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Microorganismos patogenos en
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Streptococcus del grupo D, en 1984 fue reclasificado en el género
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El aislamiento de A.a empieza con una toma de muestra de placa
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Se presentan en el agar sangre como convexas, lisas, circullares y algunas
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Muchos de estos agentes pueden producir el antígeno D, usado en la
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Bibliografia
http://www.odontologia.uady.mx/revistas/rol/pdf/V03N1p7.pdf
http://www.upch.edu.pe/faest/publica/2005/vol15-n...
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Microorganismos patógenos con mayor presencia en conductos radiculares y periodonto

  1. 1. UNIVERSIDAD AUTONOMA DE YUCATAN Microorganismos patógenos con mayor presencia en conductos radiculares y periodonto Diagnóstico Microbiológico Oral y Herramientas Moleculares María José Nuñez Matos 04/11/2013 Facultad de Odontología Profa. Sandra Hernández Solís
  2. 2. Microorganismos patogenos en conductos radiculares y periodontales Uno de los principales objetivos en el diagnostico microbiológico oral, es lograr la eliminación de todos los microrganismos que puedan estar en el periodonto asi como contenidos en la cámara pulpar, y en los conductos radiculares ; la complejidad de una infección endodontica depende de las condiciones de los tejidos de la pulpa asi como factores del hospedador. Patogénesis periapical La colonización es el establecimiento de microorganismos en un huésped cuando las condiciones bioquímicas y físicas son apropiadas para su proliferación. La flora oral es el resultado de una colonización microbiana permanente en una relación simbiótica con el huésped. La patogenicidad se utiliza para describir la capacidad de un organismo para producir enfermedad en tanto que la virulencia describe el grado de patogenicidad. La PATOGENICIDAD perspectivas diversas: y la VIRULENCIA pueden ser evaluadas desde 1. la posibilidad para causar la enfermedad 2. la posibilidad para causar uno o más de los síntomas siguientes: dolor, sensibilidad a la percusión, hinchazón y/o producir un trayecto fistuloso o 3. la posibilidad de que las bacterias tengan un efecto negativo en el pronóstico a largo plazo del tratamiento endodóntico de la enfermedad periapical. La infección de la cavidad pulpar se produce por 3 vías: • - Fractura del tejido dentario • - Evolución natural de caries • - Procedimientos odontológicos Esta infección puede derivar a necrosis dependiendo de varios factores: • - Virulencia de las bacterias • - Resistencia del huésped • - Cantidad de circulación • - Drenaje linfático • - Capacidad de secretar líquidos inflamatorios para disminuir el incremento en la presión intrapulpar Los microorganismos presentes en el conducto radicular pueden variar , sin embargo en dientes no cariados con pulpa necrótica y enfermedad periapical esta dominada por anaerobios facultativas . 1
  3. 3. Se sabe que por estudios previos que una de las bacterias que se ha encontrado con mayor frecuencia en infecciones es el Enterococus faecalis. Debido a que es una bacteria anaerobia facultativa resistentes la mayoría de medicamentos además que tiene la capacidad de adherirse dentro de los tubulillos dentinales formando un biofilm aparente, lo cual le da la capacidad de soportar ambientes hostiles por lo que es muy difícil su eliminación El el Enterococus faecalis es un coco Gram (+) del grupo anaerobio facultativo que no pertenece a la microbiota normal de la cavidad bucal . Asi mismo otra bacteria de real importancia es el fusobacterium necleatum , un bacilo anaerobio estrictoel cual esta relacionado muy frecuentemente con patologías periapicales ;este es un bacilo Gram (-) pleomorfo, inmóvil, no fermentativo, anaerobio estricto, que posee una endotoxina en su pared celular capas de inducir una minima destrucción osea; la combinación con Peptotoestreptococcus aumenta el grado de destrucción periapical además es muy común encontrarlos en abscesos periapicales , su principal habitad es el surco gingival Para poder hacer un buen diagnostico microbiológico se necesita saber las características especificas de cada organismos para poder analizarlos en el microscopio ,se requiere de la obtención de muestras , medio de transporte y medios de cultivo entre otras cosas. Identificar el sitio Diagnosticar por observacion •Profundidad •¿Existe fluido? ¿Que carecteristicas tiene? Aislar el sitio de trabajo Transporte Inoculacion en un medio de cultivo apto para su optimo crecimiento Toma de muestra •2 Puntas de papel esterilizadas (20 - 30 seg) Proceso de desinfeccion para evitar contaminacion 2 Identificacion Macroscopica del patogeno
