CROMATOGRAFÍA   JOEL SANTOS LOPEZ PEREZ             Lic.:        OMAR TORRES    QUIMICO FARMACEUTICO   UNIVERSIDAD DE CÓRD...
INTRODUCCIÓNLa clorofila es un pigmento de las plantas, que les proporciona su color verde yque absorbe la luz necesaria p...
OBJETIVOSGENERAL      Realizar procesos de deshidratación, extracción y separación de        diferentes pigmentos vegetal...
 .Aplicar la cromatografía como técnica de separación de mezclas de     sustancias, aprovechando sus características y lo...
presiones para lograr que fluya la fase móvil. De esta manera nació la técnicade cromatografía liquida de alta resolución,...
Fraccionamiento cromatografico: Recolección de pequeñas cantidades de lamuestra vegetal extraída mediante un proceso de se...
TÉCNICAS GENERALES DE SEPARACIÓN                                  (CROMATOGRAFÍA CAPA FINA Y EN COLUMNA)  DESHIDRATACIÓN  ...
Se guardan para después                                                   seguir con las placas                           ...
DESARROLLO DEL PROCEDIMIENTO Y RESULTADOSDESHIDRATACIÓN: En un erlermeyer colocamos unos 50g de la muestra (salsa de tomat...
EXTRACCIÓN La muestra es colocada en una bolsa de papel filtro bien envuelta para que no seSalga, para así ser colocada en...
FRACCIONAMIENTO CROMATOGRAFICO: El filtrado que obtuvimos de la extracción lo utilizamos para realizar las placas.Aquí tom...
ANÁLISIS POR ESPECTROSCOPIA VISIBLE:Se prepara un proceso de columna en el cual se coloca la base de Silica gel enéter de ...
Una vez que salga la primera gota de la columna montada se coloca un frascopequeño y se van cogiendo las muestras con los ...
ANÁLISIS DE RESULTADOSEl licopeno es el carotenoide más abundante en el tomate. Aunque elcontenido depende mucho del grado...
PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS  1. Realizar una búsqueda bibliográfica de la especie trabajada en el     laboratorio     Clasif...
REINO:             PlantaeDIVISIÓN:          MagnoliophytaCLASE:             MagnoliopsidaSUBCLASE:          AsteridaeORDE...
Su llegada a EuropaLos tomates amarillos fueron los primeros en cultivarse en Europa; más tarde, losde color rojo se hicie...
β-caroteno, entre un 3-7%, y otros como son el γ-caroteno, que al igual que el β-caroteno tienen actividad provitamínica A...
Se ha demostrado una reducción importante en el riesgo del cáncer de próstata alconsumir tomates, salsa de tomates, kétchu...
Para cuantificar el licopeno del tomate, en el proceso de mezcla, hay que añadirsolvente tantas veces como sea necesario h...
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cromatografia técnica utilizada para separar compuestos por medio de dos faces una movil y otra estacionaria.... o extracción de un principio activo de un medicamento.

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  1. 1. CROMATOGRAFÍA JOEL SANTOS LOPEZ PEREZ Lic.: OMAR TORRES QUIMICO FARMACEUTICO UNIVERSIDAD DE CÓRDOBAFACULTAD: CIENCIAS DE LA SALUDPROGRAMA REGENCIA EN FARMACIA MONTERÍA _ CÓRDOBA 2011
  2. 2. INTRODUCCIÓNLa clorofila es un pigmento de las plantas, que les proporciona su color verde yque absorbe la luz necesaria para la fotosíntesis, principalmente luz violeta roja yazul y refleja luz verde.Los Pigmentos vegetales, que se encuentran en los cloroplastos, son moléculasquímicas que reflejan o transmiten la luz visible, o hacen ambas cosas a la vez. Elcolor de un pigmento depende de la absorción selectiva de ciertas longitudes deonda de la luz y de la reflexión de otras. Constituyen el sustrato fisicoquímicodonde se asienta el proceso fotosintético.Hay diversas clases de pigmentos:• Clorofilas (a, b, c, d y bacterioclorofilas) de coloración verde.• Carotenoides (carotenos y xantofilas) de coloración amarilla y roja.• Ficobilinas de coloración azul y roja presentes en las algas verdeazuladas, quecomprenden el filo de los Coanocitos.Los colores que presentan los vegetales son debido a unos compuestos químicosllamados pigmentos; el color que presenta un determinado órgano vegetaldepende generalmente del predominio de uno a otro pigmento o la combinaciónde ellos. Además, algunos de los pigmentos que condicionan el color estánestrechamente ligados a las actividades fisiológicas del propio vegetal.El estudio de los diferentes pigmentos presentes en los vegetales se puedenestudiar a partir de unas técnicas cromatografías que permiten conocer losdistintos carotenos presentes en las plantas.Estas técnicas dependen en gran forma de la distribución de los componentes dela mezcla de una muestra entre dos fases inmiscibles: una fase móvil, llamadatambién activa, que transporta las sustancias que se separan y que progresa enrelación con la otra, denominada fase estacionaria. La fase móvil puede ser unlíquido o un gas y la estacionaria puede ser un sólido o un líquido. Lascombinaciones de estos componentes dan lugar a los distintos tipos de técnicascromatografías.
