Análisis fitoquímico

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Análisis fitoquímico

  1. 1. ANÁLISIS FITOQUÍMICO PRELIMINAR DE HOJAS, TALLOS Y SEMILLAS DE CUPATÁ (STRYCHNOS SCHULTESIANA KRUKOFF) Preliminary phytochemical analysis of Cupatá (Strychnos schultesiana krukoff) stems and seeds Palabras clave: Strychnos, análisis fitoquímico preliminar, Lyndon Carvajal Rojas alcaloides. Yoshie Hata Uribe Keywords: Strychnos, preliminary phytochemical study, Noralba Sierra Martínez alkaloids. Diana Rueda Niño RESUMEN les como primera aproximación a la ampliación del conocimiento químico y a la posible utilidad Con el fin de ahondar en el conocimiento de la flora de las especies presentes en esta zona de Colom- colombiana, particularmente aquella presente en bia –con características agronómicas óptimas para la región de los llanos orientales, se eligió la espe- el establecimiento de cultivos–, que permitan una cie Strychnos schultesiana Krukoff para profundi- utilización racional de los recursos naturales de zar en su composición química y así establecer una nuestro país, como fuente de desarrollo regional y potencial utilidad medicinal o industrial. Para ello nacional. se realizó un análisis fitoquímico preliminar de tres de sus órganos –tallos, hojas y semillas–, en el que ABSTRACT se evaluó la presencia de los principales grupos de metabolitos secundarios asociados con actividad In order to improve the knowledge of Colombian biológica, a saber: alcaloides, flavonoides, taninos, flora, particularly that belonging to the llanos saponinas, derivados antracénicos, esteroides y/o orientales region, Strychnos schultesiana Krukoff triterpenoides, cumarinas, glicósidos cardiotóni- was chosen for a chemical composition in–depth cos y lactonas terpénicas. Se detectó la presencia study to establish a potential utility in medicinal de alcaloides en gran concentración, lo cual era or industrial fields. For this analysis, a preliminary de esperarse al tratarse de una especie del género phytochemical study of three organs of the plant Strychnos, ampliamente conocida por su contenido –steams, seeds and leafs– was made; the purpose de alcaloides. Es notable también la presencia de was to find the main secondary metabolites asso- flavonoides en los tres órganos. Estos compuestos ciated with biological activities: alkaloids, flavo- son ampliamente conocidos por sus propiedades noids, tannins, saponins, antracenic derivates, ste- antioxidantes, útiles en la prevención de múltiples roids, coumarins, cardiotonic glycosides and terpe- enfermedades asociadas a los procesos oxidativos. nic lactones. The main compounds were alkaloids. Los resultados de este trabajo son realmente úti- This fact was expected, as this species belongs to Ingeniería Forestal, Facultad del Medio Ambiente y Recursos Naturales, Universidad Distrital Francisco José de Caldas. Correspondencia: lcarvajal@udistrital.edu.co. Departamento de Farmacia, Facultad de Ciencias, Universidad Nacional de Colombia, Sede Bogotá. yahatau@unal.edu.co Departamento de Farmacia, Facultad de Ciencias, Universidad Nacional de Colombia, Sede Bogotá. nsierram@unal.edu.co Grupo Búsqueda de Principios Bioactivos, Departamento de Farmacia, Facultad de Ciencias, Universidad Nacional de Co- lombia, Sede Bogotá. dcruedan@unal.edu.co Recepción: 4 de julio de 2009 / Aprobación: 1 de septiembre de 2009 Revista Colombia Forestal Vol. 12: 161-170 / Diciembre 2009 161FORESTAL 12.indd 161 5/18/10 4:53:04 PM
  2. 2. Análisis fitoquímico preliminar de hojas, tallos y semillas de cupatá (Strychnos schultesiana Krukoff) the genus Strhychnos, widely known because of its nar hasta estudios químicos sistemáticos bioguia- high alkaloid content. In addition, the existence of dos. Puesto que este último tipo de estudio requiere flavonoids in the studied organs of the plant is very una inversión considerable de tiempo y recursos, remarkable. These compounds are well known as lo ideal es iniciar con estudios fitoquímicos pre- scavengers, useful in prevention of diseases rela- liminares que permitan hacer una discriminación ted with oxidative processes. Finally, the results de las plantas a estudiar en términos de su com- of this work are very useful as a first approach to posición química, con el fin de seleccionar única- the knowledge and utility of the vegetal species mente aquellas más interesantes para posteriores found in this location. Furthermore, this plant has estudios sistemáticos. El objetivo de un estudio big agronomical advantages related with the