1. HONGOS ENDOFITOS EN PLANTAS MEDICINALES. Jorge Ramírez Solveig Tosi Mayo, 2007 UNIVERSIDAD TECNICA PARTICULAR DE LOJA Primeras Jornadas Andinas de Etnomedicina.

2. INTRODUCCION La palabra endófito se deriva del griego endon , que significa dentro y phyte que significa planta. Grupo muy interesante de microorganismos asociados a plantas terrestres y acuáticas. Seis de los veinte medicamentos más comúnmente prescritos son de origen fúngico . (Gloer 1997)

3. INTRODUCCION 5 % de los hongos han sido descritos, (Hawksworth 1991, 2001). Gran Fuente potencial para nuevos Productos. ( Schulz et al., 2002). Solo existen datos de hongos epifitos asociados a diversas especies de Baccharis, Piper y Borreria (Farr et al., 1995). En la mayoría de Plantas la presencia de hongos endófitos es beneficiosa. (Siegel & Scharld, 1991)

5. MATERIALES Y METODOS Al Sur del Ecuador en la Provincia de Loja. Lugar de estudio Figura 1: Localización geográfica de la provincia de Loja, mapa creado en SIG-UTPL 2005. Figura 2 : Localización de las zonas de muestreo. En la zona 1 fueron colectadas: Baccharis latifolia , Baccharis obtusifolia y Borreria laevis , mientras que en la zona 2 se colecto Piper barbatum . Mapa creado en el SIG-UTPL 2006

6. MATERIALES Y METODOS Las hojas se lavaron con agua potable y fueron esterilizadas superficialmente por inmersiones consecutivas, durante 1 minuto en etanol 70% (v/v), 10 minutos en hipoclorito de sodio 3% y 30 segundos en etanol 70% (v/v) siguiendo el método reportado por Bills (1996). Recolección y Tratamiento de la muestra 10 hojas al azar 10 Individuos 1 2 3 4 Cada hoja Inoculo al azar / 1 pedazo Medio MEA Aislamiento MEA MEA MEA 2 2-1 2-2 2-3

7. MATERIALES Y METODOS Evaluación de la Interacción Antagonista entre los aislados Fúngicos y Hongos y Bacterias Patógenas. Las bacterias fueron inoculadas con Tryptic Soy Agar (TSA; DIFCO), como medio de cultivo e incubadas a 37 ºC, hasta observar crecimiento. Los hongos fueron inoculados con Potato Dextrosa Agar (PDA; DIFCO), como medio de cultivo e incubados en el laboratorio a temperatura ambiente (25 ± 2ºC) expuestos a periodos naturales de luz y oscuridad.

8. MATERIALES Y METODOS Prueba Hongo-Hongo Método Fokkema (1973). Formula de Van Den Heuvel.

9. MATERIALES Y METODOS Prueba Hongo-Bacteria Prueba similar a la anterior, del un lado el micelio fúngico y del otro la bacteria

10. RESULTADOS Y DISCUSION En la tabla, se enlistan los taxa de hongos encontrados en las cuatro especies de plantas medicinales investigadas X (10 %) Zygomycetes-like X (10%) Stilbacea X (10 %) Phoma-like X (10%) Nigrospora sp. X (70%) X (10%) X (40%) X (100%) Micelia sterilia X (10 %) X (10%) Epicoccum-like X (20%) Coelomycetes X (20%) Aspergillus sp. X (10 %) X (30 %) X (70 %) Alternaria sp. X (10 %) X (20 %) Alternaria-like Piper barbatum Baccharis obtusifolia Baccharis latifolia Borreria laevis Aislados fúngicos

11. RESULTADOS Y DISCUSION Alternaria- like Alternaria sp Coelomycetes Nigrospora sp . Zygomicetes- like X1000 X400 X400 X1000 X400

12. RESULTADOS Y DISCUSION Diversos taxa aislados, son: Alternaria, Epicoccum, Nigrospora, Phoma resultando como hongos ambientales comunes, estos se encuentran comúnmente en el aire, como epifitos o en asociación con numerosos sustratos (Domsch et al., 1980). Mayoritariamente se ha aislado Micelia sterilia en las cuatro especies de plantas medicinales investigadas, hongos interesantes que viven en posible asociación endófitica. Dato que arroga una perspectiva muy amplia para el aislamiento de metabolitos secundarios, de interés potencial.

