UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE SINALOA
      ESCUELA SUPERIOR DE AGRICULTURA DEL VALLE DEL FUERTE




 DEPARTAMENTO DE PROTECCIÓN...
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NOMBRE DE LA CARRERA       ...
ACTIVIDADES DE APRENDIZAJE

  1)   Lectura de textos
  2)   Trabajo en equipo
  3)   Consultas bibliográficas y sitios de ...
CONTENIDO TEMÁTICO


UNIDAD I. INTRODUCCIÓN E IMPORTANCIA EN EL ESTUDIO DE LOS VIRUS
DE PLANTAS


1.1. Concepto de virus
1...
2.9. Posición taxonómica de los virus que afectan plantas
2.9.1. Grupos de importancia de virus fitopatógenos


UNIDAD III...
3.3.5.6. Transmisión de virus por vertebrados
3.3. Identificación de virus
3.3.1. Pruebas de eliminación de virus
3.3.2. R...
UNIDAD I. INTRODUCCIÓN E IMPORTANCIA EN EL ESTUDIO DE LOS VIRUS
DE PLANTAS


1.1.   CONCEPTO DE VIRUS
La palabra "virus" f...
1.2.   IMPORTANCIA DE LOS VIRUS
       Los virus son importantes porque:


   1. Causan enfermedades en el hombre (sida, c...
esto es, se dispersan desde el sitio de la infección a otras partes de las plantas. Sin
embargo, no todos los tejidos o cé...
-   La falta de síntomas no necesariamente significa que la planta no esté
       infectada. Puede suceder simplemente que...
2) Secundarios.- Ocurren posteriormente, y, se presentan en partes no inoculadas
de las plantas. Por ejemplo, el Virus Jas...
d) Virescencia (Autolisis).- Cambios de color que ocurren en las flores las cuales
adquieren una pigmentación verde.


e) ...
Otros tipos de síntomas sistémicos que pueden provocar los virus en las plantas son:
islas verdes (zonas abolsadas de colo...
gran importancia ya que nos ayudan a diagnosticar el origen de la enfermedad y en
la identificación del virus.


Las inclu...
virus, por ejemplo, el Virus del Mosaico del Tabaco cuando es inoculado a plantas de
Nicotina glutinosa y la temperatura e...
Agentes infecciosos también pueden causar síntomas similares a los ya descritos:
por ejemplo el tizón tardío llega a ser c...
UNIDAD II. FORMA, COMPOSICIÓN QUÍMICA Y TAXONOMÍA DE LOS VIRUS
QUE AFECTAN PLANTAS


2.1. PRINCIPALES FORMAS DE VIRUS DE P...
Con los descubrimientos de Takahashy y Rawlins (1932), cuando por el fenómeno
de refringencia mencionaron que las partícul...
El tamaño de los virus isométricos varía de 17-70 nanómetros (nm) de diámetro;
los baciliformes alcanzan 300 nm de longitu...
Virus X de la Papa                         6                       94
 Virus Mosaico de la Alfalfa               20       ...
El AN viral tiene como función específica el de dar arreglo a las subunidades de la
proteína del virus y la más importante...
presencia de aminoácidos, la cooperación de los ribosomas y de los ARN de
transferencia y los ARN mensajeros. El ARN mensa...
Los virus que afectan a los vegetales entran a las células a través de heridas hechas
mecánicamente, por vectores o por la...
El ó los sitios de la célula en los cuales el ARN del virus y de la proteína se sintetizan
y los sitios en los cuales esto...
El transporte de los virus por el floema ocurre aparentemente, a través de los tubos
cribosos, pudiéndose mover hasta 15 c...
deseable desde el punto de vista idiomático o nacionalista, pero que a veces
facilita la comunicación.


Resulta evidente ...
el sistema binomial de nomenclatura. En 1940, Fawcett sugiere un sistema que
combina a los anteriores, iniciando una décad...
S= Virus esféricos (poliédricos).
      U= Virus alargados con lados redondeados (baliforme y baciliforme).
      X= Virus...
Ne= Nematodos
      Ps= Psyllidae
      Si= Siphonaptera
      Th= Trips
       0= Sin vector
      Ve= Vector ninguno de ...
3) Potexvirus = R/1: 3.5/5:E/E:S/Ap


Este grupo incluye al Virus X de la Papa como su miembro tipo y las características
...
se transmiten muy fácilmente mecánicamente y los síntomas generalmente causan
mosaicos y algunas veces necrosis. Otros vir...
9) Tospovirus= R/1:7.4/2:S/S:S/Th


El único miembro de este grupo es el Virus Marchitez Manchada del Tomate y se
caracter...
UNIDAD III. FORMAS DE TRANSMISIÓN E IDENTIFICACIÓN DE LOS VIRUS
DE PLANTAS


3.1. CONCEPTO DE TRANSMISIÓN DE VIRUS
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Dada su condición como parásitos obligados los virus no se pueden desarrollar en
materia orgánica muerta; requieren del al...
culas virales pueden ser introducidas a células vivas por este método, pero para que
el virus llegue a ser funcional depen...
a) Tomar aproximadamente dos centímetros cuadrados (preferentemente hojas),
con los síntomas bien marcados.
b) Macerar en ...
los tejidos leñosos usualmente son más pobres en partículas virales que las hojas.
En hojas lo más conveniente es usar la ...
encontrar a los taninos (los cuales actúan sobre la proteína y provocan precipitación
de virus) y polifenoles oxidativos (...
El injerto es muy utilizado en virus que no se transmiten mecánicamente, pero hay
que tener mucho cuidado ya que por esta ...
3.2.2.3. TÉCNICA DE INYECCIÓN
Esta técnica fue una de las que se utilizaron por primera vez para la transmisión de
virus e...
A continuación se mencionan algunos virus de gran importancia que se transmiten
por este medio, sus hospedantes y en algun...
3.2.3.3. TÉCNICAS DE DETECCIÓN DE LOS VIRUS EN SEMILLAS
La detección de virus en semillas es más difícil que detectar hong...
Los virus pueden ser detectados en la semilla haciendo extracciones de diferentes
partes de la semilla y posteriormente in...
c) Microscopía electrónica.


Consiste en hacer preparaciones de las posibles semillas infectadas y observarlas al
microsc...
virus en campo.


