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Eventos de recombinación ilegítima puede ocurrir a frecuencias más bajas, pero se vuelven importantes como constructos tra...
Joe Cummins - Departamento de Ciencias Vegetales de la Universidad de Western                           Ontario, Ontario, ...
8. Covey, S., et al (1990). Proc. Nat. Acad. Sci. EE.UU. 87, 1633-7.       9. Maiss, E., et al (1992). J. Gen. Virol . 73,...
nuevos virus por recombinación "a pesar de una intensa investigación sobre estos               grupos de virus" (6).      ...
CaMV, no es necesario integrar en genomas de acogida para completar su ciclo de vida, y el virus se replica en el citoplas...
Hull et al (6) suponer que como sólo hay un punto de acceso de recombinación en el CaMV 35 promotor, no es probable que so...
ReconocimientoDamos las gracias a Mark Griffiths por llamar nuestra atención sobre algunos documentos importantes.Referenc...
14. Schoelz, JE y Wintermantel, WM (1993). Expansión de rango de huésped viral a través    de complmentation y recombinaci...
33. Strahl BD, CD Allis. El lenguaje de las modificaciones de las histonas covalentes. Nature,            2000, 403: 41-45...
Es DNA GM diferente del ADN natural?"El ADN es ADN es ADN", dijo un defensor en un debate público para tratar de convencer...
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ISIS Reportar 10/03/08
Transferencia horizontal de genes a partir de éstos se da
La evidencia reciente confirma que el ADN transgénico hace saltar de una especie a las bacterias e incluso las plantas y los animales, ya que algunos de nosotros habíamos pronosticado el Dr.Mae-Wan Ho y el Profesor Joe Cummins
Una versión totalmente referencecd de este informe ha sido presentado a USDA en nombre de ISIS.

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Transferencia horizontal de genes y la aparición de enfermedades infecciosas

  1. 1. Transferencia horizontal de genes y la aparición de enfermedades infecciosasNOTAS VARIAS- (Traducido con GOOGLE) ISIS Reportar 10/03/08 Transferencia horizontal de genes a partir de éstos se da La evidencia reciente confirma que el ADNtransgénico hace saltar de una especie a las bacteriase incluso las plantas y los animales, ya que algunos de nosotros habíamos pronosticado el Dr.Mae-Wan Ho y el Profesor Joe CumminsUna versión totalmente referencecd de este informe ha sido presentado a USDA en nombre de ISIS. Una versión electrónica de este informe, o cualquier otro informe ISIS, con referencias completas, se pueden enviar a través del correo electrónico de una donación de £ 3,50. Por favor, e-mail el título del informe a: report@i- sis.org.uk La ingeniería genética, la transferencia horizontal de genes y la aparición de enfermedades infecciosas La ingeniería genética crea amplias selecciones de ADN transgénico que
  2. 2. podría extenderse, no sólo a través de la polinización cruzada con la mismaespecie o relacionadas, pero también a través de la captación directa del ADN transgénico en células de especies no relacionadas, un proceso llamadotransferencia horizontal de genes. Hemos venido alertando a los reguladores para la transferencia génica horizontal - Los peligros ocultos de la ingenieríagenética [1] en muchas ocasiones desde finales de los años 1990 [2-4] ( Sueño o Pesadilla Ingeniería Genética , ISIS publicación), cuando los reguladores ysus asesores científicos habían negado vehementemente que la transferencia horizontal de genes podría suceder, y asume erróneamente que el ADN transgénico, como todo el ADN, sería degradado rápidamente una vez fuera de la célula. En una revisión publicada en 1998 [5], hemos presentado pruebas de que elADN persiste en todos los ambientes y de hecho puede ser absorbido por las células de muchas especies en todo el mundo viviente. Llamamos a una investigación pública en la medida en que la descarga mal regulada de organismos transgénicos y transgénicos ácidos nucleicos en el medio ambiente podría haber sido responsable de la aparición creciente de nuevasenfermedades virales y bacterianas y resistencia a los antibióticos y fármacos, dado que la ingeniería genética se inició en el a mediados de1970. Transferencia horizontal de genes y la recombinación es la vía principalpara la generación de nuevos patógenos y la propagación de resistencia a losantibióticos y las drogas, y la ingeniería genética no es nada si no se facilita en gran medida la transferencia horizontal de genes y la recombinación.ADN transgénico es diferente de ADN natural y más probable que se propague Los reguladores frecuentemente despedir nuestras preocupaciones con comentarios como: "La seguridad de los ácidos nucleicos es ampliamente aceptada. Ambos ARN y ADN son parte de todos los productos alimenticios que consumen. "[6] ( USDA FONSI por álamos transgénicos absurdas y peligrosas , SiS 38). La implicación es que el ADN transgénico (o ARN) no es diferente de los ácidos nucleicos naturales, y por lo tanto no tienen más probabilidad de difundir por transferencia horizontal de genes.No hay duda de que el ADN transgénico es diferente de ADN natural; no sólo contiene nuevas combinaciones de genes, sino también nuevos genessintéticos que nunca han existido en miles de millones de años de evolución: nuevas secuencias de codificación, promotores y otras reguladoras no codificantes secuencias que potencian la expresión génica a niveles anormalmente altos. Por otra parte, hay razones para sospechar que el ADN transgénico es másprobable que la transferencia horizontal y recombinación de ADN natural (ver Cuadro adaptado de [7] Viviendo con el Genoma Fluido , ISIS publicación), y esto ha sido corroborado por la evidencia acumulada, incluso aunque la
  3. 3. investigación dedicada sigue siendo extremadamente raro. ADN transgénico más probable que se extienda horizontalmente 1. El ADN transgénico está diseñado para saltar sobre los genomas, amenudo a través de vectores plásmidos virales o bacterianas que se pueden integrar en genomas. 2. ADN transgénico tiende a ser estructuralmente inestable y por lo tanto propenso a romperse y volver a unirse, dando lugar a numerosassupresiones, duplicaciones y reordenamientos otros durante el proceso detransformación, que se extendió en el genoma huésped, y esto es en parte responsable de la inestabilidad de las variedades transgénicas [8, 9] (ver líneas transgénicas inestable por lo tanto ilegal y no elegible para laProtección y el Genoma MON810 Reordenación Una vez más, la estabilidad de todas las líneas transgénicas en duda , SiS 38). 3. Los mecanismos que permiten a las construcciones transgénicas parasaltar al genoma que puedan saltar de nuevo y vuelva a insertar en otro sitio o en otro genoma. 4. Las fronteras del vector más comúnmente utilizado para las plantas transgénicas, el T-DNA de Agrobacterium , son puntos calientes de recombinación (sitios que tienden a romperse y unirse). Además, un punto de acceso recombinación también se asocia con el virus del mosaico de lacoliflor (CaMV) y los terminadores de transcripción muchos, lo que significaque la totalidad o partes del ADN integrado tiene una mayor propensión a la transferencia secundaria horizontal de genes y la recombinación (véase el texto principal ). 5. El Agrobacterium restante vector en plantas transgénicas puede ser unvehículo para la fuga de genes y pueden transferir genes ampliamente para muchas bacterias, así como en células humanas (véase el texto principal). 6. Construcciones transgénicas tienden a integrarse en los hotspots de recombinación en el genoma, que a su vez, tendería a aumentar las posibilidades de que se dis integrar y transferir horizontalmente [8]. 7. ADN transgénico a menudo tiene otras señales genéticas, tales como el origen de replicación dejada por el vector plasmídico. Estos también son puntos calientes de recombinación, y además, puede activar el ADN transgénico se replique independientemente como un plásmido que se transfiere fácilmente horizontalmente entre las bacterias y otras células.8. El estrés metabólico del organismo huésped debido a la continua sobre-expresión de transgenes vinculados a promotores agresivos tales como el35S CaMV también aumentará la inestabilidad del ADN transgénico, lo que
  4. 4. facilita la transferencia horizontal de genes 9. ADN transgénico es típicamente un mosaico de secuencias de ADN copiada de muchas especies diferentes y sus parásitos genéticos; estas homologías significa que vaya a ser más propensos a recombinarse con, y transferir con éxito a los genomas de muchas especies y sus parásitos genéticos. La recombinación homóloga se produce normalmente mil a un millón de veces la frecuencia de recombinación no homóloga, y corta secuencias homólogas podría actuar como anclas para la adquisición de las secuencias no homólogas (véase el texto principal).CaMV 35S activo en todas las especies promotor incluyendo células humanas En 1999-2000, alertamos a nuestros reguladores que el promotor CaMV 35S que está en prácticamente cada cultivo comercial transgénico comercializado. Un promotor es una señal necesaria para que un gen sea expresado, y el promotor CaMV 35S se utiliza con muchos transgenes. Tiene una recombinación (fragmentación) punto de acceso que mejore la transferencia horizontal de ADN transgénico, haciendo que el ADNtransgénico y líneas transgénicas inestable [10, 11]. Además, contrariamente ala suposición común después de que el promotor CaMV 35S era sólo activo en las plantas y organismos similares a las plantas, de hecho, es activo en especies de todo el mundo viviente, células animales y humanas incluido [12].Por lo tanto, tiene el potencial para activar los virus latentes y el cáncerde disparo, si ocurre a la tierra junto a cierta relacionada con el cáncer "proto- oncogenes". Desde entonces, el promotor CaMV 35S se demostró que era activo en humanos enterocito-como las células [13]. Y la evidencia de inestabilidad transgénica también ha surgido, con el promotor CaMV 35S representa un punto de ruptura mayor [14, 15] ( líneas transgénicas probado inestable , SiS 20), precisamente como lo había predicho. Agrobacterium vector vehículo de escape de genes También hemos proporcionado pruebas que indican claramente que elmétodo más común de crear plantas transgénicas también puede servir como una ruta listo para la transferencia horizontal de genes [16, 17].Agrobacterium tumefaciens , la bacteria del suelo que causa la enfermedad de agalla de la corona, se ha desarrollado como un vector de transferencia de genes importantes para la fabricación de plantas transgénicas. Los genes foráneos son típicamente empalmarse en el ADN-T - parte de un plásmido de A. tumefaciens llamado Ti (inductor de tumores) - que termina integrado en el genoma de la célula vegetal que posteriormente se convierte en un tumor. Pero investigaciones posteriores revelaron que el proceso por el