cultu- fitoquímico preliminar es determinar la presencia o re establishment, which improves the rational use ausencia de los principales grupos de metabolitos of natural resources in our country, as a means of en una especie vegetal, a saber: alcaloides, antra- regional and national development. quinonas y naftoquinonas, esteroides y triterpenos, flavonoides, taninos, saponinas, cumarinas, lacto- INTRODUCCIÓN nas terpénicas y cardiotónicos. Dado que cada uno de estos grupos de compuestos está relacionado El hombre utiliza las plantas con propósitos medici- con actividades biológicas específicas, partiendo nales desde tiempos prehistóricos y aún hoy tienen de los resultados obtenidos en el estudio fitoquí- un papel clave en el mantenimiento de la salud de mico preliminar es posible orientar investigaciones la mayor parte de la población mundial, pese a los posteriores para determinar la actividad biológica avances de la medicina moderna. Esto si se tienen de las especies en cuestión y los principios activos en cuenta las diversas formas en que se utilizan, que involucrados. van desde la preparación de decocciones e infusio- nes en zonas rurales y países pobres, pasando por En el caso del presente análisis fitoquímico preli- los productos fitoterapéuticos, hasta la obtención minar se partió del extracto etanólico de tres órga- de principios activos en países desarrollados para nos –hojas, semillas y tallos– de Strychnos schul- la elaboración de medicamentos. Se estima que en tesiana (Loganiaceae) (Missouri Botanical Garden el mundo se utilizan cerca de 10000 especies vege- 2008), en los cuales se evaluó la presencia de los tales con fines medicinales, la mayor parte en sis- principales grupos de metabolitos secundarios pre- temas de medicina tradicional (who 1993, Calixto viamente mencionados, mediante pruebas de tubo 2000, Cañigueral 2002, Newman et al. 2003). y/o cromatografía en capa delgada que se descri- ben de manera detallada en el siguiente apartado. En los países en vías de desarrollo, donde vive el 75% de la población mundial, se consume menos Las especies del género Strychnos han sido utili- del 15% del mercado total de medicamentos. Las zadas tradicionalmente por muchas comunidades plantas medicinales representan, por tanto, el úni- indígenas para la preparación de venenos conoci- co recurso terapéutico disponible para los sectores dos como “curares”. Strychnos schultesiana es una más desfavorecidos de esta población. Por lo ante- especie trepadora que presenta un comportamiento rior, las autoridades de salud a nivel mundial han muy favorable para su manejo y propagación en vi- aumentado considerablemente su atención a dichos vero, de igual manera comienza entre los 3 y 4 años medicamentos, ya que por un lado constituyen la de edad la producción de frutos, muy abundantes única medicina disponible en los países en vías de en el sitio de recolección y conocidos en la pobla- desarrollo y, por otro, se han convertido en una po- ción con los nombres de cupatá, castaña espinosa o pular alternativa en los países desarrollados (Sha- solita. Al no conocerse mucho de su composición rapin 2002). química, se planteó la necesidad de realización de un análisis fitoquímico preliminar para ahondar en Para determinar la composición química de las su conocimiento químico. plantas medicinales y conocer sus constituyentes biológicamente activos pueden seguirse metodolo- El cupatá es una planta trepadora de hojas simples, gías que van desde un análisis fitoquímico prelimi- opuestas, sin estipula ni exudado. La corteza exter- 162 Revista Colombia Forestal Vol. 12 - Diciembre 2009FORESTAL 12.indd 162 5/18/10 4:53:05 PM
  3. 3. Lyndon Carvajal Rojas / Yoshie Hata Uribe / Noralba Sierra Martínez / Diana Rueda Niño na es de color café y la viva, amarilla. Las ramas curares útiles para capturar las presas fácilmente; tienen espinas opuestas con las cuales asciende. para ello untan la punta del dardo o de la flecha Flores de color amarillo están dispuestas en cimas con la cual van a herir al animal. Aunque los frutos axilares. Los frutos son bayas grandes de color poseen una pulpa carnosa de un sabor muy agrada- amarillo y con numerosas semillas de color curuba ble, las semillas no se deben consumir ya que con- que presentan una fragancia muy agradable. En la tienen estricnina. Con respecto a la propagación, Figura 1 se pueden observar fotografías de los di- se puede utilizar la semilla de manera exitosa y la ferentes órganos de la especie. planta es de lento crecimiento en sus primeros esta- dos de