3.2.5.1. TRANSMISIÓN POR INSECTOS
Constituye el grupo de biotransmisores más importante de virus. La pri...
3.2.5.1.1. CLASIFICACIÓN DE VIRUS DE ACUERDO A LA TRANSMISIÓN POR
INSECTOS
En base al fenómeno de transmisión de los virus...
incubación (tiempo que tarda el virus en recorrer el tracto digestivo del insecto) que
también es de horas, semanas y hast...
Son aquellos virus que penetran al tracto digestivo del insecto, se multiplican de este
y además la infectividad se pasa l...
persistente transmite a los de los grupo Luteovirus, Grupo del Virus Mosaico,
Enanismo del Chícharo y a la familia Rhabdov...
El principal vector es Bemisia tabaci y transmiten virus cuyos síntomas principales
son: aclareamiento de nervaduras, amar...
VIRUS TRANSMITIDOS POR TRIPS
Los trips presentan dos estadios larvarios ápteros los cuales se alimentan de su
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Desde hace mucho tiempo se empezó a manejar la posibilidad de que los hongos
transmitieran enfermedades virales, sin embar...
mecánicamente, por semilla, y los síntomas generalmente son mosaicos y manchas
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virus más importantes transmitidos por plantas parásitas son el Virus Mosaico del
Pepino, Mosaico del Tabaco y Virus Mosai...
Manual de virus (virus fitopatógenos)
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  1. 1. UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE SINALOA ESCUELA SUPERIOR DE AGRICULTURA DEL VALLE DEL FUERTE DEPARTAMENTO DE PROTECCIÓN VEGETAL RAMA DE FITOPATOLOGÍA NOTAS DEL CURSO DE: VIRUS (VIRUS FITOPATÓGENOS) PROTECCIÓN VEGETAL 7mo. SEMESTRE ING. MENA ADRIANO JORGE DANIEL Profesor JUAN JOSÉ RÍOS, SINALOA. AGOSTO DE 2010
  2. 2. UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE SINALOA ESCUELA SUPERIOR DE AGRICULTURA DEL VALLE DEL FUERTE NOMBRE DE LA CARRERA Licenciatura en Ingeniería Agronómica NOMBRE DE LA ASIGNATURA : Virus (Virus Fitopatógenos) SEMESTRE: Séptimo FASE DE FORMACIÓN: Acentuación LÍNEA CURRICULAR: Producción Agrícola AREA: Protección Vegetal HORAS HORAS TEÓRICAS: 3 PRÁCTICAS: 2 CRÉDITOS: 8 FUNDAMENTACIÓN CURRICULAR La asignatura de Virus se encuentra incluida en el VII semestre de la Licenciatura en Ingeniería Agronómica en el área de Protección Vegetal y se encuentra vinculada de manera directa a las asignaturas de Fitopatología General, Fitopatología Agrícola, Hongos, Bacterias, Nematodos, Manejo de Enfermedades, Fungicidas y Enfermedades de hortalizas. Es de gran importancia ya que se considera que el 15 % de las enfermedades ocurridas en campo son causadas por estos patógenos y además por el auge y el impacto que estas enfermedades tienen actualmente en el ámbito agrícola; es por eso que un alumno egresado de esta Fase de Acentuación necesita conocer la importancia de estos agentes como causantes de enfermedades. PROPÓSITO(S) GENERAL(ES) DEL CURSO Que los alumnos conozcan las características más importantes de estos patógenos de plantas, sus formas de ataque y el daño que causan, las formas de transmisión en campo, las técnicas de identificación usadas y el impacto como agentes causantes de enfermedades, para que sean capaces de manejar de manera correcta las técnicas de diagnóstico más empleadas en su identificación y aprenda el manejo correcto de los principios de control que se usan para estos agentes fitopatológicos. ACTIVIDADES DE ENSEÑANZA 1) Exposición oral y escrita por parte del profesor 2) Exposición oral y visual por parte del profesor y los alumnos 3) Conferencias sobre enfermedades virales 4) Seminarios sobre temas relacionados con virus de plantas 6) Prácticas de laboratorio y campo ii
  3. 3. ACTIVIDADES DE APRENDIZAJE 1) Lectura de textos 2) Trabajo en equipo 3) Consultas bibliográficas y sitios de Internet 4) Debate por equipos de los temas impartidos 5) Reportes de trabajos de prácticas de campo y laboratorio CRITERIOS DE EVALUACIÓN DE LOS APRENDIZAJES ESCOLARES • Asistencia (80 % de asistencia obligatoria para aprobar curso y tener derecho a examen ordinarios y extraordinarios) • Participación en clases………………………………………………………0.5 • Cumplimiento de tareas escolares………………………………………….0.5 • Elaboración de trabajos escritos …………………………………………....0.5 • Asistencia y reporte de las prácticas de laboratorio y campo……………1.5 • Exámenes teórico-prácticos sobre las diversas unidades del programa.6.0 • Presentación oral y visual sobre un tema específico……………………..1.0 iii
  4. 4. CONTENIDO TEMÁTICO UNIDAD I. INTRODUCCIÓN E IMPORTANCIA EN EL ESTUDIO DE LOS VIRUS DE PLANTAS 1.1. Concepto de virus 1.2. Importancia de los virus 1.3. Síntomas causados por virus en plantas 1.3.1. Importancia de la sintomatología causada por virus 1.3.2. Latencia, Enmascaramiento, Planta portadora, Periodo de incubación 1.3.3. Clasificación de síntomas por su localización 1.3.3.1. Síntomas externos 1.3.3.1.1. Síntomas locales 1.3.3.1.2. Síntomas sistémicos 1.3.3.2. Síntomas internos 1.3.3.2.1. Histológicos 1.3.3.2.2. Citológicos 1.3.4. Factores que intervienen en la variación de síntomas 1.4. Factores causantes de síntomas semejantes a los inducidos por virus UNIDAD II. FORMA, COMPOSICIÓN QUÍMICA Y TAXONOMÍA DE LOS VIRUS QUE AFECTAN PLANTAS 2.1. Principales formas de virus de plantas 2.2. Tamaño de los virus 2.3. Estructura química de los virus de plantas 2.4. Composición y funciones del ácido nucleico viral 2.5. Composición y funciones de la proteína viral 2.6. Replicación de virus 2.7. Translocación de los virus de plantas 2.8. Nomenclatura iv
  5. 5. 2.9. Posición taxonómica de los virus que afectan plantas 2.9.1. Grupos de importancia de virus fitopatógenos UNIDAD III. FORMAS DE TRANSMISIÓN E IDENTIFICACIÓN DE LOS VIRUS DE PLANTAS 3.1. Concepto de transmisión de virus 3.2. Tipos de transmisión de virus 3.2.1. Transmisión por propagación vegetativa 3.2.2. Transmisión mecánica 3.2.2.1. Técnica de Frotis 3.2.2.1.1. Factores que intervienen en una transmisión por frotis 3.2.2.2. Técnica de injerto 3.2.2.3. Técnica de inyección 3.2.3. Transmisión por semilla 3.2.3.1. Importancia de la transmisión por semilla de virus en plantas 3.2.3.2. Mecanismos de entrada de los virus en la semilla 3.2.3.3. Técnicas de detección de los virus en semillas 3.2.4. Transmisión por polen 3.2.5. Transmisión de virus a través de Biotransmisores 3.2.5.1. Transmisión por insectos 3.2.5.1.1. Clasificación de virus de acuerdo a la transmisión por insectos 3.2.5.1.1.1. Virus no persistentes 3.2.5.1.1.2. Virus persistentes 3.2.5.1.1.2.1. Persistentes circulativos 3.2.5.1.1.2.2. Persistentes propagativos 3.2.5.1.1.2.3. Persistentes transováricos 3.2.5.2. Transmisión de virus por hongos 3.2.5.3. Transmisión de virus por nematodos 3.2.5.4. Transmisión de virus por ácaros 3.2.5.5. Transmisión de virus por plantas parásitas v
  6. 6. 3.3.5.6. Transmisión de virus por vertebrados 3.3. Identificación de virus 3.3.1. Pruebas de eliminación de virus 3.3.2. Rango de hospedantes 3.3.3. Propiedades de infectividad de los virus 3.3.3.1. Punto de inactivación térmica (PIT) 3.3.3.2. Punto final de dilución (PFD) 3.3.3.4. Longevidad “in Vitro” 3.3.4. Tipo de partícula viral 3.3.5. Formas de transmisión 3.3.6. Pruebas serológicas 3.3.6.1. Doble difusión en agar 3.3.6.2. Prueba de Elisa UNIDAD IV. DESCRIPCIÓN DE LAS PRINCIPALES ENFERMEDADES CAUSADAS POR VIRUS EN PLANTAS CULTIVADAS 4.1. Descripción de los principales virus que afectan hortalizas 4.1.1. Virus que afectan tomate 4.1.2. Virus que afectan chile 4.1.3. Virus de cucurbitáceas 4.2. Descripción de los principales virus que afectan cultivos básicos 4.2.1. Virus que afectan frijol 4.2.2. Virus que atacan maíz y trigo 4.3. Descripción de los virus que afectan frutales 4.3.1. Virus de cítricos 4.3.2. Virus que afectan papaya vi
  7. 7. UNIDAD I. INTRODUCCIÓN E IMPORTANCIA EN EL ESTUDIO DE LOS VIRUS DE PLANTAS 1.1. CONCEPTO DE VIRUS La palabra "virus" fue descrita por primera vez en el diccionario Phillips en 1720 como "veneno o toxina". Durante mucho tiempo este término fue utilizado en el lenguaje médico, para designar enfermedades infecciosas cuyas causas eran desconocidas. Después de las investigaciones llevadas a cabo por Pasteur en 1864 sobre la especificidad microbiana se pensó por analogía, que cada enfermedad debía de tener su agente causante ya fuera un hongo, una bacteria u otro microorganismo. Para explicar este hecho en algunas enfermedades de las plantas, producidas por agentes no visibles al microscopio común, se creó el concepto de "ULTRAMICROBIOS", para referirse a organismos más pequeños a los que en aquella época se conocían y tenían la capacidad de causar infección. Los virus son agentes infecciosos causantes de enfermedades de diversos organismos vivos. La palabra virus es de origen latino y significa pus o veneno. Los virus son partículas compuestas por ácido nucleico (AN) y proteína, de tamaño submicroscópico, son parásitos obligados que solo se multiplican en el interior de las células del hospedante. Los virus no son células ni están constituidos por ellas, pero se propagan al obligar a la célula vegetal a que los multiplique utilizando su propia energía y maquinaria biosintética. A consecuencia de lo anterior el metabolismo de las células vegetales se altera a tal grado que las plantas se enferman. Los virus no matan a las plantas directamente mediante toxinas ni enzimas. En cambio desvían el metabolismo y se generan substancias extrañas y se alteran diversas funciones vitales que inducen el desarrollo de síntomas, que pueden variar desde simples cambios de color hasta necrosis severa o muerte súbita de la planta. En otros el efecto es casi imperceptible como en el caso de los hospedantes asintomáticos. vii
  8. 8. 1.2. IMPORTANCIA DE LOS VIRUS Los virus son importantes porque: 1. Causan enfermedades en el hombre (sida, cáncer, poliomielitis, rabia, gripe y hepatitis viral, etc.), animales domésticos y silvestres. 2. Afectan a otros microorganismos (bacteriófagos, micovirus) por lo que contribuyen al equilibrio microbiano de la naturaleza. 3. Causan enfermedades de plantas. Se han caracterizado más de 1000 virus, de los cuales más de 500 son patógenos de plantas. Al alterar el funcionamiento normal de la planta llegan a provocar pérdidas hasta de 100%. Los daños no son únicamente en la cantidad sino en la calidad de la producción; por ejemplo frutos deformes y manchados pierden valor comercial. Prácticamente cualquier planta puede ser atacada por virus y es común encontrar a mas de dos virus afectando al mismo tiempo a la misma planta. Algunos como el Virus del Mosaico del Tabaco tiene un rango de hospedantes muy amplio; puede atacar más de 300 especies de plantas herbáceas y leñosas distribuidas en 50 géneros. A consecuencia de las enfermedades virales (o virosis) se derivan también una serie de gastos adicionales para lograr el control: aplicaciones de insecticidas contra vectores, cubiertas de agribón, trampas amarillas, etc. 1.3. SÍNTOMAS CAUSADOS POR VIRUS EN PLANTAS Un amplio rango de anormalidades son causadas por virus y casi nunca las características de la planta puede ser cambiada por la infección del virus, ya que la mayoría de los efectos notables son cambios de color o desarrollos anormales. La mayoría de los virus que atacan plantas infectan a sus hospedantes sistémicamente, viii
