Aula básica de fundamentos de cromatografia líquida e gasosa.

1. •http://chemkeys.com/br/2000/07/18/cromatografia-a-gas-curso-em-diapositivos/
CROMATOGRAFIA
Histórico
M. TSWEET (1903): Separação de misturas de
pigmentos vegetais em colunas recheadas com
adsorventes sólidos e solventes variados.
éter de
petróleo
CaCO3
mistura de
pigmentos
pigmentos
separados
Cromatografia =
kroma [cor] + graph [escrever]
(grego)
http://chemkeys.com/br/2000/07/18/cromatografia-a-gas-curso-em-diapositivos/

2. “Xpомофиллы в растительном и животном мире” (Chromophils
in plant and
animal world) Doctor of Science dissertation,Warsaw, 1910, 380
pp. Reprinted from
Chromatographic adsorption analysis, selected works of M. S.
Tswet by Academy

3. CROMATOGRAFIA
Princípio Básico
Separação de misturas por interação diferencial dos seus
componentes entre uma FASE ESTACIONÁRIA (líquido ou
sólido) e uma FASE MÓVEL (líquido ou gás).

4. CROMATOGRAFIA
Modalidades e Classificação
FM = Líquido
FM = Gás
Cromatografia
Líquida
Cromatografia
Gasosa (CG)
Em CG a FE
pode ser:
Sólida
Líquida
Cromatografia
Gás-Sólido (CGS)
Cromatografia
Gás-Líquido (CGL)

5. CROMATOGRAFIA GASOSA
Histórico
Presentemente:
Vendas de equipamentos e acessórios para CG nos EUA
estimadas em mais de US$ 750.000.000 (1995).
1940
1950
1960
“CGS” rudimentar
CGL proposta (Martin e Synge)
Separação de ácidos orgâni-cos por
CGL: primeiro cro-matógrafo (Martin e
James)
Primeiro equipamento comer-cial (Griffin
& George)
Detector por Densidade de Gás
(Martin e James)
Detector por Ionização em Chama
(McWillian e Dewar)
Detector por Captura de Eletrons (Lovelock e
Lipsky)
Colunas Capilares (Golay)

7. Emily Hilder and Robert Shellie
theAnalytical Scientist
March 2013, 25-31

8. http://www.pharmainfo.net/reviews/introduction-analytical-method-development-
pharmaceutical-formulations

10. t t
R M
2
k
  
Cromatograma com as medidas relacionadas à determinação de parâmetros cromatográficos
C.H. Collins, G.L. Braga, P.S. Bonato,
Fundamentos de Cromatografia, 4ª
edição .,:Editora da Unicamp,
Campinas, 2006.
R
M
M
t
t
t
k
'



2
1
1
'
R
t
'
R
t
k

 


t t
R R
2 1 2 1,177
 
s w w


R R
2 1


  


 




1 2
1 2
h h
b b
t t
w w
R

11. Variação do volume de retenção (VM) da uracila e da tiouréia em função
do tipo e da quantidade de modificador orgânico. Coluna: Restek Allure-
C18 150 × 4,6 mm. VM = tM x F, onde F é a vazão da fase móvel Y.
Kazakevich, R. Lobrutto, HPLC for Pharmaceutical Scientists, Wiley-
Interscience Hoboken, 2005.

12. L
N
H 
2 2




R
R
t
t
545 , 5 16  

 

  

 


h
b
w
w
N

13. Medida e cálculo do fator de assimetria do pico. A. Braithwaite,
F.J.Smith, “Chromatographic Methods”, 4a. edição, Chapman and Hall,
Londres, 1985.

14. Medida e cálculo do fator de alargamento do pico, segundo a
USP

15. When Peaks Collide
(Part 2)
Oct 1, 2010
By: John V. Hinshaw
LCGC Europe
Volume 23, Issue 9

16. Nov 1, 2010
By: John V.
Hinshaw
LCGC Europe
Volume 23, Issue
10

17. Oct 1, 2009
By: John V. Hinshaw
LCGC Europe
Volume 22, Issue 9

18. Oct 1, 2010
By: John W. Dolan
LCGC Europe
Volume 23, Issue 9

19. Efeito da retenção, da eficiência e da seletividade sobre a
resolução (adaptado da referencia

20. C

B
H  A 

L
M t
 
http://www.chromedia.org/chromedia?waxtrapp=yqegzCsHqnOxm
OlIEcCbC&subNav=wnjedDsHqnOxmOlIEcCbCmF

21. R.M. Ornaf, M.W. Dong In S. Ahuja, M.W Dong (Eds) 6th Volume,
Handbook of Pharmaceutical Analysis by HPLC, Elsevier
Academic Press, Londres, 2005, pg 19-45.

