Fitoquímica

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Fitoquímica

  1. 1. FITOQUÍMICA
  2. 2. “ TÉCNICAS DE EXTRACCIÓN E IDENTIFICACIÓN DE PRINCIPIOS ACTIVOS DE PLANTAS MEDICINALES”
  3. 3. LA EXTRACCIÓN DEL MATERIAL VEGETAL Se puede dividir en: Parte aérea – (flores, fruto, semillas, hojas y tallo) Raíz El estudio fitoquímico, puede ser de la planta en general ó en sus respectivas partes que la constituyen, para un mejor análisis.
  4. 4. EXTRACTO ETÉREO La planta seca y molida se extrae en un Soxhlet, con éter de petróleo o hexano durante 7 días a una temperatura de 20º- 30ºC. Al término de éste tiempo observar si hay un precipitado, en caso de tenerlo, filtrar inmediatamente y evaporar el filtrado.
  5. 5. El filtrado etéreo ya evaporado:1. Se refluja con metanol una hora (15ml de metanol por cada gramo de extracto)2. Se deja enfriar3. Separar el insoluble4. Pesar lo insoluble y soluble5. Si es posible tomar el punto de fusión al insoluble y sacar cromatografía.6. Al soluble en metanol sacar cromatografìa y pesarlo.
  6. 6. De 3 a 4 gramos de extractosoluble en metanol (yaevaporado) montarlo en unacolumna empacada con sílicagel (35-70 mesh Astm), serequiere 20 gramos de sílicapor cada gramo de extracto.
  7. 7. Extracto etéreo o hexánico soluble enmetanol mezclado con sílica gelSilica gel tipo 60 (35-70 mesh Astm) Algodón
  8. 8. Empezar a eluir la columna ELUENTE PROPORCIÓN HEXANO HEXANO-ACETONA 9.5 / .5 HEXANO-ACETONA 9.0 / 1.0 ACETONA ACETONA-METANOL 9.5 / .5 ACETONA METANOL 9.0 / 1.0 METANOLRecolectando fracciones de 125 ml
  9. 9. PRUEBAS PARA DETECTARTIPOS DE COMPUESTOS EN LOS EXTRACTOS Punto de fusión del precipitado. Observar las cromatografìas al UV marcando las manchas fluorescentes con un capilar. Revelar con Yodo (revelador general) Observar. Revelar con cloruro de cobalto. Revelar con: Dragendorff modificado (si la mancha persiste más de 24 horas, es positiva para alcaloides). Erlich (revelador, para compuestos con anillo furánico)
  10. 10. PRUEBAS QUÍMICASPRELIMINARES PARA TODO TIPO DE EXTRACTO  Saponinas  Shinoda  Taninos  Antrona  Nitrato de plata  Liebermann-Burchard
  11. 11. EXTRACTO METANÓLICO Después de haber extraído la planta conéter o hexano se extrae ahora con metanoldurante 7 dìas, al término de este tiempoobservar si hay precipitado, en caso dehaberlo filtrar, pesar y al filtradoevaporarlo y pesarlo.
  12. 12. Al filtrado metanólico (yaevaporado), se extrae concloroformo y agua en unaproporción 3 / 1 en un embudode separación, agitar y dejarreposar 20 minutos En ocasiones se formantres capas, que son:
  13. 13. • Capa acuosa.- Liofilizar, para sus pruebas químicas preliminares.• Capa intermedia.- Filtrar a sequedad para sus pruebas físicas y químicas• Capa clorofórmica.- Evaporar, para montarlo en la columna y empezar a eluirla como lo descrito en el extracto etéreo.
  14. 14. EXTRACTO ACUOSO Después de haber extraído la planta enSoxhlet con los solventes anteriores, toca el turnoahora de hacer la extracción con agua (destilada),durante 7 días. La solución acuosa se le hace la extraccióncon acetato de etilo en un embudo de separación,para separar lo soluble e insoluble
  15. 15. A lo soluble en acetato de etiloevaporarlo y pesar para montarcolumna, empezando a eluir concloroformo, cloroformo-metanol 9.5 /1.5 , 9 / 1 ......... hasta llegar a metanol. Al insoluble (solución acuosa),liofilizar
  16. 16. ARRASTRE POR VAPORLos aceites esenciales se obtienen por éste método con planta fresca y los componentes del aceite, se pueden separar por medio de la columna cromatográfica, eluyendo primero con:  Éter de petróleo o hexanoy después se va aumentando la polaridad.
  17. 17. El agua que quedó del arrastre por vapor se le hace laextracción con cloroformo en un aparato líquido-líquido , durante 5 días a una temperatura de 30°- 40° C El extracto clorofórmico se evapora y es lo que se montara en columna, eluyendo con solventes de polaridad creciente.Fig. 32. Extractor líquido-líquido
