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MATERIALES SUSTANCIAS
 Jeringuilla de 10cc
 Campana
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REACCIONES DE RECONOCIMIENTO
1. Reacción de Schiff:
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GRÁFICOS
1. inyección de 8 ml
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REACCIONES DE RECONOCIMIENTO
1) REACCION DE RIMINI
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OBSERVACIONES
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INVESTIGACION
FORMALDEHIDO
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Practica 2

  1. 1. “Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“ Página 1 UNIVERSIDAD TÉCNICA DE MACHALA FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Y DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA LABORATORIO DE TOXICOLOGÍA PROFESOR: BQF. Carlos García MSc. ALUMNA: Mónica Elizabeth Lapo Lapo CURSO: 5to PARALELO: “A” 10 GRUPO: N° 7 Fecha de elaboración de la práctica: Lunes, 8 de junio del 2015. Fecha de presentación de la práctica: Lunes, 15 de junio del 2015. PRÁCTICA N° 2 TÍTULO DE LA PRÁCTICA: INTOXICACIÓN POR FORMALDEHIDO TOXICO: Formaldehido ANIMAL DE EXPERIMENTACIÓN: Cobayo VÍA DE ADMINISTRACIÓN: Vía Intraperitonial VOLUMEN ADMINISTRADO: 8ml TIEMPOS:  Inicio de la práctica: 07:45am  Hora de administración del toxico: 07:52am  Deceso del animal:07:53am (1min)  Final de la práctica: 10:30 am SÍNTOMAS:  Muerte rápida. OBJETIVOS DE LA PRÁCTICA 1. Observar la reacción que presenta el cobayo ante la intoxicación por formaldehido. 2. Observar cuidadosamente las manifestaciones y controlar el tiempo en que actúa el toxico. 3. Conocer mediante pruebas de identificación la presencia de formaldehido.
  2. 2. “Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“ Página 2 MATERIALES SUSTANCIAS  Jeringuilla de 10cc  Campana  Equipo de disección  Bisturí  Vaso de precipitación  Erlenmeyer  Equipo de destilación.  Tubos de ensayo  Pipetas  Agitador  Guantes de látex  Mascarilla  Mandil  Cloruro de fenilhidrazina  Agua destilada  Nitroprusiato de Sodio  formol  Cloruro Férrico  Ácido sulfúrico  Leche  Hidróxido de sodio  Ácido clorhídrico  Ferrocianuro de potasio  Hidróxido de potasio al 12%  Acido cromotropico  Diluyente EQUIPOS ● Balanza analítica  Campana de gases  Cinta  Tapón de vidrio y de caucho  Mechero de alcohol  Fósforos  Probeta  Espátula  Panema  Pinza para tubos PROCEDIMIENTO 1. Antes de ingresar al laboratorio debemos tener puestas nuestro equipo de protección (bata de laboratorio, guantes, gorro, mascarilla y zapatones). 2. Desinfectar el área de trabajo con alcohol de 700 y tener todos los materiales necesarios para desarrollar la práctica. 3. Una vez dada las indicciones por parte del profesor iniciamos dicha práctica. 4. Administrar 8ml de formaldehido al cobayo por vía intraperitoneal 5. Colocar el cobayo en la panema. 6. Observar las manifestaciones que se presentan y en qué tiempo se da su deceso. 7. Con la ayuda del bisturí procedemos a realizar la disección al cobayo 8. Colocar las vísceras una vez trituradas (picadas lo más finas posibles) en un recipiente adecuado (balón volumétrico). 9. Pesar 2 gr de ácido tartárico y diluirlo en 50 ml de Agua destilada 10. Colocar la solución de ácido tartárico sobre la muestra para acidularla 11. Medir 20 ml de NaOH 0.1 N para recoger el Cianuro de sodio de la destilación.