  5. 5. cual Agrobacterium inyecta T-ADN en células vegetales se parece mucho a la conjugación , el proceso de apareamiento entre las células bacterianas. Conjugación, mediada por ciertos plásmidos bacterianos necesita una secuencia llamada el origen de transferencia ( oriT ) en el ADN que se transfiere. Todas las otras funciones pueden ser suministrados a partir de fuentes no vinculadas, conocidas como "funciones de trans-acción" (o tra ). Así, "discapacitados" plásmidos, con ninguna de las funciones de trans-acción, sin embargo, puede ser transferido por "ayudante" plásmidosque llevan los genes que codifican para las funciones de trans-acción. Y eso es la base de un complicado sistema de vectores ideado, que implica Agrobacterium ADN-T, que se ha utilizado para la creación de numerosas plantas transgénicas. Pronto fue evidente que los bordes izquierdo y derecho del ADN-T son similares a oriT , y puede ser reemplazado por el mismo. Además, el ADN-T desarmado, carente de las funciones de trans-acción ( virulencia genes que contribuyen a la enfermedad), puede ser ayudado por genes similares quepertenecen a muchas otras bacterias patógenas. Parece que la transferencia de genes trans-reino de Agrobacterium y los sistemas de conjugación de bacterias están ambos implicados en el transporte de macromoléculas, no sólo ADN, sino también de proteínas.Eso significa que las plantas transgénicas creadas por el sistema de vector de ADN-T tienen una ruta listo para el escape horizontal de genes, a través de Agrobacterium , ayudado por los mecanismos ordinarios de conjugaciónde muchas otras bacterias causantes de enfermedades, que están presentes en el medio ambiente.De hecho, la posibilidad de que Agrobacterium puede servir como un vehículopara el escape horizontal de genes fue planteada por primera vez en 1997 en un estudio patrocinado por el Gobierno del Reino Unido [18, 19], lo que resultó muy difícil deshacerse de la Agrobacterium en el sistema de vectoresdespués de la transformación. El tratamiento con un arsenal de antibióticos y subcultivo repetido de las plantas transgénicas más de 13 meses no pudo deshacerse de la bacteria. Además, 12,5 por ciento de la Agrobacterium restante aún contenía el vector binario (T-ADN y plásmido auxiliar), y por lo tanto eran completamente capaces de transformar otras plantas .Agrobacterium no sólo transfiere genes en células de plantas, hay posibilidad de retro transferencia de ADN a partir de la célula de laplanta a Agrobacterium [20]. Las altas tasas de transferencia de genes están asociados con el sistema de raíces de las plantas y las semillas en germinación, donde la conjugación es más probable[21]. Hay, Agrobacterium podría multiplicarse y transferir ADN transgénico a otras bacterias, así como para el siguiente cultivo para ser plantada. Estas
  6. 6. posibilidades aún no se han investigado empíricamente.Finalmente, Agrobacterium se adhiere y se transforma genéticamente varias líneas celulares humanas [22]. En transformadas de forma estable células HeLa (una línea celular humana derivada originalmente de un paciente con cáncer), la integración de T-ADN se produjo en el borde derecho,exactamente como sucedería cuando se transfiere en un genoma de la célula vegetal. Esto sugiere que la Agrobacterium transforma las células humanas por un mecanismo similar al que se utiliza para transformar células de plantas. La posibilidad de que Agrobacterium es un vehículo para la transferencia horizontal de ADN transgénico sigue sin resolverse hasta este día. La evidencia de la transferencia horizontal de transgenes a las bacterias negado y despedido Para 1999, ya había indicios de que la transferencia horizontal de ADNtransgénico puede ocurrir, no sólo en el laboratorio sino también en el campo [23]. Por desgracia, los investigadores fueron demasiado prudentes como científicos, y terminó negando la presunción de evidencia de que el ADN transgénico había transferido horizontalmente desde la planta hasta las bacterias del suelo [24], y que, una correcta aplicación del principio deprecaución habría dado lugar a que los investigadores haciendo hincapié en la posibilidad de que se había producido no puede ser descartada.Altas frecuencias de transferencia horizontal de ADN de la planta transgénica se demostraron para las bacterias del suelo, Pseudomonasstutzeri y Acinetobacter sp. cuando el ADN de la planta transgénica contiene secuencias homólogas a las bacterias [25]. Una vez más, los autores subrayaron que la transferencia "depende estrictamente de secuencias homólogas", lo que podría dar a los desinformados una falsa sensación de seguridad, olvidando que las construcciones transgénicas que contienen las homologías de muchas especies diferentes de bacterias y virus, por lo que son capaces de participar en alta frecuencias de transferencia horizontal de genes y la recombinación con todos ellos [24]. Nos llamó la atención sobre una prueba más de la mejor transferencia horizontal de ADN transgénico en nuestras comunicaciones [26, 27]( Molecular Pharming por la transformación del cloroplasto , GM Farmacia decomún Alga Verde , SiS 27) a las autoridades reguladoras en Hawaii oponersea una pretendida al aire libre a gran escala destinada a cepas transgénicas de la alga, Chlamydomonas reinhardtii producir una gama de proteínas farmacéuticas en transgenes integrados del cloroplasto, que aumentaría copias de ADN por célula transgénica. Hemos señalado que el ADN no sólo persiste en todos los ambientes, sino también que la transformación de la captación directa de ADN es una importante vía de transferencia horizontal
  7. 7. de genes entre bacterias [25]. Las similitudes (homologías) entre los cloroplastos transformados en transgénicos C. reinhardtii y genomasbacterianos se espera que aumente aún más la frecuencia de la transferencia horizontal de genes, por hasta un billón de veces. De hecho, los investigadores de la Universidad de Oldenburg en Alemania demostraron que la transferencia horizontal de no -ADN homólogo también se produce a frecuencias relativamente altas cuando "secuencia de anclaje un ADN homólogo está presente, que puede ser tan corto como 99bp [28]. En una revisión publicada en 2004, los investigadores figuran al menos87 especies de bacterias transformables naturalmente [29], que representan el 2 por ciento de todas las especies conocidas. Y el ADN transgénico puede extenderse no sólo a través de las raíces y restos vegetales, pero también a través de la deriva de polen en los campos que nunca habían cultivado cultivos transgénicos. Los autores habían desarrollado aún una técnica devigilancia biológica para detectar ADN transgénico basa en la transformaciónde una cepa competente de bacterias que depende de doble cruz de más deevento entre el ADN transgénico y el cromosoma bacteriano, un evento raroteóricamente mucho que un solo transversal más. Sin embargo, la técnica devigilancia biológica es al menos tan sensible como una reacción en cadena de polimerasa de rutina (PCR) para la detección de cantidades minúsculas de ADN, indicando que la transferencia horizontal de ADN transgénico no es exactamente un evento raro . Esto entra en conflicto con su conclusión en lamisma revista que "cada uno de los muchos implicados paso de la liberación de ADN intacto de una célula vegetal para la integración en el genoma procariótico tiene una baja probabilidad de que un evento de transferencia de éxito [es] muy raro. "Investigadores de la Universidad de Cardiff en el Reino Unido han confirmado que la transferencia horizontal de ADN transgénico se produce a niveles detectables mediante un sistema similar [30]. Transgene secuencias de resistencia a la kanamicina ( nptII ) y la proteína verde fluorescente (GFP) fueron impulsados por sus propios promotores bacterianos. Bacterias receptoras realizado una copia de estos dos genes con deleciones en sus extremos 3 actividad marcador abolición. Recombinación eficaz entre el transgén planta y el genoma bacteriano dio como resultado la restauración de los marcadores, lo que permite la detección a través de la selección de antibióticos y de fluorescencia. Frecuencias medibles de transformación seobtuvieron en condiciones cada vez más complejas se aproximan condiciones de campo. En microcosmos suelo estéril, la transformación se detectó utilizando ADN vegetal puro a 3,6 x 10 -8y en las hojas de tierra en 2,5 x 10 - 11 transformantes por receptor; para suelo no estéril utilizando ADN de laplanta pura, la frecuencia fue de 5,5 x 10 -11 transformantes por el destinatario.La evidencia ha seguido acumulando [31] Transferencia horizontal de genesque sucede - II , ISIS Report) que indica que el ADN transgénico en alimentosy piensos pueden transferir a las células animales y humanos [32] ( DNA GM
  8. 8. en alimentos y piensos , SiS 23). Varios estudios han documentado la supervivencia de ADN en alimentos / piensos largo del tracto intestinal enratones y cerdos [33, 34] y las referencias en él, en el rumen de ovejas [35], y en el rumen y duodeno de ganado [36], con diversos grados de sensibilidad en los métodos de PCR. En el ensayo de alimentación única en voluntarios humanos [37], que contiene una sola comida de soja transgénica con aproximadamente 3 x 10 12 copias del genoma de la soja, los completos 2 266 pb de la EPSPS transgén se recupera de la bolsa de colostomía en seis de cada siete temas ileostomía, aunque a niveles muy variables, desde 10 11 ejemplares (3,7 por ciento) en un objeto de 105 copias en otro. Esta es una fuerte indicación de que el ADN no se descompone rápidamente en el tracto gastrointestinal, lo que confirma los resultados anteriores desde el mismo grupo deinvestigación. En tres de los siete sujetos con ileostomía, aproximadamente 1a 3 por millón de bacterias cultivadas a partir de los contenidos de la bolsa de colostomía fueron positivos para el transgén soja transgénica, lo que indica que la transferencia horizontal de ADN transgénico se había producido , ya sea antes de la comida individual fue tomada, como reivindicada, o bien como elresultado de la sola comida de soja transgénica, una posibilidad que no puededescartarse [32]. Curiosamente, no se encontraron bacterias que han tomadoel ADN no transgénico de soja, lo que sugiere que el ADN transgénico puede ser más transferido con éxito por las razones dadas anteriormente. No ADN transgénico se encontró en las heces de cualquiera de los 12 voluntarios sanos ensayados. O bien el ADN restante se descomponecompletamente por entonces como el reivindicado por los investigadores, o fragmentos más detectables han pasado a la corriente sanguínea desde elintestino [31]. Los investigadores no había comprobado la presencia de ADN transgénico en el torrente sanguíneo. Ya se sabe que el material de alimentación puede alcanzar los linfocitos que entran en la pared intestinal directamente, a través de las placas de Peyer. Y fragmentos de ADN de la planta se detectaron en linfocitos de sangre periférica de vaca [38]. En la sangre, el DNA puede ser transportado a y es captada por las células del tejido, y esto ha sido conocido a partir de experimentos desde finales de 1990. El ADN transgénico y ADN viral alimenta a ratones terminaron encélulas de varios tejidos [39], y, cuando se alimenta a ratas preñadas, el DNA atravesó la placenta y entró en las células del feto y el recién nacido [40]. ADN de plantas de alimentos ingeridos se tomaron también por las células de tejido [41]. En resumen, la evidencia muestra que la transferencia horizontal de ADN transgénico sucede y ha sucedido tanto en el suelo y en el tracto gastrointestinal, aunque muchos científicos son incapaces o no están dispuestos a reconocer esto, o bien descartarlo diciendo que tiene unaprobabilidad "baja "y es" extremadamente raro ". Pero la evidencia reciente muestra que ha sido muy subestimado.
