1. METODOS MICROBIOLOGICOS
1. Aislamiento y cultivo de los
microbios
2. Métodos de esterilización
3. Requerimientos nutritivos de los
microbios
4. Medios de cultivo y como se
preparan
5. Condiciones que se requieren para
el cultivo de microbios

2. AISLAMIENTO Y CULTIVOS

3. REQUERIMIENTOS PARA UN CULTIVO PURO
• Medio de cultivo: Estéril, material
nutritivo necesario para el crecimiento
• Recipientes adecuados: Tubos ensayo,
erlemmeyer, taponados.
• Aislamiento: separar de poblaciones
mixtas, asa de transferencia o pipeta
• Condiciones de trabajo: Estériles.

4. AISLAMIENTO EN MEDIOS SOLIDOS
• Diseñar medios de cultivo
• Nutrientes y las condiciones
físicas que permitan el
crecimiento
• pH
• Agar
• Colonias

5. AISLAMIENTO EN MEDIOS SÓLIDOS
• En el estudio microbiológico, el
primer paso es la separación de la
población mixta a un cultivo puro y
luego su posterior identificación
(familia, género, especie).
Existen algunos métodos:
• Cultivo en estrías simples y
compuestas
• Difusión en placa
• Vertido en placa
• Técnica del micromanipulador

6. Cultivo en estrías
• Transfiere de una
población mixta a un
tubo que contenga agua
destilada estéril o salina.
• Estrías simples. Con una
asa estéril se transfiere
una alícuota a la placa
efectuando estrías sin
levantar el asa.

7. • Mediante un asa con hilo de platino previamente esterilizada en la
llama de un mechero y enfriada en el agar, se deposita en un
medio sólido, una pequeña cantidad de la muestra y se distribuye
extendiéndola sobre ella.
• De este modo, las bacterias se van distribuyendo sobre la
superficie del agar y separándose unas de otras.
• Los microorganismos se adhieren a la superficie del medio y se
multiplican formando colonias.
• Cada una de estas colonias se ha originado a partir de la
multiplicación de una sola célula.
• Al trasladar una de estas colonias aislada a una nueva placa
(repique), se obtendrá un cultivo puro en el que todas las colonias
presentarán las mismas características.
• Este sistema de siembra en estrías en placas de Petri con medios
sólidos es el procedimiento habitual para aislar bacterias en
cultivos puros.

8. Estrías simples.
• Se deposita el inóculo en
cualquier zona de la placa.
• Se extiende el inóculo en forma
continua sobre la superficie del
medio de cultivo.
• Se debe evitar el no cubrir toda
la superficie del medio de
cultivo, ya que ello implicará
una mala distribución del
inóculo y debido a ello el
crecimiento será compacto.

9. Estrías compuestas
• Se extiende el inóculo sobre una
pequeña zona de la placa de Petri.
• Se esteriliza el asa para trazar dos
estrías a partir del inóculo depositado.
Una de ellas se hace sólo hasta el
centro de la placa de Petri.
• Se vuelve a esterilizar el asa y se
realizan una serie de estrías paralelas a
las dos primeras.
• Luego de esterilizar el asa nuevamente,
se hacen una serie de estrías
perpendiculares a las dos primeras,
pero comenzando desde el lado
opuesto al depósito y sin llegar a
tocarlo.

10. • Se parte de una población mixta y
se prepara una suspensión
microbiana
• Se coge con una pipeta una alícuota
de la suspensión microbiana y se
coloca una gota en el centro de la
placa y luego con un dispersor se
extiende en todas las direcciones.
Esperar el aparecimiento de
colonias y repetir hasta cultivo puro.
Difusión en placa

