1. USAL
CAPACIDAD
CAPACIDAD
ANTIOXIDANTE DE
ANTIOXIDANTE DE
PLANTAS MEDICINALES
PLANTAS MEDICINALES
Dra. Lucy A. Ibáñez,Mg,Dr
Dra. Lucy A. Ibáñez,Mg,Dr
Lima-Perú
Lima-Perú
2008
2008

2. INVESTIGACION EN PLANTAS MEDICINALES
INVESTIGACION EN PLANTAS MEDICINALES
La Investigación etnobotánica y
etnofarmacológica de las especies
vegetales para su posible utilizaciòn
fitoterapèutica, exige un delicado
protocolo de trabajo que incluye toda
la escala de pruebas y ensayos que
van desde la selección de una
determinada planta de acuerdo a
ciertos criterios hasta una exhaustiva
gama de ensayos farmacològicos,
químicos fitoquímicos, toxicológicos y
clínicos.
Manual de Técnicas Experimentales . Proyecto
X.10 . CYTED

4. ¿Ensayos Clínicos en Plantas Medicinales?
¿Ensayos Clínicos en Plantas Medicinales?
ESTUDIOS PRE-CLÍNICOS ESTUDIOS CLINICOS
A
U
ESTUDIOS T
TOXICOLÓGICOS O ESTUDIOS
R FASE I
I
D ESTUDIOS
A FASE II
ESTUDIOS D
FARMACÓLOGICOS
R ESTUDIOS
E FASE III
G
ESTUDIOS U
QUIMICO-FARMACÉUTICOS L AUTORIDAD REGULADORA
A
D ESTUDIOS
ESTUDIOS O
R FASE IV
ETNOBÓTANICOS,
AGRONÓMICOS
A

5. FASES DE ESTUDIO DE UN NUEVO
MEDICAMENTO
Selección y Estudos pre-clínicos Estudos pre-clínicos
estandarización
del material activo FASE I FASE II
• Eficacia • Farmacocinética
• Efectos colaterales • Toxicologia especial
• Toxicologia aguda
• Doses repetidas
Test clínicos Test clínicos Test clínicos Test clínicos
FASE I FASE II FASE III FASE IV
VOLUNTÁRIOS PACIENTES MULTICÉNTRICO USO GENERAL
• limites de dosis • eficacia • efectos colaterales • vigilancia médica
• farmacocinética • interacciones
• efectos inesperados • ventajas
• limitaciones

6. INVESTIGACION EN PLANTAS MEDICINALES
(EQUIPO MULTIDISCIPLINARIO)
CULTIVO
CULTIVO SÍNTESIS PATENTES
PATENTES
SÍNTESIS
(ING. FORESTAL, ING.
(ING. FORESTAL, ING.
AGRONOMO, ETC)
AGRONOMO, ETC)
QUÍMICA
QUÍMICA
COMBINATORIA
FARMACOLOGÍA
FARMACOLOGÍA
COMBINATORIA
L
L MOLECULAR
MOLECULAR
QUÍMICA
QUÍMICA
ORGÁNICA
ORGÁNICA
(QUIMICOS; INGENIEROS
(QUIMICOS; INGENIEROS
QUÎMICOS,
QUÎMICOS,
FARMACÉUTICOS, ETC)
FARMACÉUTICOS, ETC)
FARMACOLOGIA TOXICOLOGIA ENSAYOS
PLANTA CLÍNICOS(FARMACOLOGOS;,QUIMICOS FARMACEUTICOS; MEDICOS; ETC)
PROCESO DE VALIDACIÓN
BOTÁNICA
BOTÁNICA CONTROL DE CALIDAD
(BOTANICOS, TAXONOMOS FARMACEUTICOS; BIOLOGOS, ETC)
(BOTANICOS, TAXONOMOS FARMACEUTICOS; BIOLOGOS, ETC)
FITOMEDICAMENTOS
ETNOFARMACOLOGIA
ETNOFARMACOLOGIA COMERCIALIZACION, EXPORTACION
(FARMACÓLOGOS; ANTROPÓLOGOS;FARMACÉUTICOS;
(FARMACÓLOGOS; ANTROPÓLOGOS;FARMACÉUTICOS; (EMPRESARIOS, EXPORTADORES,
BIOLOGOS;MEDICOS, ETC).
BIOLOGOS;MEDICOS, ETC).