  3. 3. “Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“ Página 3 REACCIONES DE RECONOCIMIENTO 1. Reacción de Schiff: A una pequeña porción de la muestra, se añade 1ml de permanganato de potasio al 1% después de mezclar se adiciona unas gotas de ácido sulfúrico puro, se deja reposar por tres minutos y agregan algunas gotas de solución saturada de ácido oxálico (hasta que decolore la mezcla); la mezcla adquiere un color madera que se decolora totalmente luego de agregarle nuevamente algunas gotas de ácido sulfúrico puro. Finalmente se le añade 1ml de fushina bisulfatada (Reactivo de Schiff), con lo cual se produce un intenso color violeta en caso de positivo. 2. Reacción de Rimini A 5 ml de destilado se agregan 10 gotas de cloruro de fenilhidracina al 4 %, 4 gotas de solución de nitroprusiato de sodio al 2.5% recién preparado y 1ml de solución de hidróxido de sodio, se produce una coloración azul intensa. 3. Con la Fenilhidracina En un medio fuertemente acidificado con ácido clorhídrico a una pequeña cantidad de muestra se agrega un pedacito de cloruro de fenil hidracina, 2-4 gotas de solución de ferricianuro de potasio al 5 – 10% y algunas gotas de hidróxido de potasio al 12% se obtiene una coloración rojo grosella. 4. Reacción de Marquis Se toma 1ml de destilado y se agregan 5ml de ácido sulfúrico concentrado, se agita luego con una solución sulfúrica de morfina (0.2 gr de cloruro de morfina en 10ml de ácido sulfúrico concentrado), se obtiene enseguida o después de algún tiempo un color violeta. 5. Con el Ácido Cromotrópico Con este ácido en un medio fuertemente acidificado con ácido sulfúrico, el formaldehido produce una coloración roja después de calentarla ligeramente. 6. Reacción de Hehner Se mezcla una gota de destilado con algunos mililitros de leche, se estratifica con ácido sulfúrico concentrado al que se le han agregado trazas de cloruro férrico (5 gotas de cloruro férrico en 500ml de ácido sulfúrico); en caso positivo, en la zona de contacto se produce un color violeta o azul violeta.
  4. 4. “Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“ Página 4 GRÁFICOS 1. inyección de 8 ml de toxico al cobayo, por vía intraperitoneal 2. Colocar el cobayo en la panema y observar sus manifestaciones 3. Proceder a realizar la disección del cobayo. 4.- Recoger las vísceras del cobayo. 5.- Triturar las vísceras Y colocarlas en un balón de Aforado 6.- Armar el equipo de destilación. 7.- Se recoge el destilado, para las reacciones de identificación.
  5. 5. “Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“ Página 5 REACCIONES DE RECONOCIMIENTO 1) REACCION DE RIMINI Reacción Negativo coloración marrón 8.- Reacción 1: de rimini (negativo) 9.- Reacción 2: de fenilhidracina (negativo) 10.- Reacción 3: con el ácido cromotropico (+) no característico. 11.- Reacción 4: de Herner (+) no caracteristico
  6. 6. “Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“ Página 6 2) Reacción de la fenilhdracina Reacción negativo coloración fucsia 3) Reacción con el ácido cromotropico Reacción positivo no característico coloración café claro CN Na + acidular con H2SO4 Adicionando la solución madre 4) Reacción de Hehner Reacción positivo no característico coloración violeta. H2SO4
  7. 7. “Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“ Página 7 OBSERVACIONES  Se necesitó solo 8ml de Formldehido para producir el deceso del cobayo.  Al administrar Formaldehido por vía intraperitoneal al cobayo este presentó una muerte rápida. CONCLUSIONES Mediante esta práctica realizada podemos concluir que el toxico utilizado es muy potente debido a que la muerte fue casi instantánea y en el cual se comprobó que si hubo presencia de Formaldehido en estos medios biológicos en la cual cada una de las reacciones fueron de vital importancia para llegar a dicha conclusión. RECOMENDACIONES  Aplicar todas las normas de bioseguridad en el laboratorio.  Utilizar el equipo de protección adecuado: bata de laboratorio, guantes, mascarilla.  Utilizar el bisturí adecuado para realizar la disección.  Preparar correctamente las sustancias a la concentración requerida. CUESTIONARIO ¿Qué es el formaldehído? El formaldehído es una sustancia química incolora, inflamable y de olor fuerte que se usa para fabricar materiales y para producir muchos productos del hogar. Se usa en productos de madera prensada, como tableros de partículas, madera contrachapada (conocida también como madera terciada, triplay o plywood) y tableros de fibra; pegamentos y adhesivos; telas de planchado permanente; revestimientos de productos de papel y ciertos materiales de aislamiento. Además, el formaldehído se suele utilizar como fungicida, germicida y desinfectante industrial y como conservante en los depósitos de cadáveres y laboratorios médicos. El formaldehído también está presente en el medio ambiente de manera natural. La mayoría de los organismos vivos lo producen en pequeñas cantidades como parte de los procesos metabólicos normales.