11. • El método del vertido en placa consiste en que por medio de un
asa con hilo de platino se transfiere una pequeña cantidad de
inóculo a partir de una suspensión bacteriana, esporas de un
hongo, o de un cultivo mixto, a un tubo de agar nutritivo fundido
y enfriado a 45°C (tubo a).
• El tubo se hace girar entre las manos para mezclar bien el
material inoculado. Con una pipeta Pasteur se traslada una
pequeña cantidad de la suspensión desde el tubo a al b y desde
el b al c, mezclando bien después de cada traspaso.
• El contenido de los tubos a, b, y c, se vierte por separado en
placas de Petri. Las placas de Petri se incuban a la temperatura
deseada por un lapso de 24 a 48 horas, luego se examinan para
buscar colonias aisladas.
• Para la obtención de un cultivo puro, se repica una colonia
aislada a otra placa de Petri con medio nutritivo y se incuba por
24 a 48 horas a la temperatura deseada.
• La técnica de dilución seriada en medios líquidos es similar a la
anterior, sólo que se utilizan medios de cultivos líquidos en
tubos de ensayo.
Vertido en placa y dilución seriada

12. • El micromanipulador se utiliza asociado
al microscopio y permite tomar un solo
microorganismo desde una preparación
en gota pendiente.
• A través del micromanipulador, el
operador puede dirigir el movimiento de
una micropipeta dentro de una gota
pendiente y tomar una sola célula
bacteriana que se transfiere a un medio
apropiado para su desarrollo.
• Esta técnica se utiliza en estudio
especializados como en genética y se
requiere de mucha práctica y habilidad
para trabajar con ella.
Técnica del micromanipulador

13. Aislamiento de hongos
a) Aislamientos a partir de micelio o esporulación.
• Con un asa previamente flameada en la llama del
mechero y enfriada, se procede a extraer una pequeña
cantidad de micelio o esporas del hongo y se depositan
en la placa de Petri con medio de cultivo.
• Si el hongo a aislar careciera de esporulación o micelio, el
sustrato se deja en una cámara húmeda durante 24 - 48
horas a 20°C.

14. b) Aislamientos a partir de cuerpos de resistencia o tejido
• Se lavan los cuerpos de resistencia (o tejido) en agua corriente.
• Se depositan en una placa de Petri estéril que posea una
solución de hipoclorito de sodio al 10% durante 1 minuto.
• El cuerpo de resistencia o tejido desinfectado se deposita en
una placa de Petri estéril que posea agua esterilizada y luego
se pasa a otra placa con papel filtro también estéril con el
objeto de secar el material.
• Cortar con la ayuda de un bisturí y pinza en trozos pequeños
que luego se depositan en la placa de Petri con el medio de
cultivo adecuado.
• Es necesario señalar que en el caso de aislamiento a partir de
tejido, éste se realiza a partir de la zona de avance del hongo.
• Con el objeto de inhibir el desarrollo bacteriano en el
aislamiento de hongos, se utilizan compuestos como los
antibióticos, o ácido láctico al 25% (3-5 gotas por 100 ml de
medio de cultivo estéril) que se adicionan al medio de cultivo.

15. ESTERILIZACION
• Comprende todos los
procedimientos físicos, mecánicos y
preferentemente químicos, que se
emplean para destruir gérmenes
patógenos.
• Métodos:
Químicos: Con oxido de etileno
Aldehídos
gas-plasma de Peróxido de
Hidrogeno
Físicos: Calor, Radiaciones
Filtración
Agentes esterilizantes y
desinfectantes

16. Calor
• La utilización de este método y
su eficacia depende de dos
factores: el tiempo de exposición
y la temperatura.
• Todos los microorganismos son
susceptibles, en distinto grado, a
la acción del calor. El calor
provoca desnaturalización de
proteínas, fusión y
desorganización de las
membranas y/o procesos
oxidantes irreversibles en los
microorganismos.
Métodos físicos

17. • El calor seco produce desecación de la
célula, es esto tóxicos por niveles
elevados de electrolitos, fusión de
membranas.
• Estos efectos se deben a la
transferencia de calor desde los
materiales a los microorganismos que
están en contacto con éstos.
• La acción destructiva del calor sobre
proteínas y lípidos requiere mayor
temperatura cuando el material está
seco o la actividad de agua del medio
es baja.
Calor seco

18. • Doble cámara, el aire caliente generado por
una resistencia, circula por la cavidad
principal y por el espacio entre ambas
cámaras, a temperatura de 170º C para el
instrumental metálico y a 140º C para el
contenido de los tambores.
• Se mantiene una temperatura estable
mediante termostatos de metal, que al
dilatarse por el calor, cortan el circuito
eléctrico.
Ventajas del calor seco:
• No es corrosivo para metales e instrumentos.
• Permite la esterilización de sustancias en
polvo y no acuosas, y de sustancias viscosas
no volátiles.
Desventajas:
• Requiere mayor tiempo de esterilización,
respecto al calor húmedo, debido a la baja
penetración del calor.
Estufa

