Microbiologia

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Microbiologia

  1. 1. Crecimiento deMicroorganismos procariotas
  2. 2. Factores que afectan el crecimiento: • temperatura • pH • oxígeno • presión osmótica • radiaciones • nutrientes• Medios de cultivo
  3. 3. CrecimientoAumento ordenado de todos los componentesde un organismo y no solamente de alguno de ellos. En organismos unicelulares el crecimientoconduce a un aumento en el número de células más que un aumento en el tamaño celular.
  4. 4. División celular: fisión binaria Gemación levaduras
  5. 5. Evaluación del crecimiento1- Determinación del número de microorganismos• Métodos directos: recuento total Recuento microscópico directo Conteo electrónico• Métodos indirectos: recuento de viables Recuento en placa Filtración por membrana e incubación Número más probable (NMP)
  6. 6. 2- Determinación de la masa celular Medida de la masa o volumen Determinación del contenido de N, C, P, Turbidimetría3- Determinación de la actividad celular Actividad enzimática Concentración de un metabolito Medida de la respiración
  7. 7. Turbidimetría– método rápido– no distingue células vivas y muertas– baja sensibilidad
  8. 8. Cuenta celular: Directamente al microscopio ómediante un contador electrónico de partículas oindirectamente por conteo de colonias.Masa celular: En forma directa pesando omidiendo el contenido celular de nitrógeno, o declorofila en el caso de cianobacterias oindirectamente por turbidimetría.Actividad celular: Indirectamente,relacionando el grado de actividad bioquímica altamaño de la población.
  9. 9. CUENTA VIABLEDe tal manera que la cuenta delas colonias en la placa, nosseñala el número de bacteriasviables del inóculo. El númerode colonias debe estar entre 30a 300, entre estas cantidadesla cuenta es más exacta.Generalmente las placas secuentan sobre una pantallailuminada que tiene una granlente de aumento. Las cuentasse reportan como UFC(Unidades Formadoras deColonias por mililitro).
  10. 10. Cuenta de Microorganismospor Filtración de MembranaSe basa en el uso de filtrosmoleculares o de membrana.Estos filtros tienen porosidaduniforme de tamañopredeterminado losuficientemente pequeño paradetener a los microorganismos.Esta técnica sirve paradeterminar el número debacterias en grandes volúmenesde aire o de agua. La membrana con bacterias sedeposita en una almohadillasaturada con el medio apropiado.Se cuentan las colonias quecrecen sobre la superficie de lasmismas.
  11. 11. Cuenta de microorganismos por el numero más probable(NMP)Otra técnica para determinar el número de bacterias esla del número más probable (NMP), es un métodoestadístico que se fundamenta en la teoría de laprobabilidad. En esté método se hacen múltiplesdiluciones seriadas y se establecen criterios como eldesarrollo de opacidad, turbidez o formación de gas,etc. en un medio de cultivo líquido, para indicar eldesarrollo de bacterias en ese medio y a cierta dilución.Para determinar el número de bacterias en la muestraoriginal se usan patrones con resultados conocidos ytablas de probabilidades estadísticas, esto es, el númeromás probable de bacterias.
  12. 12. Efecto del ambiente sobre los microorganismosLos microorganismos están ampliamente distribuidos en la naturaleza, en ambientes muy variables comosuelos, aguas, aire, superficie de vegetales, animales.El carácter mayoritariamente unicelular o muy simple de los microorganismos los hace muy vulnerables a cambios en el ambiente Microorganismos vegetales animales Complejidad de la organización Dependencia con el ambiente
  13. 13. Requerimientos del crecimiento microbiano agua fuente de energía Nutrientes macronutrientes micronutrientes, factores de crecimiento temperatura pH Condiciones luz de cultivo aireación actividad de agua potencial redox
  14. 14. Temperaturas extremas: sicrófilos microorganismos capaces de crecer a bajas temperaturas.  Sicrófilos obligados Vc < 0-20°C, óptimo < 15oC  Sicrófilos facultativos 0-35°C, óptimo 20-30oC -10 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 T (°C) Adaptaciones a la sicrofilia: _ membranas ricas en ácidos grasos insaturadosChlamydomonas nivalis
  15. 15. TermófilosCapaces de crecer a temperaturassuperiores a 45ºC. Vc -10 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 T (°C) Adaptaciones a la termofilia:  enzimas y proteínas estables al calor  membranas ricas en ácidos grasos saturados manantiales calientes
  16. 16. Ensayo de tolerancia al oxígeno Caldo tioglicolatoTioglicolato agente reductorResazurina indicador redox
  17. 17. Efecto del ambiente físicoFactores físicos que afectan el crecimiento microbiano: •Temperatura • Oxígeno • pH • Presión osmótica • Radiaciones
  18. 18. Clasificación de los microorganismos según su pH óptimoAcidófilo: pH óptimo  6 Ej.: muchas de las arqueas y hongos Membranas estabilizadas por altas concentraciones de H+Neutrófilo: pH óptimo 6 - 8 Ej.: bacterias patógenas humanas.Basófilo: pH óptimo  8 Suelos y aguas ricos en carbonatos Ej: Bacillus
  19. 19. Efecto del ambiente físicoFactores físicos que afectan el crecimiento microbiano: •Temperatura • Oxígeno y otros gases • pH • Presión osmótica • Radiaciones
  20. 20. Requerimientos del crecimiento microbiano agua fuente de energía Nutrientes macronutrientes micronutrientes, factores de crecimiento temperatura pH Condiciones luz de cultivo aireación actividad de agua potencial redox
  21. 21. Medios de cultivo agua fuente de energíaNutrientes macronutrientes micronutrientes, factores de crecimiento
  22. 22. Medios de cultivoSegún la composición• definidos o sintéticos: composición química conocida• no definidos o complejos: composición química no definida, enriquecidos con peptonas, extracto de carne, de levadura, sangreSegún la naturaleza física líquidos sólidos - solidificante: agar-agar, sílico-gel semi-sólidos

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