  4. 4. Clasificación de los medios de cultivo A.- Medios sintéticos o químicamente definidos. Llevan fuente de carbono, fuente de nitrógeno, sales que suplan iones (P, K, Mg, Fe, Ca), otros elementos como son estimuladores del crecimiento (eritritol para Brucella abortus) pero siempre a concentraciones conocidas. B.- Medios complejos o de composición indefinida. Estos medios llevan ingredientes como extracto de levadura, peptona, infusión de cerebro, extracto de carne, etc. que contienen nutrientes en abundancia pero sin saber con exactitud la composición cualitativa ni cuantitativa de estos nutrientes. C.- Medios de enriquecimiento. Son medios complejos (normalmente) con aditivos adicionales para favorecer el crecimiento de determinados microorganismos (particularmente heterótrofos exigentes). Ejemplo: adicción de sangre, suero o extractos de tejidos de animales y plantas. D.- Medios selectivos. Son aquellos que favorecen por su diseño el crecimiento específico de un microorganismo particular (o grupo de microorganismos). Es de gran utilidad para el aislamiento de microorganismos a partir de una población microbiana mixta. E.- Medios diferenciales. Son aquellos destinados a facilitar la discriminación de microorganismos de una mezcla por sus propiedades diferenciales de crecimiento en dichos medios. Ejemplo: Agar sangre diferencia hemolíticos de no hemolíticos; McConkey diferencia lactosa (+) de lactosa (-). F.- Medios de mantenimiento. Suelen ser distintos a los de crecimiento óptimo ya que el crecimiento rápido y prolífico suele ocasionar la muerte rápida de las células. Ejemplo: al añadir glucosa y utilizarla los microorganismos producen ácidos, acidificándose el medio por lo que es preferible no utilizar glucosa en los medios de mantenimiento. 3
  5. 5. Principales microorganismos patogenos presentes en conductos radiculares Genero Porphyromonas P. Gingivalis P. Endodontalis P. Asaccharolytica Género Prevotella a) Pigmentadas: – P. Melaninogénica – P. Intermedia – P. Loescheii – P. Nigrescens b) Pigmento variable: - P. Dentícola c) No pigmentadas: - P. Buccae - P. Oralis - P. Oris - Otras • Genero Veillonella • Género Peptoestreptococcu s • Género Bacteroides Género Fusobacterium • F. Nucleatum • F. Naviforme • F. Periodonticum • F. Alosis • F. Sulci Géneros menos frecuentes Géneros y especies de microorganismos que pueden aislarse en los conductos radiculares infectados según Sundqvist Enterococus Faecalis Bacteria en forma de coco dispuesta en cadenas o pares, Gram positiva, anaerobia facultativa, inmóvil y no esporulada. Reino: Bacteria Filo: Firmicutes Clase: Bacilli Orden: Lactobacillales Familia: Enterococcaceae Género: Enterococcus Especie: E. faecalis En 1889 Thiercelin describe un diplococo gram positivo de origen intestinal al que llamó Enterococcus. Clasificado posteriormente como 4
  6. 6. Streptococcus del grupo D, en 1984 fue reclasificado en el género Enterococcus. Pertenece a la familia Enterococcaceae, y se han descrito 40 especies, de las que E. faecalis y E. faecium son las aisladas con más frecuencia. Debido a su capacidad para crecer y sobrevivir en condiciones duras, puede encontrarse en el suelo, alimentos, agua y una amplia variedad de animales. El hábitat más importante es el tracto gastrointestinal de los seres humanos y de otros animales. También se encuentran en la boca, vagina y piel de individuos sanos. Debido a su resistencia intrínseca a diferentes antibióticos, son una importante causa de infección nosocomial. Son capaces de producir bacteriemia, endocarditis, infecciones del tracto urinario e infecciones de la herida Medio de cultivos Enterococcus: cultivo en agar sangre donde crecen a las 24h colonias de Enterococcus faecalis. Tienen un tamaño entre 0.5 y 1 mm, a menudo opacas y blancas, que suelen ser α hemolíticas o no hemolíticas, aunque en algunos casos aparecen como β hemolíticas. Puede crecer a temperaturas entre 10 y 45ºC, aunque su temperatura óptima de crecimiento es 35ºC. Fusobacterium mortiferum nucleatum necrophorum Miembros de flora normal de bucofaringe(nucleatum) y flora intestinal su morfología escaracterística; bacilos largos con extremos acintados o filamentos delgados. Algunos (necrophorum) pueden ser 5
