Aula Imunoprecipitação

1. UNIVERSIDADE FEDERAL DA BAHIA
INSTITUTO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE – ICS
DEPARTAMENTO DE BIOINTERAÇÃO
TEIXEIRA, A.C.O.; Ferreira, M.A.S.V. e Marques, A.S.A.. Detecção de Erwinia psidii via enriquecimento
em extrato de folhas de goiabeira e imunodifusão radial dupla. Tropical Plant Patology, vol. 33, nº 3.
Brasilia, Junho de 2008.
Trabalho realizado pelo Mestrando em Ciências Animais nos Trópicos Dan Loureiro
Nascimento sob orientação do Prof. Dr. Ricardo Wagner Dias Portela do Laboratório
de Imunologia e Biologia Molecular (LABIMUNO). Atualizado em Fevereiro de 2011.

2. http://www.analiselaboratorios.com.br/imagem/prodts/014.jpg

3. • Teste utilizado para detectar a presença de anticorpo (ac) específicos
em fluidos corporais
•Possui boa especificidade, porém apresenta falhas de sensibilidade
•A formação do complexo ag/ac e sua precipitação permite a
visualização do teste
•Facilidade de confecção do teste
• Antígeno e anticorpo são colocados em meio sólido ou líquido,
interagem e precipitam formando uma linha de precipitação, que
indica a presença do anticorpo no soro.

4. • Utiliza-se, em geral, uma placa de Petri, lâmina de microscopia ou
placa de poliestireno onde se adiciona o gel contendo ou não
antígeno,
•O gel geralmente é composto de agarose ou ágar nobre (a depender
do teste e o tipo de malha e afinidade eletrônica que o mesmo exige).
Depois de preparado e colocado na placa o gel é perfurado e nestes
poços anticorpo e/ou antígeno são colocados, de onde se difundirão.
•Na região onde o antígeno e o anticorpo se encontrarem (zona de
precipitação) formar-se-á uma linha de precipitação que indica a
positividade da amostra e/ou controle,
• É um método qualitativo (na medida em que indica um resultado
através da presença ou não das zonas de precipitação).

5. o Elementos necessários para a realização:
• Gel de Agarose ou Ágar (o gel pode ser impregnado com Ac ou não a
depender do tipo de imunodifusão),
• Antígeno purificado (imunodifusão dupla),
•Anticorpo purificado (controle positivo),
• Amostras a serem testadas,
• Placa de poliestireno, Petri, ou lâmina de microscopia,
•Cuba de eletroforese horizontal.

6. o Elementos necessários para a realização:
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http://www.analiselaboratorios.com.br/imagem/prodts/014.jpg
Placas Imunodifusão
Acervo pessoal.
Placa de Petri
http://www.biomol.com.br/Imagens/Fotos/%7B1isqt6495xo2bv02u0i43
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2014.JPG
Cuba de eletroforese horizontal

7. o Vantagens
• É um método de fácil execução,
•Não necessita de aparato sofisticado,
• Teste com boa especificidade (característica que indica que o
teste em questão identificará somente o ag ou ac desejado) –
menor risco de falsos-positivos,
•Permite que várias amostras sejam testadas ao mesmo tempo,
• Realização relativamente rápida, simples e de custo baixo em
comparação com outras técnicas.

8. oDesvantagens
• Falhas em sensibilidade, o que indica um alto risco de falsos
negativos,
•É um teste que apresenta alguns problemas com a
reprodutibilidade,
•Apesar de ser um texte de rápida execução, o tempo de
incubação é muito grande, de 24 até 72 horas em alguns casos.
•Difícil peservação do gel
• Não aplicável a alguns isotipos de imunoglobulinas.

10. EM MEIO SEMI-SÓLIDO
•IMUNODIFUSÃO RADIAL SIMPLES: dosagem de ac ou ag
• IMUNODIFUSÃO RADIAL DUPLA: detecção de ac
•IMUNOELETROFORESE: avaliação de imunoglobulinas

11. Anticorpo livre
Antígeno livre
+
-
-
Zona de excesso
de anticorpo
Zona de
equivalência
+
Precipitaçã
o de
anticorpo
Zona de excesso
de antígeno
Quantidade de antígeno adicionado

12. 1) A placa se encontra cheia de
gel impregnado com um
anticorpo específico,
2) Coloca-se os controles
positivos e as amostras a
serem testadas nos poços
perfurados no gel,
3) Incuba-se a placa por 48
horas,
Porf. Cruvinel, W.M.. PRECIPITAÇÃO, Laboratório de Apoio
Didático – UCG –Go.
4) Os halos (zona de
equivalência) formados em
tono dos poços são medidos,
Porf. Cruvinel, W.M.. PRECIPITAÇÃO, Laboratório de Apoio
Didático – UCG –Go.