  3. 3. OBJETIVOSGENERAL  Realizar procesos de deshidratación, extracción y separación de diferentes pigmentos vegetales, mediante técnicas cromatografías que permitan identificar los metabolitos presentes en estas.ESPECIFICOS  Seleccionar una serie alotrópica de eluentes que mejor separe los carotinoides presentes en diferentes muestras vegetales. .  Desarrollar fraccionamiento cromatografico, mediante con el mejor eluente que contribuya a la extracción de carotinoides hasta aislar compuestos puros y caracterizarlos por métodos de coloración, cromatografías.  Conocer otros sistemas cromatografico para la separación de carotenos.
  4. 4.  .Aplicar la cromatografía como técnica de separación de mezclas de sustancias, aprovechando sus características y los factores que en ella intervienen.  Analizar la influencia del diclorometano en la separación cromatografía, mediante su comportamiento frente a las distintas técnicas utilizadas para la determinación de su eficacia.  Determinar la efectividad de la cromatografía de capa fina y en columna, a partir de la muestra salsa de tomate, para la asimilación de sus diferentes pigmentos. TEORÍA RELACIONADALa cromatografía es un método físico de separación basado en la distribuciónde los componentes de una mezcla entre dos fases inmiscibles, una fija oestacionaria y otra móvil.En cromatografía liquida la fase móvil es un liquido que fluye a través de unacolumna que contiene la fase fija.La cromatografía liquida “clásica” se lleva a cabo en una columnageneralmente de vidrio, la cual está llena con la fase fija. Luego de sembrar lamuestra en la parte superior, se hace fluir la fase móvil a través de la columnapor efecto de la gravedad con el objeto de aumentar la eficiencia en lasseparaciones, el tamaño de las partículas de fase fija se fue disminuyendohasta el tamaño de los micrones, lo cual genero la necesidad de utilizar altas
  5. 5. presiones para lograr que fluya la fase móvil. De esta manera nació la técnicade cromatografía liquida de alta resolución, que requiere de instrumentalespecial que permita trabajar con altas presiones requeridas.Tanto los extractos de los productos naturales, como los crudos de lasreacciones orgánicas, suelen res mezclas multicomponentes, a menudo muycomplejas. Este hecho constituyo un serio impedimento para el estudio deunos y de otros, por parte de los químicos, hasta la implantación de losmodernos métodos de separativos. Entre estos, uno de los de mayorrevelación ha alcanzado, es la cromatografía de absorción en columna.Es comprensible que, después de realizar una reacción largo tiempoprogramada, les resulte duro separar al desenlace de una separacióncromatografía, que puede requerir semanas para disponer de una muestra deproductos puros.El proceso desarrollado para la obtención y estudio de los distintos pigmentosde los vegetales se puede realizar mediante:Deshidratación: Es la pérdida excesiva de agua y sales minerales de uncuerpo. Puede producirse por estar en una situación de mucho calor (sobretodo si hay mucha humedad). En plantas se realiza con el fin de que lamuestra quede libre de solventes, utilizando un alcohol, y sometiendo acalentamiento durante uno minutos. Por último se filtra sobre gasa o algodón.Extracción: Método utilizado para la preservación de la muestra vegetal,donde se presenta evaporación del solvente de los extractos a presiónreducida, lo que permite una mayor concentración de la muestra mediante ladisminución de la temperatura de ebullición del solvente, para la obtención deun mejor extracto.