19. • El calor húmedo produce
desnaturalización y coagulación de
proteínas.
• Estos efectos se debe
principalmente a dos razones:
• El agua es una especie química muy
reactiva y muchas estructuras
biológicas son producidas por
reacciones que eliminan agua.
• El vapor de agua posee un
coeficiente de transferencia de calor
mucho más elevado que el aire.
Calor húmedo

20. Autoclave
• Se realiza la esterilización por el vapor de agua a
presión. El modelo más usado es el de
Chamberland.
• Esteriliza a 121º a una atmósfera de presión (estas
condiciones pueden variar si se deja el material
durante 15 a 30 minutos.
Equipo:
• Consta de una caldera de cobre, sostenida por una
camisa externa metálica, que en la parte inferior
recibe calor por combustión de gas o por una
resistencia eléctrica, esta se cierra en la parte
superior por una tapa de bronce.
• Esta tapa posee tres orificios, uno para el
manómetro, otro para el escape de vapor en forma
de robinete y el tercero, para una válvula de
seguridad que funciona por contrapeso o a resorte.

21. Funcionamiento
• Se coloca agua en la caldera, procurando que su nivel no
alcance a los objetos que se disponen sobre una rejilla de
metal.
• Se cierra asegurando la tapa, sin ajustar los bulones y se da
calor, dejando abierta la válvula de escape hasta que todo el
aire se desaloje y comience la salida de vapor en forma de
chorro continuo y abundante.
Tyndalización
• Esterilización por acción discontinua del vapor de agua, se
basa en el principio de Tyndal.
• Las bacterias que resisten una sesión de calefacción, hecha en
determinadas condiciones, pueden ser destruidas cuando la
misma operación se repite con intervalos separados y en
varias sesiones.
• Se efectúa por medio del autoclave de Chamberland, dejando
abierta la válvula de escape, o sea funcionando a la presión
normal.
• Puede también realizarse a temperaturas más bajas, 56º u 80º
ocúpara evitar la descomposición de las sustancias a
esterilizar, por las temperaturas elevadas.

22. Ventajas del calor húmedo:
• Rápido calentamiento y penetración
• Destrucción de bacterias y esporas en
corto tiempo
• No deja residuos tóxicos
• Hay un bajo deterioro del material
expuesto
• Económico
Desventajas:
• No permite esterilizar soluciones que
formen emulsiones con el agua
• Es corrosivo sobre ciertos instrumentos
metálicos

23. Esterilización por agentes químicos
• Agente químico para que sea efectivo debe ser tóxico y
volátil.
• El más usado es el oxido de etileno
H2C ---- CH2
O
• Incoloro, olor parecido al éter, punto de ebullición es de 10,7ºC
• Peligro es muy inflamable. Se mezcal el oxido con CO2 o con el freón evita la
inflamación del diclorodifluormetano (CCl2F2) y lo reduce.
Ventaja
• Es muy tóxico incluso para las esporas y los animales
Desventaja
• No usar los productos hasta después de 24 horas de ser esterilizada.
Esta esterilización se realiza a 50 ºC y solo se usa para casos especiales como
platos petri y pipetas de plástico

24. Esterilización por filtración
• Es costoso y se usa para materiales sensibles al calor
• Se usan membranas filtrantes con poros de un tamaño
determinado. El tamaño del poro dependerá del uso al
que se va a someter la muestra (0,01- 10μ).
• Los filtros que se utilizan no retienen virus ni
micoplasmas, estos últimos están en el límite de
separación según el diámetro de poro que se utilice.
• La filtración se utiliza para emulsiones oleosas o
soluciones termolábiles.
• Se usa para esterilizar aceites, algunos tipos de
pomadas, soluciones oftálmicas, soluciones
intravenosas, drogas diagnósticas, radiofármacos,
medios para cultivos celulares, y soluciones de
antibióticos y vitaminas.