  7. 7. más abultados en su sector medio. Producen alfa y beta hemólisis en los cultivos y las colonias son translúcidas de forma varias a veces irregulares. Fusobacterium nucleatum es el más común en infecciones del aparato respiratorio, mientras que necrophorum se lo aísla de infecciones subdiafragmáticas. Son habitualmente sensibles a las Penicilinas y su poder patógeno s establece por la presencia de lipasa y leucotoxinas. Es bacilo Gram (-) fusiforme anaerobio, se caracterizan por ser bacilos largos fusiformes, inmóviles, no esporulados y generalmente no fermentativos. La producción de ácido butírico como principal producto metabólico permite diferenciar Fusobacterium de Prevotella, Porphyromonas y Bacteroides ; esta especie era la aislada con mayor frecuencia en pacientes con infecciones del tracto respiratorio superior y de la cavidad bucal en las muestras de cultivo de placa subgingival ; no se le considera un patógeno periodontal primario, tiene una importante agregación interbacteriana en la biopelicula Para obtener muestras e identificar las características por observación es necesario el uso de puntas papel esteril No.20 durante 1 min cada una en el interior de los conductos que vayan a ser estudiados para poder absorver el contenido, posteriormente , las puntas de papel se colocan en una via esteril con 1ml de buffer pH 8 , y se congelaran a -70 °C hasta el momento de la extracción de DNA (RPC) Eikenella corrodens E. corrodens se reconoce como un microbio patógeno oportunista en la cavidad oral; también, puede causar infecciones extra orales, como un agente infeccioso solo o en combinaciones con diversas bacterias Cocobacilo gramnegativo anaerobio facultativo no esporulado, inmóvil y de difícil crecimiento. Forma parte de la flora habitual de la cavidad oral humana, del tracto respiratorio superior y de la mucosa gastrointestinal y genitourinaria. Se reconoce como un patógeno oportunista y se ha asociado a infecciones 6
  8. 8. orales, abdominales, pleuropulmonares, ginecológicas y óseas. También es causante de endocarditis Crece en condiciones aeróbicas y anaeróbicas, pero requiere una atmósfera de dióxido de carbono reforzada por 3-10%. Las colonias son pequeñas y de color grisáceo, que producen una coloración verdosa del agar subyacente y un ligero olor de la lejía. Sólo la mitad producir la picadura del agar que se considera característico. Ellos son oxidasapositivos, catalasa-negativa, ureasa negativo, indol-negativo, y reducir el nitrato a nitrito Estas colonias son oxidasa positivas y catalasa negativas, no crecen en agar MacConkey y al Gram aparecen como bacilos gramnegativos rectos Cultivo de 48 h de Eikenella corrodens en agar sangre Prevotella        melaninogénica buccae oris bivia corporis dentícola intermedia ANAEROBIOS NO ESPORULADOS Bacilos Gram negativos Estos bacilos de similares características a los Bacteroides se ha reclasificado, ya que anteriormente se agrupaban como Bacteroides y subespecies de los mismos. Las cepas con producción de pigmento negro a marrón en los medios de cultivo son fácilmente identificables y son miembros de flora normal de boca y vías respiratorias superiores y partes blandas subyacentes. Algunas cepas (menos del 20 %) son productoras de penicilinasas, pero en general son sensibles a este antibiótico. La Prevotella bivia prevalece en flora vaginal y produce vaginosis e infecciones de origen obstétrico. 7