13. o Interpretação
dos resultados:
• Durante a incubação ocorre a difusão do antígeno na agarose e a formação
de complexos ag-ac.,
• Os complexos precipitam e formam um
halo ao redor do orifício,
• Existe uma relação linear entre o
quadrado do diâmetro do halo (d2) e a
concentração do antígeno,
• Utilizando antígeno de concentrações
conhecidas pode-se fazer uma curva
Porf. Cruvinel, W.M.. PRECIPITAÇÃO, Laboratório de
Apoio Didático – UCG –Go.
padrão, permitindo determinar a
concentração em amostras
desconhecidas.
http://www.anflalab.com.br/images/Hoja%20Diffuplate%20051.jpg
Porf. Cruvinel, W.M.. PRECIPITAÇÃO, Laboratório de Apoio Didático – UCG –

14. o Aplicações na medicina humana
e veterinária:
• Diagnóstico de doenças infecto-contagiosas, onde a detecção de
imunoglobulinas e proteinas séricas seja significativa
• Exemplos: dosagem de imunoglobulinas e proteina séricas (tanto em
humanos como em animais).

15. 1) O gel de agarose ou agar é
preparado e colocado na
placa,
Porf. Cruvinel, W.M.. PRECIPITAÇÃO, Laboratório de Apoio Didático – UCG –Go.
Acervo Pessoal.
Porf. Cruvinel, W.M.. PRECIPITAÇÃO, Laboratório de Apoio Didático – UCG –Go
2) Após a solidificação do gel,
poços são perfurados com um
molde (perfurador ou roseta),
3) adiciona-se antígeno ,
controle positivo e a amostra
a ser testada nos poços
perfurados,
4) Incuba-se a placa por 48
horas.
5) Os complexos ac-ag se
formam e precipitam
formando linhas de
precipitação que indicam o
resultado.

16. o Interpretação
dos resultados:
• A formação e localização da banda de
precipitação indicam a presença de ac
bem como sua concentração em relação
ao ag,
• Quanto mais perto do ag maior a
concentração de ac na amostra .
Acervo pessoal.

17. o Aplicações na medicina humana
e veterinária:
• Muito usado no diagnóstico de doenças infecto-contagiosas,
• Exemplos na Medicina Humana: Candidísase, Histoplasmose e
Aspergilose
• Exemplos na Medicina Veterinária: Doença de Maedi-visna, Brucella
ovis.

18. BURMESTER, G.R.; Pezzutto, A.. Color Atlas of Immunology. Thieme, Germany, 2003.
1) O gel é preparado e
perfurado após sua
solidificaçação,
2) O pH do gel éescolhido de
forma que partículas
negativas migrem para o
eletrodo positivo,
3) É colocado o ac e/ou ag (a
depender do tipo de
imunoeletroforese) nos poços
ou canaleta perfurados,
4) O gel numa cuba de
eletroforese horizontal,
5) É aplicada carga no gel, esta
carga é a responsável pela
migração de ag,
6) É cortada uma canaleta
entre os poços, a qual será
preenchida com ac,
7) Ac e ag formam arcos de
precipitação no gel

19. o Interpretação
dos resultados:
• Proteínas podem ser identificadas baseado na intensidade, forma e posição
das linhas de precipitação,
• Cada arco de precipitação representa um antígeno.
Imunoeletroforese
Rocket Eletroforese

20. o Aplicações na Medicina
Humana e Veterinária:
• Utilizada em pacientes com suspeitas de gamopatias monoclonais e
policlonais. Imunoglobulinas policlonais são distribuídas uniformemente
através da fração de gama-globulina depois da separação eletroforética.
• Diagnóstico sorológico de algumas doenças
• Exemplo na Medicina Humana: detecção de ac e ag bacterianos
(Meningite e Septicemia), Cisticercose.
• Exemplo na Medicina Veterinária: cisticercose, alérgenos.

21. • BURMESTER, G.R.; Pezzutto, A.. Color Atlas of Immunology. Thieme, Germany, 2003.
• ROITT,I.M.; Rabson, A.; Delves, P.J.. Really Essential Medical Immunology. Ed – 2.
Blackwell Publishing. Massachusetts – USA, 2005.
• TEIXEIRA, A.C.O.; Ferreira, M.A.S.V. e Marques, A.S.A.. Detecção de Erwinia psidii via
enriquecimento em extrato de folhas de goiabeira e imunodifusão radial dupla. Tropical
Plant Patology, vol. 33, nº 3. Brasilia, Junho de 2008.
• http://www.analiselaboratorios.com.br/imagem/prodts/014.jpg
• http://pathmicro.med.sc.edu/Portuguese/13.GIF
• http://eximlab.com.br/images/fotos/fotop_DGH12_3.jpg
•http://www.biomol.com.br/Imagens/Fotos/%7B1isqt6495xo2bv02u0i43dlgfdrxh4%7D
_Cubas%20de%20Eletroforese%20Horizontal%2014%20x%2014.JPG
• http://www.anflalab.com.br/images/Hoja%20Diffuplate%20051.jpg
• http://www.fcf.usp.br/Ensino/Graduacao/Disciplinas/LinkAula/imunoprecipitacao.pdf
• http://www.unirio.br/DMP/Graduacao/Medicina/Imunologia/AgAb%20Reactions.pdf
• http://www.scielosp.org/img/revistas/rsp/v12n1/11f1.gif