1. Nucleolar proteins with altered expression in leukemic cell lines. Kaisa J. Teittinena, Pauliina Kärkkäinena, Johanna Salonenb, Gunilla Rönnholmc, Hanna Korkeamäkia, Mauno Vihinenb, Nisse Kalkkinenc, Olli Lohia

2. leukemia. Leukemia is cancer of the blood cells. It starts in the bone marrow (the soft tissue inside most bones. Bone marrow is where blood cells are made). Normally the bone marrow makes: White blood cells (which help body fight Infection), Red blood cells (which carry oxygen to all parts of body) and Platelets (which help blood clot). With leukemia, the bone marrow starts to make a lot of abnormal white blood cells, called leukemia cells. They don't do the work of normal white blood cells, they grow faster than normal cells, and they don't stop growing when they should. Over time, leukemia cells can crowd out the normal blood cells. This can lead to serious problems such as anemia, bleeding, and infections. Leukemia cells can also spread to the lymph nodes or other organs and cause swelling or pain. INTRODUCTION.

3. leukemia is grouped by how fast it gets worse and what kind of white blood cell it Affects: -Acute leukemia gets worse very fast and cause symptoms in few time. -Chronic leukemia gets worse slowly and may not cause symptoms for years. -Lymphocytic (or lymphoblastic) leukemia affects white blood cells called lymphocytes. -Myelogenousleukemia affects white blood cells called myelocytes. types .

4. Acute lymphoblastic leukemia, or ALL. Acute myelogenous leukemia, or AML. Chronic lymphocytic leukemia, or CLL. Chronic myelogenous leukemia, or CML. types .

5. There are more likely to get leukemia when people: Was exposed to large amounts of radiation. Was exposed to certain chemicals at work, such as benzene. Had some types of chemotherapy to treat another cancer. Have Down syndrome or some other genetic problems. Smoke. Risk factors.

6. Prohibitin. Mitochondrial prohibitin complexes control cell proliferation, cristae morphogenesis and the functional integrity of mitochondria. TDP-43. has been shown to be involved in regulation of pre-mRNA splicing and repression of transcription. Nuclear proteins.

7. Nucleophosmin. It is essential for normal embryonic development and, specifically, for the control of centrosome duplication and genomic stability. Nuclear proteins.

8. Some Proteins can be find with an altered expression in the nucleoli of leukemic cells (changes in nucleolar proteomes). Prohibitin (PHB) and TAR-DNA-binding protein-43 (TDP-43) were strongly expressed in the nucleoli. Our results demonstrate that leukemic cells have differences in their nucleolar protein composition, and suggest that it may be possible to exploit these differences in identification of leukemia subtypes. Nucleolar protein-leukemia

9. This study aimed to identify nucleolar proteins that are differen- tially expressed in various cell lines derived from acute leukemias. Objective.

10. MATERIALES Y METODOS.

11. FUNDAMENTO: aislar células (ya sean células procariotas, eucariotas o vegetales), cultivarse en condiciones controladas y obtener poblaciones celulares homogéneas para estudiar los procesos que ocurren en las células. ¿Para que?: Se realizo el cultivo para poder estudiar en el laboratorio estas células plasmáticas. CULTIVO.

12. FUNDAMENTO: una manera eficiente para aislar y obtener nucléolos purificados sin las demás partes del núcleo. ¿para que?: para poder medir la concentración de proteínas totales en los nucléolos. AISLAMIENTO NUCLEOLOS.

13. FUNDAMENTO: Separa las proteínas según su punto isoeléctrico y peso molecular. ¿para que?: Análisis de los extractos nucleolares y sus características. 2 DIGE.

14. FUNDAMENTO: identificar proteínas. ¿para que?: identificar las proteínas nucleolares. IDENTIFICACION DE PROTEINAS.

15. FUNDAMENTO: detectar proteínas específicas en una muestra determinada. ¿Para que?: Detectar las proteínas: PHB y TDP-43. WESTERN BLOT.

16. FUNDAMENTO: se emplean anticuerpos para tinción de las proteínas. ¿para que?: producir la tinción de las proteínas: PHB y TDP-43. INMUNOFLUORECENCIA.

17. RESULTADOS Leucemogénesis nucleolar Fundamento: Aproximación proteómica para buscar proteínas cuya expresión varía entre diferentes tipos de células leucémicas.

20. RESULTADOS Para facilitar el lugar recogiendo los geles 2-DE fueron post-teñidas con plata. Por último, las manchas de las proteínas seleccionadas fueron digeridas "en gel" y luego sometidas anano LC-de masas en tándem análisis de espectrometría

21. RESULTADOS MASCOTA MS / MS programa de Búsqueda de Ion.

22. RESULTADOS Expresión nucleolar de PHB Western blot análisis en los extractos nucleolares de laslíneas de células leucémicas. Igualdad de cargas de las muestras. Expresión nucleolar de TDP-43 y su región terminal N (TDP-43-N) Western blot análisis. Igualdad de cargas de las muestras.

23. RESULTADOS Análisis densiométrico de las intensidades de las bandas en el panel A normalizado a los niveles de CCRF-CEM. 2.9 y 1.8 a 2.7

24. RESULTADOS Tinción de inmunofluorescencia de PHB en los preparativos nucleolares de CCRF-CEMy FH-CALL-3 células. Tinción de inmunofluorescencia de TDP-43 en los preparativos nucleolar de CCRF-CEM y las células MHH-CALL3. DAPI, 4,6-diamidino-2-phenylindole.

25. DISCUSSION

27. MAPA CONCEPTUAL

28. MAPA CONCEPTUAL

29. Mapa conceptual.

30. Gracias…