25. Existen tres tipos básicos de filtros:
Filtros profundos o Filtros de profundidad
• Consisten de un material fibroso o granular prensado, plegado, activado, o pegado
dentro de los canales de flujo.
• En este tipo de filtros la retención de las partículas se produce por una
combinación de absorción y de retención mecánica en la matriz.
Membranas filtrantes
• Tienen una estructura continua, y la retención se debe principalmente al tamaño
de la partícula.
• Partículas más pequeñas al tamaño del poro quedan retenidas en la matriza del
filtro debido a efectos electrostáticos.
Filtros de huella de nucleación (Nucleoporo)
• Son películas muy delgadas de policarbonato que son perforadas por un
tratamiento conjunto con radiación y sustancias químicas.
• Son filtros con orificios muy regulares que atraviesan la membrana verticalmente.
Funcionan como tamices, evitando el paso de toda partícula con un tamaño
mayor al del poro.

26. Esterilización por radiaciones
Su acción depende de:
• El tipo de radiación
• El tiempo de exposición
• La dosis
• Ionizantes
• Producen iones y radicales libres que alteran las
bases de los ácidos nucleicos, estructuras proteicas
y lipídicas, y componentes esenciales para la
viabilidad de los microorganismos.
• Tienen gran penetrabilidad y se las utiliza para
esterilizar materiales termolábiles (termosensibles)
como jeringas descartables, sondas, etc.
• Se utilizan a escala industrial por sus costos.

27. Rayos Ultravioletas
• 150 a 3900 Aº (2650 Aº)
• Son escasamente penetrantes y se
utilizan para superficies, se utilizan
para la esterilización en quirófanos,
se requiere de periodos largos y
además es danino para los ojos.
• Afectan a las moléculas de DNA de
los microorganismos.

28. Rayos Gamma
• (0,01 a 1 Aº). Producen iones y radicales libres que
alteran las bases de los ácidos nucleicos, estructuras
proteicas y lipídicas y componentes esenciales para la
viabilidad de los microorganismos.
• Posee gran penetrabilidad, se esteriliza materiales
termolábiles, jeringas descartables, sondas.
• Se utiliza a escala industrial por su costo.
• Puede esterilizar antibióticos, vacunas, alimentos, etc.
• Transmitida por compuestos isótopos radioactivos
Cobalto 60. Alto poder de penetración.
• Radiaciones ionizantes extrae electrones y forma iones
letales.
• Su empleo esta basado en los conocimientos sobre la
energía atómica.

29. (50000-1000000 Aº). Su empleo
esta basado en los conocimientos
sobre la energía atómica. Se aplica
productos o materiales termolábiles
y de importancia en el campo
industrial. Antibióticos, vacunas,
alimentos.
Rayos Infrarojos

30. Agentes esterilizantes
ANTISÉPTICOS
• Alcoholes
• Yodo
• Agentes catiónicos, aniónicos
y anfóteros
• Órgano mercuriales
• Colorantes
DESINFECTANTES
Y/O
ESTERILIZANTES
• Cloro y compuestos clorados
• Aldehídos
• Oxido de etileno
• Compuestos fenólicos
• Ácidos y álcalis

31. REQUERIMIENTOS NUTRITIVOS
NUTRIENTES. Materiales básicos
para la vida, pues a partir de esta
materia orgánica, sintetizan
materia viva y energía necesaria
para esta síntesis.
COMPOSICION QUIMICA DE LA
CELULA BACTERIANA
AGUA. 80 – 90% de la célula,
disueltos los compuestos
químicos del protoplasma.

32. Elementos
% peso
seco Función
Carbono 50% Constituyen los comp. orgánicos
Oxigeno 20% C.Org, Aceptor final e- en cadena respir.
Hidrógeno 8% Forma parte Comp.organ
Nitrógeno 14% Comp. Org, P,E, CoeE, A.N
Azufre 1% Comp. Org, P, CoeE, A.N
Fósforo 2% Comp. Org, A.N, Fosf, CoeE
95%