  6. 6. Fraccionamiento cromatografico: Recolección de pequeñas cantidades de lamuestra vegetal extraída mediante un proceso de separación que permiteobtener los carotenos en partes menos sucias de la muestra.Cromatografía en capa fina: Está basada en la preparación de una capa,uniforme, de un adsorbente mantenido sobre una placa de vidrio u otrosoporte. Los requisitos esenciales son, pues, un adsorbente, placas de vidrio,un dispositivo que mantenga las placas durante la extensión, otro para aplicarla capa de adsorbente, y una cámara en la que se desarrollen las placascubiertas. Es preciso también poder guardar con facilidad las placaspreparadas y una estufa para activarlas.La fase móvil es líquida y la fase estacionaria consiste en un sólido. La faseestacionaria será un componente polar y el fluyente será por lo general menospolar que la fase estacionaria, de forma que los componentes que sedesplacen con mayor velocidad serán los menos polares.Cromatografía en columna: En esta cromatografía, las moléculas de unamezcla son separadas con base a la afinidad de las moléculas por la faseestacionaria o por la fase móvil. Si una molécula A tiene más afinidad por lafase estacionaria que la B, B bajará más rápido que A.
  7. 7. TÉCNICAS GENERALES DE SEPARACIÓN (CROMATOGRAFÍA CAPA FINA Y EN COLUMNA) DESHIDRATACIÓN EXTRACCIÓN FRACCIONAMIENTO ANÁLISIS CROMATOGRAFICO CROMATOGRAFICO EN CAPA FINA La muestra se coloca Se coloca 30g de la en un sistema de Se escogen tres Se hace una muestra en un reflujo solventes preparación de erlermeyer (fresca y columna triturada) Luego 1. Diclorometano Teniendo esto montado con laSe coloca a baño maría Se le adiciona 2. Diclorometano 98:2 silica gel y lapor 5 minutos diclorometano 3. Diclorometano 9.1 muestra se observa gran variación de colores Calentamiento y filtramos Filtramos Este se extrae varias veces paraSe guarda protegido En cada solvente se Una vez caiga la primera un buende luz, humedad, y coloca una placa para gota se van cogiendo cada mejoramientocalor. saber cual es más una de las fases en frascos eficiente pequeños estos van de Este es colocado en colores diferentes un rota evaporador Se escoge el para recuperar la solvente con el Este filtrado se fase orgánica que se va a guarda protegido de trabajar durante el la luz, calor paspo sgte
  8. 8. Se guardan para después seguir con las placas MATERIALES Y REACTIVO2 Baker de 400ml2 erlermeyer1 estufa1 agitadorMuestra (zanahoria fresca y triturada)ReactivosDi cloro metanoDi cloro hexano1:1Hexano octato 4:1Etanol al 95%Sulfato de sodioÉter de petróleo
  9. 9. DESARROLLO DEL PROCEDIMIENTO Y RESULTADOSDESHIDRATACIÓN: En un erlermeyer colocamos unos 50g de la muestra (salsa de tomate) se leadicionó un volumen suficiente de etanol al 95% hasta cubrir la muestra, luego sepuso a baño maría durante unos 5 minutos, lo filtramos en caliente con papel filtro;procurando así que la muestra quede libre de solvente. Esta muestra se colocó enun frasco con tapa y se cubrió bien con papel aluminio para así evitar que losrayos de luz lleguen a ella.
  10. 10. EXTRACCIÓN La muestra es colocada en una bolsa de papel filtro bien envuelta para que no seSalga, para así ser colocada en un extractor o un sistema de reflujo; se le adicionaun volumen determinado de diclorometano.”Se debe tener cuidado con estossolventes puesto que pueden ser tóxicos”.Después de un tiempo se filtra sola, el residuo se extrae varias veces con el fin deobtener el mayor rendimiento posible. El extracto que queda es colocado en unrota evaporador para recuperar la fase orgánica se seca con sulfato de sodio. Estefiltrado que queda de los carotinoides se guarda, se tapa bien para protegerlo dela luz, humedad, color y aire.
