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Cromatografia

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    Cromatografia Cromatografia Presentation Transcript

    • Universidad de Carabobo
      Facultad de Ciencias de la Salud
      Escuela de Medicina “Dr. Witremundo Torrealba”
      Departamento de Fisiología y Bioquímica
      Sede Aragua
      Cromatografía
      Luis Marín
      Luisana Lugo
      Víctor Loaiza
      Maracay, Marzo de 2010
    • ¿Que es la Cromatografía?
      Es un conjunto de Técnicas basadas en el principio de retención selectiva, cuyo objetivo es separar los distintos componentes de una mezcla, permitiendo identificar y determinar las cantidades de dichos componentes
    • ¿Que es la Cromatografía?
      Fase Móvil
      Consiste en un liquido o gas que es arrastrado a través de la fase estacionaria
      Fase Estacionaria
      Consiste en un solido o un liquido fijado a un solido por donde el cual pasa la fase móvil
    • Tipos de Cromatografía
      Plana
      En Columna
      Por Afinidad
      Intercambio Iónico
      En papel
      En capa fina
      Por Exclusión Molecular
    • Tipos de Cromatografía: Cromatografía Plana
      Análisis cualitativos
      En Papel
      La fase estacionaria se representa por un papel de filtro y la móvil por un disolvente.
    • Tipos de Cromatografía: Cromatografía Plana
      Separar Componentes Puros
      En Capa Fina
      Una fase móvil (normalmente, un disolvente) y a una fase estacionaria (la llamada capa fina, que puede ser papel o gel de sílice)
    • Tipos de Cromatografía: Cromatografía en Columna
      Depósito
      Proteína Simple (Fase Móvil)
      Matriz porosa sólida (Fase Estacionaria)
      Soporte Poroso
      Efluido
    • Tipos de Cromatografía: Cromatografía en Columna
      Cromatografía de Exclusión Molecular
      • Separa proteínas según su tamaño.
      • La fase sólida consiste en pequeñas perlas que contienen unos poros o cavidades de tamaño calibrado.
      • Las proteínas de mayor tamaño no pueden entrar en las cavidades.
      • Las proteínas mas pequeñas penetran en las cavidades.
      La cromatografía de filtración molecular es un método de cromatografía en columna por el cual las moléculas se separan en solución según su peso molecular.
    • Tipos de Cromatografía: Cromatografía en Columna
      Partículas más pequeñas
      Espacio interno entre partículas
      Partículas más grandes
      Fibras de la matriz polimérica
      Volumen de intersticio entre partículas
      Representación de un lecho comatográfico formado por micropartículas porosas como las empleadas en cromatografía de exclusión molecular.
    • Tipos de Cromatografía: Cromatografía en Columna
    • Tipos de Cromatografía: Cromatografía en Columna
      Cromatografía de Intercambio Iónico
      En este tipo de Cromatografía la F.E tiene grupos cargados que interaccionan electroestáticamente con iones de signo contrario de la fase móvil.
    • Tipos de Cromatografía: Cromatografía en Columna
      En el caso de los intercambiadores catiónicos, las proteínas con carga neta negativa se desplazan más rápido y eluyen antes.
      Partículas poliméricas con grupos funcionales cargados negativamente
      Se añade la mezcla de proteínas a la columna que contiene intercambiadores de cationes
      Las proteínas se desplazan a través de la columna a velocidades determinadas por su carga neta al pH que se esta utilizando.
    • Tipos de Cromatografía: Cromatografía en Columna
      Cromatografía por Afinidad
      La cromatografía de afinidad permite la separación de mezclas proteicas por su afinidad o capacidad de unión a un determinado ligando
      COFACTORES
      LECTINAS
      ANTICUERPOS
      INHIBIDORES ENZIMATICOS
      LIGANDO DE AFINIDAD
    • Tipos de Cromatografía: Cromatografía en Columna
      LIGANDO DE AFINIDAD
      MOLÉCULAS BIOQUÍMICAS RESPONSABLES DE LA RETENCION ESPECIFICA DE LOS SOLUTOS- ANALITICOS ,( PROTEINAS).
      NATURALEZA
      ACCION
      Ligando generales
      Macromoléculas biológicas o moléculas de bajo peso molecular
      Ligando específicos
      Biomolèculas pequeñas o macromoléculas bioquímicas
      Lectinas y nucleótidos
      Anticuerpo
    • Tipos de Cromatografía: Cromatografía en Columna
      Mezcla de
      proteínas
      Proteína de Interés
      Polímero con Ligando
    • Tipos de Cromatografía: Cromatografía en Columna
    • Tipos de Cromatografía: Cromatografía en Columna
      Características de la Cromatografía de Afinidad
      • CAMPO DE APLICACIÓN RESTRINGIDO
      • SEPARACIÓN DE UN SOLUTO ANALÍTICO ( PROTEÍNA)
      • ALTA SELECTIVIDAD EN EL MECANISMO DE RETENCIÓN
  • Tipos de Cromatografía: Cromatografía en Columna