  8. 8. “Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“ Página 8 ¿Cuáles son los efectos en la salud a corto plazo por la exposición al formaldehído? Cuando el formaldehído está presente en el aire a niveles que exceden las 0,1 ppm, algunas personas pueden presentar efectos adversos como ojos llorosos; sensación de ardor en los ojos, en la nariz y la garganta; tos; sibilancias o respiración con silbidos; náuseas e irritación de la piel. Algunas personas son muy sensibles al formaldehído, mientras que otras no tienen reacciones al mismo nivel de exposición. ¿Cómo se puede limitar la exposición al formaldehído en el hogar? La EPA recomienda el uso de productos de madera prensada de grado exterior a fin de limitar la exposición al formaldehído en el hogar. Estos productos emiten menos formaldehído porque contienen resinas de fenol, en lugar de resinas de urea. (Los productos de madera prensada incluyen madera contrachapada, paneles, tableros de partículas y tableros de fibra y no son lo mismo que los productos de madera tratada a presión, que contienen conservantes químicos y son para uso en exteriores). Antes de comprar productos de madera prensada, como materiales de construcción, gabinetes, armarios y muebles, los compradores deben preguntar sobre el contenido de formaldehído de estos productos. Los niveles de formaldehído en la vivienda también se pueden reducir al garantizar una ventilación adecuada, temperaturas moderadas y la reducción de los niveles de humedad con el uso de aire acondicionado y deshumidificadores. ¿Cómo entra y sale el formaldehído del cuerpo? El formaldehído puede entrar a su cuerpo al usted respirarlo, ingerirlo o cuando entra en contacto con su piel. El formaldehído es absorbido rápidamente a través de la nariz y de la parte superior de las vías respiratorias. El formaldehído también se absorbe rápidamente cuando se ingiere. En cambio, solamente cantidades muy pequeñas se absorben a través de la piel. Una vez dentro del cuerpo, el formaldehído es degradado rápidamente. Casi todos los tejidos del cuerpo tienen la capacidad para degradar formaldehído. Generalmente es convertido a una sustancia no tóxica llamada formato, que se excreta en la orina. El formaldehído también puede ser convertido a dióxido de carbono, el cual se elimina en el aliento. También puede ser degradado para que el cuerpo lo use para fabricar moléculas más grandes que necesitan los
  9. 9. “Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“ Página 9 tejidos, o puede ligarse al ácido desoxirribonucleico (ADN) o a proteínas en el cuerpo. El formaldehído no se almacena en la grasa. BIBLIOGRAFÍA: Ferrero, L. (1998). Formaldehído: efectos tóxicos y recomendaciones. Rev. Soc. Venez. Ciencias Morfol, 4(2), 56-61. Parra, J. E. D., & Zapata, J. J. D. (1999). El formol su génesis, normas, aplicaciones e incidencia sobre la salud humana. Medicina UPB, 18(1), 35-45. Orduz, C. E., & Guerrero, J. Asma ocupacional por formaldehído. Revista de neumología [Internet]. Encolombia. com.[Abstract. Consultado Noviembre de 2011]. Disponible en://www. encolombia. com/medicina/neumologia/neum15303trabajos4. htm. WEBGRAFÍA: International Agency for Research on Cancer (June 2004). IARC Monographs on the Evaluation of Carcinogenic Risks to Humans Volume 88 (2006): Formaldehyde, 2-Butoxyethanol and 1-tert-Butoxypropan-2-ol. Retrieved June 10, 2011, from: http://monographs.iarc.fr/ENG/Monographs/vol88/index.phpNotificación de salida. AUTORIA Bioq. Farm. Carlos Garcia MSc. FIRMA DE RESPONSABILIDAD Mónica Elizabeth Lapo Lapo