  9. 9. esto es, se dispersan desde el sitio de la infección a otras partes de las plantas. Sin embargo, no todos los tejidos o células son invadidos y los tejidos meristemáticos de raíces y retoños, por ejemplo, parecen escapar a las infecciones. Las relaciones sobre la multiplicación de los virus y sus consecuentes síntomas (efectos visibles del patógeno sobre su hospedante), aún es poco entendido, y es conveniente señalar que depende en gran medida de algunos factores como: medio ambiente, relación virus-hospedante, condiciones fisiológicas de las plantas, edad de los tejidos del hospedante y el tiempo de infección de estos. Los síntomas causados por virus en plantas eran de las únicas herramientas con que se contaba en años anteriores para la identificación de estos patógenos y actualmente juegan un papel de gran importancia debido a: a) Con los síntomas se pueden reconocer plantas virosas en el campo y eliminarlas. b) Se puede determinar en algunos casos la naturaleza virosa de la enfermedad. c) Sirven en Virología para expresar la nomenclatura de estos patógenos. d) Se puede valorar por medio de los síntomas el grado fitopatológico de una enfermedad en una planta y un cultivo. 1.3.1. IMPORTANCIA DE LA SINTOMATOLOGÍA CAUSADA POR VIRUS Sin negar la importancia de los síntomas para identificar enfermedades virales, el diagnóstico de estas en base a los síntomas, es con frecuencia de baja precisión. Los síntomas son útiles para el diagnóstico preliminar y solo en el caso de enfermedades muy conocidas se puede afirmar con total certeza que el agente causal de tal o cual enfermedad es determinado virus. Lo anterior se debe a que: - Síntomas similares pueden ser producidos por diferentes virus. - El mismo virus puede producir un amplio rango de síntomas, dependiendo de la variante del propio virus, del ambiente y genotipo del hospedante. - Otros patógenos o factores abióticos también producen síntomas similares. ix
  10. 10. - La falta de síntomas no necesariamente significa que la planta no esté infectada. Puede suceder simplemente que la infección esté latente. 1.3.2. LATENCIA, ENMASCARAMIENTO, PLANTA PORTADORA, PERIODO DE INCUBACIÓN Las infecciones causadas por algunos virus en plantas no se manifiestan como síntomas por lo que a estos virus se les conoce como VIRUS LATENTES y la planta que tiene al virus se le conoce con el nombre de PORTADORA; por ejemplo, Datura stramonium (Toloache) con el Virus del Enchinamiento del Tomate. Otras plantas manifiestan los síntomas del daño por virus pero estos desaparecen temporalmente conociéndose a este fenómeno como ENMASCARAMIENTO. Se define como PERÍODO DE INCUBACIÓN, al tiempo que ocurre desde la inoculación de un virus hasta la aparición de los primeros síntomas y este es muy variable; en frutales es largo (meses) y en herbáceas las lesiones locales se presentan de 2-5 días y la infección sistémica de 2-3 semanas. 1.3.3. CLASIFICACIÓN DE SÍNTOMAS POR SU LOCALIZACIÓN Los síntomas causados por virus fitopatógenos se pueden clasificar en: EXTERNOS e INTERNOS. 1.3.3.1. SÍNTOMAS EXTERNOS Son aquellos efectos visibles del daño causado por un patógeno sobre su hospedante. Este tipo de síntomas son los más importantes en la descripción de los virus en plantas y se clasifican en PRIMARIOS y SECUNDARIOS (por su secuencia de infección) y en LOCALES y SISTEMICOS (de acuerdo al proceso infectivo). 1) Primarios.- Son las manifestaciones iniciales que presenta una planta y resultan frecuentemente mediante inoculaciones mecánicas artificiales o en infecciones naturales (transmisión de virus por medio de la semilla). x
  11. 11. 2) Secundarios.- Ocurren posteriormente, y, se presentan en partes no inoculadas de las plantas. Por ejemplo, el Virus Jaspeado del Tabaco en chile, primeramente presenta marchitez (síntoma primario), las plantas se defolian y después al brotar las yemas, éstas presentan síntomas de mosaico (síntoma secundario). 1.3.3.1.1. SÍNTOMAS LOCALES Llamados también reacciones de hipersensibilidad, son aquellos que se manifiestan en el lugar de la inoculación. Carecen de importancia a nivel de campo (no se presentan) pero son muy importantes a nivel experimental; las plantas que se usan para obtener estos síntomas se les conoce con el nombre de PLANTAS INDICADORAS y algunos ejemplos de estas son: Nicotiana glutinosa (Tabaco) Virus del Mosaico del Tabaco Chenopodium amaranticolor (Chual) Virus del Mosaico de la Sandía Gomphrena globosa (Amaranto globoso) Virus Pinto del Tomate 1.3.3.1.2. SÍNTOMAS SISTÉMICOS Son aquellos que se manifiestan lejos del punto de inoculación; es decir, por toda la planta y dentro de estos tenemos: a) Mosaicos.- Son alternaciones de áreas blancas, amarillas o verde-claro entremezcladas con el verde normal de la hoja o fruto. Ejemplo: Virus del Mosaico del Tabaco. b) Moteados.- Son áreas cloróticas aisladas, muy pequeñas y difusas. Ejemplo: Virus Moteado Clorótico del Clavel. c) Clorosis.- Consiste en un amarillamiento de la planta, debido al decremento o retraso de la clorofila. Puede existir en los márgenes y se llamará clorosis marginal; en el ápice y entonces será clorosis apical o entre las nervaduras y será clorosis intervenal o aclareamiento de nervaduras. Ejemplo: Virus del Enanismo Amarillo de la Cebada, Virus Rayado Fino del Maíz, etc. xi
  12. 12. d) Virescencia (Autolisis).- Cambios de color que ocurren en las flores las cuales adquieren una pigmentación verde. e) Variegación.- Decoloración irregularmente distribuida sobre las flores, las cuales presentan áreas cloróticas o blancas. Ejemplo: Virus Variegado del tulipán. f) Necrosis.- Implica muerte de células y tejidos, puede ocurrir en raíces, tallos, hojas, flores y frutos. Ejemplo: Virus de la Marchitez Manchada del Tomate. g) Manchas anulares.- Manchas que se presentan en forma de anillos. Ejemplo: Virus de la Mancha Anular del Tabaco. h) Tumores o agallas.- Sobrecrecimiento anormal de tejido debido al agrandamiento de las células o a la multiplicación excesiva de estas. Ejemplo: Virus del Tumor y Heridas del Trébol. i) Epinastia.- Pérdida del ángulo normal de la hoja, en la cual el ápice se dobla hacia el envés. Ejemplo: Virus del Mosaico Común del Frijol. j) Escoba de bruja (Blastomania).- Proliferación excesiva de brotes o yemas que dan la apariencia de una escoba. k) Filodia (Mal de agujetas).- Reducción de la lámina foliar dando la apariencia de nervadura principal. Ejemplo: Virus del la Mancha Anular de la Papaya. l) Enanismo o achaparramiento.- Desarrollo reducido de la planta; es decir, ésta no alcanza la altura deseada. Ejemplo: Virus del Enanismo del Maíz. m) Enchinamiento.- Acortadura de la nervadura central, enrollándose las hojas hacia el centro. Ejemplo. Virus del Enchinamiento del Tomate. xii
  13. 13. Otros tipos de síntomas sistémicos que pueden provocar los virus en las plantas son: islas verdes (zonas abolsadas de color verde intenso), deformación de frutos, leprosis o sarnas, brote hinchado, acortamiento de entrenudos, cambios de hábitos, gomosis, raquitismo, rama ahulada, etc. 1.3.3.2. SÍNTOMAS INTERNOS Son aquellos que se manifiestan en el interior de las plantas y pueden ser HISTOLOGICOS Y CITOLOGICOS. 1.3.3.2.1. HISTOLÓGICOS Este tipo de síntomas se manifiestan en los tejidos de las plantas. Ejemplo: el Virus Tristeza de los Cítricos cuando ataca cítricos existe acumulación de almidón entre el patrón e injerto y para detectar la enfermedad se tiene que usar una solución de lugol o Ioduro de potasio. En el Virus del Enrollamiento de la Hoja de Papa hay acumulación de celulosa en el tejido vascular y para detectarlo se tiñe con resorcinol o azul de algodón en los tubérculos. 1.3.3.2.2. CITOLÓGICOS Son los síntomas que se manifiestan en las células de las plantas y se les conoce con el nombre de cuerpos X o inclusiones virales; estas inclusiones fueron descritas por Ivanowski en 1903 en células de plantas de tabaco infectadas con el Virus del Mosaico del Tabaco. Estos cuerpos o cristales se forman como producto del metabolismo anormal que realizan las células infectadas y se forman por partículas de virus, substancias producidas por estos patógenos (proteínas), por organelos celulares anormales o bien por una combinación de todo lo anterior; su distribución es abundante en la epidermis de las hojas, pero también en tallos, raíces, flores y frutos. En las células se localizan en el citoplasma, núcleo y nucléolo. Aunque hasta la fecha su función es poco conocida se cree que forman parte de la replicación; estas inclusiones son de xiii
  14. 14. gran importancia ya que nos ayudan a diagnosticar el origen de la enfermedad y en la identificación del virus. Las inclusiones virales las podemos clasificar en AMORFAS, CRISTALINAS Y PARACRISTALINAS. Dentro de la amorfas podemos encontrar: granulosas, fibrosas, vacuoladas, bandeadas, laminadas y densas; dentro de las cristalinas tenemos: hexagonales, cuadradas, rectangulares, piramidales y romboides. 1) Granulosas.- Son de formas redondas u ovaladas con la apariencia de pequeños gránulos y de tamaño variable. Ejemplo. Virus Jaspeado del Tabaco en chile. 2) Fibrosas.- Formadas por estructuras alargadas en forma de fibra. Ejemplo: Virus del Mosaico de la Sandía. 3) Vacuoladas.- De forma redonda, con límites bien definidos por una membrana y con áreas claras por dentro. Ejemplo: Virus del Mosaico de la Calabaza. 4) Laminadas.- Inclusiones con forma de lámina. 5) Densas.- Cuerpos densos redondos, de tamaño variable. Ejemplo: Virus del Mosaico del Pepino. 6) Paracristalinas.- Inclusiones cristalinas en forma de aguja. Ejemplo: Virus del Mosaico del Tabaco. 1.3.4. FACTORES QUE INTERVIENEN EN LA VARIACIÓN DE SÍNTOMAS La manifestación de los síntomas en las plantas se ve influenciada por algunos factores dentro de los que destacan: a) Ambiente.- Dentro de las condiciones ambientales el factor más importante es la temperatura ya que influye directamente en la variación de la sintomatología de los xiv
