ENZIMA INMUNOANÁLISIS (EIA) Lcda. Griselda Arteaga Departamento de Microbiología Inmunología
Enzima Inmuno Ensayo <ul><li>Objetivo: Comprender el principio inmunológico de la técnica de EIA, sus aplicaciones y limit...
Contenido <ul><li>Principios del ELISA </li></ul><ul><li>Clasificación de las técnicas de ELISA </li></ul><ul><li>Procedim...
EIA <ul><li>ELISA:   Enzyme linked immunosorbent assay </li></ul><ul><li>Análisis de inmunoabsorción enzimática </li></ul>...
CONJUGADO ANTICUERPO MARCADO CON ENZIMA ANTIGENO MARCADO CON ENZIMA ENZIMA:  Peroxidasa de rabano, FAL,  Glucosa oxidasa,C...
Clasificación de las técnicas de ELISA <ul><li>Análisis Competitivo  empleando: </li></ul><ul><ul><li>Conjugado antígeno-e...
ELISA Competitivo con  Ag marcado Anticuerpo en fase solida Ag libre Ag-E lavado Añadir substrato, Incubar y medir activid...
ELISA tipo Sandwich Ag Ac en fase sólida Lavar + + conjugado lavar Medición de act. enz .
ELISA INDIRECTO,  para medir anticuerpo
REACTIVOS
LECTOR DE ELISA
Cálculo del Cut-off y Zona Gris <ul><li>Valor de corte o Cut Off </li></ul><ul><ul><li>CO=NCx +0.3 </li></ul></ul><ul><li>...
RESULTADOS FALSOS POSITIVOS <ul><li>Reacciones cruzadas entre anticuerpos con especificidades similares. </li></ul><ul><ul...
Resultados Falsos Negativos <ul><li>Paciente no ha generado los anticuerpos en estudio </li></ul><ul><li>Los anticuerpos d...
APLICACIONES CLINICAS <ul><li>Diagnósticos de infecciones por microorganismos: al detectar la presencia de antígenos del a...
Ejemplos <ul><li>En mujeres embarazadas: </li></ul><ul><ul><li>Medición de HGC-cualitativa y cuantitativa </li></ul></ul><...
 
 
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ELISA

  1. 1. ENZIMA INMUNOANÁLISIS (EIA) Lcda. Griselda Arteaga Departamento de Microbiología Inmunología
  2. 2. Enzima Inmuno Ensayo <ul><li>Objetivo: Comprender el principio inmunológico de la técnica de EIA, sus aplicaciones y limitantes en el diagnóstico clínico por el laboratorio. </li></ul>
  3. 3. Contenido <ul><li>Principios del ELISA </li></ul><ul><li>Clasificación de las técnicas de ELISA </li></ul><ul><li>Procedimiento </li></ul><ul><li>Cálculo de Cut off </li></ul><ul><li>Aplicaciones Clínicas </li></ul><ul><li>Ejemplos de aplicaciones clínicas </li></ul><ul><li>Flujograma diagnóstico panameño del VIH. </li></ul><ul><li>Flujograma diagnóstico panameño del VIH en niños menores de 18 meses. </li></ul>
  4. 4. EIA <ul><li>ELISA: Enzyme linked immunosorbent assay </li></ul><ul><li>Análisis de inmunoabsorción enzimática </li></ul><ul><li>PRINCIPIO : </li></ul><ul><li>Determinación cuantitativa de un antígeno o un anticuerpo por medio de una molécula indicadora, la cual se encuentra unida covalentemente a una enzima. </li></ul>
  5. 5. CONJUGADO ANTICUERPO MARCADO CON ENZIMA ANTIGENO MARCADO CON ENZIMA ENZIMA: Peroxidasa de rabano, FAL, Glucosa oxidasa,Catalasa, AC, etc
  6. 6. Clasificación de las técnicas de ELISA <ul><li>Análisis Competitivo empleando: </li></ul><ul><ul><li>Conjugado antígeno-enzima </li></ul></ul><ul><ul><li>Conjugado anticuerpo marcado con enzima </li></ul></ul><ul><li>Análisis No Competitivos </li></ul><ul><ul><li>Sandwich </li></ul></ul><ul><ul><li>Indirecto para medir anticuerpos </li></ul></ul>
  7. 7. ELISA Competitivo con Ag marcado Anticuerpo en fase solida Ag libre Ag-E lavado Añadir substrato, Incubar y medir actividad enzimática
  8. 8. ELISA tipo Sandwich Ag Ac en fase sólida Lavar + + conjugado lavar Medición de act. enz .
  9. 9. ELISA INDIRECTO, para medir anticuerpo
  10. 10. REACTIVOS
  11. 11. LECTOR DE ELISA
  12. 12. Cálculo del Cut-off y Zona Gris <ul><li>Valor de corte o Cut Off </li></ul><ul><ul><li>CO=NCx +0.3 </li></ul></ul><ul><li>Zona Gris o Equivoca </li></ul><ul><ul><li>CO +/- 10%CO </li></ul></ul>
  13. 13. RESULTADOS FALSOS POSITIVOS <ul><li>Reacciones cruzadas entre anticuerpos con especificidades similares. </li></ul><ul><ul><li>Enfermedades Autoinmunes </li></ul></ul><ul><ul><li>Embarazadas </li></ul></ul><ul><ul><li>Presencias de virus como Epstein Barr, VIH, etc. </li></ul></ul><ul><li>Contaminación cruzada entre muestras. </li></ul><ul><li>Deterioro de los reactivos </li></ul><ul><li>Errores Técnicos </li></ul>
  14. 14. Resultados Falsos Negativos <ul><li>Paciente no ha generado los anticuerpos en estudio </li></ul><ul><li>Los anticuerpos de la muestra no tienen especificidad contra el antígeno de la prueba o viceversa. </li></ul><ul><li>Deterioro de los reactivos </li></ul><ul><li>Errores Técnicos </li></ul>
  15. 15. APLICACIONES CLINICAS <ul><li>Diagnósticos de infecciones por microorganismos: al detectar la presencia de antígenos del agente infeccioso. </li></ul><ul><li>Confirmación de la presencia de anticuerpos: pueden ser anticuerpos contra cualquier microorganismo, inclusive vacunas, autoanticuerpos, etc. </li></ul><ul><li>Cuantificación de metabolitos: hormonas, medicamentos, etc </li></ul>
  16. 16. Ejemplos <ul><li>En mujeres embarazadas: </li></ul><ul><ul><li>Medición de HGC-cualitativa y cuantitativa </li></ul></ul><ul><ul><li>Toxo IgG, IgM </li></ul></ul><ul><ul><li>Rubeola IgG, IgM </li></ul></ul><ul><ul><li>VIH </li></ul></ul><ul><ul><li>CMV </li></ul></ul><ul><li>Diagnóstico de VIH </li></ul><ul><li>Monitoreo de hormonas-tratamiento </li></ul>

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