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La mitocondria como diana
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  • 1. LA MITOCONDRIA COMO DIANA FARMACOLÓGICAORIGEN DE LA MITOCONDRIA:La mitocondria, cuyo nombre proviene del griego mito (hilo) y chondros(cartílago), es una organela citoplasmática con un origen ciertamente peculiar.Todas sus características estructurales y funcionales evidencian que en elnacimiento de la célula eucariota, una bacteria fue fagocitada por unmicroorganismo de mayor tamaño con el fin de aprovecharse de la energía, enforma de ATP, que ésta fabricaba mientras la célula anfitriona dotaba a suhuésped de materias primas y protección. La simbiosis perfecta entre estos dosorganismos primitivos supone en uno de los pasos más importantes de laevolución.DATOS RELEVANTES:  Las mitocondrias tienen más similitudes con las bacterias que únicamente tamaño y forma.  La matriz mitocondrial, contiene DNA, RNA y ribosomas que participan en la síntesis de algunos componentes mitocondriales (el resto es importado del citoplasma después de su expresión desde el núcleo).  A pesar de esto, se reproducen por fisión binaria, además el proceso respiratorio que llevan a cabo, es muy semejante al que se observa en bacterias aerobias actuales.  A partir de estas observaciones, Lynn Margulis propuso que el origen de las mitocondrias modernas es a partir de la endosimbiosis (endo, dentro + simbiosis relación biológica con beneficio mutuo) de bacterias aerobias con eucariontes anaerobios antiguos.  Los nutrientes abastecidos por el eucarionte y consumidos por la bacteria, fueron presumiblemente reembolsados con creces, debido a la alta eficiencia metabólica oxidativa que el procarionte (sin núcleo), le dio al eucarionte.A lo largo del tiempo, estas bacterias fagocitadas fueron asumiendo tareas cadavez más relevantes dentro del funcionamiento interno de esta célula primitivahasta convertirse en lo que hoy conocemos como mitocondria.
  • 2. LAS MITOCONDRIAS:Son organelos citoplasmáticos membranosos característicos de las célulaseucarióticas. Las mitocondrias poseen una gran importancia, ya que en ellas serealizan una serie de reacciones de óxido-reducción que permiten el sustentoenergético de la célula.De esta manera, y de forma general, células que realizan un mayor gasto deenergía poseerán una mayor cantidad de mitocondrias.Su dimensión varia entre 1 a 10 u. Pudiendo las mismas adoptar distintas formas:  Granular  Bastoniforme  FilamentosasESTRUCTURA MITOCONDRIAL:La mitocondria presenta una estructura con dos compartimentos bien definidos,matriz y espacio intermembranal, delimitados por dos membranas, interna yexterna, con características morfológicas y funcionales bien diferentes.1.-EN LA MATRIZ se localizan varias copias del genoma circular mitocondrial(herencia de su pasado procariota), ribosomas, más parecidos a los de lasbacterias que a los de las células eucariotas, y numerosos complejos enzimáticosnecesarios tanto para las funciones energéticas, como para la expresión y lareplicación de genes.