  15. 15. virus, por ejemplo, el Virus del Mosaico del Tabaco cuando es inoculado a plantas de Nicotina glutinosa y la temperatura es de 18-20 °C da lesiones locales muy pequeñas; si la temperatura alcanza los 25 °C las lesiones son más grandes y si se inocula y se somete a temperaturas de 35 °C se presenta un síntoma sistémico. Otros factores ambientales que influyen son la luz (cuando el VMT se inocula y se mantiene al hospedante en obscuridad continua no manifiesta síntomas), el mismo virus cuando es inoculado a pepino y existe excesos de nitrógeno el virus se torna muy agresivo. b) Virus.- En este caso depende del tipo de virus, la virulencia y la capacidad de dar origen a nuevas razas fisiológicas. c) Edad de la planta.- En forma general se puede mencionar que las plantas entre más jóvenes son mayormente susceptibles al ataque de los virus. d) Hospedante.- Este factor está muy relacionado con la susceptibilidad y/o resistencia del hospedante al patógeno; es decir entre más susceptible mayor grado de virulencia. 1.4. FACTORES CAUSANTES DE SÍNTOMAS SEMEJANTES A LOS INDUCIDOS POR VIRUS • Anormalidades genéticas • Deficiencias nutrimentales • Daño por herbicidas • Daño por insectos o ácaros • Daño por pesticidas • Otros fitopatógenos Los síntomas causados por estos últimos agentes no son de naturaleza infecciosa; es decir, que no se transmiten mediante injerto. Además, al paso de los días la recuperación puede ser común. xv
  16. 16. Agentes infecciosos también pueden causar síntomas similares a los ya descritos: por ejemplo el tizón tardío llega a ser confundido con el Virus de la Marchites Manchada, por productores y técnicos inexpertos. El uso de los síntomas para la diagnosis de campo es una guía valiosa pero imprecisa, sobre todo para los técnicos no familiarizados con las enfermedades comunes en un cultivo en una región determinada. Aún el especialista debe ser humilde antes de poder afirmar que un virus particular está involucrado en determinada enfermedad. Lo anterior no significa que cada vez que detectemos síntomas presuntamente virales, se tendrá que acudir a un experto. Dependiendo de la experiencia del investigador y de los antecedentes del problema, los diagnósticos de campo pueden ser relativamente precisos. El patrón de dispersión de la enfermedad puede dar indicios del virus o grupo de virus que se trate. Por ejemplo en el caso de Geminivirus en tomate, los síntomas más notables son de enchinamiento y reducción en el crecimiento; su presencia en la región está relacionada con las poblaciones de Mosca Blanca y generalmente al inicio de las epidemias se aprecia un gradiente en dónde las plantas de las orillas son las primeras en ser infectadas, especialmente si hay maleza cercana en los drenes. En base a lo anterior en sentido estricto, solo se puede afirmar que tenemos problemas de virosis, cuyos síntomas coinciden con los descritos para Geminivirus, pero en ningún momento podemos decir con precisión de que Geminivirus se trata; tampoco podemos negar que posiblemente haya plantas infectadas por otros virus. El apoyo del laboratorio puede ser indispensable para determinar con certeza a los patógenos involucrados, sobre todo cuando se presentan síntomas que antes no se habían observado en el cultivo en la región. xvi
  17. 17. UNIDAD II. FORMA, COMPOSICIÓN QUÍMICA Y TAXONOMÍA DE LOS VIRUS QUE AFECTAN PLANTAS 2.1. PRINCIPALES FORMAS DE VIRUS DE PLANTAS xvii
  18. 18. Con los descubrimientos de Takahashy y Rawlins (1932), cuando por el fenómeno de refringencia mencionaron que las partículas del Virus del Mosaico del Tabaco (VMT) medían alrededor de 10:1 (largo y ancho) y con la primera microfotografía tomada al microscopio electrónico por Kausche, Pfankuch y Ruska (1939) en donde mostraron que este virus presentaba forma de varilla rígida; se iniciaron las investigaciones para determinar la forma, tamaño y composición química de los virus de plantas. Actualmente se tienen determinadas varias formas de virus fitopatógenos dentro de las cuales tenemos: a) Varillas rígidas, como el Virus del Mosaico del Tabaco y el Virus Cascabeleo (Rattle) del Tabaco. b) Varilla (filiforme) flexible, como el Virus X de la Papa, Virus de la Tristeza de los Cítricos, Virus de la Mancha Anular de la Papaya, Virus del Mosaico de la Sandía y Virus Jaspeado del Tabaco. c) Baciliforme, como el Virus del Mosaico de la Alfalfa. d) Baliforme, como el Virus del Mosaico del Maíz. e) Poliédricos, como el Virus del Mosaico de la Calabaza, Mosaico del Pepino, etc. f) Gemelos (Geminivirus), como el Virus del Mosaico Dorado del Frijol, Virus del Mosaico Estriado del Maíz y Virus del Chino Amarillo del Tomate. 2.2. TAMAÑO DE LOS VIRUS Las dimensiones de los virus que afectan plantas son muy variables y su tamaño se mide en nanómetros o milimicras. + Un nanómetro (=1 milimicra) = 0.000 000 001 m; o 0.000 001 mm; o 0.001 micras xviii
  19. 19. El tamaño de los virus isométricos varía de 17-70 nanómetros (nm) de diámetro; los baciliformes alcanzan 300 nm de longitud x 95 nm de ancho; los de varilla rígida miden 114-215 nm de largos por23 nm de ancho; las dimensiones de los virus de varilla flexible alcanzan hasta 2000 nm de longitud por 10 nm de ancho. Así, por ejemplo, el grupo del Virus del Mosaico del Tabaco (varilla rígida- Tobamovirus) mide 18 por 300-315 milimicras de longitud; el grupo del Virus Rattle del Tabaco (varilla rígida- Tobravirus) alcanza una longitud de 20-22 por 130-180 milimicras. El grupo del Virus X de la Papa (Potexvirus) que es una varilla flexible, mide de 13 por 480-580 nm., mientras que el Virus Tristeza de los Cítricos (Flexible- Closterovirus) alcanza hasta 2000 nm., de longitud, siendo el virus más grande de los que atacan plantas. Los virus que poseen forma bacilar (Mosaico de la Alfalfa) y bala (Marchitez Manchada del Tomate) miden alrededor de 66-227 nm., de longitud y los poliédricos miden de 18-90 nm , siendo el más pequeño el virus satélite de la necrosis del tabaco que mide 18 nm de largo (Smith ,1977; Lozoya, 1987 y Gibs y Harrison, 1976). 2.3. ESTRUCTURA QUÍMICA DE LOS VIRUS DE PLANTAS Con los descubrimientos de Stanley (1935), cuando aisló las partículas del Virus del Mosaico del Tabaco y mencionó que los virus estaban constituidos de proteína y el de Bawden y Pirie (1936), cuando describieron la naturaleza nucleoproteica de los virus se llegó a la conclusión que los virus de plantas básicamente estaban constituidos de ácido nucleico (ARN o ADN) más una cubierta de proteína. Las partículas de los virus que atacan plantas contienen diferentes cantidades de AN, variando de 15-45 % en virus isométricos, de 5 a 42 % en virus helicoidales (varilla, bala y baciliforme) y los virus que contienen lípidos en su constitución su porciento varía de 1 -20 %. La siguiente tabla nos muestra algunos ejemplos del contenido de AN y proteína de algunos virus de plantas: VIRUS % DE AN % DE PROTEÍNA (Acido Nucleico) Virus Mosaico del Tabaco 5 95 xix
  20. 20. Virus X de la Papa 6 94 Virus Mosaico de la Alfalfa 20 80 Virus Mosaico de la Calabaza 35 65 Virus Mancha Anular del Tabaco 22 58 Viroides 100 0 Las partículas de la mayoría de los virus que atacan plantas contienen una cadena simple (sencilla) de ARN, pero el Virus del Tumor y Heridas del Trébol y el Virus del Enanismo del Arroz contienen doble cadena de ARN; el Virus del Mosaico de la Coliflor posee doble cadena pero de ADN y el Virus del Mosaico Estriado del Maíz contiene una cadena simple de ADN en su composición. Otros virus además de poseer proteína contienen lípidos como es el caso del Virus de la Marchitez Manchada del Tomate, Virus del Mosaico del Maíz y el Virus del Enanismo Amarillo de la Papa. 2.4. COMPOSICIÓN Y FUNCIONES DEL ÁCIDO NUCLEICO VIRAL El AN viral está formado por la unión de nucleótidos; cada nucleótido del AN viral está formado por dos purinas (adenina y guanina) y tres pirimidinas (citosina, uracilo y timina), los cuales para poder unirse requieren de un glúcido (azúcar) y un puente de fosfato. Cada nucleótido del ARN viral está conformado por adenina, guanina, citosina y uracilo y el del ADN por adenina, guanina, citosina y timina; por lo tanto, las diferencias básicas entre los dos ácidos es que el ARN tiene la base de uracilo (ribosa) y el ADN tiene la base de timina (desoxiribosa) y el ARN tiene un oxidrilo más que el ADN. Como ya se mencionó, el ácido nucleico es el resultado de la unión lineal de una gran cantidad de nucleótidos y la secuencia de éstos determina la estructura del citrón y cada citrón se le llama codons y está compuesto por tres nucleótidos; de tal forma que una cadena de ARN (como el caso del VMT) posee 6500 nucleótidos distribuidas de la siguiente manera: 1900 moléculas de adenina, 1680 de guanina, 1180 de citosina y 1740 de uracilo para un total de 6500 nucleótidos. xx
  21. 21. El AN viral tiene como función específica el de dar arreglo a las subunidades de la proteína del virus y la más importante, que es causar infección en la planta. Los experimentos de Gierer y Schramm (1956), y de Conrad y Williams (1957) demostraron que el AN del Virus del Mosaico del Tabaco es suficiente para causar infección en plantas, por lo que se ha concluido que es el ácido el que contiene la información genética del virus. La evidencia de que el AN viral es el encargado de la infección en plantas se basa en las siguientes evidencias: A) Al Hidrolizar la enzima ribonucleasa y desoxiribonucleasa se pierde la infectividad; B) El antisuero que reacciona con la proteína no destruye su infectividad y C) Al inocular por separado el AN viral y la proteína; solo se observaron síntomas donde se inoculó el ácido. En algunos virus el AN viral está seccionado o divido en partes por lo que ha estos virus se les conoce como virus multiparticulados; por ejemplo, el Virus del Mosaico de la Alfalfa tiene divido su AN en cuatro partículas y para poder causar infección requiere que estén presentes las cuatro partículas; a cada una de las partículas virales que están seccionadas se les conoce con el nombre de Virión. Otro virus que tiene seccionado su AN es el Virus del Mosaico del Chícharo de Vaca y la que codifica la infección es la partícula del medio; el Virus Cascabeleo del Tabaco está dividido en dos partículas y si sólo se inocula una se codifica la información para la reproducción de síntomas y no para la formación de proteína por lo que se deben de inocular ambas. 2.5. COMPOSICIÓN Y FUNCIONES DE LA PROTEÍNA VIRAL La estructura de los virus es la proteína y es la que forma el cuerpo del virus. La proteína viral está formada por subunidades de proteína llamadas capsómeros, los cuales al unirse y arreglarse conforman lo que se conoce con el nombre de cápside o proteína viral; tan pronto como un AN viroso se produce, induce a las células del huésped a producir las moléculas de proteína que deberán formar la cubierta proteica de dicho virus. La síntesis de proteína en las células depende de la xxi