  10. 10. “Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“ Página 10 GLOSARIO Ulceración: Es toda lesión abierta de la piel o membrana mucosa con pérdida de sustancia. Las úlceras pueden tener origen y localización muy variada. Las más frecuentes son las que afectan a la pared del estómago o duodeno, llamadas úlceras pépticas. Polimerización: Es un proceso químico por el que los reactivos, monómeros(compuestos de bajo peso molecular) se agrupan químicamente entre sí, dando lugar a una molécula de gran peso, llamada polímero, o bien una cadena lineal o una macromolécula tridimensional. Broncodilatadores: Es una sustancia, generalmente un medicamento, que causa que los bronquios y bronquiolos de los pulmones se dilaten, provocando una disminución en la resistencia aérea y permitiendo así el flujo de aire. Dermatitis: Es una reacción de la piel consecuencia de la exposición a alérgenos (dermatitis alérgica de contacto) o irritantes (dermatitis irritante de contacto). La dermatitis foto tóxica ocurre cuando el alérgeno o irritante es activado por la luz del Sol. ANEXOS:
  11. 11. “Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“ Página 11 INVESTIGACION FORMALDEHIDO El formaldehído está considerado como un factor de riesgo laboral de tipo químico, cuya presencia puede provocar una enfermedad profesional. Las rutas primarías de la exposición humana potencial al formaldehído son inhalación, contacto cutáneo e ingestión. Los efectos comunes de la exposición a este aldehído son varios síntomas agudos, como vómitos, irritación de los ojos, edema pulmonar. También se puede presentar irritación de la garganta, vértigo, dolor abdominal, diarrea, daño renal, aparición de una neumonía secundaría, y en casos extremos colapso cardiovascular y acidosis metabólica. Hay suficientes pruebas sobre la carcinogenicidad del formaldehído en animales. Sin embargo, la Agencia Internacional para la Investigación del cáncer (IARC) limitaba la evidencia sobre su carcinogenicidad en humanos. El formaldehído puede ser un “facilitador” para otros agentes oncogénicos. Debido a su alta reactividad, el formaldehído sufre un gran número de trasformaciones biológicas importantes, como la hidratación, la reacción con el hidrógeno activo de los tioles, el cianuro de hidrógeno y el fenol. La toxicidad del formaldehído en la célula se debe a que reacciona con las proteínas produciendo entrecruzamiento entre las cadenas peptídicas, o de éstas con los grupos amino del DNA. Esta reacción es mucho más rápida con los nucleótidos libre o con el DNA desnaturalizado que con el DNA nativo. In vitro, el formaldehído induce la formación de enlaces cruzados DNA-proteínas. Este hecho ha dado lugar a que pueda utilizarse como un biomarcador de la exposición a formaldehído. En estudios in vivo se ha descrito que el formaldehído induce roturas de cadena sencilla en el DNA, transversiones de pares de bases AT a CG. También se ha detectado la formación de micronúcleos en tejidos expuestos a formaldehído.