  • 3. 2.-EL ESPACIO INTERMEMBRANAL tiene un menor contenido proteico,en él se localizan las enzimas que median el tránsito de sustancias entre la matrizmitocondrial y el citosol.Del mismo modo, sus membranas presentan también diferencias significativas.3.-LA MEMBRANA INTERNA, caracterizada morfológicamente por presentarunas invaginaciones denominadas crestas, presenta multitud de complejosenzimáticos (los componentes de la cadena transportadora de electrones (CTE),la ATP sintasa) y proteínas que regulan el paso de metabolitos (como eltransportador de nucleótidos de adenina), resultando especialmente impermeablea iones.4.-LA MEMBRANA EXTERNA, a diferencia de la interna y debido a lapresencia de la proteína porina, conocida en la actualidad como canal aniónicodependiente de voltaje (VDAC), es permeable, en condiciones fisiológicas, alpaso de iones y de metabolitos con pesos moleculares inferiores a 6000 Daltons.FUNCION MITOCONDRIAL:La función mitocondrial se basa en los siguientes aspectos: abastecimientoenergético de la célula y en la regulación de los niveles de calcio y otrossegundos mensajeros como las EROS.FOSFORILACIÓN OXIDATIVALa fosforilación oxidativa es una serie de eventos químicos que llevan a lasíntesis de ATP.La mitocondria, y en concreto su matriz, es el escenario donde tiene lugar lafosforilación oxidativa, a través de la cual se genera poder reductor en forma deNADH y FADH2, que son utilizados como donadores de electrones en la cadenarespiratoria, estos interaccionan con el oxigeno molecular, el cual es un potenteaceptor de electrones. De hecho el flujo neto de electrones desde el NADHhasta el Oxígeno resulta en la síntesis de ATP. (Jordán, 2004)Proceso:  Acoplado al transporte de los electrones (por una serie de complejos enzimáticos —I, II, III y IV, que forman la cadena transportadora de electrones) y gracias a la energía liberada, tiene lugar la salida de tres protones desde la matriz hasta el espacio intermembranal, originando un gradiente electroquímico entre los dos compartimentos.
  • 4.  Esta energía es utilizada por la enzima ATP sintasa o complejo V, localizada en la membrana interna, para fosforilar moléculas de ADP dando lugar a ATP, a la vez que los protones vuelven a la matriz a favor de gradiente.CAPTACION DE Ca+2Por otro lado, las mitocondrias, gracias a su capacidad de internalizar Ca2+ yprecipitarlo en su interior en forma de fosfatos, participan, junto con el retículoendoplasmático y las bombas iónicas y canales localizados en la membranacelular, en la regulación de los niveles citoplasmáticos del catión calcio libre.(Villalobos, Carlos - Sanz Blasco Sara - STAF LABORATORY, 2006)  El Ca2+ intracelular es un mensajero versátil y del universal segundo implicado en el control de una gran cantidad de funciones celulares y fisiológicas en esencialmente todos los tipos de células.  Las señales de Ca2+ regulan no sólo funciones a corto plazo de la célula tales como exocitosis y contracción del músculo sino también desempeñan un papel fundamental en el control de las funciones de largo plazo de la célula como proliferación de célula.  Las señales de Ca2+ activan los genes responsables de la entrada de reclinar las células en el ciclo celular, promueven síntesis de la DNA y estimulan diversos acontecimientos en la mitosis.SISTEMAS DE TRANSPORTE DE CA2+Se conocen tres sistemas de transportadores que controlan la entrada y la salidade este catión en la mitocondria:  El uniporte de Ca2+