desarrollo, en los que requiere sombra. Por La especie se distribuye en Perú, Ecuador y Vene- su carácter ascendente tiende a trepar sobre árboles zuela. En Colombia la encontramos en el Chocó biogeográfico, Orinoquía, región Andina y piede- hasta alcanzar las copas. Se han realizado ensayos monte llanero y es usada por los indígenas de las de propagación vegetativa que presentan buenos regiones donde se encuentra para la preparación de resultados en vivero. La especie presenta rebrotes. A. B. C. D. Figura 1. Fotografías de muestras de Strychnos schultesiana A. Hojas, B. Flores, C. Frutos, D. Semillas. Revista Colombia Forestal Vol. 12 - Diciembre 2009 163FORESTAL 12.indd 163 5/18/10 4:53:22 PM
  4. 4. Análisis fitoquímico preliminar de hojas, tallos y semillas de cupatá (Strychnos schultesiana Krukoff) METODOLOGÍA otros. En la Figura 2 se describe detalladamente el procedimiento de purificación de alcaloides en las El material vegetal de cupatá fue recolectado en el muestras evaluadas. mes de junio del año 2008, en la finca El Alcara- ván, vereda Los Maracos, km 1 vía al Rió Ariari, Nafto y antraquinonas: Para la detección de este Granada, Meta. Para realizar el análisis fitoquímico tipo de metabolitos secundarios se empleó la re- preliminar se utilizó la metodología corrientemen- acción de Bornträger-Kraus. Para ello, el extracto te utilizada en el Departamento de Farmacia para etanólico seco fue extraído con una solución etanó- tal propósito (Sanabria 1983), la cual se divide en lica en agua (1:7), a la cual se adicionó peróxido de tres etapas: procesamiento del material vegetal, hidrógeno y ácido sulfúrico y se procedió a calen- obtención del extracto etanólico y realización de tar; bajo estas drásticas condiciones, se hidrolizan la prueba de identificación de cada uno de los me- los enlaces glicosídicos y se oxidan las antronas y tabolitos. los antranoles hasta antraquinonas, las cuales fue- ron extraídas con tolueno y agitadas en presencia Procesamiento del material vegetal: Hojas, tallos de una solución de hidróxido de sodio al 5% que y semillas de S. schultesiana fueron sometidos a un contiene hidróxido de amonio al 2%. En caso de proceso de secado en una estufa de aire circulante a presencia de nafto o antraquinonas, al dejar separar 50º C por 48 horas, trabajando cada uno de los ór- las fases la capa alcalina (inferior) toma una co- ganos de la planta por separado. Posteriormente, el loración que va del rosado al rojo intenso, depen- tamaño de partícula se disminuyó pasando el mate- diendo de la concentración de estos compuestos en rial seco por un molino de discos (hojas y tallos) o la muestra. un molino de cuchillas (semillas), según el caso. Esteroides y triterpenoides libres: Para su aná- Obtención del extracto etanólico: 100 g del ma- lisis preliminar en plantas la prueba más común- terial vegetal seco y molido de cada uno de lo ór- ganos a estudiar fueron sometidos separadamente mente usada es la de Liebermann-Burchard. Para a maceración, en un balón de fondo plano por un realizar esta prueba, fue necesario hacer un proce- tiempo de 24 horas, utilizando como solvente de dimiento de separación previo en el cual se obtuvo extracción etanol del 96% en cantidad suficiente un extracto en éter de petróleo a partir del extracto para cubrir el material vegetal. Posteriormente se etanólico seco. Este extracto etéreo se extrajo de llevó a reflujo por una hora, se dejó enfriar a tem- nuevo con una mezcla de metanol - agua 9:1, se peratura ambiente y se filtró y concentró para eli- recuperó la capa superior y se sometió a cromato- minar el solvente y proceder a realizar las pruebas grafía en capa delgada, empleando gel de sílice F254 para cada uno de los metabolitos. como fase estacionaria y una fase móvil compuesta por una mezcla hexano - acetato de etilo (95:5). Alcaloides: La mayoría de los alcaloides, con ex- La cromatografía desarrollada se dejó secar antes cepción de los alcaloides de amonio cuaternario y de revelarla, se asperjó con el reactivo de Lieber- N-óxidos de amina, son solubles en solventes or- mann-Burchard (solución etanólica de anhídrido gánicos poco polares, como cloroformo y mezclas acético en presencia de ácido sulfúrico) y se some- de éste, pero pueden formar sales solubles en agua tió a calentamiento (110º C) durante 5 a 10 min. Se en presencia de ácidos minerales diluidos, como considera resultado positivo si bajo estas condicio- el ácido clorhídrico al 5% en agua. Esta propiedad nes aparecen manchas en cualquier tonalidad del ácido-base se aprovechó