  12. 12. “Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“ Página 12 Vías metabólicas de eliminación del formaldehído. La etapa limitante en la conversión del formaldehído a CO2 es la oxidación del ácido fórmico a CO2, que es el mayor producto del metabolismo del formaldehído. La conversión metabólica de formaldehído a ácido fórmico es catalizada en eucariotas principalmente por la formaldehído deshidrogenasa dependiente de glutatión (FALDH). También se han descrito otras vías secundarias de metabolismo del formaldehído, como la vía del tetrahidrofolato, la vía de la catalasa, o mediante el aldehído deshidrogenasa Metabolismo del formaldehído por la formaldehído deshidrogenasa dependiente de glutatión. La conversión de formaldehído a ácido fórmico es catalizada principalmente por la acción de la formaldehído deshidrogenasa dependiente de glutatión (FALDH) y la S- formilglutatión hidrolasa. La reacción espontánea de formaldehído con glutatión (GSH) da lugar al hemiacetal S-hidroximetilglutatión, que en presencia de NAD+ es oxidado por la FALDH a S-formilglutatión). El S-formilglutatión es hidrolizado por la S- formilglutatión hidrolasa a formato y glutatión. Formaldehído + Glutatión S-hidroximetilglutatión FALDH S-hidroximetilglutatión + NAD+ S-formilglutatión + NADH + H+ Dado el alto contenido en GSH de las células animales, vegetales y de los microorganismos (Meister, 1988), cabe esperar que la mayoría del formaldehído (50- 80%) que se genera en la célula esté unido reversiblemente a GSH para formar S- hidroximetilglutatión. Metabolismo del formaldehído vía tetrahidrofolato. En esta vía, hay conversión de formaldehído a CO2 a partir de la reacción acoplada a la 10-formiltetrahidrofolato sintasa y la 10-formiltetrahidrofolato deshidrogenasa en el citosol. Mediante la 10-formiltetrahidrofolato sintasa el formato se compleja con tetrahidrofolato para dar lugar a 10-formiltetrahidrofolato, pasando a formar parte del conjunto de compuestos C1, o puede ser oxidado por la 10-formiltetrahidrofolato deshidrogenasa a CO2. En términos cuantitativos, sin embargo, la vía dependiente de tetrahidrofolato sólo tiene un significado mínimo en el metabolismo del formaldehído. En el metabolismo del formato, por lo contrario, dicha vía es cuantitativamente muy importante.
  13. 13. “Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“ Página 13 En la célula, la mayoría del formaldehído se estima que está en forma de derivado del glutatión, y solo un 1-3% está unido al tetrahidrofolato en forma de 5,10-metilen tetrahidrofolato, a pesar de la importancia de este compuesto en varias vías biosintéticas. Metabolismo del formaldehído por la catalasa. Otra vía secundaría para la oxidación del formato es mediante la acción peroxidativa de la catalasa, localizada en los peroxisomas. Sin embargo, la reacción de la catalasa es dependiente de la velocidad de generación de H2O2. En algunos microorganismos, principalmente en levaduras metilotróficas, se ha descrito la oxidación del formato mediante una formato deshidrogenasa. Metabolismo del formaldehído por la aldehído deshidrogenasa mitocondrial. Otra vía secundaría de metabolismo de formaldehído es mediante la aldehído deshidrogenasa mitocondrial (EC 1.2.1.5). El aldehído deshidrogenasa posee una amplia especificidad de sustrato. Entre otros sustratos, es capaz de metabolizar el formaldehído a ácido fórmico según la reacción: HCHO + NAD (P) + H2O HCOOH + NAD (P)H + H+ En hepatocitos aislados de rata, se ha descrito que la presencia de inhibidores de la aldehído deshidrogenasa, como la cianamida y el crotonaldehído, reducen la oxidación de formaldehído a CO2 en un 30-40% aproximadamente. Estos estudios han sido realizados a altas concentraciones de formaldehído (0,2-1 mM), a las que la aldehído deshidrogenasa podría jugar un papel importante en su oxidación. Sin embargo, a concentraciones fisiológicas, no parece que la aldehído deshidrogenasa pueda contribuir de manera importante en la oxidación del formaldehído a formato.

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