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UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO,[object Object],FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA,[object Object],Laboratorio de Microbiología General II,[object Object],Embrión de Pollo,[object Object],INTEGRANTES,[object Object],Luis Islas Jorge,[object Object],Martínez Rojas Hugo ,[object Object],Ponce de León VeazNoemi,[object Object],Vargas Cisneros Berenice,[object Object],Vargas Olvera Mireya,[object Object],Equipo 3, 2752,[object Object]
OBJETIVOS,[object Object],[object Object]
El alumno conocerá las diversas partes del embrión de pollo de 9 días de inoculación. ,[object Object]
Efecto citopático,[object Object],Se denomina efecto citopático a los cambios bioquímicos y moleculares, morfológicos y de viabilidad celular, visibles a microscopía óptica, causados durante el ciclo de replicación viral.,[object Object],Aunque todos los virus líticos producen efecto citopático, puede observarse una gran diversidad de manifestaciones,[object Object]
Efecto citopático,[object Object],La mayor parte de las observaciones del ECP se han realizado en células infectadas en cultivo, en las que se aprecia: pérdida de adherencia al sustrato, inhibición por contacto, redondeamiento celular, formación de sincitios, cuerpos de inclusión citosólicos, transformación celular, lisis, etc. ,[object Object]
Lisis,[object Object],Es la conclusión del conjunto de alteraciones celulares que se producen, secuencial o simultáneamente en la célula infectada, liberando finalmente al medio las nuevas partículas virales.,[object Object]
Cuerpos de inclusión,[object Object],Muchos tipos de virus inducen la aparición de estructuras membranosas en el citoplasma, en algunos casos en forma de grandes vacuolas citoplasmáticas o pequeñas.,[object Object]
Sincicios,[object Object],Los sincicios son grupos de células fusionadas apreciables como una masa celular multinucleada,[object Object]
Transformación celular,[object Object],Es una alteración en el crecimiento normal de las células en cultivo con evidentes manifestaciones morfológicas. ,[object Object],Se asocia a una serie de cambio moleculares y está especialmente ligada a virus que insertan su genoma en el de la célula infectada, pudiendo causar mutagénesis insercional al interrumpir antioncogenes o activar pro-oncogenes, o alterando la correcta regulación de la expresión génica celular.,[object Object]
Alteraciones bioquímicas,[object Object],Las alteraciones bioquímicas son muy diversas y específicas de cada virus, si bien pueden señalarse las más importantes a nivel general.,[object Object],Algunos virus son capaces de mostrar esta inhibición en etapas tempranas de la infección pero la mayoría de los virus animales lo hacen en etapas tardías. El efecto más drástico suele producirse en la inhibición de la expresión de proteínas celulares por traducción preferente o casi exclusiva de proteínas virales.,[object Object]
Alteraciones bioquimicas,[object Object],1.- Inhibición de la síntesis de proteínas celulares,[object Object],2.- Inhibición de la síntesis de DNA celular,[object Object],3.- Inhibición de la síntesis de RNA celular,[object Object]
Alteraciones de las membranas celulares,[object Object],Cambios en la actividad de enzimas presentes en las membranas. ,[object Object],Modificaciones en la funcionalidad del sistema vesicular. ,[object Object],Aumento de la permeabilidad de la membrana plasmática. ,[object Object]
Técnicas de Cultivo,[object Object]
Técnicas para el cultivo de virus,[object Object],Los sistemas celulares utilizados para propagar los virus en el laboratorio son:,[object Object],1.Animales de experimentación,[object Object],2.Embriones animales,[object Object],3.Cultivos celulares artificiales,[object Object]
Animales de experimentación,[object Object],[object Object]
Poco  usada
Se emplea únicamente cuando se trata de propagar virus cuya replicación en los otros sistemas no es posible.
Los animales más utilizados: monos, los cobayos y los ratones,[object Object],lactantes,[object Object]
Embriones de animales ,[object Object],[object Object]
los huevos fecundados se incuban hasta el momento de su inoculación que suele oscilar entre 6 y 14 días.
Las inoculaciones, que pueden realizarse en diversas zonas del embrión (cavidad amniótica, saco vitelinol etc.).,[object Object]
Tipos de cultivos celulares,[object Object],[object Object]
Líneas celulares continuas: Las más utilizadas para el diagnostico. Derivan de un tumor o de células normales que, después de cultivos repetidos, se transforman tanto que actúan como células derivadas de tumor, es decir, poseen un número anormal de cromosomas, Estas células pueden propagarse de manera indefinida.