  9. 9. Porphyromonas    asacarolítica gingivalis endodontalis ANAEROBIOS NO ESPORULADOS Bacilos Gram negativos presentes en Flora normal de boca y encías (gingivalis y endodontalis) y flora intestinal (asacarolítica) producen infecciones relacionadas con su habitat. Su morfología varía desde los cocobacilos hasta formas alargadas. Las colonias son convexas, lisas y pigmentan con el tiempo, algunas veces se observa beta hemólisis. La vitamina K estimula el desarrollo de estos gérmenes. Porphiromina Gingivalis Es un microorganismo estricto para la toma de muestra se necesita conos de papel esterilizados ya que se presenta en las bolsas periodontales , se coloca dentro de la bolsa periodontal por un tiempo de 30 a 40 seg para luego ser llevado a un medio de cultivo enriquecido como agar sangre suplementado e incubar a 37°C por 7 a 14 dias en condiciones de anaerobio, pasado el tiempo de encubacion debe de reconocerse las características de forma redonda tamaño 1-2 mm , convexa asi como presentar una pigmentación color marron a negro, la tinción de gram debe evidenciar una morfología cocobacilar y ser negativo asi como de coloración café suele presentar zonas de hemolisis en las placas de agar sangre Veinoella Las veillonellas son cocos gram-negativos anaerobios asociados con salud oral, e caracterizan por su metabolismo inusual. Son generalmente incapaces de fermentar los hidratos de carbono, pero crecen bien anaeróbicamente sobre lactato, piruvato, malato o fumarato. Las especies de Veillonella figuran entre las primeras colonizantes de la cavidad oral y una vez que han colonizado tienden a persistir en ese ambiente. El requisito para la colonización microbiana inicial es la adherencia bacteriana a las superficies orales. La colonización primaria 8
  10. 10. con Veillonella spp. es independiente de la presencia de dientes erupcionados Los resultados obtenidos permiten concluir que los medios de elección para el aislamiento de veillonellas a partir de muestras de saliva son: medio selectivo para Veillonella con vancomicina (7,5 µg/ml) y medio selectivo para Veillonella con vancomicina (7,5 µg/ml) y 5% de sangre lacada. Principales Microorganismos patogenos presentes en el periodonto Se consideran patógenos periodontales a las bacterias anaerobias, entre las cuales figuran: Porphyromonas gingivalis, Actinobacillus actinomycetemcomitans, Prevotellas, Bacteroides forsythus, Eikenella, y Capnocytophaga; fuertemente asociadas a los diferentes tipos de periodontitis, aunque existen otros microorganismos asociados con menor frecuencia, los cuales también aparecen en las diversas formas de enfermedad periodontal. Existen diversos factores de periodontopatogenicidad que permiten la acción de estos microorganismos a nivel del periodonto, los cuales se mencionan a continuación: 1. Elementos estructurales      Adhesinas: contribuyen a la adhesión, agregación y congregación. Endotoxinas: activan la vía alterna del complemento y los macrófagos; además, provocan daño tisular y reabsorción ósea. Cápsulas y proteínas superficiales fijadoras de inmunoglobulinas (Ig) con efecto antiopsónico y de bloqueo de fagocitosis. Flagelos y estructuras relacionadas: favorecen la penetración subepitelial de las bacterias. Coagulasa lisa: crea una cubierta de fibrina alrededor de las bacterias y las protege de la acción fagocítica. 2. Exotoxinas: especialmente las leucotoxinas que destruyen polimorfonucleares (PMNs) y las epiteliotoxinas que favorecen la penetración subepitelial. 3. Exoenzimas: entre ellas se destacan: las impedinas, las cuales disminuyen las defensas del hospedador (proteasas) y las agresivas, que originan la 9
  11. 11. destrucción tisular (colagenasa, condroitinsulfatasa ). hialuronidasa, fosfatasa alcalina, 4. Metabolitos, entre los cuales se encuentran: sulfídrico, amoniaco, aminas y ácidos grasos. 5. Compuestos de acción inmunoreguladora, tales como: los citotóxicos (activan policlonalmente los linfocitos B o los que inhiben su proliferación), los que activan los linfocitos T supresores, los que inhiben o activan la quimiotaxis de los PMNs, los que inhiben la destrucción intracelular de las bacterias y los que estimulan la degradación lisosómica. Las bacterias de acuerdo con su potencial de periodontopatogenicidad, se clasifican en 4 grupos, de la manera que sigue: - Grupo A: Los que están dotados de muchos de los factores que se han señalado.        Actinobacillus actinomycetemcomitans Porphyromonas gingivalis Prevotellas Bacteroides forsythus, Capnocytophaga, Actinomyces viscosus Peptoestreptococcus - Grupo B: Las que siendo anaerobias facultativas contribuyen a crear el bajo potencial de óxido reducción del surco gingival.       Enterococcus spp Corynebacterium spp Campylobacter spp Eikenella corrodens Haemophilus spp Streptococcus spp - Grupo C: Las que actúan a nivel del periodonto por su actividad proteolítica y especialmente excretan factores nutricionales para las bacterias periodontopatógenas propiamente dichas.    Clostridium spp Mitsuokella dentalis Selenomonas spp 10