33. • 5% restante constituye, K, Mg, Ca, Fe, Mn, Co,
(Na, Cl), (Cu, Zn, Mo)
• K. Catión inorgánico, actúa cofactor en
reacciones orgánicas.
• Mg. Activador inorgánico de enzimas, en
formación de ATP, componente de la pared y
membrana celular y clorofila
• Ca. Cofactor en reacciones, Endosporas
• Fe. Cofactor importante de la cadena
respiratoria siendo cofactor de los citocromos
• Mn. Cofactor suele remplazar al Mg cuando es
necesario, interviene en reacciones del ATP
• Co. Vitamina B12 importante en los S.V.
• Na, Cl. Bacterias halofilas
• Cu, Zn y Mo. Forman parte de ciertas enzimas
especiales como la nitrogenasa

34. CLASIFICACION DE LOS MICRO DE ACUERDO A
REQUERIMIENTOS NUTRITIVOS
Los Seres Vivos, clasifican de acuerdo a
dos criterios
a) Fuente de ∑
b) Fuente de carbono

35. Luz Fotótrofos
1. Fuente de energía Comp. Químicos Org e Inorg (Quimiot)
CO2 Autótrofos
2. Fuente de carbono Comp. Orgánicos Heterótrofos
Organismos Fotoautótrofos.
Utilizan luz como fuente de energía
Y el CO2 como fuente carbono
Organismos Fotoheterótrofos
Luz como fuente de energía
Compuestos orgánicos como fuente
de carbono

36. Organismos Quimioautótrofos.
Compuestos químicos inorgánicos como
fuente de energía y CO2 como
fuente de carbono (bacterias
primitivas).
Organismos Quimioterótrofos.
Compuestos orgánicos tanto como
fuente de energía y como fuente de
carbono (microbios patógenos).
Organismos Potótrofos.
Son aquellos que no requieren factores
de crecimiento
Organismos Auxotrofos.
Son aquello que requieren factores de
crecimiento
Organismos Copiótrofos.
Requieren altos niveles de nutrientes
Organismos Oligotrofos.
Requieren bajos niveles de nutrientes

37. MEDIOS DE CULTIVOS
Es la sustancia o mezcla de sustancias que se utiliza
para cultivar microbios la que proporciona
nutrientes necesarios para el crecimiento de los
mismos. Tipos de medios de cultivo
1. Medio sintético. La composición química exacta
del cultivo es conocida es decir el tipo de
molécula y la cantidad de todos los nutrientes.
Ejemplo: bacterias quimioautótrofas que
oxidan el azufre.
Azufre en polvo 10 g
Sulfato de amonio 0,4 g
Fosfato de potasio di básico 4 g
Cloruro de calcio 0,25 g
Sulfato de Mg heptahidratado 0,5 g
Sulfato de hierro 0,01 g
Agua destilada 1000 ml

38. 2. Medio complejo. (básico) la composición química
exacta del cultivo no se conoce, es el mas utilizado
y crecen la mayoría de microorganismos
heterótrofos. Ejemplo: agar nutritivo que esta
constituido por:
a. Extracto de carne. Proporciona al medio
carbohidratos, compuestos orgánicos
nitrogenados, vitaminas, sales. 3 g/lt.
b. Peptona. Compuesto resultante de la
descomposicion de material proteico como:
extracto de carne, leche, gelatina. La peptona es la
principal fuente de N. orgánico para los microbios
aporta con vitaminas y carbohidratos. 5 g/lt
c. Agar. Carbohidrato de estructura bastante
compleja se extrae de algas rojas, solo es un
agente solidificante. 15 g/lt. Extracto de carne +
peptona = caldo nutritivo
3. Medio Enriquecido. Medio básico + una sust. Da lugar
al crecimiento de heterótrofos fastidiosos. Ejm.
Cuando a un medio básico se le añade extracto de
levadura, al extracto se le prepara con agua
destilada, se lo deja toda la noche y al día
siguiente se lo recoge solo lo superficial.