  9. 9. La evidencia de que la transferencia horizontal de ADN transgénico ha sido muy subestimado Un equipo de investigadores dirigido por Aurora Rizzi en la Universidad de Milán, Italia, desarrolló una estrategia para detectar la transformación de la bacteria del suelo Acinetobacter baylyi BD413 in situ por la expresión de la proteína verde fluorescente (GFP) [42]. Las bacterias transformadas que crecen en tejidos de la planta se puede ver y se contaron directamente mediante microscopía de fluorescencia. Usando este método, los investigadores mostraron que los métodos convencionales basados en elcultivo y la selección de los transformantes en placas de agar que conteníanantibióticos de subestima las frecuencias de transformación por lo menos un centenar de veces.La etapa de agar-plating destruye el material original, por lo que no se puede obtener información sobre la ubicación específica de los eventos de transferencia de genes o la interacción entre las bacterias y el material de la transformación, incluyendo el ADN del donante. Por lo tanto, no es posible localizar los puntos calientes de transformación en un medio complejo talcomo el suelo, o dentro de la planta. Además, las técnicas convencionales de deposición sólo aislar células que pueden ser cultivadas (que es probablemente menos del uno por ciento de los microbios del suelo). La cepa reportero está diseñado con una proteína verde fluorescente (GFP)que no se expresa debido a una deleción que incluye su promotor, y que está presente en el ADN transgénico.Así que cuando la pieza deseada de ADN transgénico sea transferido a la posición correcta - que lo hará, porque lasupresión está flanqueado por secuencias homólogas al ADN transgénico - la GFP se expresa y se ilumina las células bajo el microscopio de fluorescencia.Usando esta técnica los investigadores localizaron los acontecimientos reales de transformación sobre un filtro de membrana, y en descomposición hojas de tabaco y raíces. Las frecuencias de transformación fueron medidos al menos dos órdenes de magnitud más alta que la registrada por cultivo basado en placas. En hojas en descomposición, las células transformadas se encuentra en los intersticios entre las células epidérmicas en la superficie de las hojas y cerca del estoma (poros para el intercambio de gases) en la frontera con otrascélulas epidérmicas. Las bacterias transformadas se encontraron también en las superficies radiculares. La transferencia horizontal de genomas de plantas y animales puede ocurrir a frecuencias aún más altas Mientras que los investigadores sobre seguridad de la biotecnología se han centrado en la transferencia horizontal de genes de plantas a las bacterias,
  10. 10. está surgiendo evidencia que sugiere que los genomas de plantas y animales superiores pueden ser objetivos incluso más suaves para la transferencia horizontal de genes. El ADN transgénico bien puede ser tomado por las células de otras plantas, y por los animales incluyendo los seres humanos se alimentan de las plantas. Hemos venido advirtiendo de esta posibilidad, por lo menos desde 2001, cuando los experimentos en "gen therapy toma de transgénicos células humanas - se demuestra lo fácil que era para construcciones transgénicas para ser absorbidos por las células humanas y animales [43] ( metiéndose en el REGULADOR NET: Naked y libres ácidos nucleicos ) Ahora, la información de transgénicos de Arabidopsis y el arroz, con genomas secuenciados, y la enorme cantidad de virus de la reliquia, transposones y retroelements cloroplasto y ADN mitocondrial se encuentra en estos y otros genomas secuenciados están convenciendo a los genetistas que [44] "genomas nucleares de las plantas, como los de otros eucariotas, son promiscuos en la integración no homóloga del ADN "." recombinación ilegítima ", una rareza en los procariotas, es la principal vía de integración del transgén en las células eucariotas. En otras palabras, los genomas eucariotas, incluyendo el genoma humano, integrar ADN extraño mucho más fácilmente que los genomas bacterianos. Hemos explicado qué consecuencias podría ser tales [43]: mutaciones de inserción incluyendo el cáncer, la activación de virus latentes, y la recombinación con secuencias virales en el genoma para generar nuevos virus. Eesearch en los últimos años también ha descubierto cantidades sustanciales de ADN y ARN que circulan en la sangre periférica, los cuales son secretados activamente por las células vivas, y plenamente capaz de transformar otras células [45, 46]. Los ácidos nucleicos parecen jugar un papel en la progresión de la enfermedad y la metástasis de los cánceres. En las plantas también, ácidos nucleicos extraños y circular endógeno [47], aparentemente actuando como mensajeros intercelulares. Hay una clara posibilidad, por lo tanto, que el ADN transgénico se podría vectored entre plantas a través de insectos, así como bacterias del suelo, y el ADN transgénico de los alimentos podría terminar en la sangre periférica y la entrada de ganancia en las células [45].FUENTE: http://www.i-sis.org.uk/horizontalGeneTransfer.phpISIS Informe - 04 de mayo 2001 Transferencia horizontal de genes que sucede - IILa evidencia de la transferencia horizontal de genes se están acumulando. Mae-Wan Ho revisa una selección de los últimos trabajos científicos.
  11. 11. La supervivencia libre de la resistencia a los antibióticos de ADN que codifica a partir de maíztransgénico y la actividad de transformación de ADN en la saliva ovina, ovina fluido ruminal yefluentes de ensilaje. Duggan PS, PA Chambers, J Patrimonio y Forbes JM. FEMS Microbiology Letters 2000, 191, 71-7.Resistente a los insectos línea de maíz CG00526-176 contiene tres genes bacterianos: la Cry1A (b) específica para lepidópteros, el bar gen que confiere tolerancia al glufosinato, y un bla gen quecodifica TEM-1 -lactamasa (resistencia a ampicilina). El bla gen origina en el vector de clonación pUC18 y no se expresa en el maíz, pero tiene secuencias reguladoras bacterianas que lepermitan ser funcional si fuera a ser transferidos de vuelta a las bacterias. Hay al menos dos copias de cryIA (b) y bla genes integrados en el ADN de la línea de maíz CG00526-176.Los investigadores estudiaron la supervivencia de ADN de maíz transgénico y la transferencia de la resistencia a los antibióticos bla gen a las bacterias en presencia de saliva, fluido del rumen yefluentes de ensilaje, que son pertinentes a la transferencia horizontal de genes en la cavidad oral, el rumen, y en ensilaje.E. coli cepa DH5 era la prueba de microorganismos para la transferencia horizontal de genes. La degradación de ADN fue seguido por electroforesis en gel así como por la reacción encadena de polimerasa (PCR). Tanto el ADN de maíz transgénico plásmido pUC18 y se utilizaron en los experimentos.En la electroforesis en gel, el ADN plásmido de ADN y el maíz, se mostró a ser degradados rápidamente por el fluido del rumen o efluentes de ensilaje en un minuto, pero ambos eranincompletamente degradado después de la exposición al menos lh a la saliva.El análisis de PCR, los fragmentos grandes de la bla gen (> 350 bp) se encontraron todavía en el fluido ruminal de hasta 30 minutos para el plásmido y hasta 1 min para ADN de maíz. Inclusofragmentos más grandes (> 350 y 684> pb) de ADN de plásmido y el maíz se encontraron hasta 30 minutos de incubación en efluentes de ensilaje, y hasta 24 h y 2 h, respectivamente, en lasaliva.PCR análisis también mostró que los fragmentos de la cryl1A (b) (> 1914bp) en el ADN de maíz se ha encontrado hasta 1 min con el fluido del rumen, 5 min con efluentes de ensilaje, y 60 mincon saliva.El ADN del plásmido expuesto a la saliva durante 24 horas todavía era capaz de transformar E. coli a resistencia a la ampicilina, pero a una baja eficiencia: 20 ufc (unidades formadoras decolonias) por ml en comparación con 1,6 x10 3 ufc por ml a las 24 h en agua estéril. La exposición previa a líquido ruminal durante 30 s redujo transformada de 5 veces. No se obtuvierontransformantes después de que el plásmido de ADN fue expuesto a eflluent ensilado o el fluido del rumen durante más de 1 min.Sin embargo, cuando E. coli y el plásmido se añadieron simultáneamente a esterilizada por filtración de fluido efluentes de ensilaje o rumen, 4.75x10 3 ufc por ml transformantes fueronrecuperados después de 4,5 h en el fluido ruminal y 11cfu por ml se recuperaron después de 3 h de efluentes de ensilaje.En resumen, la transferencia horizontal de genes puede ocurrir antes de que el ADN sedescompone completamente, incluso cuando la ruptura es rápida, como en el rumen o en elensilaje.Desglose de ADN es extremadamente lento en la saliva, y por lo tanto la cavidad oralserá un sitio muy importante para la transferencia horizontal de genes.La transformación natural del suelo bacterias Pseudomonas stutzeri y Acinetobacter sp. porADN de la planta transgénica depende estrictamente de secuencias homólogas en las célulasreceptoras. DeVries J, P Meier y Wackernagel W. FEMS Microbiology Letters 2001, 195, 211-5.El nptII gen en plantas transgénicas de patata que codifican para resistencia a la kanamicina, transforma las células naturalmente competentes del suelo bacterias Pseudomonasstutzeri yAcinetobacter BD413 (tanto un plásmido con un nptII gen que contiene una pequeña deleción (por lo tanto no funcional) con la misma eficiencia alta como nptII genes en ADN deplásmido (3x10 -5 -1x10 -4 ) a pesar de la presencia de más de un 10 6 veces en exceso de ADN de la planta. Sin embargo, en ausencia de secuencias homólogas en las células receptoras de latransformación se redujo en al menos aproximadamente 10 8 veces en P. stutzeri 10 y 9 veces en Acinetobacter , por debajo del límite de detección.Más de 60 especies bacterianas han demostrado tomar e incorporar ADN (experimentar una transformación). Muchas bacterias como Bacillus subtilis y Acinetobacter sp. cepa BD413,aparentemente captar ADN de cualquier fuente en el citoplasma. Mantenimiento estable y la expresión depende de la integración en el genoma por recombinación genética.Los autores afirman: "Esto indica una probabilidad muy baja de fragmentos de ADN no homólogos a ser integrados por eventos de recombinación ilegítima durante la transformación".¿Hayque estar tranquilos? No, en absoluto.Las altas frecuencias de recombinación homóloga obtenidos son relevantes para GM construyeliberado en grandes concentraciones en el medio ambiente de los cultivos transgénicos y losdesechos transgénicos. Constructos transgénicos contienen las homologías de muchas especiesdiferentes de bacterias y virus, y por lo tanto son capaces de participar en altas frecuencias derecombinación con una amplia variedad de bacterias y virus.