7. VALIDACIÓN DE
PLANTAS MEDICINALES
PLANTA Test in vitro,
preclínicos
Perfil farmacológico
Análisis toxicológico Y clínicos
EFICACIA SEGURIDAD
PLANTA MEDICINAL
Síntesis química de
NUEVOS
derivados activos
MEDICAMENTOS
Fracciones purificadas
Extracto total de la planta Principios activos aislados e
identificados

8. INCIDENCIA DE ENFERMEDADES
INCIDENCIA DE ENFERMEDADES
DE CRONICO DEGENERATIVAS
DE CRONICO DEGENERATIVAS
Numerosos estudios en nutrición humana
Numerosos estudios
demuestran una estrecha correlación entre el
demuestran
consumo de frutas y verduras y la menor
consumo de frutas y verduras y la menor
incidencia
incidencia de
de enfermedades
enfermedades crónico
crónico
degenerativas debido a su bajo contenido en
degenerativas debido a su bajo contenido en
calorías, colesterol y a la presencia de
calorías, colesterol y a la presencia de
vitaminas, fibras, antioxidantes naturales y
vitaminas, fibras,
minerales.
minerales.
Así mismo el estrés oxidativo ha sido
Así mismo el estrés oxidativo ha sido
asociado a la patogénesis de muchas
asociado a la patogénesis de muchas
enfermedades
enfermedades humanas,
humanas, como
como
arterioesclerosis, artritis, demencia, cáncer,
arterioesclerosis, artritis, demencia, cáncer,
etc; es por ello que el uso de antioxidantes
etc; es por ello que el uso de antioxidantes
en farmacología es estudiado de forma
en farmacología es estudiado de forma
intensiva, particularmente en el tratamiento
intensiva, particularmente en
de
de accidentes
accidentes cerebrovasculares
cerebrovasculares y
enfermedades neurodegenerativas.
enfermedades neurodegenerativas.

9. INCIDENCIA DE ENFERMEDADES
INCIDENCIA DE ENFERMEDADES
DE CRONICO DEGENERATIVAS
DE CRONICO DEGENERATIVAS
El oxígeno es esencial para la mayoría de
los organismos que viven bajo condiciones
aerobicas. Este es utilizado por la célula , la
cual posee diversos sistemas que producen
radicales libres de oxígeno(RLO).
Frente al poder agresivo de estos RLO, la
célula posee un arsenal defensivo de
mecanismos neutralizantes formado por
enzimas y compuestos que evitan la
formación incontrolada y excesiva de RLO
y producen la neutralización, eliminación y
bloqueo de su actividad en cadena

10. INCIDENCIA DE ENFERMEDADES
INCIDENCIA DE ENFERMEDADES
DE CRONICO DEGENERATIVAS
DE CRONICO DEGENERATIVAS
La enzima superóxido dismutasa
remueve el anión superóxido (O2º)
convirtiéndolo en H2O2, el cual es
transformado por la enzimas catalasa y
Glutatión peroxidasa en agua (H2O)
.
Así mismo también posee moléculas
que remueven los radicales libres por
reacción directa (no catalítica) tales
como: el glutation reducido, los
tocoferoles (vitamina E) y el ácido
ascórbico (Vitamina C).

11. Así mientras que niveles moderados de RLO
constituyen y modulan vías fisiológicas de funciones
celulares, incluyendo señalización en cascadas y el
control de la expresión génica transcripcional y post-
transcripcional, el estrés oxidativo severo induce
daño celular que puede conducir a apoptosis o a la
necrosis.
Por tanto el estrés oxidativo se deriva de la falta de
equilibrio entre los mecanismos de defensa
antioxidante y los fenómenos favorecederos de la
oxidación.

12. PROCESOS OXIDATIVOS
Dos fenómenos muy importantes en nuestra vida son
procesos oxidativos: la combustión y la respiración.
Ambos se asemejan, ya que son procesos a través
de los cuales sustratos combustibles se transforman
en energía consumiéndose oxígeno y liberándose
agua y dióxido de carbono.
Así, la combustión, es un proceso oxidativo en el cual
un combustible se transforma en energía en forma
de luz y calor, produciéndose además dióxido de
carbono (CO2) y agua. Pero si el proceso no es
perfecto, la oxidación no es total y produce
contaminantes, como el monóxido de carbono.

13. En la respiración ocurre lo mismo: La glucosa y
ácidos grasos - se transforman en energía. Esta
transformación se realiza al interior de la célula, en la
mitocondria y exactamente, se produce ATP, la
molécula clave para la síntesis de los componentes
celulares y para la mayoría de los procesos celulares,
y que se conoce también como la "moneda"
energética de la célula.
En la respiración se consume oxígeno, se genera
ATP, y quedan como residuos dióxido de carbono y
agua. Pero, este proceso no es perfecto ya que se
producen también otras moléculas contaminantes, las
Especies Reactivas del Oxígeno (EROs). Entre el 1
y 3 % del oxígeno que respiran nuestras células al
oxidar sus sustratos se transforma en EROs, que, o
bien son radicales libres, o llevan a su formación.