  18. 18. EXTRACTO METANÓLICO DIRECTO Material Vegetal Metanol (Soxhlet) Sol Metanol Ins Metanol REFLUJO 1 hr. HexanoSol Hexano Ins Hexano Cloroformo Sol Cloroformo Ins Cloroformo Acetato de Etilo Sol Acetato de Ins Acetato de Etilo Etilo
  19. 19. LIXIVIACIÓN DE MATERIAL VEGETAL Es dejar el material vegetal fresco en unrecipiente (del tamaño que se requiera según lacantidad de material vegetal) a temperaturaambiente, durante tres dìas, con acetona, sínser necesario cortar en trozos dicho material. Después de este tiempo se decanta y seevapora la acetona.
  20. 20. BIOENSAYOS Y PRUEBAS QUIMICAS PRELIMINARES PARA DETECTARACTIVIDAD BIOLÓGICA EN VARIAS PLANTAS.
  21. 21. Utilizando pequeñas cantidades de materialvegetal se pueden hacer extracciones, paradeterminar mediante pruebas químicaspreliminares que tipos de compuestos puedancontener, las diferentes plantas a examinar Así también se obtienen pequeñascantidades de extracto en forma más rápida, pararealizar los bioensayos y determinar la actividadbiológica de cada una de las plantas.
  22. 22. Los compuestos puros se sometena diversos métodos para elucidar su estructura.
  23. 23. MétodosMétodos Físicos Espectroscópicos 1.- Punto de fusión. 1.- Ultravioleta. 2.-Resonancia Magnética Nuclear. 3.-Infrarrojo. 4.- Rotación Óptica. 5.- Espectro de Masas 6.- Espectro de Difracción de Rayos X
  24. 24. Métodos Químicos1.- Ignición2.- Instauraciones.- Prueba de tetranitrometano (TNM).3.- Prueba de bromo en tetracloruro de carbono4.- Prueba de permanganato de potasio5.- Grupo carbonilo.- Prueba de la 2, 4-dinitrofenilhidrazina6.- Grupo carboxilo.- Prueba de bicarbonato de sodio.7.- Oxhidrilos fenólicos, (Taninos).- Prueba de cloruro férrico8.- Esteroides y triterpenos. Prueba de Liebermann- Burchard.9.- Saponinas10.- Flavonoides
  25. 25. 11.- Carbohidratos.- Prueba de la Antrona12.- Coumarinas.-13.- Alcaloides.- Prueba de Dragendorff.14.- Ehrlich.-15.- Prueba de aromaticidad.-16.- Prueba para identificar nitritos (NO2)17.- Prueba para cloruros.-18.- Prueba de Belstein.- (halógenos),19.- Prueba para identificar Cianuros.-20.- Para identificar una sal de cloruro de amonio (NH4Cl), agregar hidróxido de sodio y tapar con papel ph idriòn y ver los cambios; NH4Cl + NaOH NaCl + NH4OH
  26. 26. PREPARACIÒN DE ALGUNOS REVELADORES PARA CROMATOGRAFÌA EN CAPA DELGADA1. CLORURO DE COBALTO (Revelador general)2. DRAGENDROFF MODIFICADO3. EHRLICH (Para compuestos con anillo furánico)4. REVELADOR PARA POLIHOLES5. MARQUIZ (Revelador de alcaloides)
  27. 27. 6. REVELADOR PARA QUINONAS7. REVELADOR PARA SESQUITERPENLACTONAS8. REVELADOR PARA AZÚCARES.-9. REVELADOR PARA ACEITES ESCENCIALES.-10. REVELADOR PARA FLAVONOIDES (SALES DE DIAZONIO).-11. REVELADOR PARA COMPUESTOS QUE LLEVE EL GRUPO CETONA.-12. REACTIVO DE KELLER – KILLIANI (Para glicósidos cardiotónicos),
  28. 28. La naturaleza nos ofrece una gama extensade compuestos con actividad biológica,muchos de ellos aún a la espera de serdescubiertos. El uso de las plantasmedicinales, no significa que se va a eliminarla vegetación o ir en contra de la Ecología yaque después de ser encontrado elcomponente con actividad biológica, éstepuede ser posteriormente sintetizado en loslaboratorios.
  29. 29. En algunos casos, un compuesto vegetal se puede “copiar” en el laboratorio, es decir, sintetizarlo completamente en grandescantidades, como la L Efedrina, originalmenteaislado de Ephedra distachya, que se emplea contra el asma y la fiebre del heno.
  30. 30. Y saber que en México contamos con unagran cantidad de especies vegetales y porque no, también contamos con curanderosindígenas, con grandes conocimientos queheredaron de sus ancestros y así podríamosaprender, a contribuir a un mejor desarrollosocial, económico y de salud para el país,con beneficio general para la humanidad,descubriendo y desentrañando los misteriosde las plantas medicinales.

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