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Cromatografia

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  • 1. Es un conjunto de Técnicas basadas en el principio de retención selectiva, cuyo objetivo es separar los distintos componentes de una mezcla, permitiendo identificar y determinar las cantidades de dichos componentes
  • 2. Fase Móvil Fase Estacionaria Consiste en un liquido o gas que es arrastrado a través de la fase estacionaria Consiste en un solido o un liquido fijado a un solido por donde el cual pasa la fase móvil
  • 3. Plana En Columna En papel En capa fina Por Afinidad Por Exclusión Molecular Intercambio Iónico
  • 4. La fase estacionaria se representa por un papel de filtro y la móvil por un disolvente. En Papel Análisis cualitativos
  • 5. En Capa Fina Una fase móvil (normalmente, un disolvente) y a una fase estacionaria (la llamada capa fina, que puede ser papel o gel de sílice) Separar Componentes Puros
  • 6. Depósito Proteína Simple (Fase Móvil) Matriz porosa sólida (Fase Estacionaria) Efluido Soporte Poroso
  • 7. Cromatografía de Exclusión Molecular La cromatografía de filtración molecular es un método de cromatografía en columna por el cual las moléculas se separan en solución según su peso molecular. Separa proteínas según su tamaño. La fase sólida consiste en pequeñas perlas que contienen unos poros o cavidades de tamaño calibrado. Las proteínas de mayor tamaño no pueden entrar en las cavidades. Las proteínas mas pequeñas penetran en las cavidades.
  • 8. Representación de un lecho comatográfico formado por micropartículas porosas como las empleadas en cromatografía de exclusión molecular. Fibras de la matriz polimérica Partículas más pequeñas Partículas más grandes Volumen de intersticio entre partículas Espacio interno entre partículas
  • 9. Cromatografía de Intercambio Iónico En este tipo de Cromatografía la F.E tiene grupos cargados que interaccionan electroestáticamente con iones de signo contrario de la fase móvil.
  • 10. Partículas poliméricas con grupos funcionales cargados negativamente Se añade la mezcla de proteínas a la columna que contiene intercambiadores de cationes Las proteínas se desplazan a través de la columna a velocidades determinadas por su carga neta al pH que se esta utilizando. En el caso de los intercambiadores catiónicos, las proteínas con carga neta negativa se desplazan más rápido y eluyen antes.
  • 11. Cromatografía por Afinidad La cromatografía de afinidad permite la separación de mezclas proteicas por su afinidad o capacidad de unión a un determinado ligando ANTICUERPOS COFACTORES INHIBIDORES ENZIMATICOS LECTINAS LIGANDO DE AFINIDAD
  • 12. LIGANDO DE AFINIDAD MOLÉCULAS BIOQUÍMICAS RESPONSABLES DE LA RETENCION ESPECIFICA DE LOS SOLUTOS- ANALITICOS ,( PROTEINAS). NATURALEZA ACCION acromoléculas biológicas o moléculas de bajo peso molecular Biomolèculas pequeñas o macromoléculas bioquímicas Ligando específicos Ligando generales Anticuerpo Lectinas y nucleótidos
  • 13. Características de la Cromatografía de Afinidad CAMPO DE APLICACIÓN RESTRINGIDO SEPARACIÓN DE UN SOLUTO ANALÍTICO ( PROTEÍNA) ALTA SELECTIVIDAD EN EL MECANISMO DE RETENCIÓN