14. ESPECIES OXIGENO REACTIVAS (ROS)
ESPECIES OXIGENO REACTIVAS (ROS)
Por causas ambientales (radiación), así como por la ingesta
de algún contaminante o incluso como consecuencia de
nuestro propio metabolismo, surgen algunas moléculas
que nos pueden provocar daño.
A estas se les conoce como especies oxigeno reactivas
(ROS), que se asocian a enfermedades como cáncer,
problemas cardiacos o al natural envejecimiento humano.
Entre los problemas que originan figuran: destrucción de
paredes celulares, inactivación de enzimas, debilitamiento
de la capacidad defensiva, alteración del sistema
inmunológico e incluso daño del material genético .

15. RADICALES LIBRES
RADICALES LIBRES
Además la radiación cósmica y la radiación
electromagnética de baja longitud de onda (por
ejemplo los rayos gama) pueden dividir el agua en el
cuerpo para generar el radical hidroxilo, OH▪.
Este radical débilmente reactivo una vez producido
ataca a cualquier cosa que este cerca, siendo su vida
media extremadamente pequeña y reaccionando en
su punto de formación dejando tras de si una secuela
de reacciones en cadena de radicales libres en
propagación.

16. SUPLEMENTACION NUTRICIONAL
SUPLEMENTACION NUTRICIONAL
Es así que un estudio realizado en China demostró la
eficacia de una “suplementación nutricional" con β-
caroteno, vitamina E y Selenio sobre la mortalidad total y
por cáncer (especialmente carcinoma de esófago en una
población deficitaria).
Sin embargo un estudio Finlandés realizado sobre una
población de alto riesgo (fumadores importantes) mostró
que la suplementación con dosis elevadas de β -caroteno
aumentaba el riesgo de padecer un carcinoma de pulmón.
Es muy importante que una dieta diaria debe proveer
cantidades adecuadas de nutrientes esenciales “naturales”
para el mantenimiento de una salud óptima. Estos
antioxidantes naturales se encuentran presentes en
prácticamente todas las plantas, microorganismos, hongos
e incluso en los tejidos animales.

17. TENDENCIAS MUNDIALES DE LA
TENDENCIAS MUNDIALES DE LA
ALIMENTACION
ALIMENTACION
Las tendencias mundiales de la
alimentación en los últimos años
indican un interés acentuado de los
consumidores hacia ciertos
alimentos que además de contener
nutrientes contengan sustancias
fisiológicamente activas que
cumplan, al igual que los nutrientes
esenciales, una función de beneficio
en la reducción de ciertas
enfermedades.

18. TENDENCIAS MUNDIALES DE LA
TENDENCIAS MUNDIALES DE LA
ALIMENTACION
ALIMENTACION
A estos alimentos se les ha
denominado “alimentos funcionales”
y se vienen realizando la
identificación de ciertos principios
activos, a fin de evaluar su
seguridad y las dosis respectivas a
utilizar, estableciéndose en la
mayoría de casos marcadores
analíticos, marcadores
farmacológicos, realizándose además
ensayos clínicos controlados a doble
ciego y la demostración de sus
efectos bioquímicos, fisiológicos,
farmacológicos y toxicológicos.

19. ALIMENTOS FUNCIONALES
ALIMENTOS FUNCIONALES
El término Alimento Funcional fue propuesto por
primera vez en Japón en la década de los 80’s con la
publicación de la reglamentación para los "Alimentos
para uso específico de salud" ("Foods for specified
health use" o FOSHU).
Aunque el término alimentos funcionales no es una
categoría de alimento legalmente reconocida por la
Administración de alimentos y Drogas (FDA) de los
Estados Unidos, sin embargo se han dado
recientemente algunos cambios legislativos acerca de
la información que deben contener las etiquetas de los
productos relacionados con beneficios funcionales de

20. REGULACIONES
REGULACIONES
Las regulaciones de la NLEA (Ley de Etiquetado y
Regulación Nutricional) y de la DSHEA (Ley de
Suplementos Dietéticos Salud y Educación) se
encaminan a preparar el camino legal en que se debe
fundamentar el uso de estos productos. La posición
oficial de la U.S. Food & Drugs Administration
(FDA) es: "Las sustancias específicas de los
alimentos pueden favorecer la salud como parte de
una dieta variada".

21. Antioxidantes
Se define como cualquier sustancia que, a bajas concentraciones en
comparación con el sustrato oxidable, retrasa o inhibe
significativamente la oxidación de dicho sustrato. Para lograrlo los
antioxidantees entregan un electron a los radicales libres, con lo cual
los desactivan, apagando el proceso de oxidaciòn y transformandose
ellos en radicales libres inactivos o poco reactivos.
La importancia de un antioxidante depende de su concentración, del
medio donde actúa y de su habilidad para interaccionar con sistemas
regeneradores.
Ciertas enfermedades como la arterioesclerosis, degeneraciones
ligadas al envejecimiento y el cáncer, podrían estar unidas al fenómeno
de la oxidación celular mediada por radicales libres.

