- da como gen eae (+)/stx2/EHEC-hlyA. Palabras clave: Escherichia coli O157:H7, carne picada, hamburguesas ABSTRACT Escherichia coli O157:H7 detection in fresh ground beef and hamburgers. Escherichia coli O157:H7 is an emergent pathogen associated with food transmitted diseases. In 1982, Escherichia coli 0157:H7 was for the first time identified as the cause of two hemorrhagic colitis outbreaks in the United States. It is now well known that most cases of hemolytic uremic syndrome are caused by these bacteria. The objective of this work was to detect the microorganism in fresh ground beef and hamburgers. From April 2003 to August 2004 samples were taken at sale points of our supermarket chain, totalling 37 and 43, respectively. These samples were processed using the EC selective enrichment broth containing novobiocin, then followed by the application of an immunocapture method (TECRA E. COLI O157 IMMUNOCAPTURETM ECOICM 20), and later isolation in MacConkey sorbitol agar with cefixime and potassium tellurite, in a chromogenic medium. The suspected strains were genotypically characterized by PCR detection of the stx1, stx2, eaeA, and EHEC-hlyA genes, and by a colony blot hybridization assay. Serotyping, antimicrobial susceptibility patterns, and production of Stx by a specific citotoxicity assay on Vero cells were also determined. E coli O157:H7 was isolated in only one fresh ground beef sample (2,7%), identified as gene eae (+)/ stx2/EHEC-hlyA. Key words: Escherichia coli O157:H7, ground beef , hamburgers Escherichia coli productor de toxina Shiga (STEC) tan a la población infantil, y las bajas dosis infectivas es un patógeno emergente asociado a enfermedades que caracterizan no sólo a los brotes sino también a los transmitidas por alimentos, que puede causar enferme- casos esporádicos (menos de 100 UFC/g), le han per- dades severas en el hombre como colitis hemorrágica mitido ser clasificado como uno de los patógenos trans- (CH), síndrome urémico hemolítico (SUH) y púrpura mitidos por los alimentos de más alto riesgo para la sa- trombocitopénica trombótica. Las cepas STEC produ- lud pública (5). cen potentes citotoxinas denominadas toxinas Shiga El ganado vacuno es señalado como el principal (previamente conocidas como vero citotoxinas) Stx1, reservorio de STEC, y a la carne picada insuficientemente Stx2 y variantes de Stx2, las que liberadas en el intesti- cocida como el vehículo más frecuente de los brotes. El no pasan a la circulación sanguínea y causan daños a primer aislamiento descrito en este reservorio fue en Ar- nivel del endotelio vascular (7, 9). La gravedad de las gentina, en 1977, en un ternero de menos de tres sema- enfermedades producidas, especialmente cuando afec- nas de edad con colibacilosis (11).
  • 2. Detección de Escherichia coli O157:H7 39 Los brotes alcanzan el máximo número durante los glucuronidasa negativa fueron enviadas al Servicio de meses más calurosos del año, a raíz del aumento de la Fisiopatogenia del Instituto Nacional de Enfermedades portación en el ganado vacuno y en los vehículos de trans- Infecciosas-ANLIS Dr. Carlos G. Malbrán, para su carac- misión (5). terización genotípica y fenotípica. Las mismas consistie- Según la Organización Panamericana de la Salud ron en la detección de los genes de virulencia stx1, stx2, (OPS), en muestro país el SUH es endémico, aproxima- eaeA y EHEC-hlyA por PCR e hibridación con sondas damente trescientos casos nuevos son comunicados genéticas, del serotipo con antisueros específicos, pro- anualmente por las unidades de nefrología hospitalarias. ducción de Stx por ensayo de citotoxicidad en células Vero La incidencia estimada es de 9,2 casos por cada 100.000 (6) y sensibilidad a los antimicrobianos por el método de niños menores de 5 años, y más de 7.000 casos han difusión de Kirby-Bauer para ampicilina, amicacina, sido registrados desde 1965 (10). ciprofloxacina, colistina, cloranfenicol, gentamicina, ácido La Región Sanitaria I de la Provincia de Buenos Ai- nalidíxico, nitrofurantoína, estreptomicina, tetraciclina y res, cuya cabecera es la ciudad de Bahía Blanca, notifi- trimetoprima-sulfa metoxazol (8). có durante el año 2004 al Sistema Nacional de Vigilan- Se aisló E. coli O157: H7 en una de las muestras