  11. 11. FRACCIONAMIENTO CROMATOGRAFICO: El filtrado que obtuvimos de la extracción lo utilizamos para realizar las placas.Aquí tomamos tres placas para realizar cromatografía en capa fina se marcarespectivamente de 1 al 3 y se colocan en diferentes solventes.1: CH2Cl (DCM).2: DCM 98.23: DCM 9.1Luego al ver el profesor las placas y detallar bien el movimiento que tuvo cadasolvente nos recomendó que el sistema más conveniente para seguir trabajandoera el solvente diclorometano (DCM)
  12. 12. ANÁLISIS POR ESPECTROSCOPIA VISIBLE:Se prepara un proceso de columna en el cual se coloca la base de Silica gel enéter de petróleo o n-hexano se le adiciona la muestra y se le coloca un pedacito dealgodón, ya teniendo todo esto montado se observan varios colores en diferentelugar de la columna. Todo esto para así realizar las cromatografías necesariaspara encontrar l RF.
  13. 13. Una vez que salga la primera gota de la columna montada se coloca un frascopequeño y se van cogiendo las muestras con los colores respectivos, que se vanreuniendo para realizar la cromatografía. Ya teniendo la cantidad suficiente defrascos con el liquido se van enumerando correctamente 1,2,3,4,5,……… teniendoya esto se colocan en una placa para cromatografía de menor a mayor. Ya hechaslas primeras placas se empiezan a unir las que más se parezca, para realizarotras placas mas .esta última placa es donde se va a definir el RF.
  14. 14. ANÁLISIS DE RESULTADOSEl licopeno es el carotenoide más abundante en el tomate. Aunque elcontenido depende mucho del grado de maduración (aumenta con ella),exposición a la luz (también aumenta), tipo de suelo, y de la variedad, puedeconsiderarse representativa la cifra de 40 mg de licopeno por cada 100gramos.Una diferencia fundamental entre la estructura del licopeno y la del b-carotenoes que los anillos de los extremos se encuentran abiertos. De hecho, ellicopeno es el precursor biocinética del b-caroteno en el tomate. El licopeno notiene actividad como vitamina A, pero es un antioxidante muy eficiente frente aloxigeno ringlete, el que más de todos los carotenoides comunesA medida que se efectuó la extracción de los pigmentos carotenoides senotaron los cambios en la coloración de la muestra; puesto que se partió deuna pasta color rojo intenso y después de mezclar el producto con el solventeutilizado, se adquirieron soluciones con distintos matices al color de origen.
  15. 15. PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS 1. Realizar una búsqueda bibliográfica de la especie trabajada en el laboratorio Clasificación taxonómica Prescripción botánica Componentes químicos 2. Tipos de pigmentos presentes en la especie 3. Que tipos de pigmentos de acuerdo a la coloración y su RF fueron aislados de la especie analizada SOLUCIÓNTOMATE
  16. 16. REINO: PlantaeDIVISIÓN: MagnoliophytaCLASE: MagnoliopsidaSUBCLASE: AsteridaeORDEN: SolanalesFAMILIA: SolanaceaeGÉNERO: SolanumESPECIE: S. lycopersicumSolanumSOLANUM LYCOPERSICUMLa tomatera, es una planta de la familia de las solanáceas (solanáceas) originariade America y cultivada en todo el mundo por su fruto comestible, llamado tomate(o jitomate en el sur y centro de Mexico. Dicho fruto es una baya muy coloreada, típicamente de tonos que van delamarillento al rojo, debido a la presencia de los pigmentos (licopeno y caroteno).Posee un sabor ligeramente ácido, mide de 1 a 2 cm de diámetro en las especiessilvestres, y es mucho más grande en las variedades cultivadas.Se produce y consume en todo el mundo tanto fresco como procesado dediferentes modos, ya sea como salsa, puré, jugo, deshidratado o enlatado.HISTORIALos españoles distribuyeron el tomate a lo largo de sus colonias en el caribedespués de la conquista de Sudamérica. También lo llevaron a Filipinas y por allíentró al continente asiatico.