39. 4. Medio selectivo. Se obtiene cuando a un medio básico o
enriquecido se le añade sust. Que permite el
crecimiento de ciertos microbios pero no de otros. Ejm.
Ciclohexamina. Crecimiento de bacterias
Estreptomicina. Crecimiento de hongos
5. Medio diferencial. Se obtiene cuando a un medio básico o
enriquecido se le añade sust. Que permite el
crecimiento de microbios en una forma típica o que
provoca algún cambio típico en el medio como
resultado de crecimiento. Ejm. Si al medio se le añade
azul de bromotimol (indicador de pH) el medio torna
una coloración azul verdosa bien típica, cuando se
inocula los microbios al medio se puede tornar azul o
amarillo. Si el microbio produce álcali (base) se torna
azul cuando el pH sube, si el medio produce ácido el
medio se hace amarillo el pH baja.
• En otros casos se añade sangre al medio se torna rojo,
pero si en este crecen bacterias hemolíticas, el medio se
produce zonas claras ya que las bacterias destruyen los
glóbulos rojos.

40. PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVOS
SUSTANCIAS NATURALES. Si el medio es una sustancia
natural como la leche, lo único que se debe hacer es
dispersar el medio sobre recipientes adecuados y
esterilizar.
• Mezcla de sustancias
1. Pesar
2. Disolver
3. Medir el pH. No pH indicado 0,1 a 0,5 N de NaOH o
HCl
4. Dispersar
5. Esterilizar

41. CONDICIONES NECESARIAS PARA EL CRECIMIENTO DE LOS
MICROORGANISMOS
TEMPERATURA. Crecimiento esta en relación a la Tº,
o el metabolismo esta en relación a la Tº.
• Existen tres tipos de Tº
• Tº óptima. Crecimiento máximo
• Tº máxima. Crecimiento se detiene normalmente,
resulta la muerte de microbios por la coagulación
de proteínas
• Tº mínima. Bajo crecimiento se detiene a
diferencia de la máxima no mueren permanecen
en refrigeración a 4 o 5ºC y no crecen.

42. Rangos de temperatura
• Psicrófilos. Tº =< 0ºC – 15 a 20ºC
• P obligados. No crecen a Tº > 20ºC
• P facultativos. Crecen a Tº > 20ºC
• Mesófilos. 25 y 40 ºC
• Termófilos. Crecen Tº > 55ºC y óptima
45 a 60ºC
• T obligados. No crecen < 37ºC
• T facultativos. Crecen > 37ºC

43. OXIGENO
• Aceptor final en la cadena respiratoria.
Atmósfera 20 – 22%. Gas altamente
reactivo. SV necesitan para respirar
• Aeróbicos
• Anaeróbicos
• A. obligados. No crecen en oxigeno
• A aerotolerantes. No oxigeno pero crecen
en presencia de oxigeno
• A facultativos. Si hay oxigeno utilizan y si
no hay viven en el.
• Microaerófilos. No utilizan el oxigeno que
esta al 22% porque es tóxico. Utilizan de 2
a 10%

44. Anaeróbico obligado
• Algunas alternativas
• Uso de agente reductantes. Elimina
el oxigeno. Tioglocolato de sodio
• La remoción mecánica del oxigeno.
Bomba extrae el oxigeno y se
remplaza con N2, H2, CO2
• Reacción química. Mueve el oxigeno
del recipiente en donde se hace el
cultivo.

45. pH
• pH = 1/log (H+)
• Prevenir el cambio de pH
• Buffer. Parejas de sustancias que resisten el cambio
de pH. Fosfatos buffer fuente de fósforo para el
crecimiento de microbios
• Pareja de sustancias el uno es una sal débilmente
ácida y el otro es una sal débilmente básica.
• Acido. Sustancia que libera iones hidrógeno en el
agua
• Base. Sustancia que libera iones OH en solución.
• Una sal débilmente ácida es el fosfato de potasio
monobásica KH2PO4 y la sal débilmente acida es
K2HPO4

46. COMO ACTUAN LOS BUFFER
• K2HPO4 + HCl KH2PO4 +KCl sal débilmente acida,
mantiene el pH no cambia
• KH2PO4 + KOH K2HPO4 + H2O sal débilmente básica.
• Los fosfatos neutralizan y no es tóxico para los microbios
y actúan como fuente de fósforo
• Sin embargo en ocasiones la cantidad de ácido es muy
alto el fosfato buffer no es suficiente en este caso se usa.
• Carbonatos insolubles. Carbonato de calcio CaCO3
H H
• CO3
-2 HCO3
- H2CO3 CO2 + H2O

