ENFERMEDADES   EMERGENTES       Enfermedades transmitidas por alimentos           y PCR: prevención y diagnósticoL as enfe...
ENFERMEDADES       EMERGENTESpende, entre otros factores, de la elec-       laboratorios diferentes para su uso       tecc...
ENFERMEDADES      EMERGENTES10. Coetsier C, Vannuffel P, Blondeel N, Denef J,    15. Fagan P, Hornitzky M, Bettelheim K,  ...
Próxima SlideShare
Cargando en…5
×

ETAs y PCR

634 visualizaciones

Publicado el

ETAs y PCR
Tomado de:
http://www.scielosp.org/pdf/spm/v47n5/28385.pdf , consultado n línea:
27/02/2012

0 comentarios
0 recomendaciones
Estadísticas
Notas
  • Sé el primero en comentar

  • Sé el primero en recomendar esto

Sin descargas
Visualizaciones
Visualizaciones totales
634
En SlideShare
0
De insertados
0
Número de insertados
3
Acciones
Compartido
0
Descargas
11
Comentarios
0
Recomendaciones
0
Insertados 0
No insertados

No hay notas en la diapositiva.

ETAs y PCR

  1. 1. ENFERMEDADES EMERGENTES Enfermedades transmitidas por alimentos y PCR: prevención y diagnósticoL as enfermedades (ETA) se pro- por los alimentos transmitidas la calidad higiénico-sanitaria de los alimentos, y se ha demostrado que un estado viable pero no cultivable (VPNC), debido al procesamiento alducen por la ingestión de alimentos la contaminación de éstos puede que se sujeta el alimento, lo que im-y/o bebidas contaminados con micro- ocurrir durante su procesamiento2-4 posibilita el uso de los métodos deorganismos patógenos que afectan la o por el empleo de materia prima cultivo como herramienta de diag-salud del consumidor en forma indi- contaminada,5,6 pues algunas bacte- nóstico. Además, la obtención devidual o colectiva. Sus síntomas más rias patógenas para el hombre for- resultados puede tomar días8,9 o se-comunes son diarreas y vómitos, pero man parte de la flora normal de aves, manas;10,11 por ejemplo, los métodostambién se pueden presentar otros cerdos y ganado. convencionales para la detección decomo choque séptico, hepatitis, cefa- El control de los microorganis- Salmonella requieren de 3 a 4 díasleas, fiebre, visión doble, etcétera.1 mos causantes de ETA, por parte tan- para indicar resultados negativos y Hasta la fecha se han descrito to de las autoridades sanitarias como más de siete para confirmar un re-más de 250 ETA. La mayoría son in- de las plantas procesadoras de ali- sultado positivo.12fecciones ocasionadas por distintas mentos, depende en cierta medida Un alto porcentaje de los casosbacterias, virus y parásitos. Entre las del método analítico que se utiliza de ETA no puede asociarse con algúnbacterias comúnmente reconocidas para su detección. alimento en particular o no es facti-como causantes de ETA se encuen- La detección y la investigación ble identificar al patógeno responsa-tran especies de los géneros Campy- de los brotes de ETA constituye uno ble, debido, fundamentalmente, a quelobacter y Salmonella, así como la cepa de los principales retos para el Siste- los resultados de los análisis bacterio-O157:H7 de la enterobacteria Esche- ma de Salud Pública, pues requiere lógicos demoran; asimismo, el vehí-richia coli. A largo plazo, algunas de obtener, de manera oportuna y eficaz, culo alimentario implicado ya no seestas enfermedades pueden condu- información médica (datos perso- encuentra disponible para su análi-cir a otros padecimientos; por ejem- nales, síntomas, etc.) y análisis de la- sis, lo que sugiere la necesidad de es-plo, es posible que una infección con boratorio de los restos de alimentos tablecer métodos rápidos y eficientesla cepa O157:H7 de E. coli provoque o de las materias