  12. 12. Eventos de recombinación ilegítima puede ocurrir a frecuencias más bajas, pero se vuelven importantes como constructos transgénicos se liberan en escalas masivas. En particular, los puntoscalientes de recombinación asociados con muchos constructos transgénicos (tales como los que contienen el promotor CaMV 35S) puede aumentar la frecuencia de recombinación ilegítima.Efecto de la localización genómica en la transferencia horizontal de un cassette del genrecombinante entre Pseudomonas cepas en la rizosfera y espermosfera de plántulas decebada.Sengelov G, KJ Kristensen, AH Sorensen, N Kroer, y SJ Sorensen. Current Microbiology 2001, 42, 160-7.La rizosfera - superficies alrededor de las raíces de las plantas - y la espermosfera - superficies alrededor de las semillas germinadas - Se reconocen hotspots para la transferencia horizontal degenes entre bacterias. Sin embargo, la frecuencia de la transferencia horizontal también depende de la localización de los genes, ya sea en el cromosoma bacteriano, o en un plásmidomovilizable es decir, un plásmido que puede transferirse con funciones auxiliares suministrados por otros plásmidos, o en un plásmido conjugativo es decir, , un plásmido que tiene sus propiasfunciones de transferencia durante la conjugación (apareamiento entre las células bacterianas). No es sorprendente, los investigadores encontraron las frecuencias más altas de transferenciahorizontal de genes, tanto en la rizosfera y espermosfera cuando la casete de GM fue en un plásmido conjugativo, algo más baja cuando se encontraba en un plásmido movilizable, pero nopudo ser detectado cuando se inserta en el bacteriana cromosoma.Sin embargo, eso no significa que las construcciones transgénicas localizados en los cromosomas bacterianos no se transfieren. Los autores fueron cuidadosos en señalar que el principalmodo de transferencia horizontal de genes, tanto en la rizosfera y espermosfera es la conjugación. En otra parte, la transformación (por captación directa de ADN) será más importante, y hayevidencia de que las construcciones cromosómicas son más eficientes en la transformación.Los autores advierten: "Sobre la base de estos experimentos, no podemos descartar laposibilidad de que la transferencia horizontal de genes por transformación ocurre en bajafrecuencia en el suelo y que este proceso podría tener un efecto significativo en la escala decampo, que es un punto especialmente importante en lo que respecta evaluación de riesgos.Tales eventos raros que no se pueden estudiar en experimentos de microcosmos, sino que debeser objeto de estudios retrospectivos sobre el terreno ".El único estudio retrospectivo realizado de hecho ha encontrado pruebas de la transferencia horizontal de genes de plantas transgénicas a las bacterias del suelo (véase " transferenciahorizontal de genes ocurre ", ISIS News 5). La investigación aún no se ha hecho es la transferencia horizontal de plantas modificadas genéticamente a bacterias en la rizósfera.La evidencia de invasión reciente del genoma de los peces medaka por el Tol2 elemento transponible. Koga A, A Shimada, Shima, A, Sakaizumi, M, H Tachida y Hori H. Genética 2000, 155, 273-81.Los elementos transponibles son unidades genéticas que pueden moverse de un cromosoma a otro, con o sin multiplicarse. Tol2 es un elemento kpb 4,7 encuentran en el genoma de los pecesmedaka latipes Oryzias . Tiene terminales repeticiones invertidas y contiene cuatro genes similares a un grupo de elementos transponibles que se encuentran en fruitflly, maíz y boca dedragón. Hay unos 10 a 30 copias de Tol2 en el genoma medaka que son altamente homogéneo en su estructura, y sin variación en la secuencia de bases se encontró cuando 5 clones al azarfueron examinados. Esto es inusual, ya que los elementos de transposición son típicamente heterogéneas, con muchas copias defectuosas estar presente en el mismo genoma.El Oryzias género contiene más de 10 especies. Los autores examinaron 10 especies pero Tol2 se encontró en sólo dos de ellos: O. curvinotus y O. latipes . La estructura de la Tol2 es homogéneae idéntica, tanto dentro de cada especie y entre las dos especies, que no están estrechamente relacionados y no cruce en la naturaleza.Estos resultados sugieren la transferencia horizontal de genes muy reciente. Las dos especies sesuperponen en la distribución probablemente en algún lugar en el sur de China. Tol2 podríahaber transferido de una especie a otra, o ambas especies podría haber adquirido de la mismafuente. También ilustran los peligros de usar elementos transponibles como vectores detransferencia de genes.FUENTE: http://www.i-sis.org.uk/hgthappens.php Peligros de promotor CaMV
  13. 13. Joe Cummins - Departamento de Ciencias Vegetales de la Universidad de Western Ontario, Ontario, Canadá Mae-Wan Ho y Ryan Angela, Departamento de Ciencias Biológicas de la Open University, Walton Hall, Milton Keynes, MK7 6AA (Para aparecer en Nature Biotechnology abril de 2000)Se trata de una réplica a un artículo publicado en Nature Biotechnology (enero 2000) atacando un artículo anterior, publicado ahora (Ho, MW, Ryan, A., Cummins, J. (1999) El promotor demosaico de la coliflor viral - una receta para el desastre? Ecología Microbiana en Salud y Enfermedad 11, 194-197).Palabras clave, promotor CaMV 35S, la transferencia horizontal de genes, el principio deprecaución, los peligros de los cultivos transgénicosEn su cuenta (enero 2000) (1) de nuestra pre-publicación del manuscrito, se citan las críticas, pero ignoran por completo nuestra refutación completa, la cual fue publicada en la web el pasadonoviembre. Vamos a esbozar las principales cuestiones planteadas en respuesta a las críticas. Los detalles completos y las referencias están disponibles en nuestro sitio web (2).Nuestro manuscrito (3) En y sintetiza la literatura científica sobre el promotor 35S del virus del mosaico de la coliflor (CaMV) que se utiliza para dar constitutiva de expresión de los transgenesen prácticamente todos los cultivos transgénicos ya comercializados o sometidos a pruebas de campo. Los promotor funciona eficientemente en todas las plantas, así como las algas verdes,levadura y E. coli . Tiene una estructura modular, con partes comunes a e intercambiable con los promotores de otras plantas y virus animales. También tiene un punto de recombinación,flanqueado por múltiples motivos implicados en la recombinación, similar a los puntos calientes de recombinación otras incluidas las fronteras de la Agrobacterium vector de ADN T másfrecuentemente utilizados en la fabricación de plantas transgénicas. El mecanismo de sospecha de recombinación - DNA de doble cadena break-reparación - requiere homologías ADN poca oninguna secuencia. Finalmente, la recombinación entre transgenes virales y virus que infectan se ha demostrado en el laboratorio (4).Los resultados sugieren que las construcciones transgénicas que el promotor CaMV 35S puede ser estructuralmente inestable y propenso a la transferencia horizontal de genes y larecombinación. Los riesgos potenciales son mutagénesis, carcinogénesis reactivación de virus dormidos y generación de nuevos virus. Estas consideraciones son especialmente relevantes a laluz de los recientes hallazgos de que ciertos papas transgénicas - que contiene el promotor CaMV 35S - no es seguro para las ratas jóvenes, y que una parte significativa de los efectos puedendeberse a "la construcción o la transformación genética (o ambos) "(5).Nuestros críticos creen que el promotor CaMV 35S no es perjudicial porque la gente ha estado comiendo el virus en repollos y coliflores infectados por muchos años. Lo que hemos estadoconsumiendo es el virus predominante intactas y genomas virales no desnudos. Desnudos genomas virales se han encontrado para dar toda regla infecciones en especies hospedantes no queno son susceptibles al virus intacto (6). Además, el promotor 35S de CaMV en el es una parte estable, integrante del virus, y no puede ser comparado con el promotor 35S en artificialesconstrucciones transgénicas. Construcciones artificiales son bien conocidos para ser estructuralmente inestable (7). Sabemos que el promotor 35S en el virus no se transfiere en los genomasporque pararetroviruses, tales como CaMV, no se integran en genomas de acogida para completar su ciclo de vida, y la replicación viral tiene lugar en el citoplasma (8). Pero eso no dice nadasobre el promotor 35S en construcciones transgénicas que están integradas en los genomas de acogida.Proviral secuencias están presentes en todos los genomas, y como todos los promotores virales son modulares, y tener al menos un módulo - la caja TATA - en común, si no más, no esinconcebible que el promotor 35S en construcciones transgénicas puede reactivar virus latentes o generar nuevos virus por recombinación. El promotor de CaMV 35S ha sido unidoartificialmente a los ADNc de una amplia gama de genomas virales y virus infecciosos producidos en el laboratorio (9). También hay pruebas de que la secuencia proviral en el genoma puedeser reactivado (10).El hecho de que las plantas se "cargan" con elementos potencialmente móviles sólo puede empeorar las cosas. La mayoría, si no todos los elementos habrá sido "domado" en el curso de laevolución y por lo tanto ya no es móvil. Pero la integración de las construcciones transgénicas que contienen el promotor 35S puede movilizar los elementos. Los elementos a su vez puedeproporcionar funciones helper para desestabilizar el ADN transgénico, y también pueden servir como sustratos para la recombinación para generar elementos invasivos más exóticas.Al firmar el Protocolo Internacional de Bioseguridad en Montreal en enero, más de 150 gobiernos se comprometieron a aplicar el principio de precaución. La evidencia disponible indicaclaramente que hay serios riesgos potenciales asociados con el uso del promotor CaMV. Todos los cultivos transgénicos y los productos que contienen el promotor CaMV por lo tanto debenretirarse tanto de uso comercial y de pruebas de campo a menos que y hasta que puedan demostrar que es segura.Referencias 1. Hodgson, J. (2000). Nature Biotechnology 18, 13. 2. Instituto de la Ciencia en la web de la Sociedad: <www.i-sis.org.uk> 3. Ho, MW, Ryan, A. y Cummins, J. (1999). Ecología Microbiana en Salud y Enfermedad , en prensa, y está disponible en formato electrónico www.scup.no / mehd / ho ;. 4. Wintermantel, W. y Schoelz, J. (1996). Virología 223, 156-64 5. Ewen, SWB y Pusztai, A. (1999). The Lancet 354, 1353-1354. 6. Véase, por ejemplo, Rekvig, OP, et al (1992). Scand. J. Immunol. 36, 487-95. 7. La inestabilidad estructural de los vectores artificiales es un tema de libro de texto. Ver RW Vieja, y Primrose, SB (1994). Principios de la manipulación genética , 5 ª ed., Blackwell, Oxford.