  17. 17. Su llegada a EuropaLos tomates amarillos fueron los primeros en cultivarse en Europa; más tarde, losde color rojo se hicieron más populares.TOMATE ROJO, CRUDO  Valor nutricional por cada 100 g Energía 20 kcal 80 kJ Carbohidratos 4g Azucares 2.6g Grasas 0.2g Proteinas 1g Agua 95g Vitamina C 13 mg (22%)El tomate es una fuente importante de ciertos minerales (como el potasio y elmagnesio). De su contenido en vitaminas destacan la B1, B2, B5 y la vitamina C.Presenta también carotenoides como el licopeno (pigmento que da el color rojocaracterístico al tomate).La vitamina C y el licopeno son antioxidantes con una función protectora denuestro organismo. Durante los meses de verano, el tomate es una de las fuentesprincipales de vitamina C. En la tabla se provee información sobre los principalesconstituyentes nutritivos del tomate.En nuestra dieta obtenemos licopeno a partir de alimentos muy definidos,fundamentalmente a través del consumo de tomate y derivados (salsas, tomatefrito, tomate triturado, kétchup, pizzas, zumos) y de sandía. En el tomate maduro, el carotenoide mayoritario es el licopeno que lo contiene enaproximadamente en un 83% y en porcentaje también importante, se encuentra el
  18. 18. β-caroteno, entre un 3-7%, y otros como son el γ-caroteno, que al igual que el β-caroteno tienen actividad provitamínica A, fitoeno, fitoflueno, etc.El contenido en licopeno aumenta con la maduración de los tomates y puedepresentar grandes variaciones según la variedad, condiciones del cultivo como eltipo de suelo y clima, tipo de almacenamientoEstructura del ß-carotenoEstructura del licopenoCÓMO ACTÚA EL LICOPENOEstas sustancias se encuentran en el tomate fresco y en todos sus derivados:jugos, salsas y conservas. Del grupo de los carotenoides es el más abundante enla sangre, se almacena en hígado, pulmones, próstata, cuello uterino, colon y piel.Su principal función es ser antioxidante, es decir, evita por ejemplo que elcolesterol “malo” o LDL se oxide y produzca daños (lo que se denomina “estrésoxidativo”), el mecanismo de acción consiste en actuar sobre los radicales libres,moléculas extremadamente inestables con gran poder reactivo que se producennormalmente en el organismo por el contacto con el oxígeno, afectando lasmembranas celulares y atacando el material genético de las células.
  19. 19. Se ha demostrado una reducción importante en el riesgo del cáncer de próstata alconsumir tomates, salsa de tomates, kétchup y extracto de tomate con unafrecuencia superior a 2 veces por semana.PROPIEDADES MEDICINALES DE LAS HOJASLas hojas de la tomatera tienen sus aplicaciones en medicina popular, pues conellas se prepara un cataplasma emoliente, que da muy buenos resultados en lasinflamaciones, para ello simplemente se aplica a la parte afectada una vez que hasido triturada y literalmente asada. CONCLUSIONPor medio de esta practica se logró extraer de la salsa de tomate los carotenos opigmentos pertenecientes a este producto, los cuales poseen gran cantidad delicopeno y en este caso le proporcionan el color rojo que caracteriza al tomate,siendo este su pigmento vegetal constituyente. Sin embargo, la finalidad de estapractica era realizar dicha separación y esto no hubiera sido posible sin laaplicación de las distintas técnicas cromatograficas, las cuales brindan un espectrocompleto y detallado de las fracciones o manchas obtenidas.
  20. 20. Para cuantificar el licopeno del tomate, en el proceso de mezcla, hay que añadirsolvente tantas veces como sea necesario hasta la desaparición de la coloración,y así poder calcular con la mayor exactitud la concentración de licopeno. Mientrasque si sólo se quiere identificar es necesario tan sólo un poco de color para leer suespectro en el espectrofotómetro.La importancia de esta práctica radica en que nos permite determinar y conocerprocesos como deshidratación, extracción y separación de los diferentespigmentos vegetales, mediante las técnicas anteriormente mencionadascontribuyendo a la identificación de los metabolitos presentes en cada muestra.Además ayuda a distinguir los distintos eluentes y eluyentes a utilizar en dichoprocedimiento, observando las fases que intervienen en cada prueba y lossolventes empleados en la separación de los pigmentos, para identificar laproporción en que existen los distintos metabolitos constituyentes de la muestra detomate utilizada. BIBLIOGRAFIADavid Abbot y R.S. Andrews “Introducción a la cromatografía”, 2ª ed. Madrid:Alhambra, 1970.Martínez Martínez, A. “Carotenoides”. [en línea]. Facultad de QuímicaFarmacéutica. Medellín: Universidad deAntioquia, 2003.
  21. 21. INFOGRAFIAhttp://www.alimentariaonline.com/http://www.scielo.clhttp://upcommons.upc.edu

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