  22. 22. presencia de aminoácidos, la cooperación de los ribosomas y de los ARN de transferencia y los ARN mensajeros. El ARN mensajero que se produce refleja parte de la clave que determina la clase de proteína que deberá producirse por codificación y la secuencia en la cual los aminoácidos deberán de arreglarse y la proteína formada es para uso exclusivo del virus que formó dicha cubierta. La proteína viral está compuesta de alrededor de 20 aminoácidos diferentes, conteniendo en mayores proporciones la serina y trionina; el tipo y arreglo de estos aminoácidos es regido por el AN viral. Algunos virus de plantas tienen composición compleja, ya que además de poseer aminoácidos la proteína contiene algunas substancias polipépticas, por ejemplo, el Virus del Enanismo Amarillo de la Papa contiene cuatro diferentes tipos de polipéptidos y los virus que contienen lípidos se les ha encontrado glucósidos. Las funciones de la proteína viral son básicamente el dar forma al virus, proteger al AN de factores externos y juega un papel muy importante en la transmisión de virus por pulgones. 2.6. REPLICACIÓN DE VIRUS La infección de una planta por un virus esta en relación directa con la síntesis del mismo, puesto que la infección no ocurrirá a menos de que el virus se multiplique en el tejido del huésped susceptible. Los virus y viroides están constituidos de moléculas reguladoras; es decir, el ácido nucleico viral ordena a la planta que realice funciones para su beneficio, y dentro de las funciones básicas ordenadas esta la patogenicidad y la replicación de éste. El proceso de replicación de los virus es un tanto complejo pero en forma general lo podemos dividir en las siguientes etapas: a) Adsorción y penetración; b) Liberación del AN; c) Replicación del AN; d) Síntesis temprana de proteína; e) Síntesis tardía de proteína y f) Ensamblaje. Las partículas virales no tienen capacidad de penetrar a las células autónomamente (por sí solas) o por aberturas naturales como lo hacen los hongos y las bacterias. xxii
  23. 23. Los virus que afectan a los vegetales entran a las células a través de heridas hechas mecánicamente, por vectores o por la fecundación de un óvulo por el grano del polen infectado. Una vez dentro el siguiente contacto del virus es con el citoplasma de la célula en donde existen ciertos sitios de infección que son saturados con partículas virales; se da una asociación electrostática entre el virus y el citoplasma y de esta manera queda inmerso en dicho citoplasma. Puesto que la parte activa del virus, que es el ácido nucleico está cubierto de proteína, deberá liberarse de la vaina proteica para establecer la infección. La liberación del AN tiene lugar durante las primeras horas siguientes a la inoculación, ocurriendo los pasos siguientes en forma ordenada, y probablemente esto se concluya más bien por la célula huésped que por el virus, puesto que ningún virus de planta contiene o produce por si mismo alguna enzima. Los fragmentos de la cubierta proteica degradada permanecen en la célula y son utilizados en los procesos sintéticos de la misma. Una vez que el AN se libera de la proteína, este actúa como ARN mensajero y se asocia con los ribosomas celulares (esta fase se conoce como fase de eclipse o polisoma) para sintetizar una proteína funcional conocida con el nombre de enzima replicasa la cual tiene un peso aproximado de 130,000 a 165,000 daltons; la enzima replicasa se asocia con el virus y forman los moldes de AN los cuales son negativos debido a que sus bases de adenina, guanina, citosina y uracilo están cambiadas y son leídas como una imagen del virus vista a un espejo, la cual a medida que se va formando, se conecta temporalmente a la cadena virosa progenitora, a los ribosomas y a la enzima replicasa para convertirse en AN positivos y por tanto infectivos. La enzima replicasa también tiene como función formar proteína de encapsulamiento o proteína temprana. Una vez que los ARN son infectivos pueden tomar dos caminos: a) volver a entrar a los ribosomas celulares (aparentemente estos ARN son de bajo peso molecular) y formar otra vez moldes y seguir el mismo proceso anterior y formar otra vez proteína (la cual se llamará síntesis tardía de proteína) o b) darse el ensamblaje con la proteína formada tempranamente, estos es, el ARN organiza las subunidades de proteína alrededor de él y al unirse forman la partícula completa. xxiii
  24. 24. El ó los sitios de la célula en los cuales el ARN del virus y de la proteína se sintetizan y los sitios en los cuales estos componentes se unen para producir los viriones todavía no se ha determinado con absoluta certeza pero los estudios efectuados con el VMT sugieren que el ARN viroso, después que está libre de su cubierta proteica se mueve a los núcleos o posiblemente a los nucléolos, en donde se duplica. El primer virión intacto aparece en las células de las plantas 10 horas después de la inoculación. Las partículas virosas pueden existir solas o en grupos formando las inclusiones virales. 2.7. TRANSLOCACIÓN DE LOS VIRUS DE PLANTAS Después de la introducción de un virus en la célula, el virus aparentemente se mueve, antes y después de desprenderse de su cubierta proteica, hacia los sitios de síntesis y ensamblaje de sus componentes. El movimiento probablemente es pasivo y depende de la corriente protoplasmática de la célula, pero otros mecanismos también pueden estar implicados. Para que un virus realice la infección en una planta el virus deberá moverse de una célula a otra, y multiplicarse en la mayoría de ellas o al menos en las células en las que se mueve. Se cree que los virus en sus movimientos de célula a célula, siguen un camino a través de las conexiones plasmodesmatales de las células adyacentes y se cree también que el retículo endoplásmico puede conectar una célula a otra. Sin embargo, es posible que los virus no se muevan a través de la célula del parénquima a menos que los virus infecten las células y se multipliquen en ellas, esto ocasiona una invasión continua y directa de célula a célula. Se considera que el radio de dispersión de los virus de célula a célula varía de acuerdo con la clase y edad de las células de las plantas infectadas y es mayor en las células alargadas y jóvenes que en las viejas y redondas. Otras formas de movimiento de los virus en plantas ocurren a través de los tejidos vasculares (floema y xilema). xxiv
  25. 25. El transporte de los virus por el floema ocurre aparentemente, a través de los tubos cribosos, pudiéndose mover hasta 15 cm en solo seis minutos. En forma general se puede indicar que los virus que ocasionan síntomas de lesiones locales o de hipersensibilidad su movimiento lo realizan a través de las conexiones plasmodesmales que existen entre célula y célula y los virus que provocan síntomas sistémicos lo realizan por medio de los tejidos vasculares. 2.8. NOMENCLATURA A través del tiempo se han seguido varios sistemas de nomenclatura de virus incluyendo el uso de sistemas binomiales, el cual se encuentra solamente en la literatura antigua. Actualmente el nombre particular de cada virus se adopta en base a los síntomas los más característicos de la enfermedad (a juicio del descubridor del patógeno), en hospedante en el que se observó por vez primera al virus. Así por ejemplo, el Virus Mosaico del Pepino lleva este nombre porque fue descubierto en pepino y uno de los síntomas principales es el mosaico. En virología es común el uso de siglas para designar de manera abreviada a los virus, lo cual resulta práctico. Así se utiliza VMP para el Virus Mosaico del Pepino, VMT para el Virus Mosaico del Tabaco o VMAT para el Virus Mancha Anular del Tabaco. Es necesario aclarar que estas abreviaturas se usan de manera uniforme por la mayoría de los investigadores, con el fin de facilitar la comunicación oral o escrita. Es pertinente señalar que en el idioma inglés también se usan abreviaturas, aunque estas no sean las mismas que en español; en lugar del VMP se usa CMV (Cucumber Mosaic Virus) y en lugar del VMT la abreviatura es TMV (Tobaco Mosaic Virus). En esta época de globalización es muy común el uso de las siglas en inglés para referirse a los virus y algunos investigadores latinos hasta se olvidaron de las siglas en español, para referirse a tal o cual virus; por ejemplo todo mundo habla de TSWV (Tomato Spotted Wilt Virus), en lugar de VMMT para referirse al Virus de la Marchitez Manchada del Tomate. Este fenómeno no es xxv
  26. 26. deseable desde el punto de vista idiomático o nacionalista, pero que a veces facilita la comunicación. Resulta evidente que el sistema de nomenclatura en uso resulta inapropiado, ya que los síntomas pueden variar incluso en el mismo hospedante y con el mismo virus. Los síntomas también pueden ser diferentes de acuerdo a la variante del virus y por el efecto del ambiente. Sin embargo el uso del sistema binomial, tan útil en hongos y bacterias, no es aceptado por los virólogos, entre otras razones porque no se acepta que los virus son seres vivos, en sentido estricto. 2.9. POSICIÓN TAXONÓMICA DE LOS VIRUS QUE AFECTAN PLANTAS La mayoría de los virus que afectan plantas fueron primeramente reconocidos por los daños que estos causaban en ellas, y usualmente fueron nombradas usando el nombre de la enfermedad y del hospedante que afectaban. Por ejemplo, un virus que causaba mosaico y se le encontraba afectando plantas de tabaco se le deno- minaba Virus Mosaico del Tabaco. En 1939 se reportaron los primeros acuerdos del Comité para la Nomenclatura de virus designado por la Sociedad Norteamericana de Fitopatología, donde se seleccionaron cinco características importantes de los virus para su clasificación: 1) Síntomas; 2) alteraciones citológicas y morfológicas; 3) transmisión por insectos; 4) relaciones serológicas y 5) propiedades físicas y químicas de los virus. Considerando que se desconocía la naturaleza del agente causal, se propusieron tres alternativas de nomenclatura: a) Si el virus era un organismo se le haría un binomio, por ejemplo, el Virus Mosaico del Tabaco se llamaría Paracrystalis altathermus; b) si resultaban ser compuestos químicos se debería agregar el sufijo "vir". Así nuestro ejemplo sería, P. altathermovir y c) no tomar en cuenta la naturaleza del agente y en este caso se llamaría al VMT Nicotiana virus altahermus. Como es costumbre, tan pronto como se publicó esta propuesta surgieron críticos, adeptos y modificadores. También en 1939 Holmes propone la creación de reino Vira, con dos divisiones, Phytophagi y Zoophagi, para virus de plantas y animales respectivamente, utilizando xxvi
  27. 27. el sistema binomial de nomenclatura. En 1940, Fawcett sugiere un sistema que combina a los anteriores, iniciando una década de propuestas de diversos autores que no fueron del todo aceptadas. En 1950 se inicia una nueva era en la taxonomía de virus al crearse un subcomité ex-profeso durante el Congreso Internacional de Microbiología. Este grupo admite que en virus no se puede usar la misma nomenclatura científica tradicionalmente empleada para bacterias u otros microorganismos. Recomienda basarse en aspectos morfológicos, físicos y químicos de las partículas, y en composición antigénica, en vez de amplitud de hospedantes y síntomas. A partir de entonces surgen propuestas que incluyen la naturaleza del ácido nucleico, la forma y tamaño del nucleocápsido, número de capsómeros, etc., con Gibbs et al., en 1966 nace el criptograma, que también se ha perfeccionado con aportaciones posteriores. La criptograma que es usada actualmente para nombrar virus y que es aceptada por el Comité Internacional de Nomenclatura de virus es la siguiente (VMT): R/1:2/5:E/E:S/0 En el criptograma anterior el significado de cada componente es: R/1= La R significa que el virus está compuesto por ARM; el número 1 indica que la cadena del ARN es de una sola banda. 2/5= El 2 representa el peso molecular del ácido nucleico, expresado en millones. El 5 representa la proporción (%) de ARN que posee la partícula. E/E= Se representa aquí la forma de la partícula que recubre al ARN. E= Virus alargados con lados paralelos pero no redondeados (varilla rígida y varilla flexible). xxvii