23. 푑푝 2휇
퐷푀
푣 =
a)
+ 푐푣
b)
퐻 = 퐴푑푝 +
퐵퐷푀
휇
+ 퐶
휇푑푝
퐷푚
ℎ =
퐻
푑푝
ℎ = 푎 +
푏
푣
a) Gráficos de van Deemter b) gráficos de Knox . Dm para a
acetofenona é 1.2 × 10−9 m2/s . Fase móvel 30/70 acetonitrile/água
temperatura: 40 ◦C, Colunas Acquity BEH C18, 1.7 m, 10 cm × 2.1mm
ID; XBridge C18, 3.5m, 15 cm×4.6mm ID; XBridge C18, 5 m, 25
cm×4.6mm ID. de Villiers et al. / J. Chromatogr. A 1127 (2006) 60–69

24. Fekete et al.,
Journal of
Chromatography
A 1228 (2012) 57-
71

25. ΔP = (ηFL)/(K0πr2dp2)
onde K0 é a permeabilidade específica, η
é a viscosidade da FM, F é a vazão da
FM, r é o raio interno da coluna e dp é o
diâmetro médio das partículas da fase
estacionária (FE) que recheiam a coluna

26. Transferência de método do HPLC para o UPLC, metodologia empregada para analisar uma formulação
farmacêutica de composto 6 onde se encontram onze impurezas (a) método original para HPLC: coluna,
XBridge C18 (150×4.6 mm, 5 μm); vazão: 1000 μL min−1; volume de injeção, 20 μL; tempo de gradiente, 45
min. (b) método UHPLC transferido para HPLC: coluna, Acquity BEH C18 (50×2.1 mm, 1.7 μm); vazão,
610 μL min−1; volume de injeção, 1.4 μL; tempo de gradiente, 5.1 min. (c) Otimização do método UHPLC:
columa, Acquity BEH C18 (50×2.1 mm, 1.7 μm); vazão, 1000 μL min−1; volume de injeção, 1.4 μL; tempo
total de gradiente, 3.1 min. Figura adaptada Guillarme et al. Anal Bioanal Chem (2010) 397:1069–1082.

28. Jul 1, 2012
By: Fabrice Gritti, Georges Guiochon
LCGC North America Volume 7, Issue 30

29. DA,B é o coeficiente de difusão de um soluto A em um solvente
B, (cm2 s−1), MB é a massa molecular do solvente B (g mol−1),
T é a temperatura absoluta em (K), ηB é a viscosidade do
solvente B (cP) a uma temperatura T, VA é o volume molar do
soluto A (cm3 g−1 mol−1) e ϕB, é o coeficiente de associação do
soluto com a fase móvel B (adimensional) (Guillarme et al /
Journal of Chromatography A, 1052 (2004) 39–51)

30. Van Deemter plots das colunas Kinetex, Ascentis Express (2.7 μm), e sub-2 μm totalmente porosas. Fase
móvel : (A) 48% acetonitrila–52% água para o estradiol e (B) 95% acetonitrila–5% água para a ivermectina.
Temperatura: 35 °C, injeção: 0.5 μL, analito: (A) estradiol (B) ivermectina. (E. Olah et al. / J. Chromatogr. A
1217 (2010) 3642–3653)

31. Curvas H–u (curvas de van Deenter) de colunas 1.7 μm core–shell (Kinetex C18, 5 cm×2.1mm) e 1.7 μm
totalmente porosas (Waters BEH C18, 5 cm×2.1mm). Fase móvel: 440/560/1 (para proteínas de 18.8 kDa),
470/530/1 (para proteínas de 38.9 kDa) e 610/390/1 (para BSA, 66.3 kDa) acetonitrila/água/TFA,
temperatura: 60 ◦C, injeção: 0.5 μl, analitos teste: proteínas. S. Fekete et al. / Journal of Pharmaceutical and
Biomedical Analysis 54 (2011) 482–490.

32. Distribuição do tamanho de
partícula. (A) Zorbax-XDB-
1.8 μm, (B) Acquity-BEH-
1.7 μm, (C) Kinetex-1.7
μm, and (D) EiS-150-1.7
μm. (E) Sobreposição de
todas as figuras.
Omamogho & Glennon;
Anal. Chem. 2011, 83,
1547-1556

33. Y.-F. Cheng, T.H. Walter, Z. Lu, P. Iraneta, B.A. Alden, C.
Gendreau, U.D. Neue, J.M. Grassi, J.L. Carmody, J.E.
O’Gara, R. Fisk, LC–GC 18 (2000) 1162-1172.