47. CULTIVO EN ESTRIAS
• Transferir una población mixta

48. CULTIVO EN ESTRIAS SIMPLES
• Asa estéril de transferencia
• Zic - zac

49. CULTIVO EN ESTRIAS COMPUESTAS
• Más laborioso
• Resultados mejores

50. DIFUSION EN PLACA
• Una gota en el centro
con una pipeta estéril
• Difusor se extiende en
todas las direcciones

51. CULTIVO VERTIDO EN PLACA
• Medio líquido a 45 C
• Pipeta estéril – alícuota
• Transferir a otro tubo

52. TECNICA DEL MICROMANIPULADOR
• El micromanipulador se utiliza
asociado al microscopio y permite
tomar un solo microorganismo
desde una preparación en gota
pendiente

53. COMO SE ESTERILIZA RECIPIENTES Y MEDIOS DE CULTIVOS

54. ESTERILIZACION
• Eliminación de toda forma viviente de
un medio de cultivo u objeto
• Agentes letales de los microbios
• Naturaleza fisica o química
• Filtraciones
• Radiaciones

55. ESTERILIZACION MEDIANTE EL CALOR
• Más utilizado
• Calor húmedo y seco

56. CALOR SECO
• Estufa. 240 C
• Requiere más tiempo y temperatura
• Resistencia de microbios al calor seco
• Materiales de vidrio o metálicos
• Envueltos en papel periódico o aluminio
• 160 C 2 horas 170 C1,5 horas

57. Ventajas del calor seco
• No es corrosivo para
metales e instrumentos.
• Permite la esterilización
de sustancias en polvo y
no acuosas, y de
sustancias viscosas no
volátiles.

58. Desventajas
– Requiere mayor tiempo de
esterilización, respecto al calor
húmedo, debido a la baja penetración
del calor

59. CALOR HUMEDO
• Mejor conductor del calor
• Autoclave
• Sube la presión y temperatura y mata
• Presión 121C 1,0546 Kg/cm2 o 15 lb/pulg2
• Mar 1,013 Kg/cm2
• Medios líquidos
• Esterilización fraccionada

60. Ventajas del calor húmedo
Rápido calentamiento y
penetración
• Destrucción de bacterias
y esporas en corto
tiempo
• No deja residuos tóxicos
• Hay un bajo deterioro
del material expuesto
• Económico

61. Desventajas
• No permite esterilizar
soluciones que formen
emulsiones con el agua
• Es corrosivo sobre ciertos
instrumentos metálicos

62. ESTERILIZACION POR AGENTES QUIMICOS
• Agente químico sea efectivo debe ser tóxico y vólatil
O
• Oxido de etileno H2C --- CH2
• Incoloro,olor parecido al eter
• Punto de ebullición 10,7 C
• Es muy inflamable mezcla con CO2 o el FREON (CCl2F2)
• Tóxico para esporas
• Usar recipientes cerrados
• No usar el producto 24 horas después esterilizado
• 50 C y 33-100% HR
• Casos especiales, platos petri, pipetas de plástico

63. ESTERILIZACION POR FILTRACION
• Es costoso
• Materiales sencibles al calor
• Filtros con poros muy pequeños
• Tamaño 0,01 y 10 micrometros

64. ESTERILIZACION POR RADIACIONES
• Es muy caro
• Requiere equipo sofisticado
Su acción depende de:
• El tipo de radiación
• El tiempo de exposición
• La dosis
• Ionizantes:

65. RAYOS ULTRAVIOLETAS
• Son de baja penetración
• Salas quirúrgicas
• Periódos largos y daña a los
ojos
• Actúan al ser absorvidos por
las proteínas y A. nucleicos
• 2650 A

66. RAYOS INFRAROJOS
• Sobre la luz visible
• 50000 a un millón
• Actúa por la alta energía
térmica

67. RAYOS GAMA
• Son de muy pequeña longitud de honda
• Radiaciones ionizantes
• Extrae electrones y forman iones letales
• Su empleo esta basado en los conocimientos sobre la energía
atomica.
• Este tipo de esterilización se aplica a productos o materiales
termolábiles y de gran importancia en el campo industrial.
• Puede esterilizar antibióticos, vacunas, alimentos, etc.