  28. 28. S= Virus esféricos (poliédricos). U= Virus alargados con lados redondeados (baliforme y baciliforme). X= Virus de naturaleza compleja S/O= Describe el tipo de hospedante (en este caso plantas de semilla o angiosperma). El 0 (cero) indica el tipo de vector que en este caso no existe). S/0= Clase de hospedante / tipo de vector 1) HOSPEDANTE A= Parásito de algas B= Parásito de bacterias F= Parásito de hongos I= Parásito de invertebrados P= Parásito de Pteridofitas S= Parásito de plantas M= Micoplasmas V= Vertebrados 2) VECTOR Ac= Ácaros y arañas Al= Aleyrodidae (moscas blancas) Ap= Aphididae (pulgones) Au= Auchenorrhyncha (chicharritas) Cc= Coccidae (escamas) Cl= Coleóptera (escarabajos) Di= Díptera (moscas y mosquitos) Fu= Hongos Gy= Gymnocerata (tingidae) xxviii
  29. 29. Ne= Nematodos Ps= Psyllidae Si= Siphonaptera Th= Trips 0= Sin vector Ve= Vector ninguno de los mencionados 2.9.1. GRUPOS DE IMPORTANCIA DE VIRUS FITOPATÓGENOS A continuación se mencionan 10 de los 28 grupos de virus aceptados actualmente con algunas de sus características más sobresalientes: 1) Tobravirus = R/1:2.3/5 + 0.6-1.3/5:E/E:S/Ne El miembro tipo de este grupo es el Virus Rattle del Tabaco o Cascabeleo del Tabaco y los miembros se caracterizan por poseer forma de varilla rígida con una longitud de 180-210 nm y 45-115 nm de ancho, son transmitidos por nematodos de la familia Trichodoridae; su punto de inactivación térmica (PIT) es de 70 - 80 °C, su punto final de dilución (PFD) de 10-6 y la longevidad in vitro de seis semanas. Muchas razas de este grupo de virus se transmiten muy fácilmente mecánicamente y tienen un amplio rango de hospedantes. Tiene un solo miembro que es el Virus del Obscurecimiento Temprano del Chícharo. 2) Tobamovirus = R/1:2/5:E/E:S/O El miembro tipo del grupo es el Virus Mosaico del Tabaco, poseen forma de varilla rígida y la partícula mide alrededor de 300 nm de longitud, se transmite muy fácil mecánicamente pero no por insectos, el PIT es de 90 °C, su PFD es mayor a 10-6 y la longevidad in vitro es por varios años. Otros virus de este grupo son: el Virus Mosaico del Tomate y Virus de la Mancha Anular del Odontoglussum. xxix
  30. 30. 3) Potexvirus = R/1: 3.5/5:E/E:S/Ap Este grupo incluye al Virus X de la Papa como su miembro tipo y las características más sobresalientes es que sus partículas son de forma de varilla flexible y miden de 480- 580 nm de longitud, se transmiten mecánicamente, normalmente no se transmiten por vectores; sin embargo, para PVX se reportan chapulines y al hongo Synchytrium endobioticum, ocasionan generalmente síntomas de mosaico y su PIT fluctúa entre 60-80 °C, su PFD es de 10-5 a 10-6 y la longevidad in vitro es de meses. Algunos miembros de este grupo son: Virus Mosaico de la Papaya y Virus Mosaico de la Yuca. 4) Potyvirus = R/1:3.5/5:E/E:S/Ap El nombre de este grupo se deriva de su miembro tipo, Virus Y de la Papa (PYV), el cual ataca a papa y a otras solanáceas. Estos virus tienen partículas flexibles que miden entre 720-800 nm de longitud; pueden ser transmitidos experimentalmente por medio de savia (mecánica), y en el campo sus principales vectores son los áfidos, los cuales lo transmiten de manera no persistente; el PIT es de 50-60 °C, su PFD está entre 10-2 - 10-3 y la longevidad in vitro es de 48-72 horas. Algunos miembros de este grupo son el Virus Mosaico Común del Frijol, Mosaico Amarillo del Frijol, Virus Mancha Anular de la Papaya, Mosaico de la Soya, Virus Mosaico de la Sandía, Mosaico de la Caña de Azúcar, etc. 5) Cucumovirus = R/1:1.3/19+1.1/19 + 0.8/19 S/S:S/Ap El Virus Mosaico del Pepino (CMV) es el miembro tipo de este grupo; aunque los virus que pertenecen a este grupo tienen características en común, pueden diferir con respecto a la especificidad del hospedante y a la reacción serológica. Estos virus poseen partículas poliédricas que miden alrededor de 30 nm de longitud; el PIT es de 60-70 °C, el PFD es de 10-4 y fuera del hospedante dura alrededor de 3-6 días; xxx
  31. 31. se transmiten muy fácilmente mecánicamente y los síntomas generalmente causan mosaicos y algunas veces necrosis. Otros virus importantes de este grupo son el Mosaico Amarillo del Pepino, Aspermy del Tomate y Virus del Enanismo del Cacahuate. 6) Nepovirus = R/1:2.4/43+1.4-2.1/30+2.8/46:S/S:S/C,Ne En este grupo se encuentran los virus cuyos vectores son principalmente nematodos de los géneros Xiphinema y Longidorus, sus partículas son poliédricas y miden 30 nm de diámetro. Son transmitidos mecánicamente, por semilla y polen, y los síntomas principales son manchas anulares, moteados y necrosis; su PIT es de 55-70 °C, el PFD de 10-4 y la longevidad in vitro es de una a tres semanas. El miembro tipo de este grupo es el Virus Mancha Anular del Tabaco y también se encuentra el Virus Mancha Anular del Tomate, el Enrollamiento de la Hoja de Papa, Hoja de Abanico de la Vid, etc. 7) Sobemovirus = R/1:1.4/21:S/S:S/Ve,Cl El miembro tipo de este grupo es el Virus Mosaico Sureño del Frijol (SBMV) y los miembros se caracterizan por poseer forma poliédrica con partículas que varían de 28-30 nm de diámetro, se transmiten por jugos de savia, semilla y en el campo generalmente son diseminados por coleópteros; su PIT es de 90-95 °C, su PFD es de 10-5 y fuera del hospedante dura entre 20 y 165 días; se relaciona con el Virus Estriado Temporal de la Alfalfa. 8) Necrovirus = R/1:1.5/19:S/S:S/Fu El miembro tipo de este grupo es el Virus de la Necrosis del Tabaco, el cual normalmente causa necrosis en las raíces de sus hospedantes; las partículas son poliédricas de 26 nm de diámetro, su PIT es de 65-95 °C, se desconoce su punto final de dilución y la longevidad in vitro es de más de 30 días, en campo es diseminado por las zoosporas de Olpidium brassicae. xxxi
  32. 32. 9) Tospovirus= R/1:7.4/2:S/S:S/Th El único miembro de este grupo es el Virus Marchitez Manchada del Tomate y se caracteriza porque sus partículas son isométricas de 70-90 nm de diámetro; su PIT es de 40-46 °C, su PFD es de 10-2-3 y la longevidad in vitro es muy corta (2-5 horas). Se transmite mecánicamente y por Trips y causa mosaico y necrosis en sus hospedantes atacados. 10) Grupo del Mosaico de la Alfalfa = R/1:1.1/16+0.8/16:U/U:S/Ap El miembro único de este grupo es el Virus Mosaico de la Alfalfa el cual posee cuatro partículas baciliformes que miden de 18-58 nm de diámetro, se transmite muy fácilmente mecánicamente, por pulgones y los síntomas que normalmente causa a sus hospedantes son mosaicos y manchas anulares. Su PIT es de 60-70 °C, su PFD es de 10-5 y la longevidad in vitro es de 2-4 días; se le encuentra muy relacionado con el grupo de los CUCUMOVIRUS. Cuadro. Algunos ejemplos de virus importantes en México. Grupo Virus Luteovirus Enrollamiento de la Hoja de la Papa Nepovirus Mancha Anular del Tabaco Sobemovirus Mosaico Sureño del Frijol Mosaico de la alfalfa Mosaico de la Alfalfa Cucumovirus Mosaico del Pepino Tobamovirus Mosaico del Tabaco, Mosaico del Tomate Potexvirus “X” de la papa Potyvirus “Y” de la papa, Mosaico Común del Frijol, Mancha Anular de la Papaya, Mosaico de la Sandía, Jaspeado del Tabaco Closterovirus Tristeza de los Cítricos Tospovirus Marchitez Manchada del Tomate Geminivirus Chino del Tomate, Mosaico Dorado del Fríjol, Enrollamiento de la Hoja de la Calabaza. xxxii
  33. 33. UNIDAD III. FORMAS DE TRANSMISIÓN E IDENTIFICACIÓN DE LOS VIRUS DE PLANTAS 3.1. CONCEPTO DE TRANSMISIÓN DE VIRUS La propiedad de transmitirse de una planta enferma a una sana es una característica fundamental de los virus al igual que otros agentes biológicos que causan enfermedades. Los virus a diferencia de hongos y bacterias no tienen la capacidad de diseminarse por el viento o agua porque fuera de las células se inactivan con rapidez, además, no pueden penetrar a la planta por sus propios medios y requieren que se les deposite directamente dentro de una célula. xxxiii
  34. 34. Dada su condición como parásitos obligados los virus no se pueden desarrollar en materia orgánica muerta; requieren del albergue en tejido vivo, ya sea en estado de reposo o de multiplicación activa. El Virus Mosaico del Tabaco (VMT) constituye una de las pocas excepciones, ya que puede sobrevivir en restos de tejidos infectados que quedan en el campo después de la cosecha, de tal manera que estos materiales sirven como fuente de inóculo primario en el siguiente ciclo. Los virus requieren pasar constantemente de un hospedante infectado a otro sano, para poder sobrevivir en cualquier región. Los virus no penetran a las plantas de manera directa, ni salen de estas por sus propios medios. La dispersión no es activa; es pasiva y se da mediante los siguientes mecanismos: 3.2. TIPOS DE TRANSMISIÓN DE VIRUS Las formas en que los virus son transmitidos de plantas enfermas a plantas sanas son a) Propagación vegetativa; b) mecánicamente; c) semilla; d) polen y e) biotransmisores. 3.2.1. TRANSMISIÓN POR PROPAGACIÓN VEGETATIVA Siempre que las plantas se propaguen vegetativamente mediante injerto, esquejes, tubérculos, bulbos o rizomas, cualquier tipo de virus que se encuentre en la planta madre, a partir de la cual dichos órganos de propagación se obtienen casi siempre serán transmitidos a la progenie. Tomando en cuenta que casi todas las frutas y la mayoría de los árboles de ornato, y los cultivos como papa se propagan mediante estos medios, este tipo de transmisión adquiere importancia significativa. 3.2.2. TRANSMISIÓN MECÁNICA Todos los virus pueden ser transmitidos a algunas plantas mediante inoculación mecánica, pero no todas pueden infectar y establecer infección. En teoría las partí- xxxiv
  35. 35. culas virales pueden ser introducidas a células vivas por este método, pero para que el virus llegue a ser funcional depende de una gran variedad de condiciones como: el grado de susceptibilidad de la célula receptora, funcionamiento del genoma viral dentro de la célula, condiciones necesarias para la maduración del virus, factores ambientales, etc. La TRANSMISIÓN MECÁNICA es definida como el proceso por el cual las partículas de virus son manualmente introducidas a una planta por heridas mecánicas, para facilitar la iniciación de la infección en células potencialmente infectables. La transmisión mecánica puede ocurrir de manera natural (campo) y de forma artificial (laboratorio); en campo, dicha transmisión puede efectuarse entre plantas bastantes próximas al rosarse con el viento, cuando las plantas son dañadas por el hombre en las labores de cultivo, por medio de fumadores (como el caso del VMT), etc. La transmisión mecánica artificial es de gran importancia a nivel experimental y se puede realizar de diferentes formas: frotis; injerto e inyecciones. 3.2.2.1. TÉCNICA DE FROTIS Es la técnica más usada artificialmente ya que presenta varias ventajas entre las que destacan de que es muy rápida y segura, facilita el estudio de los virus en ausencia de vectores, facilita el estudio de los virus "in vitro", se pueden separar virus mediante inoculaciones mecánicas por frotis y nos da pauta para realizar estudios sobre el número de lesiones locales que se obtienen con inoculaciones mecánicas (Holmes, 1929; demostró que el número de lesiones locales era proporcional a la concentración del inóculo en ciertas especies de tabaco inoculadas con VMT). La técnica de transmisión por este medio es muy simple y la metodología básica es la siguiente: xxxv