para su purificación a par- rojo, azules o verdes. tir de extractos totales. Luego de este paso inicial se realizaron pruebas de precipitación en medio Flavonoides: Para su detección se emplea princi- ácido, utilizando para ello sales de metales pesa- palmente la reacción de la cianidina, conocida tam- dos como el ioduro de potasio (reactivo de Dragen- bién como reacción de Shinoda. Para ello el extracto dorff), el ioduro de potasio y mercurio (reactivo de etanólico seco se extrajo con una solución etanóli- Mayer) y la sal de Reineckato de amonio, entre ca en agua (1:7) y se filtró. Este filtrado, denomina- 164 Revista Colombia Forestal Vol. 12 - Diciembre 2009FORESTAL 12.indd 164 5/18/10 4:53:23 PM
  5. 5. Lyndon Carvajal Rojas / Yoshie Hata Uribe / Noralba Sierra Martínez / Diana Rueda Niño do “A”, se puso en un tubo de ensayo con 0.5 g de de magnesio, evaporando a sequedad y extrayendo magnesio en polvo. Seguidamente se adicionó hcl luego con etanol al 96%. Una vez eliminados los concentrado, gota a gota, hasta el desprendimiento taninos, 1 ml de esta solución se puso en un tubo de de hidrógeno. Si en estas condiciones se observa la ensayo en presencia de 5 ml de suspensión norma- aparición de coloración rojiza, violeta o naranja, se lizada de glóbulos rojos. Como patrón de hemólisis considera positivo para compuestos con el núcleo positiva se emplearon 0.5 ml de una solución de de la γ-benzopirona (flavonas, flavonoles, flavano- digitonina (10 mg en 100 ml de etanol del 80%) nas, flavanonoles, isoflavonoides y xantonas). en presencia de 5 ml de suspensión normalizada de glóbulos rojos y como blanco se emplearon 5ml También existe otro tipo de flavonoides denomi- de la misma suspensión con 1 ml de agua. La prue- nados leucoantocianidinas, las cuales por cambio ba de hemólisis es considerada positiva cuando en en el pH se tornan de incoloras a intensamente 10 min se presenta hemólisis en el patrón y en la coloreadas de rojo. Para detectar la presencia de muestra, mientras que el blanco permanece sin he- este tipo de compuestos en la muestra, el filtrado molizar. A fue transferido a un tubo de ensayo, se adicionó ácido clorhídrico concentrado y se sometió a calen- La prueba de formación de espuma consiste en tamiento en un baño maría hirviendo durante 10-15 agitar vigorosamente la solución acuosa (7:1), ob- min. La aparición de coloración rojiza bajo estas tenida del extracto etanólico total, en un tubo de condiciones indica la presencia de leucoantociani- ensayo y observar la espuma formada. Ésta debe dinas. ser estable por lo menos 30 minutos para poder es- tablecer la presencia de saponinas. Taninos: Estos polifenoles tienen la propiedad de unirse a las proteínas y precipitarlas. Por esta Glicósidos cardiotónicos: Estos compuestos po- razón, la prueba más empleada para la detección seen características estructurales similares a las de de este grupo de metabolitos secundarios emplea las saponinas, con una estructura compuesta por el reactivo de gelatina-sal, el cual produce un pre- un núcleo esteroidal glicosilado (2 desoxiazúcares) cipitado blanco en presencia de taninos, luego de y una lactona insaturada de 5 o 6 miembros. Para haber extraído el extracto etanólico total con una la detección de éstos pueden emplearse pruebas solución acuosa de etanol (7:1). Estos precipitados en tubo de ensayo específicas para cada una de formados como consecuencia de la presencia de ta- las partes que componen la molécula, o técnicas cromatogáficas. El presente análisis fitoquímico ninos deben ser solubles en urea 10 M y producir preliminar empleó cromatografía en capa delga- coloraciones verdes, azules o negras tras la adición da (ccd), sirviéndose de dos placas cromatográfi- de cloruro férrico al 10% en agua. cas eluídas en la misma fase móvil (cloroformo: Saponinas: Son glicósidos cuya aglicona consiste metanol: agua 82:17:1) con el fin de comparar los en un núcleo esteroidal o triterpénico; esta carac- valores de Rf de los compuestos revelados. Una de terística estructural les confiere un carácter anfó- ellas se reveló con el reactivo de vainillina - ácido tero que les permite actuar como tensioactivos. ortofosfórico (1% vainillina y 10% de ácido en eta- Aprovechando esta propiedad, las dos pruebas más nol), específico para esteroides y triterpenos, con empleadas en la detección de saponinas son la de el fin de detectar el núcleo esteroidal de los car- hemólisis y la de formación de espuma, puesto que diotónicos. La otra placa se reveló con la reacción al ser tensioactivas las saponinas