22. EL ENVEJECIMIENTO ENFERMEDADES
CRONICODEGENERATIVAS

23. ..
Envejecimiento celular Peroxidación de los ácidos grasos de la membrana
celular y daño del ADN.
Ateroesclerosis Peroxidación de lípidos en las partículas de LDL con
daño de otros de sus componentes.
Cáncer Daño del ADN.
Cataratas Modificaciones irreversibles en las proteínas.
Cuadros Inflamatorios Crónicos Activación de genes relacionados con la respuesta
inflamatoria.

24. OXIDACION DE MOLECULAS BIOLOGICAS
OXIDACION DE MOLECULAS BIOLOGICAS
La oxidación de las moléculas biológicas,
membranas y tejidos es inducida por el oxigeno
activo y mediada por radicales libres, lo cual esta
relacionado con un aumento en la incidencia de
enfermedades digestivas en los seres humanos.
El metabolismo oxidativo, proceso biológico
normal, es capaz de generar radicales libres
oxigenados, altamente reactivos. Estas especies con
oxígenos activos incluyen el radical superóxido
(O2º), el peróxido de hidrógeno (H2O2), el radical
óxido nítrico (NO▪) y el oxígeno singulete ( O2).
1
1

25. Sustancias propias del organismo,
enzimas antioxidantes
Tambièn cierta parte de los superóxidos son producidos
Tambièn cierta parte de los superóxidos son producidos
por accidentes químicos en los que muchas moléculas del
por accidentes químicos en los que muchas moléculas del
cuerpo reaccionan directamente con el Oxigeno para
cuerpo reaccionan directamente con el Oxigeno para
producir súperóxido. Ejemplos de ello incluyen las
producir súperóxido. Ejemplos de ello incluyen las
catecolaminas, tetrahidrofolatos y algunos componentes
catecolaminas, tetrahidrofolatos y algunos componentes
de la cadena mitocondrial y otras cadenas de transporte de
de la cadena mitocondrial y otras cadenas de transporte de
electrones.
electrones.
Esta producción de superóxido es inevitable. Además
Esta producción de superóxido es inevitable. Además
cierta
cierta cantidad
cantidad de de súper
súper óxido
óxido se se produce
produce
deliberadamente por ejemplo los fagocitos activados
deliberadamente por ejemplo los fagocitos activados
(neutrófilos, monocitos, macrófagos, eosinófilos) dan lugar
(neutrófilos, monocitos, macrófagos, eosinófilos) dan lugar
a grandes cantidades superóxido como parte del
a grandes cantidades superóxido como parte del
mecanismo a través del cual exterminan a los organismos
mecanismo a través del cual exterminan a los organismos
extraños durante las inflamaciones crónicas este
extraños durante las inflamaciones crónicas este
mecanismo protector normal puede afectarse.
mecanismo protector normal puede afectarse.

26. Sistemas antioxidantes del organismo
..ANTIOXIDANTES ENZIMATICOS.
ANTIOXIDANTES ENZIMATICOS.
INTRACELULAR. ENDOGENOS
INTRACELULAR. ENDOGENOS
Catalasa
Catalasa
Glutation peroxidasa
Glutation peroxidasa
Gutation reductasa
Gutation reductasa
Superoxido dismutasa
Superoxido dismutasa
Complejo reparador de ADN
Complejo reparador de ADN
ANTIOXIDANTES NO ENZIMATICOS.
ANTIOXIDANTES NO ENZIMATICOS.
EXTRACELULAR. ENDOGENOS
EXTRACELULAR. ENDOGENOS DIETARIOS EXOGEBNOS
DIETARIOS EXOGEBNOS
Glutation
Glutation B Caroteno
B Caroteno
Urato
Urato Vit C y E
Vit C y E
Ubiquinol
Ubiquinol Polifenoles
Polifenoles
Poteínas plasmáticas
Poteínas plasmáticas Flavonoides
Flavonoides
Químicos sintéticos
Químicos sintéticos

27. Sustancias propias del organismo,
enzimas antioxidantes
Además de las enzimas glutatión peroxidasa, catalasa y
Además de las enzimas glutatión peroxidasa, catalasa y
superóxido
superóxido dismutasa,
dismutasa, hay
hay otras
otras sustancias
sustancias
antioxidantes como la coenzima Q-10, que ayuda a las
antioxidantes como la coenzima Q-10, que ayuda a las
enzimas a realizar su función, y participa en
enzimas a realizar su función, y participa en
numerosos procesos corporales.
numerosos procesos corporales.
Se ha comprobado una gran similitud entre las
Se ha comprobado una gran similitud entre las
propiedades antioxidantes de la vitamina E y las de la
propiedades antioxidantes de la vitamina E y las de la
coenzima Q-10, que juega un muy importante papel en
coenzima Q-10, que juega un muy importante papel en
la generación de energía celular, y a su vez es un
la generación de energía celular, y a su vez es un
estimulante inmune, mejora la circulación y ayuda a
estimulante inmune, mejora la circulación y ayuda a
proteger el sistema cardiovascular.
proteger el sistema cardiovascular.