primas empleadas de detección del agente causal.el síndrome hemolítico urémico en su elaboración e, incluso, de las Recientemente, se han desarrolla-(SHU) con secuelas de insuficiencia manos de las personas involucradas do varios procedimientos alternativosrenal crónica.1 en la manipulación del alimento. para la tipificación y la identifica- Las ETA constituyen un impor- Tradicionalmente, las infeccio- ción de bacterias. Uno de ellos es latante problema de salud pública debi- nes se diagnostican mediante el cul- reacción en cadena de la polimerasado al incremento en su ocurrencia, el tivo de muestras de alimentos que (PCR), que consiste en la amplifica-surgimiento de nuevas formas de se suponen contaminados y la iden- ción selectiva de una secuencia blan-transmisión, la aparición de grupos tificación de las bacterias que crecen co flanqueada por secuencias cortaspoblacionales vulnerables, el aumen- en los medios de cultivo, con base de polinucleótidos (usualmente deto de la resistencia de los patógenos en criterios morfológicos y fisiológi- entre 10 y 30 nucleótidos) llamadasa los compuestos antimicrobianos y cos que quizá dependan de factores iniciadores o cebadores.el impacto socioeconómico que oca- ambientales o genéticos. 7 Por otro El éxito en la implementación desionan. La incidencia de estas enfer- lado, se ha demostrado que algunas la PCR para la identificación de mi-medades es un indicador directo de células bacterianas pueden entrar en croorganismos causantes de ETA de-388 salud pública de méxico / vol.47, no.5, septiembre-octubre de 2005
  2. 2. ENFERMEDADES EMERGENTESpende, entre otros factores, de la elec- laboratorios diferentes para su uso tección temprana de los patógenos.ción correcta de la secuencia blanco, cotidiano, lo que dificulta la repro- De ese modo, contribuirán notable-la cual debe permitir la identificación ducibilidad de los resultados entre mente a la prevención tanto de ETAdel microorganismo de interés, in- distintos grupos de trabajo.22-24 como de sus consecuencias.dependientemente de la presencia Recientemente, se desarrolló ende otras fuentes de ADN proceden- varios laboratorios europeos el pro- Mtra. Tania González Flores, Dr. Rafael Antonio Rojas Herrera,te de microorganismos concomitan- yecto denominado Food-PCR, cuyo Unidad Sureste del Centrotes o de la muestra misma. objetivo es la validación y estanda- de Investigación y Asistencia en Tecnología y Diseño Las regiones genómicas más co- rización de las metodologías de PCR del Estadomúnmente empleadas en el diseño de para la detección y el control de los de Jalisco, A. C. Guadalajara, Jalisco, México.cebadores para la identificación de patógenos Campylobacter spp. ter-microorganismos patógenos son las mofílico, E. coli O157, Yersinia en-relacionadas con los genes que codi- terocolítica, Listeria monocytogenes yfican para toxinas y proteínas antigé- Salmonella spp. en alimentos.22 Estos Referenciasnicas específicas. En la detección y el estudios proponen pruebas simplesdiagnóstico de E. coli, por ejemplo, las y específicas para la detección de pa- 1. Rosas GA, Acosta VM. Manual de manejosecuencias blanco por excelencia han tógenos, y los resultados obtenidos higiénico de los alimentos. Mexico, D.F.: Secretaría de Salud, 2001.sido los genes que codifican para las pueden facilitar la comparación y el 2. Autio T, Hielm S, Miettinen M, Jöberg A-M,dos variantes de la toxina Shiga, STX1 intercambio internacional de datos Aarnisalo K, Björkroth J et al. Sources ofy STX2,13,14 aunque también se han epidemiológicos, así como favorecer Listeria monocytogenes contamination in autilizado genes que codifican para la implementación de estas metodo- cold-smoked rainbow trout processing plantproteínas de virulencia accesorias logías en otros laboratorios. detected by pulsed-field gel electrophoresis typing. Appl Environ Microbiol 1999;65:150-155.como el eaeA (intimina) y el hlyA La detección y la prevención de 3. Hyytiä E, Hielm S, Björkroth J, Korkeala H.