inestabilizan la de Raymond, la cual utiliza m-dinitrobenceno (2% membrana celular de los eritrocitos, induciendo su en etanol) y naoh al 20%; en estas condiciones, las ruptura. γ-lactonas α-β insaturadas producen coloraciones violeta que desaparecen rápidamente. De esta ma- Para realizar la prueba de hemólisis el extracto eta- nera, sólo aquellas manchas que revelan en las dos nólico fue extraído con la solución acuosa (7:1). En placas pueden considerarse cardiotónicos pues po- caso de ausencia de taninos, se procedió a realizar seen el núcleo esteroidal además de la lactona insa- las pruebas; de lo contrario, con el fin de eliminar- turada. Esto se evidencia claramente con un patrón los, se adicionaron aproximadamente 2 g de óxido de digitoxina. Revista Colombia Forestal Vol. 12 - Diciembre 2009 165FORESTAL 12.indd 165 5/18/10 4:53:24 PM
  6. 6. Análisis fitoquímico preliminar de hojas, tallos y semillas de cupatá (Strychnos schultesiana Krukoff) Practicar las 4 reacciones de precipitación Figura 2. Análisis preliminar de alcaloides. Previo a la realización de la cromatografía es ne- porador rotatorio, se dejó enfriar y se extrajo en cesario eliminar las clorofilas del extracto, ya que un embudo de decantación con 2 volúmenes de 30 intervienen con el ensayo. Es necesario hacer lo ml de cloroformo. Se combinaron las capas cloro- mismo en el caso del análisis de cumarinas y lacto- fórmicas, se adicionó sulfato de sodio anhidro, se nas sesquiterpénicas. Para ello el extracto etanólico filtró y se concentró a 3 ml aproximadamente, ob- seco fue tratado con un volumen aproximadamente teniendo así la solución a ser utilizada en las prue- igual de una solución de acetato de plomo al 4% bas cromatográficas. que contenía 0.5% de ácido acético, con el fin de Cumarinas: Son compuestos derivados de la α- precipitar las clorofilas presentes. Esta mezcla se benzopirona. Dado que en su estructura presentan dejó en reposo durante aproximadamente 15 min y un gran número de instauraciones, estos compues- se filtró a presión atmosférica. El filtrado así obte- tos exhiben una fuerte fluorescencia azul o verde nido fue concentrado a 3/4 de su volumen en eva- al ser irradiados con luz ultravioleta, propiedad 166 Revista Colombia Forestal Vol. 12 - Diciembre 2009FORESTAL 12.indd 166 5/18/10 4:53:31 PM
  7. 7. Lyndon Carvajal Rojas / Yoshie Hata Uribe / Noralba Sierra Martínez / Diana Rueda Niño que se aprovecha para su detección. Adicional- DISCUSIÓN mente, puesto que todas las cumarinas poseen en su estructura una γ-lactona, pueden identificarse En el presente análisis fitoquímico preliminar de mediante las reacciones propias para lactonas. Por hojas, tallos y semillas de la especie S. schultesia- este motivo, con el fin de determinar la presencia na se partió de extractos etanólicos puesto que este solvente tiene la capacidad de extraer compuestos de cumarinas en la muestra, se desarrolló una cro- de una amplia gama de polaridades, además de ser matografía en capa delgada empleando gel de sílice menos costoso y tóxico que otros solventes orgáni- F254 como fase estacionaria y una mezcla clorofor- cos. La metodología seguida para este análisis fue mo-cetona 9:1 como fase móvil. Una vez eluída la la previamente estandarizada por Sanabria (1983), placa, se observó a la luz uv (365 y 254 nm) antes y contempla la detección de los metabolitos secun- de revelarse con la reacción del hidroxamato férri- darios generalmente relacionados con actividades co, específica para lactonas. Esta reacción consiste biológicas. en asperjar la placa con una mezcla de volúmenes iguales de clorhidrato de hidroxilamina al 2% en A continuación se presenta la discusión de los re- etanol y naoh 2N, calentar por 5-10 min a 100º C sultados consignados en la Tabla 1, en relación a los y, al cabo de este tiempo, dejar enfriar y asperjar órganos de la especie S. schultesiana evaluados. con volúmenes iguales de hcl 2N y FeCl3 al 1% en Con respecto a los alcaloides, fue el grupo de meta- etanol. Aquellos compuestos con fluorescencia al bolitos secundarios más abundante encontrado en ultravioleta que luego de la aplicación del reactivo los tres órganos. Sin embargo, dado que la cantidad revelador exhiben coloración anaranjada al visible de precipitado obtenido es proporcional a la con- son considerados cumarinas. Una placa cromato- centración de alcaloides en la muestra, puede infe- gráfica adicional puede asperjarse con koh al 5%, rirse que las hojas son el órgano de la planta donde el cual acentúa fuertemente la fluorescencia de