de cia Epidemiológica (SI.NA.VE) 5 casos de SUH: uno en carne picada en el frigorífico (2,7%), correspondiente a un menor de un año y los 4 restantes en niños cuyas un aislamiento efectuado en el mes de enero. Esta cepa edades oscilaban entre 2 y 4 años (12). fue caracterizada como gen eae (+) / stx2 / EHEC-hlyA y El objetivo del trabajo fue detectar la presencia de E. fue sensible a los antimicrobianos ensayados. coli O157:H7 en carne picada fresca y hamburguesas La detección de E. coli O157:H7 en alimentos se pue- congeladas, muestras obtenidas en puntos de venta de de efectuar utilizando métodos de cultivos directos, o la cadena de supermercados en un total de 37 y 43, res- empleando previamente una inmunoconcentración a fin pectivamente, en el período comprendido entre abril de de elevar la sensibilidad de los mismos. Chapman et al. 2003 y agosto de 2004. Las muestras de carne picada han efectuado estudios comparativos utilizando técnicas fresca fueron trituradas, 16 en el frigorífico de la empre- de inmunoconcentración y han corroborado el incremen- sa (categoría Ciclo II) y 21 en los puntos de venta perso- to de sensibilidad con respecto al uso de cultivos direc- nalizada de las sucursales. Las muestras de hamburgue- tos o enriquecimiento y subcultivos posteriores (3). La sas congeladas fueron retiradas de los puntos de venta metodología recomendada por el United States De- (góndolas de alimentos congelados). partment of Agriculture/Food Safety and Inspection Se realizó un enriquecimiento de 25 g del alimento en Service (USDA/FSIS), es la concentración con partícu- 225 ml de caldo EC modificado (Biokar BK149) con el las inmunomagnéticas para alimentos crudos y listos para agregado de 20 µg/ml de novobiocina (Biokar BS03308). su consumo, la cual posee un límite de detección de me- Se incubó a 42 °C durante 6 h. Luego se utilizó el test de nos de 1 UFC/g sobre un tamaño de muestra de 65 g concentración por inmunocaptura TECRA (E. COLI O157 (14). Con fines investigativos, trabajando con muestras IMMUNOCAPTURETM ECOICM 20) (3) de acuerdo a las de carne picada fresca inoculadas previamente, se pudo especificaciones del fabricante, que consistió en captu- recuperar dicho microorganismo cuando se utilizaron las rar las cepas de E. coli O157 presentes en una alícuota partículas inmunomagnéticas frente a un inóculo de 1 (4 ml) del caldo de enriquecimiento de la muestra con un bacteria por cada 10 g, pero no se detectó la presencia hisopo que posee anticuerpos anti-O157 purificados en de E. coli O157:H7 en todas aquellas muestras inocula- su superficie. Se incubó a 41-43 °C durante 30 a 40 min, das con 1 bacteria por cada 100 g (13). se efectuó un lavado del hisopo y se transfirió a un me- Entre los años 2001 y 2002 se han efectuado distintos dio de cultivo provisto, en el cual E. coli O157 captura- trabajos de investigación con el objetivo de detectar la pre- dos se multiplicaron hasta niveles detectables. Para ello sencia de E. coli O157:H7 en diferentes productos cárnicos, se incubó a 41-43 °C por 4 h. El caldo se agitó en vórtex utilizándose la técnica de concentración, y los mismos han por 20 segundos para liberar a E. coli O157 y posterior- arrojado los siguientes resultados: carne picada 3,8%, mente se aisló en agar MacConkey sorbitol (CT-SMAC embutidos frescos 4,8% y embutidos secos 3,3% (4). base, Biokar, BK147HA) con el agregado del suplemen- En función de todos estos estudios no cabe duda que to selectivo cefixima-telurito (Biokar, BS03708) en una las técnicas de detección de E. coli O157:H7 se han ido proporción de 50 ng/ml y 25 mg/ml, respectivamente, y optimizado notablemente y lo seguirán haciendo en el en CHROMagarTM O157. Ambos medios se incubaron a futuro. También es una realidad, que la única manera de 37 °C durante 18 h. minimizar los casos de SUH y de todas aquellas patolo- Las colonias presuntivas aisladas, en su mayoría del gías producidas por este microorganismo en la pobla- medio cromogénico, fueron caracterizadas bioquímica- ción pasa por la aplicación de las medidas educativas y mente previa coloración de Gram con las pruebas de agar- preventivas, en los distintos ámbitos que estén hierro-tres azúcares (TSI), citrato, utilización de triptofano, involucrados con la producción y consumo de productos rojo de metilo, ortonitrofenil β-galactopiranósido (ONPG) cárnicos. En los EEUU se espera que para el año 2010 y β-glucuronidasa. Las cepas identificadas como E. coli β- la incidencia de infecciones por STEC O157 sea de 1