  14. 14. 8. Covey, S., et al (1990). Proc. Nat. Acad. Sci. EE.UU. 87, 1633-7. 9. Maiss, E., et al (1992). J. Gen. Virol . 73, 709-13; Meyer, M y Dessens, J. (1997 ). J. Gen. Viol . 78, 147-51. 10. Nowora, T. et al (1999). Virología 255, 214-20. Peligros de las plantas transgénicas que contienen el promotor viral mosaico de la coliflor Respuesta a las críticas de los autores de "El Promotor mosaico de la coliflor Viral - ¿una receta para el desastre" Ecología Microbiana en Salud y EnfermedadDisponible en formato PDF aquí Mae-Wan Ho y Angela Ryan Instituto de la Ciencia en la Sociedad y el Departamento de Biología, Universidad Abierta, Walton Hall, Milton Keynes, MK7 6AA, Reino Unido Joe CumminsDepartamento de Ciencias Vegetales de la Universidad de Western Ontario, Ontario, Canadá(Estamos haciendo caso omiso de los comentarios del P. Christou, ya que tienen poca relación con el artículo real que hemos presentado, y fue publicado en el Journal. Nuestras observacionesestán dirigidas a las críticas de Hull, R. Covey, SN y Dale, P. del Centro John Innes, y de Oliver Rautenberg de Biolinx.)Se revisó y sintetizó los hallazgos existentes para predecir los peligros potencialesComo Rautenberg (1) señala con razón, nuestro papel (2) no se ha elaborado a partir de los trabajos de investigación que hemos hecho nosotros mismos, sino que fue escrito para revisar ysintetizar la literatura científica sobre y alrededor del promotor CaMV 35S. Esta es una parte legítima e importante de la actividad científica, pues la ciencia no consiste en hechos aislados queno guardan relación entre sí. Es precisamente la red de interrelaciones mutuas de las conclusiones que constituyen la ciencia. Más importante aún, esta traza el universo de posibilidades tantopara la investigación y para la predicción de los riesgos potenciales en la evaluación de riesgos. Nuestros críticos no están de acuerdo con las implicaciones que extraemos de losdescubrimientos científicos, y sobre todo con nuestras conclusiones y recomendaciones.Para recapitular, señalamos que el promotor CaMV 35S es promiscuo en función, y funciona de manera eficiente en todas las plantas, así como las algas verdes, la levadura y E. coli . Tiene unaestructura modular, con partes comunes a e intercambiable con los promotores de otras plantas y virus animales. También tiene un punto de recombinación, flanqueado por múltiplesmotivos implicados en la recombinación, y es similar a la recombinación hotspots otras incluidas las fronteras de la Agrobacterium vector de ADN T más frecuentemente utilizados en lafabricación de plantas transgénicas. El mecanismo de sospecha de recombinación - DNA de doble cadena break-reparación - requiere homologías ADN poca o ninguna secuencia.Finalmente, larecombinación entre transgenes virales y virus que infectan se ha demostrado en el laboratorio.Construcciones transgénicas ya son bien conocidos por ser inestables, y la existencia de un punto de acceso recombinación a exacerbar el problema. Por consiguiente, las construccionestransgénicas que contienen el promotor CaMV pueden ser más propensos a la transferencia horizontal de genes y la recombinación de ADN no transgénico. Lapeligros potenciales incluyen reordenación del genoma, la mutagénesis de inserción, inserción de la carcinogénesis, la reactivación de virus dormidos y generación de nuevos virus (revisadoen refs. 3 y 4). Estas consideraciones son especialmente relevantes a la luz de los recientes hallazgos de que ciertos papas transgénicas - que contiene el promotor CaMV 35S y transformadocon Agrobacterium ADN-T - no es seguro para las ratas jóvenes, y que una parte significativa de los efectos pueden deberse a "la construir o la transformación genética (o ambos) "(5). Por lotanto, llamamos a todos los cultivos transgénicos y los productos que contienen el promotor CaMV que ser retirado y prohibido, que está de acuerdo con el principio de precaución así comosólidos conocimientos científicos.Las objeciones planteadas por nuestros críticosNuestros críticos no están en desacuerdo con la descripción de los resultados, pero con las consecuencias que sacamos, y con nuestra conclusión. Se plantearon una serie de cargos, que seenumeran a continuación. 1. Virus mosaico de la coliflor infecta a una amplia gama de las crucíferas consumidos por los seres humanos, y sin efectos nocivos se han encontrado ya sea a través de recombinación para causar la sobre expresión de genes normales o mediante la producción de nuevos virus (1,6). 2. CaMV y pararetroviruses otros, así como los retrotransposones numerosos relacionados presentes en los genomas de plantas no se han encontrado para generar
  15. 15. nuevos virus por recombinación "a pesar de una intensa investigación sobre estos grupos de virus" (6). 3. Promotor CaMV no es única. Muchos promotores de plantas se espera que tengan características similares. La recombinación es una característica normal del cultivo tradicional de plantas y de todas las poblaciones. Por lo tanto, no hay nuevos virus podría ser generada por el promotor CaMV en plantas transgénicas. 4. Los eventos de recombinación descritos por Kohli et al (7) la cual nos referimos, da evidencia de eventos de recombinación antes de que el transgén está integrado y no es pertinente a su estabilidad en las plantas transgénicas y puede ser debido a su construcción particular que consiste en el CaMV promotor 35S se asocia en los tres enlazados expresión de genes de casetes (6). 5. Relación entre CaMV y hepadnavirus tales como la hepatitis B virus humano no es suficiente para que el promotor CaMV para recombinarse con ella. Tienen ciclos de replicación significativamente diferentes y no existe similitud de secuencia entre el punto de acceso del promotor 35S de CaMV y las secuencias de hepadnavirus importantes en la replicación (6). 6. Para el promotor CaMV para recombinarse con humano u otro animal o virus de plantas, o para provocar la sobre expresión de los genes del huésped, el promotor entero tendría que ser extirpados y reinsertado precisamente en el sitio nuevo o su extremo 3 unido precisamente con el gen hospedador o el gen viral. Esto no es probable, ya que sólo hay un punto de acceso recombinación asociado con el promotor CaMV 35S (6). Además, el promotor intacto no sobrevivir a la digestión en el intestino del animal. 7. Recombinación que implica el promotor CaMV 35S, si se produce, es un evento raro, como secuencias transgénicas están presentes en concentraciones muy bajas, es decir, una o varias copias en la mayoría de por célula. Además, los recombinantes raras serán seleccionados cuando las semillas son de hasta expansionado en una etapa temprana (6). 8. Compuestos potencialmente cancerígenos ya existen en abundancia en plantas de alimentos naturales (6). Por lo tanto, no es necesario estar preocupado por generar nuevas toxinas o agentes cancerígenos en las plantas transgénicas.Vamos a tratar de hacer frente a todas estas objeciones, en el espíritu de "mejorar el debate" (6)El virus intacto difiere significativamente de los genomas virales desnudasEl CaMV intacto, encapsidada, que consiste en el genoma de CaMV envuelto en su capa de proteína, no es infeccioso para los seres humanos ni para otros animales no sensibles y plantas,como es bien conocido, porque es la capa que determina la susceptibilidad del huésped en la primera instancia. Así que comer el virus intacto (recusación 1 arriba) es de poca importancia.Sinembargo, los genomas virales desnudas o libre puede ser más infecciosa y tienen un amplio rango de huésped que el virus intacto. De células T humanas leucémicas genomas virales formadovirus completos cuando se inyecta en el torrente sanguíneo de conejos (8). De manera similar, los genomas de los poliomavirus humano BK (BKV) dio una infección en toda regla cuando seinyectan en conejos, a pesar del hecho de que la BKV intacto no es infecciosa (9). Los acontecimientos recientes en la terapia génica y vacunas de ácidos nucleicos dejan pocas dudas de quelos ácidos nucleicos desnudos o sin fácilmente puede tener acceso a todas las células de los animales y los seres humanos modelo (4). El destino de tales ácidos nucleicos, una vezinternalizado, depende de las construcciones particulares. Por ejemplo, se ha descubierto recientemente que las secuencias integradas virales en los genomas de las células muertas sonmucho más fácilmente transferido horizontalmente con los genomas de células vivas que han tomado el ADN fragmentado (10). También se encuentra que la falta de secuencias viralesintegradas replican como episomas rara vez, o nunca, transferido.Hay una gran diferencia entre los genomas virales que contienen el promotor CaMV 35S como una parte integral del virus - adaptado a los virus y al host a través de millones de años deevolución - y el promotor CaMV 35S fuera de contexto, se unió con un gen extraño y se inserta en un genoma extraño. Por lo tanto, comer desnudos genomas virales (recusación 1) puedetener poco efecto, pero eso no dice nada sobre el ADN transgénico que contiene el promotor CaMV 35S.El promotor 35S de CaMV en el genoma viral difiere significativamente de la delpromotor 35S de CaMV en el ADN transgénicoComo Hull et al (6) destacar, hay muchas limitaciones para la recombinación natural, y la recombinación natural entre los virus es muy rara (objeción 7), posiblemente porque cada genomaviral tiene una integridad natural y la estabilidad como resultado de millones de años de evolución. El promotor 35S en el virus no se transfiere en los genomas porque pararetroviruses como