  12. 12.     Bifidubacterium spp Veillonella spp Peptococcus niger Eubacterium spp - Grupo D: Las que se aislan del surco gingival y en ciertas periodontitis no se conocen cuáles son exactamente los factores de virulencia a este nivel.  Micoplasma La enfermedad periodontal es la enfermedad infecciosa crónica mas común en los humanos, la periodontitis agresivas presenta una elevada porción de Actinobacillus actinomycetemcomitans y ciertas porciones presenta de Porphyromonas gingivalis ya mencionada antes en patógenos presentes en porciones radiculares. Actinobacillus actinomycetemcomitans Es un importante periodonto-patogeno, coco-bacilo Gram (-), Redondo ,Capnofilico es decir que requiere de la presencia de CO2 para su desarrollo, no produce esporas , no es hemolítico, forma colonias aproximadamente de 0,5-1,0mm de diámetro, de forma circular transparente , de bordes irregulares Aislamiento in vitro El A.a es una típica bacteria que puede crecer en medios enriquecidos como Agar sangre, chocolate suplementado con hemina, Vitamina K , menadiona en condiciones de CO2 al 5-10%20, pero para su mejor crecimiento se requiere incubarlo a condiciones de anaerobiosis por 5-7 días a 37ºC 11
  13. 13. El aislamiento de A.a empieza con una toma de muestra de placa subgingival (Fig. 1, 2), con un cono de papel estéril Nº 30 o 40. Se deja 60 seg., luego se retira y se coloca en un medio de transporte como VMGA III22 (Viability Maintaining Microbiostatic Médium III, Anaerobically Prepared), RTF22 (Reduced Transport Fluid), BHIB (Brain Heart Infusión Broth). En lo posible trabajar la muestra a los pocos minutos, sembrando en un medio selectivo tipo TSBV incubar en anaerobiosis a 37º C por 5-7 días. Pasado el tiempo, se observaron colonias de aproximadamente Porphyromonas Gingivalis Patogeno predominante en la periodontitis crónica, bacilo o coco-bacilo Gram negativo,anaerobio estricto, considerado un conmensal en la cavidad oral,sus multiples factores de virulencia la hacen muy agresiva. En el surco gingival encuentra en condiciones para su crecimiento Su pared celular presenta a nivel de la membrana externa las endotoxinas, son capsulados , no esporulativos, sin flagelos. Con presencia en el biofilm dentogingival , es considerado colonizador secundario que llega por contagio, mayormente por saliva.Cultivo Invitro Materiales : conos de papel esterilizados ya que se presenta en las bolsas periodontales , se coloca dentro de la bolsa periodontal por un tiempo de 30 a 40 seg para luego ser llevado a un medio de cultivo enriquecido como agar sangre suplementado e incubar a 37°C por 7 a 14 dias en condiciones de anaerobio, pasado el tiempo de encubacion debe de reconocerse las características de forma redonda tamaño 1-2 mm , convexa asi como 12
  14. 14. presentar una pigmentación color marron a negro, la tinción de gram debe evidenciar una morfología cocobacilar y ser negativo asi como de coloración café suele presentar zonas de hemolisis en las placas de agar sangre Prevotella Intermedia Bacilos pleomorficos , gram negativos, inmóviles, sacaroliticos Cultivos presentan colonias pigmentadas:P. Melaninogenica Colonias pigmentadas variables : P.Denticola Colonias No pigmentadas : P. Buccalis Las especies pigmentadas incluyen a P. melaninogenica, P. intermedia, P. nigrescens, P. corporis, P. loeschii, P. pallens, y P. denticola. En relación con la etiología en las enfermedades periodontales la especie más implicada es P. intermedia, cuya incidencia aumenta durante el desarrollo de gingivitis y periodontítis. Otra especie implicada en afecciones periodontales es P. nigrescens. Las especies no pigmentadas incluyen: P. buccae, P. buccalis, P. oris, P. oulorum, P. veroralis, P zoogleoformans, P. dentales, P. tannerae, P. enoeca, la mayoría de ellas poseen como hábitat primario el surco gingival -Prevotella intermedia es un Bacteroide de pigmentación negra. -gram negativo. -Corto. -Extremos redondeados. -Están elevados en la gingivitis ulcerativa necrosante aguda y en ciertas formas de periodontitis. -Tiene diversas propiedades virulentas. -Por inyección induce infecciones mixtas en animales. -En algunos sujetos se encuentran Ac séricos elevados en la periodontitis refractaria. -Prevotella intermedia y Prevotella nigrescens tienen rasgos fenotípicos idénticos. Las colonias crecen en un medio de agar sangre anaerobio ,incubado por 48 horas donde requieren de hemina y vitamita K para su optimo desarrollo, utilizan carbohidratos como fuente única de carbono y energía 13