  • 5.  El antiporte 2Na+/Ca2+,  El antiporte Ca2+/2H+.El primero de ellos es un transportador electrogénico y el único que se encargade internalizar Ca2+ en la mitocondria, presenta baja afinidad por el Ca2+ ypuede ser inhibido por el rojo de rutenio y el Mg2+.Por otro lado, el sistema antiporte Na+/Ca2+, inhibido por fármacos bloqueantesde los canales de Ca2+, y el sistema de antiporte dependiente de energíaCa2+/2H+, localizado en las mitocondrias de algunas células, realizan laliberación del Ca2+ en respuesta a determinados estímulos.APLICACIÓN EXPERIMENTAL:Experimentos donde se determinó la concentración de calcio mitocondrial[Ca2+]m gracias al uso de acuorinas, han demostrado que cambios rápidos en laconcentración de calcio citoplasmático[Ca2+]c producidos, por ejemplo, por laestimulación de la célula nerviosa, tienen su representación en la mitocondria, ycon una amplitud muy elevada, aunque de una duración muy corta, ya que esrápidamente compensada por la salida de Ca2+.  En respuesta a este incremento de [Ca2+]m se produce, por ejemplo, la activación de rutas metabólicas, generando más cantidad de energía para la célula.  Además, se ha observado que esta regulación de los niveles de [Ca2+]c llevada a cabo por la mitocondria también es esencial, en las células excitables, para el correcto funcionamiento de los sistemas que controlan la liberación de neurotransmisor.Sin embargo, en condiciones patológicas, donde las [Ca2+]c se encuentrenelevadas de forma sostenida, la entrada de Ca2+ a la matriz es desmesurada yconduce a efectos muy diferentes, como es la activación de forma rotunda delsistema de uniporte de Ca2+, con la consiguiente saturación de los sistemas desalida de calcio, obteniendo como resultado cambios drásticos en el interior de lamitocondria.Una mitocondria dañada dilata los ciclos metabólicos, relentiza el procesoenergético y consume más energía. El exceso de energía consumida para elmismo rendimiento inhibe la capacidad de comunicación con las células vecinasy promueve la muerte celular.FUENTE DE EROS:
  • 6. Finalmente, se ha propuesto a la mitocondria como la fuente de EROS másimportante en el interior de las células.Como resultado de una reducción defectuosa del oxígeno durante la fosforilaciónoxidativa puede tener lugar, en la matriz mitocondrial, la generación de especiesreactivas del oxígeno (EROS), como el superóxido que, constituyen una piezaclave en el envejecimiento celular. LA MITOCONDRIA UNA ORGANELA ENERGETICA EN EXPANSIÓN:En la actualidad se sabe que esta organela, no solo supone la fuente energéticapara el funcionamiento celular, sino que también desempeña un papel esencial enla regulación de los niveles de segundos mensajeros como el Ca2+ o las especiesreactivas de oxígeno (EROS) en el citoplasma.ESPECIES REACTIVAS DE OXIGENO (EROS)La estructura electrónica del oxígeno hace que sea susceptible de reduccionesparciales, produciéndose Especies Reactivas de Oxígeno (EROs)Las especies reactivas del oxígeno incluyen:  iones de oxígeno  radicales libres  peróxidos tanto inorgánicos como orgánicos.Son generalmente moléculas muy pequeñas altamente reactivas debido a lapresencia de una capa de electrones de valencia no apareada.Estas especies se forman de manera natural como subproducto del metabolismonormal del oxígeno y tienen un importante papel en la señalización celular. Sinembargo, en épocas de estrés ambiental sus niveles pueden aumentar en granmanera, lo cual puede resultar en daños significativos a las estructuras celulares.Esto lleva en una situación conocida como estrés oxidativo.Las principales especies reactivas del oxígeno o sustancias pro-oxidantes son:− Radical hidroxilo (HO)+− Peróxido de hidrógeno (H2O2)− Anión superóxido (O2)− Oxígeno singlete (1O2)− Oxígeno nítrico (NO)− Peróxido (ROO)− Semiquinona (Q)
  • 7. − OzonoLas EROS se pueden originar en cualquier compartimento celular comoresultado normal de su fisiología, se pueden formar a nivel de mitocondrias,como de retículo endoplasmico.EQUILIBRIO OXIDANTES—ANTIOXIDANTESLas especies reactivas del oxigeno (EROs) se producen normalmente en lascélulas como producto del metabolismo celular. La concentración de EROS esfinamente controlada por acción de los antioxidantes  Si un agente estresante induce un aumento en la producción de EROs, este equilibrio puede romperse causándose daños en las estructuras celulares  Los daños serán reparados por mecanismos celulares