(hemolisina).13-18 ETA depende del esfuerzo conjunto Biodiversity of Clostridium botulinum type E En la práctica, cuando se aplican de las autoridades normativas, sa- strains isolated from fish and fishery products.las técnicas de PCR al análisis de áci- nitarias, industriales y educativas, Appl Environ Microbiol 1999;65:2057-2064.dos nucleicos en matrices complejas cuyas investigaciones objetivas y de- 4. Millemann Y, Gaubert S, Remy D, Colmin C. Evaluation of IS200-PCR and comparison withcomo los alimentos, la eficiencia de la talladas conlleven a una disminu- other molecular markers to trace Salmonellaamplificación puede reducirse signifi- ción en los riesgos de contaminación enterica subsp. enterica serotype yphimuriumcativamente por la presencia de sustan- de los alimentos. Para garantizar a bovine isolates from farm meat. J Clin Microbiolcias inhibidoras como la hemoglobina, los consumidores un alimento segu- 2000;38:2204-2209.la lactoferrina, los polisacáridos, las ro e higiénico, es necesario el control 5. Hielm S, Björkroth J, Hyytiä E, Korkeala H. Prevalence of Clostridium botulinum in finnish troutgrasas o las proteínas.9,19 La repercusión de los microorganismos patógenos farms: Pulsed-field gel electrophoresis typing revealsde estos compuestos en la obtención de en todas las etapas de la producción, extensive genetic diversity among type E isolates.resultados falso-negativos puede elimi- lo que implica disponer de métodos Appl Environ Microbiol 1998;64:4161-4167.narse empleando pasos de preenrique- de diagnóstico que no sólo sean rá- 6. Fach P, Perelle S, Dilasser F, Grout J,cimiento o polimerasas apropiadas, así pidos y sensibles, sino, sobre todo, Dargaignaratz C, Botella L et al. Detection by PCR-enzyme-linked immunosorbent assay ofcomo membranas selectivas.20,21 altamente específicos. Los métodos Clostridium botulinum in fish and environmental La detección y la identificación de clásicos de diagnóstico bacterioló- samples from a coastal area in northern France.los patógenos implicados en las ETA gico son laboriosos, requieren tiem- Appl Environ Microbiol 2002;68:5870-5876.es una parte fundamental de la vigi- po y no es posible identificar todas 7. Scheu P, Berghof K, Stahl U. Detection oflancia epidemiológica, por lo que es las cepas aisladas, por lo cual la in- pathogenic and spoilage micro-organisms in food with the polymerase chain reaction. Foodnecesario estandarizar las técnicas a fin formación que brindan es limitada Microbiol 1998;15:13-31.de implementar la vigilancia y el con- y dificulta la toma de decisiones. El 8. Herman L, De Block J, Waes G. A direct PCRtrol de dichos microorganismos y pre- desarrollo y la automatización de los detection method for Clostridium tyrobutyricumvenir las enfermedades que producen. métodos de PCR abren una gran spores in up to 100 mililiters of raw milk. Appl Durante la última década se han oportunidad para su aplicación como Environ Microbiol 1995;61:4141-4146. 9. Gentry-Weeks C, Hutcheson H, Kim L, Boltereportado numerosos ensayos de PCR herramientas analíticas en micro- D, Traub-Dargatz J, Morley P et al. Identificationpara la detección de microorganismos biología y control de calidad de los of two phylogenetically related organisms frompatógenos en matrices alimenticias, alimentos, debido a su rapidez, alta feces by PCR for detection of Salmonella spp. Jpero ninguno ha sido validado por sensibilidad y eficiencia para la de- Clin Microbiol 2002;40:1487-1492.salud pública de méxico / vol.47, no.5, septiembre-octubre de 2005 389