  15. 15. Se presentan en el agar sangre como convexas, lisas, circullares y algunas veces hemolíticas y pigmentada con un color tostado a negro Treponema Denticola Son espiroquetas en forma espirilada, gramnegativas, no capsuladas, anaeróbicas estrictas y de gran movilidad, gracias a un filamento axial denominado endoflagelo. Desde el punto de vista nutricional, son bacterias muy exigentes y es por ello que deben utilizarse medios de cultivo enriquecidos como agar TSBV para su aislamiento, aún así, su cultivo no ha sido tarea fácil. Reino: Bacteria Filo: Spirochaetes Clase: Spirochaetes Orden: Spirochaetales Familia: Spirochaetaceae Género: Treponema Especie: Denticola Las muestras microbiológicas se obtienen con puntas de papel para endodoncia número 40 o 50 de cuatro zonas de la boca usando por lo menos 10 puntas y se colocan todas estas en un frasco con 2mL de RTF el cual es un medio de transporte. Tenemos un plazo de 24 horas para hacer el sembrado. Enterococcus Spp Los Enterococcus son cocos Gram positivo, encontrados solos, en pares o formando cadenas y eventualmente pueden tener una morfología cocobacilar. Son anaerobios facultativos y tienen un rango óptimo de crecimiento entre 30 y 35° C. Todas las especies crecen en caldos con 6,5% de NaCl e hidrolizan la esculina en la presencia de sales biliares. Son organismos catalasa negativa, pero en algunas oportunidades pueden ser catalasa positivo y el ácido láctico es el producto final de la fermentación de la glucosa 14
  16. 16. Muchos de estos agentes pueden producir el antígeno D, usado en la clasificación de los Streptococcus sp. b -hemolíticos . El rango del contenido de Guanina más Citosina para este grupo es de 37 a 45 mol % . En términos generales los Enterococcus sp. son cocos Gram positivo, catalasa negativo, anaerobios facultativos, no producen gas a partir de la fermentación de la glucosa, son pirolidonil b -naftilamida positivos, leucemia amino peptidasa positivos, bilis esculina positivos, crecen en caldos con NaCl al 6,5% y pueden ser alfa, beta o gamma hemolíticos Presentan una subdivicion en  E. faecalis E. faecalis es una bacteria inmóvil, anaerobia facultativa y fermenta la glucosa sin producir gas. No presenta una reacción con la catalasa en presencia de peróxido de hidrógeno, puede producir una reacción pseudocatalasa si se cultiva en agar sangre, sin embargo ésta es muy débil. E. faecalis puede vivir en ambientes extremos que incluyen pH altamente alcalino de 9,6 y elevadas concentraciones de sal.  E. faecium Enterococcus faecium es una bacteria Gram-positivo, bacteria alfa hemólítica o no hemolítica en el género Enterococcus.1 Puede ser comensal (inócuo, organismo coexistente) en el intestino humano, pero podría ser patógeno, causando enfermedades como meningitis neonatal. E. faecium Vancomicina-resistente llama frecuentemente como EVR. se EL termino –SPP Para hacer referencia a las especies pertenecientes a un género (y a veces a un taxón genérico particular), la fórmula binominal cambia a: nombre del género + spp., por ejemplo: Pinus spp. se lee como "las especies del género Pinus". Además, si se hace referencia a una especie concreta pero cuyo epíteto específico es desconocido, o carece de importancia, se permite el uso de la partícula "sp."; por ejemplo, Pinus sp. se refiere a una especie concreta de pino. 15
  17. 17. Bibliografia http://www.odontologia.uady.mx/revistas/rol/pdf/V03N1p7.pdf http://www.upch.edu.pe/faest/publica/2005/vol15-n2/vol15_n2_05_art14.pdf http://www.usmp.edu.pe/odonto/servicio/2011/Kiruv.8.3/Kiru_v.8.3%20art.9.pdf http://www.unne.edu.ar/unnevieja/Web/cyt/cyt/2000/3_medicas/m_pdf/m_016.pdf http://seq.es/seq/0214-3429/24/2/lorenzo.pdf http://www.scielo.cl/pdf/rci/v24n3/art10.pdf http://www.odon.uba.ar/uacad/Pagina%20Microbiologia/fotos%20book/guias%20de%20clas es/bacterias%20gingivoperiodontales%20y%20cariogenicas.pdf 16

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