específicos. Si no se recupera el equilibrio se producirán disfunciones que pueden desembocar en la muerte celular.EFECTOS DAÑINOSNormalmente las células son capaces de defenderse a sí mismas contra los dañosde las especies reactivas del oxígeno mediante el uso de enzimas como lasuperóxido dismutasa y la catalasa. Pequeñas moléculas antioxidantes como elácido ascórbico (vitamina C), ácido úrico, y glutatión también desempeñan un rolimportante como antioxidantes celulares.Los efectos de las especies reactivas del oxígeno sobre el metabolismo celularhan sido bien documentadas en una gran variedad de especies. Estos incluyen nosólo los roles en la muerte celular programada y la necrosis, sino también efectospositivos, tales como:  La inducción de genes de defensa y la movilización de los sistemas de transporte de iones.  También se lo implica con frecuencia en funciones de señalización redox o señalización oxidativa.  Estas también proporcionan un enlace a la adaptación del sistema inmune a través de la reclutación de glóbulos blancos.  La señalización redox también está implicada en la mediación de la apoptosis o muerte celular programada y en la lesión isquémica. Ejemplos concretos son los accidentes cerebro vasculares y ataques cardíacos.En general, los efectos nocivos de las especies reactivas del oxígeno en la célulason:
  • 8. 1. Daños al ADN 2. Oxidación de ácidos grasos poliinsaturados 3. Oxidación de aminoácidos en las proteínas LA MITOCONDRIA Y SU RELACIÓN RELEVANTE CON LA APOPTOSIS:Pero quizás el descubrimiento más importante sobre esta organela sucedió haceun par de décadas, cuando se observó que su presencia era necesaria para lainducción de muerte celular programada, de forma que, estudios recientessitúan a la mitocondria como el punto donde convergen diferentes vías deseñalización apoptótica.Esta organela, a través de la regulación de la permeabilidad de sus membranas,controla la liberación al citoplasma gran cantidad de sustancias de naturalezaproteica (Citocromo C, AIF, SMAC/Diablo, etc.) que son capaces de activarrutas de señalización (factores proapoptoticos) necesarias para que se produzca lamuerte programada de la célula.El lanzamiento de factores proapoptoticos se relaciona con un aumento enormeen la permeabilidad de la membrana mitocondrial interna.Varios factores promueven este aumento de la permeabilidad incluyendo:  La tensión oxidativa.  Pérdida de potencial mitocondrial.  Sobrecarga especialmente mitocondrial de la concentración de Ca2+.PROCESOS APOPTÓTICOS.
  • 9. Los procesos de apoptosis se ejecutan normalmente durante el desarrollo parasuprimir las células innecesarias o para eliminar las células que han sido dañadaspor distintos agentes estresantes, tales como la radiación o la oxidación.  Si la apoptosis no está operando correctamente, sin embargo, pueden presentarse tumores, inmunodeficiencia, autoinmunidad o trastornos neurodegenerativos.  Cuando la célula no consigue el ATP suficiente para su funcionamiento, su citoplasma y membrana cambian su configuración, entrando en lo que se denomina senescencia. Las células T detectan las células senescentes y les insertan la información necesaria para que inicien su programa de autodestrucción o apoptosis.APLICACIÓN EXPERIMENTAL:En la última década del siglo pasado, en el laboratorio del Prof. J.C. Reed enla Fundación para la Investigación sobre el Cáncer en California se obtuvo laprimera indicación de que la mitocondria desempeña un papel importante enla inducción de la apoptosis, al demostrar que la presencia de esta organelaera necesaria para inducir apoptosis en un tubo de ensayo.Desde entonces los estudios se han dirigido a analizar diferentes característicasde esta organela que son esenciales para que ejerza este papel, tales como sucapacidad de regular la permeabilidad de sus membranas, controlando laliberación de componentes proteicos al citoplasma y la producción de radicaleslibres como el superóxido.