28. Sustancias propias del organismo,
enzimas antioxidantes
Entre los principales antioxidantes dietarios esta la vitamina E
Entre los principales antioxidantes dietarios esta la vitamina E
que se ha demostrado posee actividad antioxidante in vivo.
que se ha demostrado posee actividad antioxidante in vivo.
La vitamina C in vitro regenera a la vitamina E, lo que
La vitamina C in vitro regenera a la vitamina E, lo que
probablemente ocurra tambien in vivo.
probablemente ocurra tambien in vivo.
Los carotenoides estàn presentes en zanahorias , ,berros, espinacas,
Los carotenoides estàn presentes en zanahorias berros, espinacas,
tomates , ,mangos y damascos.
tomates mangos y damascos.
Los polifenoles son un grupo de compuestos presentes en la
Los polifenoles son un grupo de compuestos presentes en la
naturaleza, en su mayoría potentes antioxidantes necesarios para
naturaleza, en su mayoría potentes antioxidantes necesarios para
el funcionamiento de las células vegetales, que se encuentran en
el funcionamiento de las células vegetales, que se encuentran en
frutas y verduras, principalmente manzanas y cebollas y en
frutas y verduras, principalmente manzanas y cebollas y en
bebidas como el té y el vino.
bebidas como el té y el vino.

29. Los principales polifenoles identificados en la
dieta son àcidos fenólicos, derivados de
tirosina, estilbenos, flavonoides y
compuestos poliméricos como los taninos.
En estudios in vitro, muchos polifenoles
naturales son mejores antioxidantes que la vit
C y E, siendo la quercetina la sustancia más
abundante.
Los citroflavonoides presentes en algunos
cítricos, como el hesperidósido y el rutósido,
son eficaces antioxidantes.

30. Moléculas con actividad antioxidante
Flavonoides

31. Investigación de plantas
con actividad antioxidante

32. OBTENCION DEL
MATERIAL VEGETAL(MV)
El MV que serà utilizado para la investigación se debe
El MV que serà utilizado para la investigación se debe
recolectar de acuerdo con cada especie, la época de
recolectar de acuerdo con cada especie, la época de
recolección, la parte que es utilizada, la naturaleza,
recolección, la parte que es utilizada, la naturaleza,
cantidad y tipo de principio activo, los mismos que
cantidad y tipo de principio activo, los mismos que
varían considerablemente de acuerdo a la familia,
varían considerablemente de acuerdo a la familia,
género y especie de cada planta medicinal y se debe
género y especie de cada planta medicinal y se debe
proceder de forma rigurosa a su correcta
proceder de forma rigurosa a su correcta
identificación, posterior preservación, conservación y
identificación, posterior preservación, conservación y
preparación.
preparación.

33. Plantas peruanas nativas e introducidas
evaluadas

34. EXTRACCION DEL MATERIAL
VEGETAL
Una vez seleccionada y
recolectada la especie que
se quiere estudiar se
dispondra de una cantidad
apropiada de material
vegetal seco que puede
triturarse en mayor o menor
grado,según el caso y
posteriormente someterse a
la acción del disolvente
oportuno en las condiciones
y con la duración adecuadas
para conseguir la extracción
más completa posible de las
sustancias activas en el MV.

35. SCREENING FITOQUIMICO
SCREENING FITOQUIMICO
El objetivo de la primera extracción se centra
El objetivo primera extracción
en la obtención de una pequeña porción de
en la obtención de una
extracto, en cantidad suficiente que permita
extracto, en cantidad suficiente que permita
por un lado, la realización de los bioensayos
por
preliminares programados , encaminados a
preliminares encaminados a
demostrar la presencia de sustancias
demostrar presencia de sustancias
bioactivas en él y por otro disponer de
bioactivas otro disponer de
materia para obtener cromatogramas (CF) en
materia para obtener cromatogramas (CF) en
diversas condiciones de elución, espectros de
diversas condiciones de elución, espectros
infrarojo(IR) y de Resonancia Magnetica
infrarojo(IR) y de Resonancia Magnetica
Nuclear de protón (RMN), que sirvan para
Nuclear de (RMN), que sirvan para
caracterizar suficientemente el extracto y
caracterizar suficientemente el extracto y
proporcionar información sobre su probable
proporcionar
composición.
composición.
Manual de Técnicas Experimentales . Proyecto X.10 . CYTED