  16. 16. CaMV, no es necesario integrar en genomas de acogida para completar su ciclo de vida, y el virus se replica en el citoplasma de distancia desde el genoma del huésped. Sin embargo, algunassecuencias pararetroviral se han encontrado integrarse en los genomas de plantas (11).También está claro que la recombinación entre transgenes virales y virus que infectan puede ocurrir. Un número de estudios han demostrado que los virus de plantas pueden adquirir unavariedad de genes virales de plantas transgénicas. Se indica que el transgén viral, aislado del virus y se integran en el genoma del huésped, no puede equipararse con el mismo gen en el virusen sí. Esto es relevante a las objeciones de 2, 3, 4 5 y 7 planteadas por nuestros críticos.Defectuoso virus del mosaico necrótico del trébol rojo que carece del gen movimiento de célula a célula, y por lo tanto, no infecciosa, se recombina con una copia de ese gen en plantastransgénicas de Nicotiana benthamiana plantas para regenerar virus infecciosos (12). Transgenic Brassica napus que contiene CaMV gen VI, un activador de traslación, se recombina con la partecomplementaria del virus de la falta ese gen (13), y dio virus infeccioso en el 100% de las plantas transgénicas. El mismo experimento llevado a cabo en Nicotiana bigelovii (14) diorecombinantes infecciosos que ampliado la gama de huéspedes del virus. N. benthamiana plantas que expresan un segmento del virus moteado clorótico caupí (CCMV) capa-proteína del genrecombinado con virus defectuoso que falta ese gen (15). Un informe posterior indicó que la recombinación entre transgenes y el virus infectante en CCMV era mucho más frecuente que larecombinación entre los virus que infectan a co-(16), a pesar del hecho de que las secuencias transgénicas se producen en concentraciones muy bajas en comparación con los virus queinfectan a co-objeción (7). Las mismas plantas transformadas con tres construcciones diferentes que contienen la secuencia de codificación de proteína de la cubierta del virus delmosaico africano de la mandioca (ACMV) se recombina con un mutante de deleción de la proteína de la cubierta para regenerar el virus de tipo salvaje que produce síntomas gravesde la infección en las plantas transgénicas (17 ).Como todos los experimentos implicados recombinación entre virus defectuoso y el transgén, se pensó que, en condiciones naturales, cuando los virus no son defectuosos, no tiene ningúnvirus recombinantes se generaría (18). Sin embargo, la recombinación entre los de tipo salvaje CaMV y VI transgén se demostró en N. bigelovii (19). Al menos uno de los virus recombinantesera más virulenta que la de tipo salvaje.Green y Allison (20) encontraron que el recorte del extremo 3 del transgén CCMV que contiene la región no traducida (UTR) redujo la recombinación a cero, en comparación con 3% en loscontroles. Como secuencias de ribonucleótidos dentro de la 3 UTR están implicados en la iniciación de la replicación viral, la presencia de esta secuencia puede fomentar la participación deltransgén en la recombinación del ARN. Esto sugiere que la mayoría, si no todas las recombinaciones puede implicar la plantilla de conmutación entre secuencias homólogas durante lareplicación viral. Hallazgos recientes indican también que el viral RNA-polimerasa dependiente de ARN de varios potyvirus y virus aspermy tomate tienen la capacidad de reconocer heterólogo3 UTR (del virus mosaico de la lechuga y virus del mosaico del pepino) incluido en los ARNm del transgén, y usarlos como promotores de la transcripción (21). Estos resultados tienenimplicaciones importantes para la seguridad de las plantas transgénicas resistentes a virus en general.Se ha observado en experimentos con CaMV (19), que la frecuencia de recombinación es mucho mayor que para otros virus. Mientras CCMV recombinante se recuperó a partir de 3%transgénico N. benthamiana que contiene secuencias CCMV, recombinante CaMV se recuperó a partir de 36% de transgénicos N. bigelovii . Se sospechaba que roturas bicatenarias de ADNpuede estar implicado en el caso de la recombinación CaMV. Esto puede ser debido al hecho de que el ADN transgénico incluyen el promotor CaMV 35S.Inestabilidad estructural de ADN transgénico en comparación con el ADNhuésped naturalNuestros críticos creen que el punto caliente de recombinación del promotor CaMV 35S en el ADN transgénico no es único, ya que todos contienen promotor recombinación hotspots yrecombinación en los genomas es un evento normal (objeción 3).Es bien sabido, sin embargo, que las piezas de ADN fuera de contexto y se recombinan en nuevas configuraciones tienden a ser inestables, por lo tanto, que la inestabilidad estructural devectores artificiales para la ingeniería genética - hecha por unión de piezas de ADN de virus diferentes, plásmidos, transposones y otras fuentes - es un tema tratado en un libro de texto sobreingeniería genética (22). Esta inestabilidad también hace que los vectores artificiales propensas a la recombinación y transposición.El promotor CaMV 35S en la planta transgénica es parte del ADN transgénico introducido, que es una construcción altamente mosaico. El promotor CaMV está unido a un gen que nunca hasido vinculado a la anterior, para formar una "expresión-cassette . Varias casetes de expresión son a menudo apiladas en serie, y se empalma a su vez en un vector artificial, lo más a menudo Tdel ADN, que también se conoce para ser flanqueado por puntos calientes de recombinación (ver ref. 7). Tal estructura típica de ADN transgénico se reconoce a ser inestables y de tener unapropensión a reordenamientos y para la transferencia horizontal de genes (23, 24). Esto se afirma explícitamente en un reciente informe científico encargado por la Salud y Seguridad delReino Unido (25)," La ubicación de los genes liberados en elementos genéticos móviles o en estrecha dentro ES secuencias, transposones, casetes de genes o puntos calientes de recombinación .... todopuede aumentar la probabilidad de transferencia horizontal de genes. " p. 70.Promotor CaMV en el ADN transgénico se diferencia significativamente de lospromotores de la propia planta, virus integrados y otros puntos calientes derecombinación posiblesEl promotor CaMV en el ADN transgénico es también muy diferente de los promotores de los genes propios de la planta (objeción 3). Estructuralmente, los promotores propios de la planta seespera que sea mucho más estable que el promotor CaMV en el ADN transgénico por las siguientes razones. En primer lugar, los genes de la planta y sus promotores existir en un genomaorganizado, donde la recombinación homóloga es predominantemente entre alelos, de modo que cada promotor permanecerá asociado con alelos del mismo gen después de larecombinación. En segundo lugar, cada gen del huésped y su promotor han sido adaptados el uno al otro, estructural y funcionalmente, en el contexto de todo el genoma, para cientos demillones de años, y por lo tanto espera que sea mucho más estable que el ADN transgénico que contiene el promotor CaMV. Los virus integrados, inactivos y retrotransposones, de manerasimilar, han sido "domesticados" por la planta, probablemente durante millones de años y, por tanto, de nuevo, más probabilidades de ser estable que el nuevo intruso (objeción 3). ComoHull et al (6) estado, la mayoría, si no todos, de los retrotransposones ya no son móviles. En tercer lugar, la mera integración de ADN transgénico en un cromosoma huésped crea regiones deno homología, que se espera que interrumpir aún más la estructura cromosómica debido a la desigual cross-over mitótico y en la recombinación meiótica.La inestabilidad de la expresión del transgen como el resultado de "silenciamiento de genes está ahora bien reconocido y activamente investigados (ver ref. 26 para el último mecanismodescubierto). La inestabilidad estructural que exige movilidad secundaria o reordenamiento de transgenes integrados también es una causa común de fallo de líneas transgénicas (discutidoen la ref. 27).La inestabilidad estructural de los transgenes es generalmente subestimada, como las células que pierden transgenes se eliminan automáticamente durante el proceso de selección necesariapara la producción de líneas transgénicas. Sin embargo, la inestabilidad puede surgir incluso en las generaciones posteriores de propagación vegetal (objeción 7). Somos conscientes de haydatos publicados que documentan la estabilidad estructural de las líneas transgénicas en sucesivas generaciones, a pesar de la inestabilidad fenotípica se ha documentado, por ejemplo, enplantas transgénicas de algodón Bt de algodón se cultiva comercialmente en el sur de los Estados Unidos en 1996 (28), y en Roundup 1997 (29). Estrés fisiológico debido a condicionesextremas de temperatura o sequías, que pueden movilizar los transposones, pueden aumentar la inestabilidad transgénica. La sobreexpresión constitutiva de transgenes al promotor deCaMV 35A, de manera similar es un estrés metabólico-factor que puede aumentar la inestabilidad transgen (30).