  36. 36. a) Tomar aproximadamente dos centímetros cuadrados (preferentemente hojas), con los síntomas bien marcados. b) Macerar en un mortero el tejido de la planta enferma y agregar solución buffer con un PH de 7.0 a 8.5. c) Adicionar carborundum de 400 o 600 mallas por pulgada cuadrada sobre las hojas que se van a inocular. d) Con un cotonete impregnado con savia infectiva se talla suavemente donde se aplicó el carborundum y lavar con agua corriente para eliminar el exceso de este material. e) Colocar la planta inoculada en un lugar fresco y fuera del alcance de los insectos vectores para evitar traslape de resultados. Otros detalles de la transmisión mecánica. 1) Preferible inocular hojas cotiledonales 2) En plantas grandes inocular las hojas medias a jóvenes 3) Gramíneas deben inocularse por el envés de las hojas 4) Cucurbitáceas inocularse preferentemente en hojas cotiledonales. 5) Macerar e inocular preferentemente a bajas temperaturas 6) Lavar la hoja inoculada inmediatamente después de la inoculación. 7) Las lesiones locales tienen menor concentración que la superficie verde. 8) Inocular de preferencia por la mañana o por la tarde. 3.2.2.1.1. FACTORES QUE INTERVIENEN EN UNA TRANSMISIÓN POR FROTIS La eficiencia de la transmisión por frotis depende de varios factores como: FUENTE DE INOCULO, PREPARACIÓN DEL INOCULO, APLICACION DEL INOCULO, CONSTITUYENTES DEL INOCULO Y FACTORES AMBIENTALES. FUENTE DE INÓCULO.- El inóculo puede ser obtenido de varias partes de la planta infectada, pero si las hojas muestran síntomas se deben de probar primero, ya que xxxvi
  37. 37. los tejidos leñosos usualmente son más pobres en partículas virales que las hojas. En hojas lo más conveniente es usar la tiernas donde los síntomas están más acentuados, en hojas viejas, la concentración de virus es menor. PREPARACIÓN DEL INÓCULO.- Los tejidos infectados pueden contener numerosas partículas de virus infecciosos, pero la infectividad dependerá de varias condiciones y técnicas que pueden ser empleadas en la fase de la preparación del inóculo, que es por tanto, un factor muy importante que puede influenciar la efectividad del inóculo. El inóculo es preparado por extracto de virus de tejido enfermo, por unos momentos el virus está expuesto al medio ambiente el cual puede reducir su infectividad. Varias sustancias tales como metabolitos de la hospedera y escombros celulares son liberados simultáneamente con el virus; algunos de estos componentes celulares producen substancias inhibitorias por lo que es necesario agregar un solvente apropiado como antiinhibidor. Generalmente, al momento de la preparación del inóculo se utiliza una solución de fosfatos monobásicos y dibásico de potasio (solución buffer) con PH 7.0-8.5 ya que esta solución ayuda a mantener la configuración del virus y aumenta la eficiencia de la infección ya que diluyen inhibidores. APLICACIÓN DEL INÓCULO.- En este caso es muy recomendable que la planta que se va a inocular sea previamente herida con abrasivos, pudiéndose usarse carborundum de 400 ó 600 mallas por pulgada cuadrada, celite, arena, carbón molido, caolín, etc., es importante evitar los excesos de abrasivo ya que causan daños muy fuertes a las plantas que pudieran confundirse a los causados por virus, también es necesario tallar muy suavemente la parte inoculada pudiéndose hacer con los dedos, cotonetes (mas usado), manta de cielo, espátulas de vidrio, etc., y posteriormente lavarse con agua corriente para eliminar los excesos de abrasivo. CONSTITUYENTES DEL INÓCULO.- Como se mencionó anteriormente, varios componentes (INHIBIDORES) que resultan al momento de la maceración, afectan la infectividad de los virus. Los inhibidores son de distinta naturaleza pudiendo xxxvii
  38. 38. encontrar a los taninos (los cuales actúan sobre la proteína y provocan precipitación de virus) y polifenoles oxidativos (oxidasas). Para contrarrestar el efecto de estos componentes se usan los ANTIINHIBIDORES (sustancias que contrarrestan el efecto de los inhibidores), pudiendo usar nicotina y cafeína (para taninos) y para los polifenoles usar cianamida, ácido salicílico, hidroxilamina, ácido tioglicolico y ácido ascórbico. FACTORES AMBIENTALES.- Los factores ambientales juegan un papel muy importante en la transmisión mecánica por frotis en virología; la luz, temperatura, nutrición y humedad son los factores más importantes: a) Luz.- Se ha observado que cuando la planta que es inoculada se le somete a períodos de oscuridad continua, tres días antes se favorece la infección; también cuando se inocula y después se expone a altas luminosidades se aumenta la eficiencia de la transmisión. b) Temperatura.- Se ha determinado que cuando se inocula a altas temperaturas (>36 °C), existe una marcada tendencia a no presentarse la infección; esto mismo sucede cuando las temperaturas son menores de 12 °C. La óptima para inocular es de 18-25 °C. c) Nutrición.- Se ha comprobado que es mejor inocular plantas con una nutrición óptima o en ocasiones con ligeros excesos de nitrógeno. d) Humedad.- La infección aumenta con los excesos de agua. 3.2.2.2. TÉCNICA DE INJERTO Este método fue usado desde el siglo XVIII para la obtención de plantas de tulipán que producían flores variegadas. Desde el siglo XX, el injerto se convirtió en una técnica muy útil para el estudio de los virus y fue la base para determinar la naturaleza infecciosa de varias enfermedades. xxxviii
  39. 39. El injerto es muy utilizado en virus que no se transmiten mecánicamente, pero hay que tener mucho cuidado ya que por esta técnica también se transmiten otros agentes fitopatógenos. El injerto se puede realizar en plantas de diferentes especies y de diferentes géneros; cuando se usa esta técnica en plantas diferentes existe menor posibilidad de que el injerto prenda pero, en este caso, lo único que se persigue en virus es poner en contacto los tejidos vasculares de la planta enferma con los tejidos de la planta sana. La metodología usada es muy sencilla, se toma una planta que se utiliza como patrón, a la cual se le hace un corte en el tallo tratando de que llegue a los tejidos vasculares, se utiliza una hoja o una pequeña rama de la planta enferma y con una navaja de rasurar se le quita la epidermis con el fin de dejar los haces vasculares descubiertos, posteriormente se introduce en el cuerpo del patrón, teniendo cuidado que los haces vasculares se pongan en contacto, para la transmisión del virus, luego se sella con Parafilm o polietileno y la planta se coloca en un lugar fresco, para esperar la aparición de síntomas. Las condiciones que se deben de tomar en cuenta para el éxito del injerto son las siguientes: 1.- El corte debe de ser lo más uniforme posible para que se establezca la unión entre el patrón y el injerto. 2.-Tratar de que la superficie de contacto entre patrón e injerto sea lo más grande posible. 3.- Evitar la deshidratación de los tejidos una vez que se haya realizado el injerto; esto se puede lograr colocando la planta en una cámara húmeda y si no se tiene, colocar una bolsa de polietileno húmeda. xxxix
  40. 40. 3.2.2.3. TÉCNICA DE INYECCIÓN Esta técnica fue una de las que se utilizaron por primera vez para la transmisión de virus en plantas; en la actualidad solo se utiliza para transmitir algunos virus que no se transmiten por frotis como por ejemplo, el Virus Curly Top de la Remolacha. 3.2.3. TRANSMISIÓN POR SEMILLA Cuando un virus infecta a una planta, invaden todos los tejidos y llegan hasta la semilla. La evidencia más concluyente de que los virus se transmitían por medio de la semilla fue la presentada por Reddick y Stewart en 1919, cuando demostraron que las semillas de fríjol infectadas con el Virus Mosaico Común del Fríjol producían plantas infectadas desde un 10-90 %. Doolittle y Gilbert (1919), también demostraron que el Virus Mosaico del Pepino se transmitía por este medio en pepinillo. En la actualidad alrededor del 20 % de los virus de plantas conocidos se transmiten a través de la semilla. La transmisión de virus por este medio ocurre cuando: el hospedante es infectado sistémicamente en la floración, cuando el virus es capaz de invadir el polen y el óvulo, cuando es capaz de sobrevivir en la gameta, cuando sobrevive a la deshidratación de la semilla y al almacenamiento y cuando no es inactivado durante el desarrollo de la semilla. 3.2.3.1. IMPORTANCIA DE LA TRANSMISIÓN POR SEMILLA DE VIRUS EN PLANTAS La transmisión por semilla constituye uno de los factores más importantes en el desarrollo epidémico de algunos virus. Las semillas infectadas dan origen a plántulas que representan una fuente de inóculo inicial temprana, que además se halla uniformemente distribuido. Las plántulas infectadas constituyen reservorios a partir de los cuales ocurre la dispersión secundaria del virus, lo cual sucede por transmisión mecánica o mediante vectores. La gran mayoría de los virus que se transmiten por semilla, persisten en el embrión; el porcentaje de transmisión depende de la raza del virus, el hospedante, las condiciones ambientales, entre otros factores, y su "longevidad" depende del hospedante, inóculo, condiciones de almacenamiento y el período de almacenaje. xl
  41. 41. A continuación se mencionan algunos virus de gran importancia que se transmiten por este medio, sus hospedantes y en algunos casos su período de viabilidad. VIRUS CULTIVOS VIABILIDAD Virus Mosaico Común del Chícharo 3-3.8 años Frijol Virus Mosaico de la Alfalfa Alfalfa, Chile 3 años Virus Mosaico Sureño del Frijol, Chícharo 6 meses Frijol Virus Mosaico del Pepino Pepino, Cártamo, Melón, 0.5-2.2 años Sandia, Calabaza, Tomate Virus Mosaico del Melón Melón, Calabaza, Sandia 3-5 años Virus Mosaico de la Soya Soya 2 años Virus Mosaico de la Sandia 3-5 años Calabaza Virus Mosaico del Tabaco Chile 3-9 años Virus Mancha Anular del Garbanzo, Melón, Soya, 0.7-5.5 años Tabaco Tabaco Virus Mosaico Amarillo del Frijol, Haba X Frijol Virus Mosaico del Maíz Maíz X Virus X de la Papa Papa X Virus Y de la Papa Papa X Virus Marchitez Manchada Tomate X del Tomate Virus Mosaico de la Sandia Calabaza X Virus Mosaico del Trigo Trigo, Maíz X 3.2.3.2. MECANISMOS DE ENTRADA DE LOS VIRUS EN LA SEMILLA Los virus asociados con las semillas son acarreados de dos formas: como una infección o como una infestación. La infección implica que el virus es llevado internamente, inmerso en los tejidos de la semilla y cuando el virus es llevado pasivamente se le conoce como infestación o contaminación. El Virus Mosaico Común del Fríjol, Virus Mosaico de la Soya, Mancha Anular del Tabaco, etc., son ejemplo de algunos virus que van internamente; el Virus Mosaico del Tabaco en tomate y la Marchitez Manchada del Tomate se encuentran en la cubierta de la semilla. xli