36. CARACTERIZACION PRELIMINAR DE LOS EXTRACTOS
CARACTERIZACION PRELIMINAR DE LOS EXTRACTOS
Para conseguir el aislamiento y purificaciòn de los
principios activos , se recomienda utilizar algunas
técnicas fisicoquímicas e instrumentales que puedan
informar sobre la naturaleza y composición de los
extractos y fracciones que se estén analizando y
puedan permitir detectar la presencia de algunos
tipos de metabolitos, alcaloides, flavonoide,
esteroides, saponinas.
Como herramienta fitoquímica se utiliza un
conjunto de técnicas muy bien establecidas, que
están basadas en reacciones coloreadas, selectivas o
específicas y que mediante reactivos de diverso tipo,
aplicados generalmente de forma directa sobre el
extracto o sus fracciones o sobre placas
cromatográficas desarrolladas, proporcionan
información sobre la presencia de distintos grupos
de metabolitos.
Manual de Técnicas Experimentales .

37. OXIDACION DE MOLECULAS BIOLOGICAS
OXIDACION DE MOLECULAS BIOLOGICAS
Otro grupo de herramientas muy útiles se
basan en la aplicación de técnicas
espectróscopicas generalmente disponible.
Es conveniente obtener espectros IR (neto) y
RMN1H (Preferentemente en CDCl3 o
DMSO-d6) del extracto o la fracción, para
tratar de detectar y estimar particularmente
la presencia y la proporción de componentes
lineales y otros tipos de metabolitos
secundarios definidos.

38. CARACTERIZACION PRELIMINAR DE LOS EXTRACTOS
CARACTERIZACION PRELIMINAR DE LOS EXTRACTOS
La estimación de la presencia de componentes lineales se
consigue directamente mediante observación simple de la
intensidad y proporción de las absorciones hacia 720 cm-1(IR) y
1,25 ppm (RMN 1H).
La estimación de componentes funcionalizados se puede llevar a
cabo tambien mediante la observación del espectro de IR, a
través de las absorvaciones que aparezcan en las regiones de
3,500-3000 cm-1(funciones NH y OH, olefinas y sistemas
aromáticos), 1800-1500 cm-1 (carbonilos, carboxilos e
insaturaciones ) y 1100-800 cm-1 (éteres e insaturaciones);
complementandola con la observación del espectro de RMN1H ,
en las zonas 13-8 ppm (H puente, aldehidos, amidas), 8-6 ppm
(aromáticos y olefínicos conjugados)), 6-3 ppm (olefínicos,
alcoholes, ésteres, grupos metoxilo, azúcares) y 3-0,5 (metilos)
ppm.
Manual de Técnicas Experimentales . Proyecto X.10 . CYTED (pag 37)

39. VALIDACION EXPERIMENTAL
 Tamizaje In vitro (céluas , órganos aislados)
/ In vivo: preclínica (animales) y clínica (humanos)
antiinflamatoria, antitumoral, antiviral espasmolítica,
analgésica, diurética, hipoglicémica, sedante, antioxidante,
antiinfecciosa, cicatrizante, etc.
 Extracción fraccionada ( > ó < polaridad)
 Fraccionamiento dirigido.
 Elucidación estructural: a) Universidad de Salamanca.
(Departamento de Química Farmacéutica
Dr. Arturo San Feliciano)
b) Universidad Autónoma de Mexico
(Instituto de Química. Dr. Ricardo Reyes Chilpa).

40. Plantas con acción
antioxidante

41. Aunque el rutósido es relativamente
frecuente en la naturaleza, solo un
pequeño número de plantas lo
contienen en cantidad suficiente para
permitir su extracción industrial.
Se obtiene fundamentalmente a partir
de la sófora (Sophora japonica L.,
Fabaceae), el trigo sarraceno
(Fagopyrum esculentum Moench.,
Fagopyrum tataricum [L.] Gaertn.,
Polygonaceae), Eucalyptus
macrorrhyncha F. Muell., (Myrtaceae),
y Dimorphandra spp.
(Caesalpinaceae).
Por su contenido en flavonoides, la
hoja de ginkgo (Ginkgo biloba, Ginkgo biloba.
Ginkgoaceae) , también llamado
«árbol de los cuarenta escudos», es
un excelente captador de radicales
libres, lo que explica sus propiedades
antioxidantes.

42. Otras plantas utilizadas como
antioxidantes en productos
cosméticos por su contenido en
flavonoides son la manzanilla
(Chamomilla recutita [L.]
Rauschert, Asteraceae), la
caléndula (Calendula officinalis
L., Asteraceae) y el lúpulo
(Humulus lupulus,
Cannabaceae), si bien también
se emplean flavonoides puros,
como el hesperidósido y el
rutósido.
Vitis vinifera.
En el caso de la vid roja (Vitis
vinifera L., Vitaceae)su
utilización como antioxidante en
la industria de los cosméticos se
debe a la presencia de
proantocianidoles.