es- tiene lugar la mayor acumulación de alcaloides, tos compuestos al ser expuestos a la luz uv. aunque cabe aclarar que en tallos y semillas tam- bién se encuentran en concentración apreciable. Lactonas sesquiterpénicas: Estos compuestos, como su nombre lo indica, son terpenos con un es- Es conocido que las especies del género Strychnos queleto de 15 átomos de carbono, que tienen ade- presentan una alta concentración de alcaloides de más en su estructura una lactona. Para identificar tipo indólico (estricnina, Yang Yang 1993, San- estos compuestos se hicieron dos cromatografías tos et al. 2006), los cuales son solubles principal- en capa delgada (fase estacionaria: gel de sílice mente en solventes de baja polaridad. Por este mo- F254) eluídas con una fase móvil compuesta por tivo, los extractos obtenidos con este tipo de sol- cloroformo y acetona (9:1). Una de las cromato- ventes durante el proceso de purificación (filtrados grafías fue revelada para terpenos, como se indicó A y B) presentaron una mayor concentración de en el caso de los glicósidos cardiotónicos, y la otra alcaloides, tal como se muestra en la Tabla 1. Ade- se derivatizó para lactonas con el reactivo de hi- más de alcaloides de tipo indólico, puede inferirse droxamato férrico, como se indicó en el caso de la presencia de alcaloides de amonio cuaternario o las cumarinas. Ambas pruebas deben ser positivas N-óxidos de amina en las semillas y las hojas de para poder concluir que la muestra presenta este esta planta, puesto que se obtuvo resultado positivo con el Reineckato de amonio, tanto en el extracto tipo de metabolitos secundarios. inicial como en la fase más polar del proceso de RESULTADOS purificación, donde se encuentra concentrado este tipo de alcaloides. Sin embargo, se deduce que En la Tabla 1 se presentan los resultados obtenidos la concentración de éstos es muy baja, lo que se luego de hacer el análisis fitoquímico preliminar de evidencia en la reducida cantidad de precipitado los tres órganos seleccionados de S. schultesiana. obtenido. Revista Colombia Forestal Vol. 12 - Diciembre 2009 167FORESTAL 12.indd 167 5/18/10 4:53:32 PM
  8. 8. Análisis fitoquímico preliminar de hojas, tallos y semillas de cupatá (Strychnos schultesiana Krukoff) Tabla 1. Resultados de los análisis fotoquímicos preliminares de hojas, tallos y semillas de Strychnos schultesiana. Órgano Metabolito Hojas Tallos Semillas Filtrado A +++ + ++ Filtrado B +++ + ++ Filtrado C ++ + + Alcaloides Filtrado D ++ - + Capa acuosa 3 + - + Capa Cloroformo - - - Nafto/Antraquinonas - - - Esteroides y/o triterpenoides libres ++ ++ ++ Flavonoides ++ ++ ++ Taninos + - - Saponinas + - - Glicósidos cardiotónicos - - - Cumarinas - - - Lactonas sesquiterpénicas - - + + Presencia escaza, ++ Presencia relativamente abundante, +++ Presencia abundante, - No detectado. La cromatografía realizada para la detección de dado que el precipitado obtenido es soluble en urea esteroides y/o triterpenos permite determinar la y produce coloración verde tras la adición de cloru- presencia de estos compuestos en las tres muestras ro férrico, se infiere que estos taninos son del tipo evaluadas, lo que se evidencia en la aparición de catéquico o condensados. Sin embargo, la reducida diversas manchas de tonalidades azulosas y roji- cantidad de precipitado obtenido indica una baja zas. Las hojas presentan un mayor número de estos concentración de taninos en la muestra. compuestos en comparación con semillas y tallos. Según lo observado, el lupeol no se encuentra pre- Respecto al análisis de saponinas, sólo el extracto sente en esta planta puesto que en ninguno de los etanólico de las hojas de la especie evaluada pro- órganos evaluados se observan manchas con un va- dujo hemólisis comparable a la observada con el lor de Rf similar al obtenido para este patrón. patrón, mientras que con los extractos de tallos y semillas los eritrocitos permanecieron intactos, El análisis fitoquímico preliminar de hojas, tallos lo que se evidenció por la turbidez de la suspen- y semillas de S. schultesiana permitió comprobar sión de glóbulos rojos. De lo anterior se infiere también la presencia de flavonoides en la especie, que de los tres órganos analizados, sólo las hojas ya que en los tres órganos evaluados se obtuvie- contienen saponinas. Por otro lado, los resultados ron resultados positivos con la reacción de Shi- de la prueba de espuma para semillas y tallos con- noda y con la del ácido clorhídrico. Lo anterior cuerdan con esta conclusión, puesto que al agitar indica la presencia de