34. %ACN tR(NB), min k(NB) tR(PP), min k(PP) α (PP/NB)
100 1,02 0,28 1,02 0,28 1
90 1,04 0,3 1,04 0,3 1
80 1,18 0,48 1,12 0,39 0,83
70 1,38 0,73 1,27 0,59 0,81
60 1,73 1,16 1,57 0,96 0,83
50 2,37 1,96 2,29 1,86 0,95
40 3,73 3,66 3,73 3,66 1
30 6,55 7,19 8,62 9,78 1,36
25 9,25 10,56 15,35 18,19 1,72
20 13,46 15,83 30,75 37,44 2,37
%MeOH tR(NB),min k(NB) tR(PP), min k(PP) α (PP/NB)
100 1,02 0,28 1,02 0,28 1
90 1,08 0,35 1,08 0,35 1
80 1,25 0,56 1,25 0,56 1
70 1,5 0,88 1,68 1,1 1,26
60 2,02 1,53 2,73 2,41 1,58
50 3,05 2,81 5,65 6,06 2,16
40 5,07 5,34 14,36 16,95 3,18
30 8,91 10,14 41 50,25 4,96
25 11,78 13,73 74 91,5 6,67
Tempo de retenção (tR), fator de
retenção (k) e seletividade (α) do
nitrobenzeno (NB) e do
propilparabeno (PP) em função
da percentagem e do tipo de
modificador orgânico. Coluna:
Symmetry C18, 3 μm, 75 × 4,6
mm, Waters. Vazão: 1mL/min.
Temperatura 40 °C

35. Y. Kazakevich, R. Lobrutto, HPLC for Pharmaceutical
Scientists, Wiley-Interscience Hoboken, 2005.

38. Selectivity for steroids as a function of organic mobile-phase
component. Chromatograms showing the elution order of all eight
congeners as a function of organic modifier with 0.1% formic acid as
the buffer phase on YMC ODS-AQ column at ambient temperature.
(Top panel) 25% acetonitrile, 1.5-mL/min flow rate; (middle panel)
45% methanol, 1.2-mL/min flow rate; (bottom panel) 20%
tetrahydrofuran, 1.5- mL/min flow rate. (Reprinted from reference
51, with permission.) P. Zhuang, R. Thompson, and T. O’Brien, J.
Liq. Chrom. Rel. Technol. 28 (2005), 1345–1356.

39. Time (min) A (%) B (%)
0 100 0
4 55 45
40 0 100
45 0 100
48 100 0
A. Stafiej et al. / J. Biochem. Biophys.
Methods 69 (2006) 15–24

40. Y. Kazakevich, R. Lobrutto, HPLC for Pharmaceutical
Scientists, Wiley-Interscience Hoboken, 2005.

41. Theoretical retention versus pH profiles for acidic and a zwitterionic component. Chromatographic
conditions: Column: 15-cm × 0.46-cm Phenoemenex Luna C18(2), 5μm; 70% 15mM K2HPO4
adjusted pH 2–9 with phosphoric acid; 30% MeCN; flow rate, 1mL/min; temperature, 25°C. R.
LoBrutto, A. Jones, Y. V. Kazakevich, and H. M. McNair, J. Chromatogr. A 913 (2001),
173–187

42. Y. Kazakevich, R. Lobrutto, HPLC for Pharmaceutical
Scientists, Wiley-Interscience Hoboken, 2005.

43. R. LoBrutto, A. Jones, Y. V. Kazakevich, and H. M. McNair, J. Chromatogr. A 913 (2001), 173–187

45. Buszewski, B., Jezierska, M., Wełniak, M. and Berek, D. (1998),
Survey and Trends in the Preparation of Chemically Bonded Silica
Phases for Liquid Chromatographic Analysis. J. High Resol.
Chromatogr., 21: 267–281.

46. Y. Kazakevich, R. Lobrutto, HPLC for Pharmaceutical Scientists, Wiley-
Interscience Hoboken, 2005.

47. http://pubs.acs.org/cen/coverstory/86/8617cover.html
acessada em 2 de fevereiro de 2011.

48. Diferentes seletividades obtidas para uma mistura de compostos básicos com fases estacionárias preparadas com
diferentes tipos de ligantes químicos sobre a mesma sílica. Colunas: 250 x 4,6 mm, dp 5 μm, todas da ACE. Fase
móvel: metanol:tampão fosfato (pH 6; 25 mmol/L) 80:20 (v/v). Vazão: 1.5 mL/min. Identificação dos solutos: 1 =
norefedrina; 2 = nortriptilina; 3 = tolueno; 4 = amitriptilina; 5 imipramina
Dolan, J. W.; LCGC North Am. 2007, 25, 1014

49. J. Layne / J. Chromatogr. A 957 (2002) 149–164

50. H. Engelhardt, R. Grüner, M. Schererv
Chromatographia, 53 (2001), pp.
S154–S161
Separation of tricyclic antidepressants on an (a) Prontosil C18 H and (b) Prontosil C 18
ACE/EPS column (150 mm × 4.6 mm, dp 5 μm). Mobile phase 65:35 (v/v)
methanol:phosphate buffer (20 mM, pH 7). Peaks: 1 = uracil, 2 = protriptyline, 3 =
nortriptyline, 4 = doxepine, 5 = imipramine, 6 = amitryptyline, 7 = trimipramine, 8 =
clomipramine.