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  • 1. Universidad de Carabobo
    Facultad de Ciencias de la Salud
    Escuela de Medicina “Dr. Witremundo Torrealba”
    Departamento de Fisiología y Bioquímica
    Sede Aragua
    Cromatografía
    Luis Marín
    Luisana Lugo
    Víctor Loaiza
    Maracay, Marzo de 2010
  • 2. ¿Que es la Cromatografía?
    Es un conjunto de Técnicas basadas en el principio de retención selectiva, cuyo objetivo es separar los distintos componentes de una mezcla, permitiendo identificar y determinar las cantidades de dichos componentes
  • 3. ¿Que es la Cromatografía?
    Fase Móvil
    Consiste en un liquido o gas que es arrastrado a través de la fase estacionaria
    Fase Estacionaria
    Consiste en un solido o un liquido fijado a un solido por donde el cual pasa la fase móvil
  • 4. Tipos de Cromatografía
    Plana
    En Columna
    Por Afinidad
    Intercambio Iónico
    En papel
    En capa fina
    Por Exclusión Molecular
  • 5. Tipos de Cromatografía: Cromatografía Plana
    Análisis cualitativos
    En Papel
    La fase estacionaria se representa por un papel de filtro y la móvil por un disolvente.
  • 6. Tipos de Cromatografía: Cromatografía Plana
    Separar Componentes Puros
    En Capa Fina
    Una fase móvil (normalmente, un disolvente) y a una fase estacionaria (la llamada capa fina, que puede ser papel o gel de sílice)
  • 7. Tipos de Cromatografía: Cromatografía en Columna
    Depósito
    Proteína Simple (Fase Móvil)
    Matriz porosa sólida (Fase Estacionaria)
    Soporte Poroso
    Efluido
  • 8. Tipos de Cromatografía: Cromatografía en Columna
    Cromatografía de Exclusión Molecular
    • Separa proteínas según su tamaño.
    • 9. La fase sólida consiste en pequeñas perlas que contienen unos poros o cavidades de tamaño calibrado.
    • 10. Las proteínas de mayor tamaño no pueden entrar en las cavidades.
    • 11. Las proteínas mas pequeñas penetran en las cavidades.
    La cromatografía de filtración molecular es un método de cromatografía en columna por el cual las moléculas se separan en solución según su peso molecular.
  • 12. Tipos de Cromatografía: Cromatografía en Columna
    Partículas más pequeñas
    Espacio interno entre partículas
    Partículas más grandes
    Fibras de la matriz polimérica
    Volumen de intersticio entre partículas
    Representación de un lecho comatográfico formado por micropartículas porosas como las empleadas en cromatografía de exclusión molecular.
  • 13. Tipos de Cromatografía: Cromatografía en Columna
  • 14. Tipos de Cromatografía: Cromatografía en Columna
    Cromatografía de Intercambio Iónico
    En este tipo de Cromatografía la F.E tiene grupos cargados que interaccionan electroestáticamente con iones de signo contrario de la fase móvil.
  • 15. Tipos de Cromatografía: Cromatografía en Columna
    En el caso de los intercambiadores catiónicos, las proteínas con carga neta negativa se desplazan más rápido y eluyen antes.
    Partículas poliméricas con grupos funcionales cargados negativamente
    Se añade la mezcla de proteínas a la columna que contiene intercambiadores de cationes
    Las proteínas se desplazan a través de la columna a velocidades determinadas por su carga neta al pH que se esta utilizando.
  • 16. Tipos de Cromatografía: Cromatografía en Columna
    Cromatografía por Afinidad
    La cromatografía de afinidad permite la separación de mezclas proteicas por su afinidad o capacidad de unión a un determinado ligando
    COFACTORES
    LECTINAS
    ANTICUERPOS
    INHIBIDORES ENZIMATICOS
    LIGANDO DE AFINIDAD
  • 17. Tipos de Cromatografía: Cromatografía en Columna
    LIGANDO DE AFINIDAD
    MOLÉCULAS BIOQUÍMICAS RESPONSABLES DE LA RETENCION ESPECIFICA DE LOS SOLUTOS- ANALITICOS ,( PROTEINAS).
    NATURALEZA
    ACCION
    Ligando generales
    Macromoléculas biológicas o moléculas de bajo peso molecular
    Ligando específicos
    Biomolèculas pequeñas o macromoléculas bioquímicas
    Lectinas y nucleótidos
    Anticuerpo
  • 18. Tipos de Cromatografía: Cromatografía en Columna
    Mezcla de
    proteínas
    Proteína de Interés
    Polímero con Ligando
  • 19. Tipos de Cromatografía: Cromatografía en Columna
  • 20. Tipos de Cromatografía: Cromatografía en Columna
    Características de la Cromatografía de Afinidad
    • CAMPO DE APLICACIÓN RESTRINGIDO
    • 21. SEPARACIÓN DE UN SOLUTO ANALÍTICO ( PROTEÍNA)
    • 22. ALTA SELECTIVIDAD EN EL MECANISMO DE RETENCIÓN
  • Tipos de Cromatografía: Cromatografía en Columna