  • 10. VÍAS DE SEÑALIZACIÓN DE LA APOPTOSISExisten tres vías principales para la transmisión de una señal apoptótica:– La primera ocurre cuando el sistema nervioso es sobreexcitado porglutamato, como ocurre en los procesos isquémicos.En ellos se ha observado una entrada masiva y prolongada del ión Ca2+ alcitoplasma, que es «detectada» por la mitocondria.– La unión de ligandos a receptores «de muerte», como el TNFR1 o Faslocalizados en la membrana citoplasmática activa rutas de señalización que sedirigen a la mitocondria.– Por último, el daño en el genoma celular puede ser detectado por ciertosfactores de transcripción, como p53, que inducen el incremento de lasconcentraciones citoplasmáticas de ciertas proteínas que se translocan a lamitocondria para ejercer efecto proapoptótico.LA APERTURA DEL PORO DE PERMEABILIDADTRANSITORIA MITOCONDRIAL:Todos estos procesos se ven traducidos a nivel mitocondrial en la formación deuna estructura multiproteica, en las zonas de unión de sus membranas, que seconoce como «poro de permeabilidad transitoria mitocondrial» (PPTM), y que sepresenta como el eje del desencadenamiento de una señal apoptótica.Cuando estos estímulos llegan a la mitocondria, diferentes proteínas, entre lasque destaca el ANT-proapoptico y el VDAC (Voltaje Dependent AnionChannel), se ven modificadas para la generación de un poro de dimensionesexageradas y por el cual se produce la liberación, entre otras sustancias, decompuestos con conocida actividad pro-apoptótica, como citocromo C, laproteína Smac/Diablo, el factor inductor de apoptosis y algunos miembros dela familia de las caspasas (ejecutoras más importantes de las últimas fases de laapoptosis gracias a su actividad catalítica).Este proceso está altamente regulado por multitud de proteínas que interaccionancon los componentes esenciales del PPTM, entre las que destacan la ciclofilinaD, que se encuentra en la matriz y cuya interacción con ANT parece esencialpara la apertura del poro.
  • 11. FASE DE EJECUCIÓNEn esta etapa, las sustancias liberadas por la mitocondria activan diferentes rutasapoptóticas. Así, mientras el citocromo C junto con la procaspasa 9 y laproteína apaf-1 entran a formar parte de un complejo multiproteico denominadoapoptosoma, que dirige la activación de las proteínas denominadas caspasas, quemedian la muerte programada celular, el AIF (factor inductor de apoptosis)desencadena procesos de condensación de la cromatina y fragmentación delADN.CASOS FRECUENTES DE APOPTOSIS:  La apoptosis puede ocurrir, por ejemplo, cuando una célula se halla dañada y no tiene posibilidades de ser reparada, o cuando ha sido infectada por un virus.  ghg  La "decisión" de iniciar la apoptosis puede provenir de la célula misma, del tejido circundante o de una reacción proveniente del sistema inmune.  hggh  Cuando la capacidad de una célula para realizar la apoptosis se encuentra dañada (por ejemplo, debido a una mutación), o si el inicio de la apoptosis ha sido bloqueado (por un virus), la célula dañada puede continuar dividiéndose sin mayor restricción, resultando en un tumor que puede ser de carácter canceroso.  ghnggh  También condiciones de stress como la falta de alimentos, así como el daño del ADN provocado por tóxicos o radiación, pueden inducir a la célula a comenzar un proceso apoptótico. FARMACOLOGÍA DE LA MITOCONDRIA:La capacidad reguladora de los procesos de muerte celular por parte de lamitocondria la convierte en la organela de estudio de fármacos con actividadestanto proapoptóticas, con el fin de matar la célula, como antiapoptóticas, con elfin de prevenir su muerte. (CEÑA, Valentín - TORNERO, Daniel, 2002)Estos farmacos ayudarian al tratamiento.
  • 12.  Enfermedades neurodegenerativas.  Envejecimiento celular.  Procesos isquemicos e infartos al corazón.  Tratamiento del Cancer y el crecimiento tumoral.En este trabajo revisaremos el mecanismo de acción de algunos fármacos quemodulan la función mitocondrial, entre los que se incluyen algunosantitumorales, inmunosupresores, antivirales, y agonistas de canales de potasiolocalizados en la membrana mitocondrial, así como sulfonilureasas y anestésicos.FÁRMACOS PROAPOPTÓTICOSEntre los mecanismos de acción de los fármacos proapoptóticos existe lamanipulación de la concentración de calcio en el interior de las células, porejemplo, mediante el uso de la tapsigargina (inhibidor de la ATPasa-Ca2+ delretículo endoplasmático) que previene la acumulación de calcio en el retículo yque induce apoptosis en varios tipos celulares. Otros promotores de la apoptosis,como ya se ha comentado, son las EROS.