  3. 3. ENFERMEDADES EMERGENTES10. Coetsier C, Vannuffel P, Blondeel N, Denef J, 15. Fagan P, Hornitzky M, Bettelheim K, 20. Lampel K, Orlandi P, Kornegay L. ImprovedCocito C, Gala J. Duplex PCR for differential Djordjevic S. Detection of Shiga-like toxin (stx1 template preparation for PCR-based assays foridentification of Mycobacterium bovis, M. avium, and stx2), intimin (eaeA), and enterohemorrhagic detection of food-borne bacterial pathogens.and M. avium subsp. paratuberculosis in Escherichia coli (EHEC) hemolysin (EHEC hlyA) Appl Environ Microbiol 2000;66:4539-4542.formalin-fixed paraffin-embedded tissues from genes in animal feces by multiplex PCR. Appl 21. Wilson I. Inhibition and facilitation of nucleiccattle. J Clin Microbiol 2000;38:3048-3054. Environ Microbiol 1999;65:868-872. acid amplification. Appl Environ Microbiol11. Bannantine J, Baechler E, Zhang Q, Li L, Kapur 16. Paton A, Paton J. Detection and 1997;63:3741-3751.V. Genome scale comparison of Mycobacterium characterization of Shiga toxigenic Escherichia 22. Malorny B, Hoorfar J, Bunge C, Helmuth R.avium subsp. paratuberculosis with Mycobacterium coli by using multiplex PCR assays for stx1, stx2, Multicenter validation of the analyticalavium subsp. avium reveals potential diagnostic eaeA, enterohemorragic E. coli hlyA, rfbO111 accuracy of Salmonella PCR: Towards ansequences. J Clin Microbiol 2002;40:1303-1310. and rfbO157. J Clin Microbiol 1998;36:598-602. international standard. Appl Environ Microbiol12. Bhagwat A. Rapid detection of Salmonella 17. Franck S, Bosworth B, Moon H. Multiplex 2003;69:290-296.from vegetable rinse-water using real-time PCR. PCR for enterotoxigenic, attaching and effacing, 23. Lubeck P, Wolffs P, On S, Ahrens P, RadstromFood Microbiol 2004;21:73-78. and Shiga toxin-producing Escherichia coli P, Hoorfar J. Toward an international standard13. Reischl U, Youssef M, Kilwinski J, Lehn N, strains from calves. J Clin Microbiol for PCR-based detection of food-borneZhang W, Karch H et al. Real-time fluorescence 1998;36:1795-1797. thermotolerant campylobacters: AssayPCR assays for detection and characterization 18. Normanno G, Dambrosio P, Quaglia N, development and analytical validation. Applof shiga toxin, intimin, and enterohemolysin Montagna D, Chiocco D, Celano G. Typing of Environ Microbiol 2003;69:5664-5669.genes from shiga toxin-producing Escherichia Escherichia coli O157 strains isolated from fresh 24. Lubeck PS, Cook N, Wagner M, Fach P,coli. J Clin Microbiol 2002;40:2555-2565. sausage. Food Microbiol 2004;21:79-82. Hoorfar J. Toward an international standard for14. Wang G, Clark C, Rodgers F. Detection in 19. Fach P, Popoff M. Detection of PCR-based detection of food-borneEscherichia coli of the genes encoding the major enterotoxigenic Clostridium perfrigens in food thermotolerant campylobacters: Validation in avirulence factors, the genes defining the and fecal samples with a duplex PCR and the multicenter collaborative trial. Appl EnvironO157:H7 serotype, and components of the type slide latex agglutination test. Appl Environ Microbiol 2003;69:5670-5672.2 Shiga toxin family by multiplex PCR. J Clin Microbiol 1997;63:4232-4236.Microbiol 2002;40:3613-3619.390 salud pública de méxico / vol.47, no.5, septiembre-octubre de 2005

×