flavonoides tipo flavona, la muestra no se observó la formación de espuma flavonol, flavanona, flavanonol, isoflavonoide y abundante ni estable; sin embargo, a pesar de los leucoantocianidinas. resultados obtenidos en la prueba de hemólisis para el extracto de hojas, el ensayo de espuma arrojó Por otra parte, puesto que sólo las hojas de S. schul- resultados negativos, lo cual puede deberse a que, tesiana ocasionaron precipitación del reactivo ge- como se expuso anteriormente, no todas las sapo- latina - sal, puede concluirse que en este órgano se ninas tienen la capacidad de producir espuma. Aun concentran los taninos producidos por la planta, y con estos resultados a simple vista contradictorios 168 Revista Colombia Forestal Vol. 12 - Diciembre 2009FORESTAL 12.indd 168 5/18/10 4:53:33 PM
  9. 9. Lyndon Carvajal Rojas / Yoshie Hata Uribe / Noralba Sierra Martínez / Diana Rueda Niño para el extracto de hojas, puede inferirse la presen- observada en el extracto de tallos no reveló, por lo cia de saponinas en él, pues la prueba más conclu- que puede concluirse que aunque los tallos poseen yente para la determinación de saponinas es la de lactonas, no son de tipo terpénico. hemólisis. Para esta especie no se encuentran reportes sobre En cuanto a la detección de glicósidos cardiotóni- composición química. Sin embargo, los resultados cos, ninguno de los esteroides observados tras re- obtenidos del presente análisis fitoquímico preli- velar una de las placas con vainillina presentó co- minar de hojas, tallos y semillas de esta planta co- loración violeta similar a la del patrón en la placa inciden con los reportados para otras especies del revelada con la reacción de Raymond, por lo cual género Strychnos. Ejemplo de lo anterior son los puede deducirse que la especie S. schultesiana no reportes de la presencia de alcaloides en las hojas contiene glicósidos cardiotónicos en hojas, tallos de S. pseudoquina y en semillas de S. nux-vomica ni semillas. Por su parte, el patrón de digitoxina (Nicoletti Colus 1984, Yang Yang 1993, San- produjo coloraciones violetas, al ser revelado tanto tos et al. 2006), flavonoides en hojas de S. pseudo- con el reactivo de vainillina en ácido o-fosfórico quina y S. spinosa (Nicoletti et al. 1984, Hoet et al. como con el de Raymond, tal como se esperaba. 2004, Santos et al. 2006) y esteroides y ácidos gra- sos en raíces y tallos de S. nitida (Gu et al. 1997). Para la detección de cumarinas se emplearon tres Adicionalmente, se reporta la presencia de otros fases móviles, de las cuales aquella constituida por grupos de metabolitos no analizados en esta opor- tolueno-éter etílico (1:1), saturada con ácido acé- tunidad, como lignanos en tallos de S. vanprukii tico al 10%, permitió una mejor separación de los (Thongphasuk et al. 2004), glicósidos fenólicos, componentes de cada extracto, encontrándose así iridoides en madera y corteza de S. axillaris (Itoh una mancha fluorescente bien definida en el ex- y Colus 2008) y ácidos orgánicos como el quínico tracto de tallos, otra en el extracto de semillas y y el logánico y ésteres de los mismos en corteza y cuatro en el de hojas; sin embargo, al revelar con la madera de S. lucida (Itoh et al. 2008). reacción del hidroxamato férrico, ninguna de ellas presentó coloración café similar a la del patrón, descartando así la presencia de cumarinas en los A pesar de no haber detectado cumarinas en el pre- extractos. sente análisis fitoquímico preliminar de S. schulte- siana, se ha reportado la presencia de este tipo de Para confirmar lo anterior, se asperjó una de las metabolitos secundarios en las raíces de S. catha- placas desarrolladas en acetato de etilo, con koh al yensis (Luo 2006). Sin embargo, este es un grupo 5%, con lo cual no se intensificó la fluorescencia de de compuestos cuya presencia no se haya amplia- las manchas observadas, que incluso desapareció, mente descrita en la literatura de otras plantas del confirmando que no se trata de cumarinas sino de género Strychnos, por lo que puede tratarse de un otros compuestos poliinsaturados que pueden fluo- grupo poco difundido en estas especies y presen- rescer también al uv. te en estos órganos (raíces). Además, cabe aclarar que la presencia de un tipo de metabolito en una Por otro lado, si bien los compuestos fluorescentes planta no condiciona su presencia en otras especies presentes en semillas y hojas de S. schultesiana no del mismo género. se colorearon tras revelar la placa con la reacción del hidroxamato férrico, los extractos de tallos y Grupos de metabolitos secundarios