  17. 17. Hull et al (6) suponer que como sólo hay un punto de acceso de recombinación en el CaMV 35 promotor, no es probable que someterse a la transferencia horizontal de genes (objeción 6).Porsupuesto, incluso una rotura de doble cadena puede dar lugar a la reordenación genética, y el resultado en el promotor CaMV 35S está asociada con el gen de acogida o secuenciasprovirales. Pero más aún, el constructo transgénico suele contener varios puntos de recombinación. Por ejemplo, las plantas transgénicas creadas más con el Agrobacterium vector T-ADNtendrá ADN transgénico flanqueado por los bordes izquierdo y derecho, dos puntos de acceso de recombinación. Además, los casetes de expresión de genes incluyen terminadores quetambién son puntos calientes de recombinación (como se discute en la ref. 7). Así que todo o parte del ADN transgénico pueden ser propensas a la transferencia horizontal.Es muy probable que los promotores CaMV apilamiento en tres casetes de expresión sucesivas, como Kohli et al (7) han hecho, aumentará la inestabilidad estructural adicional (objeción 4).Lasrecombinaciones y reordenamientos que han observado en las diferentes líneas transgénicas, sin embargo, puede haber ocurrido antes y después de los eventos de transformación primaria,durante la propagación y selección en cultivo de células y de la planta. Esto es algo que debe ser abordado por las investigaciones empíricas.Las consecuencias funcionales de la construcción modular de todos los promotores,incluyendo el promotor 35S de CaMVLa construcción modular de los promotores tiene dos consecuencias importantes, el primero de los cuales está relacionado con la función de los promotores. Los diferentes módulos oelementos en el promotor de responder a las señales procedentes de una batería de genes que codifican para otros factores de transcripción, que determinan la especificidad de tejido,calendario y la amplitud de la expresión génica. Por lo tanto, los promotores de genes permiten hablar el uno al otro, formando complejas redes de intercomunicación que permitan a lasdecenas de miles de genes en un organismo para funcionar como un todo coherente, y en su caso para el medio ambiente. Algunos de los elementos del promotor también permiten queresponda a recombinasas y otras enzimas que dan como resultado la recombinación, transposición, la movilidad y la mutación. Este tipo de "ingeniería genética natural" (31) es muy precisa, yaque está regulado por el organismo como un todo, de manera que todavía no entienden (32). La estructura de la cromatina sí mismo ahora se sabe que contribuyen a esta regulación.Lashistonas se modifican de acuerdo con un "hasta ahora desconocido código de histonas "que modula la función de genes a través de la estructura de cromatina en todos los genomaseucariotas (33).Uno puede ver por qué la inserción aleatoria de ADN extraño en esta increíblemente compleja, sistema de regulación material cuadrático y sutil dará una serie de efectos inesperados, nodeseados, especialmente cuando el ADN extraño incluye la constitutivo fuerte promotor CaMV 35S. La integración del ADN transgénico en los genomas se sabe que tienen muchos efectosinesperados, incluyendo mutaciones, cánceres (en el caso de células de mamífero) y los cambios en la metilación del ADN, una modificación química del ADN, que puede afectar a lasactividades de los genes del hospedador. Los efectos se sabe que se extienden lejos de la zona de inserción (34). Hull et al (6) están equivocados al suponer que el promotor CaMV tiene queser colocado exactamente junto a un gen con el fin de hacer que sobre-expresan (objeción 6). En un experimento reciente en la mutagénesis de inserción utilizando un transposón mini-sintético, los investigadores descubrieron un evento que resulta en la sobre expresión de un gen del huésped que es de 164 pares de bases de distancia del sitio de inserción (35).Por lo tanto, la posibilidad de nuevas toxinas y alérgenos derivados no puede ser fácilmente desechado en cuenta tanto los efectos de posición debido a la inserción aleatoria de ADNtransgénico y efectos pleiotrópicos debidos a las interacciones funcionales con genes del hospedador. La sugerencia de que los compuestos potencialmente cancerígenos se producen enabundancia en las plantas naturales (objeción de 8) es irrelevante. Estos alimentos se han comido desde hace decenas de miles de años, y compuestos que son carcinógenos en forma aisladapuede tener efectos muy diferentes cuando se consumen en combinación con todos los otros componentes de la comida en sí.El punto importante es que las construcciones transgénicas no contienen nuevos genes y nuevas combinaciones de genes que nunca han existido en la naturaleza, no en miles de millones deaños de evolución. Que, al menos, es una de las razones en las reivindicaciones de patente que se hacen. Además, la sobre expresión de los genes del huésped que se asocian con el promotorCaMV 35S como el resultado de una transferencia horizontal de genes o reordenación genómica también puede aumentar la concentración de metabolitos de otra manera segura a los nivelestóxicos o cancerígenos.Consecuencias estructurales de la estructura modular de los promotoresHull et al (6) también puede ser un error pensar que todo el CaMV 35S tiene que ser transferido antes de que cualquiera de los dos puede conducir a la sobre-expresión de genes de acogida opara la reactivación o la generación de nuevos virus (objeción 6). Debido a la construcción modular de todos los promotores, ya está claro que muchos elementos son comunes a muchospromotores, tanto es así que los terapeutas de genes sintéticos están haciendo súper-promotores por recombinación al azar de diferentes elementos (36). Como se revisa en nuestrodocumento anterior (2), el promotor CaMV 35S es promiscuo en función, y es activo en combinación en su totalidad o en parte con otros promotores. Por lo tanto, la transferencia de partesdel 35S CaMV contienen potenciador u otros elementos en los genomas puede ser suficiente para causar la sobre expresión de genes o para reactivar virus latentes o generar nuevos virus.Como se ha señalado por Hull et al (6), secuencias provirales (37) y retrotransposones relacionados se encuentran ahora a estar presentes en todos los genomas, incluyendo los de las plantassuperiores (38). El hecho de que el promotor CaMV es diferente en secuencia a partir de otros promotores no impide que sustituyendo una serie de virus. El promotor de CaMV 35S ha sidounido artificialmente a los ADNc de una amplia gama de secuencias virales, y los virus infecciosos producidos en el laboratorio (39, 40). También hay pruebas de que la secuencia proviral en elgenoma del banano puede ser reactivado, especialmente en el cultivo de tejidos, como se demuestra por un grupo de investigadores que incluyen uno de nuestros críticos, Roger Hull (41). Elhabía advertido anteriormente que las proteínas de la cubierta viral en plantas transgénicas no sólo puede ofrecer disfraz a virus relacionados a moverse alrededor de la planta e infectar, perotambién que la proteína puede envolver retrotransposones en plantas y permitir que se transmite horizontalmente a otras especies ( 42).El hecho de que las plantas se "cargan" con elementos potencialmente móviles, como retrotransposones, sólo puede empeorar las cosas. La mayoría, si no todos, de los elementos ya no sonmóviles. Pero la integración de las construcciones transgénicas que contienen el promotor 35S puede movilizar los elementos. Los elementos a su vez puede proporcionar funciones helperpara desestabilizar el ADN transgénico, y también pueden servir como sustratos para la recombinación para generar elementos invasivos más exóticas. Ya se conoce, a partir de experimentosen la terapia génica, que las secuencias retrovirales y otras se pueden integrar en los genomas de mamíferos en ausencia de la integrasa viral (43). Aunque promotor CaMV 35S y promotoresde virus de los animales no tienen la misma secuencia de bases, que tienen al menos un elemento (la caja TATA) en común, si no más. Por tanto, es posible, por tanto, para protooncogenesanfitrionas y secuencias províricas se active y reactiva (objeciones 5 y 6). También, completamente nuevas especies cruzadas virus puede surgir de la recombinación entre los elementos ymotivos del promotor 35S de CaMV y las de virus animales, latente o de otro modo (objeción 5).Una nueva investigación en nuestros críticos propia investigación instituto están revelando cómo las plantas naturalmente resistentes a las infecciones virales, haciendo pequeños ARNantisentido de 25 nucleótidos en contra de los genes virales. Exactamente el mismo mecanismo que se dirige contra transgenes de silenciar ellos (26). El comentario de los autores de que elsilenciamiento de genes "puede representar un mecanismo natural de defensa antiviral y transgenes podrían ser atacados por ellos, o su ARN son percibidos como los virus." Esto en cuanto ala afirmación de que la ingeniería genética es igual que el fitomejoramiento convencional.Al firmar el Protocolo Internacional de Bioseguridad en Montreal en enero, más de 130 gobiernos se comprometieron a aplicar el principio de precaución. La evidencia disponible indicaclaramente que hay serios riesgos potenciales asociados con el uso del promotor 35S de CaMV. El sello distintivo de la ciencia es que es siempre provisional e incierto. La genética molecular esuna disciplina nueva y nuestra ignorancia respecto a la regulación de genes y los impactos ecológicos de la transferencia horizontal de genes es profundo. La responsabilidad social de laciencia y el uso apropiado de la evidencia científica, por tanto, para establecer la precaución. Hacemos un llamamiento a nuestros críticos como sus colegas científicos a unirse a nosotros parapedir la retirada de todos los cultivos transgénicos y los productos que contienen el promotor CaMV 35S, tanto de uso comercial y de los ensayos de campo, a menos que y hasta que puedandemostrar que es segura. Mientras tanto, la investigación de calidad más bien básica - como en la realizada en el Instituto John Innes - debe continuar bajo condiciones estrictamenteestablecidas.