43. Los flavanolignanos
presentes en el fruto del
cardo María (Silybum
marianum [L.] Gaertn.,
Asteraceae) inhiben la
peroxidación lipídica de la
membrana y actúan como
captadores de radicales
libres.
El principio activo
mayoritario se conoce
como silimarina, y está
constituido por una
mezcla de silibina,
silicristina y silidianina. Silibina, silicristina, silidianina

44. OTROS PRODUCTOS CON ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Las ceramidas (esfingosinas N-aciladas por un ácido
graso) y glicosilceramidas del trigo y del arroz, que
constituyen una alternativa de las ceramidas animales;
la industria cosmética las utiliza por su posible
capacidad en la prevención o atenuación del
envejecimiento cutáneo.
Los ácidos grasos insaturados (aceites). Como
ejemplo podemos citar el aceite de sésamo (semillas
de Sesamum indicum, Pedaliaceae), el aceite de maíz
(estigmas de Zea mays L., Gramineae), aceite de oliva
(frutos de Olea europaea, Oleaceae) y aceite de
cacahuete (semillas de Arachis hypogaea,
Leguminosae).

45. Efecto antioxidante del hidroxitirosol
procedente de la hoja de olivo (Olea
europaea L)
El hidroxitirosol(2-(3,4-dihidroxifenil)etanol) es un compuesto
fenólico presente en la hoja del olivo en forma libre y
esterificada y que destaca del resto de polifenoles por sus
múltiples actividades farmacológicas como antimicrobiano
con actividad in vitro frente a bacterias gram + y gram -,
inhibidor de la formación del leucotrieno B4 a nivel de la 5-
lipooxigenasa implicadas en el proceso antiinflamatorio e
inductor de apoptosis en células HL-60. La actividad
antioxidante del hidroxitirosol es una de las más elevadas
entre los polifenoles, siendo incluso superior a la de la
Vitamina E.
P. de la Fuente, P Chamorro, M. Moreno. M.A Poza.
Revista de Fitoterapia 2004;4(2):PI-PF 139,140

46. ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ANTI-ESTRES DE MACA

47. EVALUACIÓN DE LA CAPACIDAD ANTIOXIDANTE DE
PLANTAS MEDICINALES PERUANAS NATIVAS E
INTRODUCIDAS.
Dr. Castañeda C. B.1, Q.F. Ramos LL. E. 2, Dra. Ibáñez V. L. 3
RESUMEN
Se evaluó la capacidad antioxidante de veintinueve extractos de las
siguientes plantas medicinales: Cinnamomum zeylanicum “canela”,
Calophyllum brasiliense “lagarto caspi”, Myrciaria dubia “camu camu”,
Minthostachys mollis “muña”, Alchornea castaneifolia “hiporuro”,
Smallanthus sonchifolius “yacón”, Lepidium peruvianum y Lepidium
meyenii “maca”, por el método de la decoloración del radical 2,2-difenil-1-
picrilhidrazilo (DPPH).
Los resultados obtenidos al evaluar la capacidad antioxidante a las
concentraciones de 1 ug/mL, 50 ug/mL, 100 ug/mL y 200 ug/mL fueron:
canela (Extracto etanólico de la corteza) 97.59% a una concentración de
1 ug/mL, lagarto caspi (E. Metanólico de hojas) 99.76% a 50 ug/mL, camu
camu (E. Metanólico del fruto) 98.09% a 50 ug/mL, muña (E. Acuoso de
hojas) 92.41% a 50 ug/mL, hiporuro (E. Metanólico de hojas) 100.57% a
100 ug/mL, Lagarto (E. Acuoso de hojas) 110.56% a 100 ug/mL, Lepidium
peruvianum (E. Acuoso de hipocótilo) 95.55% a 200 ug/mL y Lepidium
meyenii (E. Metanólico de hipocótilo) 88.21% a 200 ug/mL, en
comparación con el al ácido ascórbico (Vitamina C) que presentó una
actividad antioxidante en promedio de 92.82%.

48. DETERMINACION DE LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
DETERMINACION DE LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
POR EL METODO DEL DPPH
POR EL METODO DEL DPPH
El Fundamento del método desarrollado por Brand-
Willams et al , DPPH, consiste en que este radical
tiene un electrón desapareado y es de color azul-
violeta, decolorándose hacia amarillo pálido por la
reacción de la presencia de una sustancia
antioxidante siendo medida la absorbancia
espectrofotométricamente a 517 nm.
La diferencia de absorbancias permite obtener el
porcentaje de captación de los radicales libres .
199 3.0

49. ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Procedimiento:
1. Se preparó 100 ml una solución de DPPH (2,2-difenil-1-picril hidrazilo) en metanol
de 20 mg/L.
2. Luego se preparó una solución metanólica de los extractos en una concentración
de
300 ug/ml (Solución A) y de 600 ug/mL (Solución D)
3. El Blanco se preparó con metanol agua 2:1 para ajustar el espectrofotómetro a
cero.
4. El Blanco de muestra se preparó con 0.75 mL de muestra (solución A) y 1.5 mL de
metanol.
5. Se preparó el patrón de referencia con 1.5 mL de DPPH y 0.75 mL de agua.
6. Luego se procedió a preparar la muestra con 0.75 mL de solución A y 1.5 mL de
DPPH, obteniéndose una concentración final de 100 ug/mL, dejándose x 5 min. Y
se
leyó a 517 nm en un espectrofotómetro.
7. Se midió la absorbancia del patrón de referencia y del blanco de la muestra.
8. Luego se diluyó la solución A con metanol en una proporción 1:2 (solución B) para
obtener una concentración final de 50 ug/mL, y en una proporción de 1:10 (solución
C) para obtener una concentración final de 1 ug/mL.
9. Con las soluciones B, C y D se procedió igual a los puntos 6 y 7.

50. Actividad Antioxidante un
DPPH DPPH
(Forma radicalaria) (Forma reducida)
Compuesto Compuesto
N N
N
oxidado
HN
O 2N O2 N
NO2 NO 2
O 2N
O2N
Violeta Amarillo

51. Los extractos fueron evaluados por triplicado a diferentes
concentraciones de 1, 25, 50, 100 y 200 ug/mL utilizando como
fármaco control, vitamina C.
Posteriormente con los valores de las absorbancias obtenidas
se determinó el % de captación de radicales libres (DPPH)
mediante la siguiente formula:
Capacidad Antioxidante = [ 1 – (A2 – A3) / A1 ] x 100
% Captación de Radical Libre
Donde:
A1= Absorbancia del patrón de referencia
A2= Absorbancia de la muestra
A3= Absorbancia del blanco de muestra

52. Preparación de soluciones antioxidantes

53. Medición de absorbancias de las soluciones en el Espectrofotómetro

54. % CAPTACION DE RADICAL
MUESTRA Extracto LIBRE (R.L.)
VITAMINA C (Control )
(Acido Ascórbico) ----- 92,82
Canela, corteza
(Cinnamomum zeylanicum) 10% Etanol 97.59 a
Lagarto, hoja
(Calophyllum brasiliense) 20% Metanol 99.76 b
Camu- camu, fruto
(Myrciaria dubia) 10% Metanol 98.09 b
Muña, hoja
(Minthostachys mollis) 10% Acuoso 92.41 b
Hiporuro, hoja
(Alchornea castaneifolia) 10% Metanol 75.96 b
Lagarto, hoja
(Calophyllum brasiliense) 10% Acuoso 110.56 c
Yacón, hoja
(Smallanthus sonchifolius) 10% Etanol 103.19 d a 1 ug/mL,
b 50 ug/mL
c 100 ug/ mL
MACA KOKEN, hipocótilo
d 200 ug/ mL
(Lepidium peruvianum) 10% Acuoso 95.55 d
MACA AMAZON, hipocótilo
(Lepidium meyenii) 10% Metanol 88.21 d

55. Porcentaje de Captación de Radical Libre x DPPH
Capacidad antioxidante % Captación de R.L.
120 111
100 103
98 98 96
100 93 92 88
76
80
% 60
40
20
0
Vit C CAN - ET LAG - MET CAM - MET MUÑ - AC HIP - MET LAG - AC YAC - ET MAC- K - MAC- A -
1ug/ mL 50 ug/ mL 50 ug/ mL 50 ug/ mL 50 ug/ mL 100 ug/ mL 200 ug/ mL AC AC
200 ug/ mL 200 ug/ mL
Concentración

56. AISLAMIENTO E IDENTIFICACION DE
PRINCIPIOS ACTIVOS DE PLANTAS
CON ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE

57. LAGARTO CASPI , CALOPHYLLUM BRASILIENSE
UNIVERSIDAD DE SALAMANCA
(ESPAÑA)

58. LAGARTO CASPI , CALOPHYLLUM BRASILIENSE
UNIVERSIDAD DE SALAMANCA
(ESPAÑA)

59. LAGARTO CASPI , CALOPHYLLUM BRASILIENSE
UNIVERSIDAD DE SALAMANCA
(ESPAÑA)

60. Lepidium peruvianum Ch. “MACA”
UNIVERSIDAD DE SALAMANCA
(ESPAÑA)

61. Lepidium peruvianum Ch. “MACA”
UNIVERSIDAD DE SALAMANCA
(ESPAÑA)

64. MUCHAS GRACIAS
http://www.usal.es
(BECAS INTERNACIONALES)
Dra. Lucy A. Ibáñez Vásquez
lu_cy1964@yahoo.com
libanezv@hotmail.com
199 3.0