  • 3. 40 Revista Argentina de Microbiología (2006) 38: 38-40 caso/100.000 personas, gracias a los Sistemas de Vigi- 5. Doyle MP, Zhao T, Meng J, Zhao S. Escherichia coli O157:H7. En: Doyle, Beuchat, Montville, editores. Micro- lancia Epidemiológica (2) y a los controles en puntos biología de los alimentos. Fundamentos y fronteras. Zara- estratégicos de la industria cárnica para los animales en goza, España, Editorial Acribia S A, 2001, p. 177-98. pie, las operaciones durante el sacrificio y la obtención 6. Gómez D, Miliwebsky E, Fernández Pascua C, Baschkier de la carne picada, en respuesta a notificaciones de la A, Manfredi E, Zotta M, et al. Aislamiento y caracterización de Escherichia coli productor de toxina Shiga en hambur- FSIS (15). Por otra parte, la National Association of State guesas supercongeladas y quesos de pasta blanda. Rev Public Health Veterinarians (NASPHV) ha publicado en Argent Microbiol 2002; 34: 66-71. marzo de 2005 un compendio de medidas para prevenir 7. Karmali MA. Infection by verotoxin-producing Escherichia las enfermedades asociadas con animales en lugares coli. Clin Microbiol Rev 1989; 2: 15-38. 8. National Committee for Clinical Laboratory Standards. públicos (1). Perfomance standards for antimicrobial disk susceptibility En el Cono Sur de América, las infecciones por E. coli test, 7th edition, 2000; Approved standards M100-S10. enterohemorrágico son endémicas, y esto obedece fun- Wayne, Pa, USA. damentalmente a la falta de programas de vigilancia de 9. O’ Brien AD, Holmes RK. Shiga and Shiga-like toxins. Microbiol Rev 1987; 51: 206-20. brotes de toxo-infecciones alimentarias en toda esta re- 10. Organización Panamericana de la Salud. Organización Mun- gión. Sin embargo, tanto en Argentina como en Chile y dial de la Salud (OPS/OMS). IV Reunión de la Red de Vigi- Uruguay, se estableció que en el SUH se observa una lancia de Enfermedades Emergentes del Cono Sur. Asun- menor participación del serogrupo O157 con relación a ción, Paraguay 2001. Disponible en: http://www.paho.org 11. Ørskov F, Ørskov I, Villar JA. Cattle as reservoir of vero- las cepas no O157 (10). toxin-producing Escherichia coli O157:H7. Lancet 1987; ii: 276. 12. Sistema Nacional de Vigilancia Epidemiológica (SI.NA.VE). BIBLIOGRAFÍA Disponible en http://www.direpi.vigia.org.ar 13. Tanaro JD, Lound LH, Ledri SE, Scarpin MI, Schimpf MC, 1. Centers for Disease Control and Prevention. Compendium Casse JS et al. Desarrollo y aplicación de una metodolo- of measures to prevent diseases associated with animals gía de aislamiento de Escherichia coli O157:H7 en el Mu- in public settings, 2005. MMWR 2005; 54: 5-10. nicipio de Gualeguaychú. Rev Argent Microbiol 2002; 34: 2. Centers for Disease Control and Prevention. Preliminary 205-12. food net data on the incidence of infection with pathogens 14. United States Department of Agriculture. Food Safety and transmitted commonly through food-10 sites, USA 2004. Inspection Service, Office of Public Health and Science. MMWR 2005; 54: 352-6. Detection, isolation, and identification of Escherichia coli 3. Chapman PA, Cerdan Malo AT, Siddons CA, Harkin M. O157:H7 and O157:NM (nonmotile) from meat products. Use of commercial enzyme immunoassays and immu- USA, 2002, p. 1-13. nomagnetic separation systems for detecting Escherichia 15. United States Department of Agriculture. Food Safety and coli O157 in bovine fecal samples. Appl Environ Microbiol Inspection Service. Office of Policy Program Development 1997; 63: 2549-53. and Evaluation. Regulations and Directives Development. 4. Chinen I, Tanaro JD, Miliwebsky E, Lound LH, Chillemi G, Federal Register Publications. Escherichia coli O157:H7 Ledri S, et al. Isolation and characterization of Escherichia contamination of beef products. Docket N° 00-022N 2000. coli O157:H7 from retail meats in Argentina. J Food Prot Disponible en: http://www.fsis.usda.gov/OPPDE/rdad/ 2001; 64: 1346-51. FRPubs/docs_00-022N.htm Recibido: 4/07/05 – Aceptado: 9/01/06