  18. 18. ReconocimientoDamos las gracias a Mark Griffiths por llamar nuestra atención sobre algunos documentos importantes.Referencias 1. Rautenberg O. Ecología Microbiana en Salud y Enfermedad (en prensa). 2. Ho MW, Ryan A, Cummins, J. Promotor mosaico de la coliflor Viral - Una receta para el desastre? Ecología Microbiana en Salud y Enfermedad 1999, 11: 194-197. 3. Ho MW, T Traavik, R Olsvik, B Tappeser, V Howard, von Weizsäcker C, McGavin G. Tecnología Genética y Ecología Genética de las Enfermedades Infecciosas. Ecología Microbiana en Salud y Enfermedad 1998,10: 33-59. 4. Ho MW, Ryan A, Cummins J, T Traavik riesgos no regulados:. Ácidos nucleicos Naked y Free . ISIS Report, enero de 2000, preparado por TWN y distribuido en la Conferencia del Protocolo de Bioseguridad en Montreal, 24 hasta 28 en 2000, disponible en el Instituto de Ciencia en Sociedad de la página web www.i-sis.org.uk , también presentado para su publicación en otro lugar. 5. Ewen S, Pusztai A. Efecto de dietas con papas genéticamente modificadas que expresan Galanthus nivalis lectina en intestino delgado de rata. The Lancet 1999, 354: 1353-1354. 6. Hull R, SN Covey, Dale P. Vegetales Genéticamente Modificados y el promotor 35S:. Evaluación de los riesgos y Enchancing el Debate Ecología Microbiana en Salud y Enfermedad (en prensa). 7. Kohli A, S Griffiths, Palacios N, RM Twyman, Vain P, Laurie DA, P. Christou Caracterización molecular de la transformación de plásmido reordenamientos en el arroz transgénico revela un Hotspot recombinación en el promotor CaMV 35S y confirma el predominio de recombinación mediada microhomology. La Planta Diario 1999, 17: 591-601. 8. Zhaqo T, Robinson M, F Bowers, Kindt infectividad de T. quimérico humano de células T tipo I virus de la leucemia clones moleculares evaluados por inoculación de ADN desnudo.Proc. Natnl.Acad Ciencia. EE.UU. 1996, 93 : 6653-6658. 9. Rekvig OP, K Fredriksen, B Brannsether, U Moens, A Sundsfjord, Traavik anticuerpos a T. eucariotas, incluyendo autólogo, el ADN nativo se producen durante la infección por el virus BK, pero no después de la inmunización con no infecciosa BK ADN. Scand. J. Immunol . 1992, 36: 487-495. 10. Holmgren L, Szeles A, E Rajnavolgyi, Foldman J, Klein G, Ernberg I, Falk KI. . La transferencia horizontal de ADN mediante la captación de cuerpos apoptóticos Sangre 1999, 93: 3956-3963. 11. Harper G, Osuju, JO, JS Heslop-Harrison, R. Hull Integración de badnavirus Rayado del Banano en el Musa Genoma:. Evidencia molecular y citológica Virología 1999, 255: 207- 213. 12. Lommel, SA y Xiong, Z. (1991). La reconstitución de un virus funcional del mosaico necrótico del trébol rojo por rescate de recombinación del gen de movimiento de célula a célula expresa en una planta transgénica . J. Cell. Biochem . 15A, 151. 13. Gal, S., Pisan, B., Hohn, T., Grimsley, N. y Hohn, B. (1992). Aginfection de plantas transgénicas conduce a virus viable mosaico de la coliflor por recombinación intermolecular. Virología187, 525-33.
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  21. 21. Es DNA GM diferente del ADN natural?"El ADN es ADN es ADN", dijo un defensor en un debate público para tratar de convencer a la audiencia que no hay diferencia entre los cultivos genéticamente modificados (GM) de ADN y el ADN natural ", elADN es captado por las células, ya que es muy nutritivo! ""GM puede suceder en la naturaleza", dijo otro proponente. "La madre naturaleza llegó allí primero."Así que, ¿por qué preocuparse por la contaminación transgénica? ¿Por qué molestarse establecer los umbrales de contaminación de alimentos y piensos? ¿Por qué las patentes de adjudicación del DNA GM en labase de que es una innovación? ¿Por qué no aceptar empresas de biotecnología pasivos si no hay nada de qué preocuparse?En cuanto a GM sucede en la naturaleza, lo mismo ocurre con la muerte, pero eso no justifica el asesinato. La desintegración radiactiva que ocurre en la naturaleza también, pero concentra y acelera, se convierteen una bomba atómica.GMDNA y ADN natural son indistinguibles de acuerdo con la química más mundanas, es decir, tienen la misma fórmula química o composición atómica. Aparte de eso, son tan diferentes como la noche y eldía. ADN natural se realiza en organismos vivos; GMDNA se produce en el laboratorio. ADN natural tiene la firma de la especie a la que pertenece; GMDNA contiene bits copiados desde el ADN de una ampliavariedad de organismos, o simplemente sintetizado en el laboratorio. ADN natural tiene miles de millones de años de evolución tras de sí; GMDNA contiene material genético y combinaciones de materialgenético que nunca han existido.Además, está diseñado GMDNA - aunque sea toscamente - para cruzar las barreras entre especies y saltar al genoma. Las características de diseño incluyen cambios en el código genético y fines especiales quemejoran la recombinación, es decir, irrumpiendo en los genomas y volver a unir. GMDNA menudo contiene genes marcadores de resistencia necesarios en el proceso de elaboración de los organismosmodificados genéticamente, pero no tiene ninguna función útil en el organismo modificado genéticamente.El proceso de GM claramente no es lo que hace la naturaleza (véase "La punción de los mitos de GM", SiS 22). Se evita la reproducción, cortocircuitos y acelera en gran medida la evolución.La evolución naturalcreado nuevas combinaciones de material genético a un ritmo predominantemente lento y constante durante miles de millones de años. Hay un límite natural, no solamente a la velocidad sino también para elámbito de aplicación de intercambio de genes en la evolución. Eso es porque cada especie sale al escenario evolutivo en su propio espacio y tiempo, y sólo aquellas especies que se superponen en el espacio y eltiempo nunca podrían intercambiar genes en absoluto en la naturaleza. Con GM, sin embargo, no hay límite alguno: incluso el ADN de organismos enterrados y extinción de cientos de miles de años podrían serdesenterrado, copiado y se recombina con el ADN de organismos que existen hoy en día.GM aumenta enormemente el alcance y la velocidad de transferencia horizontalde genesTransferencia horizontal de genes ocurre cuando salta de materiales extraños genéticos en los genomas, creando nuevas combinaciones (recombinación) de genes o genomas nuevos.Transferencia horizontalde genes y la recombinación van de la mano. En la naturaleza, así es como, de vez en cuando, los nuevos virus y bacterias que causan enfermedades epidémicas se generan y cómo los antibióticos y resistencia alos medicamentos se extendió a los agentes patógenos, por lo que las infecciones mucho más difícil de tratar.La modificación genética es la transferencia de genes esencialmente horizontal y la recombinación, se aceleró enormemente, y totalmente ilimitada en la fuente del material genético recombinado para hacer elGMDNA que se inserta en las plantas genomas, los animales y el ganado para crear organismos genéticamente modificados (OGM).Al mejorar tanto la velocidad y el alcance de la transferencia horizontal de genes y la recombinación, GM también ha aumentado la posibilidad de generar nuevos patógenos virus y bacterias. (Es como elaumento de las probabilidades de obtener la combinación correcta de números para ganar la lotería apostando en muchas combinaciones diferentes al mismo tiempo.) Eso no es todo. Los estudios sobre elproceso de GM han demostrado que las inserciones de genes extraños invariablemente dañan el genoma, aleatorización y reordenando las secuencias de ADN, lo que resulta en la expresión del gen apropiadoque puede provocar cáncer.El problema con los insertos transgénicos es que pueden transferir de nuevo en otros genomas con todos los riesgos mencionados. Hay razones para creer insertos transgénicos son más propensos a sometersea la transferencia horizontal y la recombinación de ADN natural, el principal de los cuales es que los insertos transgénicos (y las variedades transgénicas resultantes de ellos) son estructuralmente inestables, yamenudo contienen recombinación hotspots (como el fronteras de las inserciones).Después de años de negación, algunos países europeos comenzaron a llevar a cabo específicos para cada evento "Análisis molecular de los insertos transgénicos en el mercado variedades GM aprobados comoes requerido por las nuevas directivas europeas para la liberación intencional, nuevos alimentos y la trazabilidad y el etiquetado. Estos análisis revelan que casi todos los insertos transgénicos han fragmentado yse han reorganizado ya que se caracteriza por la empresa . Esto hace que todas las variedades modificadas genéticamente ya comercializados ilegal bajo el nuevo régimen, y también invalida cualquier evaluaciónde la seguridad que se ha hecho en ellos (ver "Las líneas transgénicas demostrado inestable", SiS 20 y "inestables líneas transgénicas ilegales", SiS 21 ). Como todo el mundo sabe, las propiedades de la variedadGM, y por tanto su identidad, dependen absolutamente de la forma exacta y la posición de la inserción de GM (s). No hay sentido en el que una variedad transgénica es "sustancialmente equivalentes" a lasvariedades no transgénicas.GMDNA en los alimentos y piensosEn vista de la evaluación de la seguridad ambiental estricto necesario para el crecimiento de los cultivos transgénicos en Europa, las empresas de biotecnología están pasando por alto que en la solicitud deimportación de alimentos GM producir y procesar solamente. ¿Puede alimentos transgénicos? Hay tanto de la evidencia científica y anecdótica que indica que no puede ser: muchas especies de animales se veafectada negativamente después de haber sido alimentados con diferentes especies de plantas modificadas genéticamente con una variedad de insertos transgénicos ("? Alimentos GM seguro" verseries, SiS 21 ), lo que sugiere que el peligro común puede residir en el proceso de GM en sí, o el GMDNA.¿Cómo fiable puede GMDNA ser detectado?ADN puede ser fácilmente aislado y cuantificado en grandes cantidades. Pero el método utilizado rutinariamente para detectar pequeñas cantidades o trazas de GMDNA es la reacción en cadena de la polimerasa(PCR). Esto copia y amplifica una secuencia específica de ADN basado en "cadenas" cebadores cortos de ADN que coinciden con los dos extremos de la secuencia a amplificar, y por lo tanto se puede unir a losextremos a prime la replicación de la secuencia a través de típicamente 30 o más ciclos, hasta que pueda ser identificado después de la tinción con un colorante fluorescente.Hay muchas dificultades técnicas asociadas con la amplificación por PCR. Debido a la pequeña cantidad de la muestra usado rutinariamente para el análisis, puede no ser representativo de la muestra,especialmente si la muestra es no homogénea, tal como el contenido intestinal de un animal grande. Los cebadores pueden no hibridarse con la secuencia correcta, la propia PCR puede fallar porque losinhibidores están presentes. Por lo general, la secuencia amplificada es una pequeña fracción de la longitud de todo el inserto de GM, y por lo tanto no se detecta ningún otro presente GM fragmento. Si lasecuencia objetivo en sí está fragmentado o reorganizado, la PCR también fallará. Por todas estas razones, la PCR casi siempre subestiman la cantidad de presente GMDNA, y un resultado negativo no puede sertomada como evidencia de que GMDNA está ausente.

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