Cultivos de linfocitos: Los linfocitos B se dividen y continúan la división de manera indefinida cuando están infectados por VEB. Esta característica es conocida como inmortalización y se puede aprovechar como marcador del aislamiento de VEB.Los linfocitos T crecen en presencia de una linfocina, IL-2, el descubrimiento de este fenómeno ha sido fundamental para el estudio de los retrovirus humanos (VIH y HTLV) que logran propagarse en cultivos celulares  con la formación de células gigantes sincitiales. ,[object Object]
Embrion de pollo
Importancia ,[object Object],La inoculación animal sigue siendo un método de gran valor para estudiar:,[object Object], La oncogénesis viral,[object Object], La patología de los padecimientos virales,[object Object], La respuesta inmune a los virus ,[object Object], El efecto de los factores ambientales sobre infecciones virales                          ,[object Object]
Cuerpo de Negri.,[object Object],Corpúsculos hallados por Negri en las células del sistema nervioso central de los animales muertos de rabia; son específicos de esta enfermedad. Se trata de reacciones de la célula contra el virus. No se hallan en los animales inoculados con la rabia experimental.,[object Object]
Cuerpos de Negri por Rabdovirus,[object Object],El virus de la Rabia en el cerebro de animales infectados produce Cuerpos de Negri de varias formas (menores de 1 micrómetro de diámetro, con masas redondas u ovales, y cintas de 2 a 10 micras de diámetro). ,[object Object],Estos son inclusiones eosinofílicas intracitoplasmáticas formadas por agregados de nucleocápside en las neuronas de cerca de 50 a 80% de los humanos infectados.,[object Object]
Histopatología de la rabia, cerebro. Cuerpos de Negri característicos están presentes con una célula de Purkinje del cerebelo en este paciente que falleció por rabiaHistopatología de la rabia, cerebro. Cuerpos de Negri característicos están presentes con una célula de Purkinje del cerebelo en este paciente que falleció por rabiaVVV,[object Object]
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Embrión de Pollo,[object Object]
EMBRIÓN DE POLLO,[object Object],Se reconoce el embrión que esta vivo porque en la transiluminación se ven como telaraña ,[object Object],venas que forman la membrana corioalantoidea y se observa que se desplaza un punto negro intermitente (el ojo).,[object Object]
EMBRIÓN DE POLLO,[object Object],Al morir, los vasos se desintegran y este yace fijo al polo superior del huevo. ,[object Object],A medida que aumenta de tamaño disminuye el volumen de los líquidos extraembrionarios ,[object Object]
CULTIVO VIRAL EN HUEVO EMBRIONADO,[object Object],UTILIDAD: Es una fuente de tejido vivo conveniente y fácil de manipular que se utiliza en la propagación, titulación e identificación de virus, así como en la preparación de algunas vacunas virales.,[object Object],Se emplean huevos con 5 a 14 días de incubación, según la vía de inoculación:,[object Object],Membrana corioalantoidea,[object Object],Cavidades alantoidea y amniótica,[object Object], Saco vitelino,[object Object],Intracerebral,[object Object],Endovenosa. ,[object Object]
TIPOS DE VIRUS QUE SE PUEDEN INOCULAR EN EMBRION DE POLLO,[object Object]
Embrión de pollo,[object Object]
EMBRIÓN DE POLLO,[object Object]
Vías de Inoculación,[object Object],Selectividad que tienen algunos virus por determinados tejidos,[object Object]
Inoculación por saco alantoideo,[object Object],Con colorante se observa: liquido alantoideo, albumina y cámara de aire teñidos,[object Object],Liquido alantoideo: virus hemaglutinantes o producción de hemaglutininas,[object Object],Embrión de 9-12 días, inoculo de 0.1-0.2ml,[object Object]
Inoculación por saco alantoideo,[object Object]
Inoculación en saco amniótico ,[object Object],Con colorante: líquido amniótico, cámara de aire,[object Object],Primoaislamiento de cepas de influenza,[object Object],Embrión de 7-15 días, inoculo de 0.1-0.2ml ,[object Object]
Inoculación en saco amniótico ,[object Object]
Inoculación en saco vitelino  ,[object Object],Con colorante: Saco vitelino, Cámara de aire,[object Object],Cultivo de clamidias y ricketsias,[object Object],Embriones de 5-8días, inoculo de 0.2-1ml ,[object Object]
Inoculación en saco vitelino ,[object Object]
Inoculación de membrana corioalantoidea (MCA),[object Object],Con colorante: membrana corioalantoidea,[object Object],Permite cuantificar aquellos grupos virales que producen lesiones localizadas,[object Object],Embrion de 10-12 días, inoculo de 0.1-0.5ml,[object Object]
Inoculación de membrana corioalantoidea (MCA),[object Object]
Embrión de pollo,[object Object],La infección puede producir una lesión tisular local conocida como pústula (característico de virus),[object Object], A veces se inyecta el virus directamente en el embrión en desarrollo: IV,  intraperitoneal, o intracerebral.,[object Object],Tambien influye: la dilución, la cantidad del inóculo, la temperatura y tiempo de incubación tras la inoculación ,[object Object]
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  • 17. Se emplea únicamente cuando se trata de propagar virus cuya replicación en los otros sistemas no es posible.
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  • 20. los huevos fecundados se incuban hasta el momento de su inoculación que suele oscilar entre 6 y 14 días.
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  • 23. Líneas celulares continuas: Las más utilizadas para el diagnostico. Derivan de un tumor o de células normales que, después de cultivos repetidos, se transforman tanto que actúan como células derivadas de tumor, es decir, poseen un número anormal de cromosomas, Estas células pueden propagarse de manera indefinida.
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