como los gli- semillas presentaron manchas de color café que no cósidos antracénicos, los cardiotónicos, saponinas fluorescían al uv, lo que indica la presencia de lac- y taninos, los cuales no fueron detectados en el tonas. Sin embargo, al revelar con el reactivo de presente estudio o sólo fueron detectados en uno vainillina, sólo las lactonas presentes en el extrac- de los órganos evaluados, no se encuentran repor- to de semillas poseen una parte terpénica que se tados en la literatura consultada para otras especies observa de color violeta, mientras que la mancha del género Strychnos. Revista Colombia Forestal Vol. 12 - Diciembre 2009 169FORESTAL 12.indd 169 5/18/10 4:53:34 PM
  10. 10. Análisis fitoquímico preliminar de hojas, tallos y semillas de cupatá (Strychnos schultesiana Krukoff) CONCLUSIONES Luo, T. 2006. Studies on the chemical consti- tuents and biological activities from the stem Los resultados del análisis fitoquímico preliminar of Pourthiaea lucida and the root of Strych- efectuado sobre la muestra de hojas de S. schul- nos cathayensis. Master’s Thesis. Gradua- tesiana Krukoff evidencian la presencia de alca- te Institute of Pharmaceutical Technology, loides, taninos, flavonoides, saponinas, esteroides Tajen University. Taiwan. Disponible en: y/o triterpenoides. Los tallos y las semillas de la http://192.192.215.232/ETD-db/ETD-search/ misma especie presentan alcaloides, flavonoides, view_etd?URN=etd-0717107-162042 lactonas y esteroides. En estos órganos no se de- tectó la presencia de saponinas ni taninos. Las se- Missouri Botanical Garden. 2008. Disponible en: millas contienen lactonas terpénicas, mientras que http://www.tropicos.org/ en los tallos se encuentran lactonas pero no de tipo Nicoletti, M., M. Goulart., R. de Lima, A. esteroidal. En ninguno de los órganos evaluados se Goulart, F. Delle Monache G. Marini encontró la presencia de cumarinas ni glicósidos Bettolo. 1984. Flavonoids and alkaloids from cardiotónicos o antraquinónicos. Strychnos pseudoquina. J. Nat. Prod. 47 (6): 953-957. AGRADECIMIENTOS Newman, D. J., G. M. Cragg K. M. Snader. A la Corporación para el Desarrollo del Área del 2003. Natural products as sources of new drugs Manejo Especializado la Macarena “CORMACA- over the period 1981 - 2002. Journal of Natural RENA”, por la financiación de este proyecto el Products 66: 1022-1037. cual se desarrolló en el marco del convenio 05 de Sanabria, A. 1983. Análisis fitoquímico prelimi- 2001 suscrito con la Universidad Distrital Francis- nar. Metodología y su aplicación en la evalua- co José de Caldas. ción de 40 plantas de la familia Compositeae. Facultad de Ciencias, Departamento de Far- REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS macia, Universidad Nacional de Colombia. Calixto, J. B. 2000. Efficacy, safety, quality con- Bogotá. trol, marketing and regulatory guidelines for Santos, F., I. Colus, M. Silva, W. Villegas E. herbal medicines (phytotherapeutic agents). Varanda. 2006. Assessment of dna damage by Brazilian Journal of Medical and Biological extracts and fractions of Strychnos pseudoqui- Research 33: 179-189. na, a Brazilian medicinal plant with antiulcero- Cañigueral, S. 2002. La fitoterapia: ¿una terapéu- genic activity. Food and Chemical Toxicology tica para el tercer milenio? Revista de Fitotera- 4 (9): 1585-1589. pia (2): 101-121. Sharapin, N. 2002. Materias primas vegetales Gu, Z., T. Li, P. Xiao, J. Chen W. Lian. 1997. para la industria de productos fitofarmacéuti- Chemical constituents of Strychnos nitida G. cos. Revista de Fitoterapia 1 (3): 23-28. Don. Zhongguo Zhong Yao Za Zhi 22 (1): 40- Thongphasuk, P., R. Suttisri, R. Bavovada R. 41. Verpoorte. 2004. Antioxidant lignan gluco- Hoet, S., F. Opperdoes, R. Brun, V. Adjakidjé sides from Strychnos vanprukii. Fitoterapia 75 J. Quetin-Leclercq. 2004. In vitro antitrypa- (7-8): 623-628. nosomal activity of ethnopharmacologically World Health Organization (WHO). 1993. Re- selected Beninese plants. Journal of Ethno- search guidelines for evaluating the safety and pharmacology 91 (1): 37-42. efficacy of herbal medicines. Geneva. Pg. 57. Itoh, A., Y. Tanaka, N. Nagakura, T. Nishi Yang, X. Z. Yan. 1993. Studies on the chemical T. Tanahashi. 2006. A quinic acid ester from constituents of alkaloids in seeds of Strychnos Strychnos lucida. J. Nat. Med 60: 146-148. nux-vomica L. Zhongguo Zhong Yao Za Zhi 18 (12): 739-40, 763-764. 170 Revista Colombia Forestal Vol. 12 - Diciembre 2009FORESTAL 12.indd 170 5/18/10 4:53:35 PM

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