  • 13. La producción excesiva de radicales libres puede ser inducida por un grannúmero de xenobióticos, iones de metales de transición y radiaciones ionizantes yultravioleta.LA ACTIVACIÓN DEL PPTM o la modificación de la estabilidad de lamembrana mitocondrial constituyen parte del mecanismo de acción de grannúmero de fármacos anticancerígenos entre los que se incluye el etopósido,doxorrubicina, 1-beta-D-arabinofuranosilcitosina, lonidamina, ácidobetulínico, arsenito, CD437 y péptidos alfahelicoidales catiónicos anfifílicos. APOPTOSISFÁRMACOS ANTIAPOPTÓTICOS. MODULACIÓN DEL ESTRÉSOXIDATIVOCon el fin de proteger a la mitocondria contra el daño producido por las EROS,son varias las aproximaciones que se están realizando (entre las que destacamosel aumento de los valores de glutatión) mediante el uso de precursores de susíntesis como puede ser la N-acetilcisteína, que además tiene, por sí sola,propiedades antioxidantes.Este efecto también se produce con el incremento en el contenido de coenzima Amediante la administración de su precursor, el ácido pantoténico.Otros antioxidantes intracelulares generales son el ácido ascórbico, elalfatocoferol y el betacaroteno.EL RECEPTOR DE BENZODIACEPINASLas benzodiazepinas son fármacos extensamente utilizados por sus propiedadescomo ansiolíticos, anticonvulsionantes, relajantes musculares y sedantes.Como se ha comentado anteriormente, el receptor de estos compuestos seencuentra en la membrana externa mitocondrial, interaccionando tanto con elVDAC como con el ANT.
  • 14. FÁRMACOS INMUNOSUPRESORESLa ciclosporina A es un fármaco inmunosupresor que bloquea la transcripción degenes en células T activadas. Es ampliamente utilizado para evitar los rechazosen transplante de órganos.A nivel mitocondrial, la ciclosporina A es capaz de bloquear la formación delPPTM, y éste parece ser el mecanismo por el cual este fármaco es eficaz en laprotección de las células frente a una lesión isquémica.FÁRMACOS ANTIINFLAMATORIOS NO ESTEROIDES:Los fármacos antiinflamatorios no esteroides, como los salicilatos y elibuprofeno, muy comúnmente prescritos, presentan efectos secundarios queparecen estar mediados por un proceso que incluye daño mitocondrial einhibición de ciclooxigenasas.A este nivel, estos fármacos antiinflamatorios modifican la fosforilaciónoxidativa, inhibiendo la producción de ATP y alterando la permeabilidad de lamembrana interna de la mitocondria.El hecho de que los salicilatos induzcan la formación del PPTM en mitocondriaaislada está siendo motivo de estudio por su implicación en el síndrome infantilde Reye. Además, el ibuprofeno, de una forma directa, también induce laapertura del PPTM.OTROS FÁRMACOSAdemás de los ya revisados, numerosos compuestos usados en medicina humanay veterinaria pueden interaccionar con la mitocondria de un modo más o menosaccidental.Así, algunos fármacos antiarrítmicos, como amiodarona, y algunos antibióticos,como el cloranfenicol, no sólo inhiben la síntesis proteica bacteriana, sinotambién la mitocondrial. TÉCNICAS DE ANÁLISIS DE LA MITOCONDRIADebido a la importancia que, en el campo de la Farmacología, está adquiriendo elestudio de la mitocondria se ha producido un gran avance en el desarrollo detécnicas, no sólo bioquímicas que permiten el estudio de la acción de fármacossobre esta organela.Así, disponemos de técnicas tanto in situ, en las que las mitocondrias seencuentran dentro de células intactas; como de mitocondria aislada que requierenla purificación de las mismas.