13. RESULTADOS Y DISCUSION Pruebas de Interacción entre Hongos y Bacterias. En la tabla , se presenta los resultados de la interacción antagonista de algunas de las cepas de hongos aislados frente a microorganismos patógenos (Hongos y Bacterias). El porcentaje de inhibición I1, esta referido a la inhibición del patógeno sobre la cepa ensayada y el porcentaje de inhibición I2, esta referido a la inhibición de la cepa sobre el patógeno. + + + + 21,74 32,14 Stilbacea + - + + 39.13 7.14 Micelia sterilia 3 - - - - 25.87 15.85 Micelia sterilia 2 + * * + 39,13 10,71 Micelia sterilia 1 + + + + 21 25 Epicoccum-like + + + + 22 15,93 Nigrospora sp. + + + + 8,7 37,5 Phoma-like + + + + 17,37 26,78 Alternaria-like + + + + 36,95 17,86 Alternaria sp. I 2 % I 1 % Staphylococcus aureus Pseudomonas aeruginosa Klebsiella pneumonie Escherichia coli Aspergillus niger Aislados Fúngicos

14. RESULTADOS Y DISCUSION Cultivo Doble. Inhibición de K pneumoniae de parte de Micelia sterilia 3 Cultivo Doble. Inhibición de E coli de parte de Nigrospora sp. Cultivo Doble. Inhibición de Aspergillus niger de parte phoma -like. Cultivo Doble. Inhibición de Aspergillus niger de parte alternaria- like.

15. RESULTADOS Y DISCUSION El potencial bioactivo de los hongos aislados es prometedor, la mayoría muestran propiedad antagonista positiva tanto con bacterias como también con Aspergillus niger . Principalmente las tres cepas que no han fructificado nombrados como Micelia sterilia , exhiben antagonismo positivo.

16. CONCLUSIONES Micelia sterilia fue la cepa fúngica mayoritariamente aislada en las cuatro especies de plantas medicinales estudiadas, principalmente en Borreria laevis (Lam.) Grises, se encontró presente en todos los individuos muestreados. Los géneros de Alternaria sp., fueron comúnmente aislados en Baccharis latifolia (Ruiz & Pav.) Pers., Piper barbatum Kunth y Borreria laevis (Lam.) Grises. Los géneros Phoma-like y Nigrospora sp., además la Familia de Moniliales, ( Stilbacea ), se aislaron de manera común en Borreria laevis (Lam.) Grises. Los géneros, Zygomycetes- like, Aspergillus sp y los hongos Coelomycetes , se aislaron de forma común en Piper barbatum Kunth. Epicoccum-like , fue un género fúngico aislado tanto en Borreria laevis (Lam.) Grises. como también en Piper barbatum Kunth

17. CONCLUSIONES Los resultados de los ensayos de bioactividad, mediante cultivo doble, evidencian que, Alternaria sp, Micelia sterilia 1(Hospedero Baccharis latifolia ), Micelia sterilia 2 (Hospedero Borreria laevis ) y Micelia sterilia 3 (Hospedero Baccharis obtusifolia ), muestran actividad antifúngica, aunque débil contra Aspergillus Níger. La mayoría de las cepas fúngicas testadas, muestras actividad antibacteriana, en contra de Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa y Staphylococcus aureus. El resultado mas interesante se muestra en lo referente al Micelio estéril 3 (Hospedero Baccharis obtusifolia ), pues este muestra una marcada actividad antibacteriana, principalmente frente a Klebsiella pneumoniae.

18. Gracias