  • 15. Todas estas técnicas han servido para conocer la gran diversidad que existe en lasmitocondrias de distintos tipos celulares y dentro de una misma célula y paraconocer con mayor detalle las funciones que desempeñan dentro de ellas.EN LAS TÉCNICAS IN SITU, las mitocondrias se estudian valorando susinteracciones con el resto de componentes celulares, si bien presentan ladificultad de que pueden existir interferencias entre las diferentes mitocondrias ypor parte de otras organelas del citoplasma.  La técnica "in vitro" más conocida y utilizada, quizás debido a su gran versatilidad, para el análisis de las mitocondrias individuales es la microscopía.  Mediante la microscopía y usando sondas de localización mitocondrial como es la "mito-DsRed", hoy somos capaces de estudiar las propiedades físicas mitocondriales en el interior de las células.  También disponemos de sondas fluorimétricas que permiten el estudio de variaciones en el potencial mitocondrial o de los niveles de ciertas moléculas de la matriz como el NADH.EN LAS TÉCNICAS DE MITOCONDRIA AISLADA la organela es purificadapor centrifugación a través de gradientes bien de sacarosa o de Percoll.  En estas preparaciones se eliminan las posibles interferencias con los otros componentes del citoplasma celular, permitiendo un análisis más directo, aunque se encuentran sacrificadas todas las interacciones que existen con ellos y que pueden modificar los procesos motivo de estudio.  Estas preparaciones permiten la manipulación de los substratos y la modificación del entorno con el fin de obtener una mayor eficiencia en el suministro de los fármacos.
  • 16. Las técnicas más frecuentemente utilizadas sobre preparaciones de mitocondriaaislada son:i) El registro electrofisiológico de los canales iónicos de ambas membranas. En el caso de la membrana interna se realizan preparaciones, conocidas como mitoplastos, en las que se ha eliminado la membrana externa.ii) La citometría de flujo, utilizada para detectar distintas subpoblaciones de mitocondrias con diferentes características estructurales y/o funcionales.iii) Las medidas espectrofotométricas de la absorbencia de una suspensión de mitocondrias aisladas permiten monitorizar modificaciones en el volumen de la organela como es su hinchamiento que indica, en algunos modelos, la apertura del PPTM.iv) La electroforesis capilar con detección de fluorescencia inducida por láser utiliza las diferentes cargas de la superficie de las mitocondrias determinadas por la composición de su membrana externa para separarlas y determinarlas.BIBLIOGRAFÍA:VILLALOBOS, Carlos - SANZ BLASCO, Sara - STAF LABORATORY. (2006). The Unit ofChemoprevention And Neuroprotection @ IBGM. Recuperado el OCTUBRE de 2008, de UCAN-IBGM- ESPAÑA VALLADOLID - http://www.ucan-ibgm.com/Jordán, D. T. (MARZO de 2004). ACTUALIDAD EN FARMACOLOGÍA Y TERAPÉUTICA. Recuperadoel OCTUBRE de 2008, de I+D+i DE FÁRMACOS - La mitocondria como diana farmacológica:http://www.uclm.es/profesoradO/jjordan/pdf/review/5.pdfCEÑA, Valentín - TORNERO, Daniel. (DICIEMBRE de 2002). Revista Farmaceútica OFFARM.Recuperado el OCTUBRE de 2008, de La mitocondria como diana farmacológica:http://www.uclm.es/profesoradO/jjordan/pdf/review/5.pdf - ESPAÑAREVISTA REDBI. (2005). Recuperado el 2008, de Biologia en internet: http://www.biologia-en-internet.com/default.asp?Id=11&Fd=2Abbracchio MP, Ongini E, Memo M. (1999). Disclosing apoptosis in the CNS. Trends inPharmacological Sciences. Recuperado el octubre de 2008, de Apoptosis. suicidio celular:http://www.raphael.com.ve/multimedia/Temas/Apoptosis/Apoptosis.pdfALVARADO, C. J. (2003). Farmacología Basica. Lima , Perú: AMP - Apuntes médicos del Perú.BERTRAM, G. K. (2004). Farmacología básica y clínica (Novena Edición ed.). Lima, Perú: ManuelModerno.
  • 17. Tortora - Derickson. (2006). Principios de Anatomía y Fisiología (Onceava Edición ed.). Sevilla,España: Editorial Médica Panamericana.