  42. 42. 3.2.3.3. TÉCNICAS DE DETECCIÓN DE LOS VIRUS EN SEMILLAS La detección de virus en semillas es más difícil que detectar hongos, bacterias y nematodos. Los virus son parásitos obligados y por tanto requieren de pruebas especiales para su detección; estas varían desde una observación visual simple, hasta pruebas muy sofisticadas como el uso de serología y microscopía electrónica. Las pruebas más usadas se describen a continuación: A) Observación de semillas secas. Las observaciones visuales de la semilla revelan anormalidades tales como decoloración, arrugamientos, reducción en tamaño, manchado, necrosis, etc. por ejemplo, el Virus Mosaico de la Soya provoca un moteado en la semilla de soya, el Mosaico del Tabaco causa necrosis y deformación en semilla de tomate el Virus Mosaico de la Calabaza reduce el tamaño en un alto porcentaje cuando infecta melón y calabaza. B) Pruebas biológicas. Es uno de los métodos más usados por el agricultor ya que es económico, fácil y muy seguro. Existen dos pruebas biológicas: 1) Prueba de crecimiento. La prueba de crecimiento es usada para determinar el porcentaje de transmisión por semilla. Se plantan 100 semillas en suelo, vermiculita u otro medio de crecimiento y una vez germinado son examinadas regularmente siguiendo muy de cerca los síntomas de los virus; en algunos casos como el V.M.C.F. la transmisión por semilla puede ser detectada una vez que las hojas primarias hayan aparecido. Sin embargo, los síntomas se observan más claramente en el primero o segundo trifolio. 2) Detección usando plantas indicadoras. xlii
  43. 43. Los virus pueden ser detectados en la semilla haciendo extracciones de diferentes partes de la semilla y posteriormente inoculando en plantas indicadoras. El Virus Mosaico Común del Fríjol es detectado al inocular la savia del embrión y cotiledones en plantas de fríjol "Monroe" en donde reacciona con síntomas locales; Chenopodium amaranticolor es usado para detectar virus como por ejemplo, el Virus Mosaico del Pepino, Virus Mosaico de la Sandía, entre otros. C) Pruebas bioquímicas. Dentro de las pruebas bioquímicas el uso de a) Serología, b) Tinciones de tejidos y c) Microscopio electrónico son las pruebas más confiables para detectar virus en la semilla. a) Serología. Los métodos serológicos son usados para caracterizar y determinar las relaciones entre los virus. Estas pruebas están basadas en la relación entre un antisuero (virus purificado) y un antígeno (virus a identificar). Dentro de las pruebas serológicas más usadas para la detección de virus en la semilla se pueden mencionar las microprecipitación serológica, doble difusión en agar, aglutinación serológica, aglutinación de cloroplastos y E.L.I.S.A., entre otros. b) Técnica de tinción. Un gran número de colorantes tales como la acridina, giemsa, azul de triponina, entre otros, pueden detectar infecciones virales en los tejidos de las plantas. El uso de acridina (colorante fluorescente) sirve para diagnosticar la presencia del Virus del Chícharo de Vaca en semillas de chícharo; es muy simple y consiste en poner las semillas de chícharo en agua durante dos días, agregarle el colorante y si existe la presencia del virus se observará un agregado de un color rojo fluorescente en las semillas infectadas. xliii
  44. 44. c) Microscopía electrónica. Consiste en hacer preparaciones de las posibles semillas infectadas y observarlas al microscopio electrónico. 3.2.4. TRANSMISIÓN POR POLEN Cuando una planta está infectada, el virus tiene la capacidad de llegar a infectar el polen y cuando este es acarreado por el viento o por insectos el virus se transmite de una planta enferma a una sana por este medio. La transmisión por medio del polen está muy relacionada con la transmisión de virus por semilla, por ejemplo, el Virus Mosaico Común del Frijol tiene un mayor porcentaje de transmisión por semilla y por polen ya que la planta es autógama. La gran mayoría de los virus que se transmiten por medio de la semilla también se transmiten por polen, por ejemplo, Virus Mosaico Común del Frijol, Virus Mosaico de la Calabaza, Virus Mosaico de la Lechuga, etc. 3.2.5. TRANSMISIÓN DE VIRUS A TRAVÉS DE BIOTRANSMISORES Se aplica este término a cualquier agente vivo (excluyendo semilla y polen) capaz de portar o transmitir un virus fitopatógeno de una planta enferma a una planta sana. En sentido estricto la palabra vector no es sinónimo de biotransmisor, aunque en el lenguaje común se usan de manera indistinta. Siendo más común el primer término. El ser vector implica que el virus es ingerido y se halla en contacto íntimo con el transmisor. Un ejemplo útil de vector es el del mosco Anopheles, que transmite al protozoario causante del paludismo; el microorganismo ingerido se multiplica y sufre transformaciones en el interior del cuerpo del insecto, antes de poder ser transmitido. En muchos casos de biotransmisores de virus, el patógeno si se multiplica en el insecto pero hay abundantes excepciones en las que no sucede así. Este tipo de transmisión incluye a los insectos, ácaros, nematodos, hongos, plantas parásitas y vertebrados, y constituye la forma más importante de diseminación de los xliv
  45. 45. virus en campo. 3.2.5.1. TRANSMISIÓN POR INSECTOS Constituye el grupo de biotransmisores más importante de virus. La primera evidencia que se tiene de la transmisión por este medio fue la publicada por Takata en Japón (1895) y Takami (1901), donde se menciona a las chicharritas Inzuma dorsalis y Nephotettix cinctipes asociadas con el Virus Enanismo del Arroz. Más tarde Doolittle (1916) demostró que el pulgón Aphis gossypii transmitía al Virus Mosaico del Pepino; Botjes (1920) encontró que Myzus persicae podía transmitir al Virus del Enrollamiento de la Hoja de Papa. Actualmente se reconoce que más de 400 especies de insectos transmite virus, y de todas estas especies Myzus persicae, es el más importante ya que transmite alrededor de 85 virus diferentes. Las especies de insectos reportadas como transmisores de virus se encuentran principalmente en los órdenes Homóptera (pulgones, moscas blancas, chicharritas, escamas, psilidos, etc.); Thysanóptera (trips); Coleóptera (escarabajos); Orthóptera (chapulines); Dermáptera (tijeretas); Lepidóptera (palomillas y mariposas); Díptera (mosquitos) y Hemíptera (tingidos). En general, durante la transmisión por insectos se pueden distinguir tres fases: - Período de adquisición. Es el tiempo mínimo que requiere el insecto para adquirir el virus. - Período de latencia. Tiempo transcurrido desde que el insecto adquiere el virus hasta que es capaz de transmitirlo. - Período de inoculación. Tiempo mínimo requerido por el insecto para poder trasmitir el virus adquirido, una vez que empieza a alimentarse de una planta sana. Hay otro término importante denominado período de retención, que se refiere al tiempo durante el cual el insecto permanece infectivo. xlv
  46. 46. 3.2.5.1.1. CLASIFICACIÓN DE VIRUS DE ACUERDO A LA TRANSMISIÓN POR INSECTOS En base al fenómeno de transmisión de los virus por insectos estos se han clasificado en: virus no persistentes y virus persistentes. 3.2.5.1.1.1. VIRUS NO PERSISTENTES Llamados también virus de estilete o virus no circulativos, constituye el grupo más grande y de mayor importancia en campo. Este grupo de virus se caracteriza por que el insecto que los transmite (generalmente pulgones), tiene un período de adquisición (tiempo que tarda el insecto en adquirir a un virus) y un período de transmisión (tiempo que tarda el vector en transmitir a un virus) sumamente cortos (de 10-60 segundos). El insecto retiene al virus durante un período muy corto que puede ser de minutos u horas; esto depende del insecto ya que si este se alimenta más rápido, más pronto se deshace de los virus. El virus no penetra al tracto digestivo del insecto por lo que al darse el proceso de muda en este se elimina al virus; si el vector es sometido a un período de ayuno se aumenta la eficiencia de la transmisión. La mayoría de estos virus presentan las siguientes características en común: 1) Su punto de inactivación térmica anda entre 50-65 °C. 2) Generalmente son filamentosos (varilla rígida o flexible). 3) La longevidad "in vitro" es solamente de unos cuantos días. 4) Generalmente presentan síntomas de mosaico y manchas anulares. 5) La gran mayoría se transmite por pulgones 6) Se transmiten muy fácilmente mecánicamente 7) Generalmente están confinados a las células epidermales 3.2.5.1.1.2. VIRUS PERSISTENTES También llamados virus circulativos; y se caracterizan porque el insecto que los transmite (pulgones, mosca blanca, chicharritas, etc.) tienen períodos de adquisición y transmisión largos (horas, días y hasta semanas) y además poseen un período de xlvi
  47. 47. incubación (tiempo que tarda el virus en recorrer el tracto digestivo del insecto) que también es de horas, semanas y hasta días. En este caso el virus si penetra al tracto digestivo del insecto por lo que al darse el proceso de muda en este, no se pierde la infectividad. Los virus persistentes presentan las siguientes características: 1) Generalmente poseen forma poliédrica 2) Los síntomas más comunes son: amarillamientos, enchinamientos, enrrollamientos, etc. 3) Su longevidad "in vitro" en algunos casos puede durar toda la vida del insecto. 4) Al mudar el insecto no se pierde la infectividad 5) Están confinados a los tejidos vasculares de la planta. 6) Generalmente no se transmiten por medios mecánicos. 7) En la naturaleza sus principales vectores son mosca blanca, chicharritas, nematodos, etc. Los virus persistentes se pueden clasificar en: circulativos, propagativos y transováricos. 3.2.5.1.1.2.1. PERSISTENTES CIRCULATIVOS Son aquellos virus que penetran al tracto digestivo del insecto vector, pero no se multiplican de este. Este tipo de virus generalmente son transmitidos por mosca blanca. 3.2.5.1.1.2.2. PERSISTENTES PROPAGATIVOS Son aquellos virus que penetran al tracto digestivo del insecto y se multiplican de este. Este tipo de virus se multiplican en la hemolinfa, tubos de Malpighi, cerebro, etc., y generalmente son transmitidos por chicharritas. 3.2.5.1.1.2.3. PERSISTENTES TRANSOVÁRICOS xlvii
  48. 48. Son aquellos virus que penetran al tracto digestivo del insecto, se multiplican de este y además la infectividad se pasa la progenie. Estos virus solo se transmiten por chicharritas y el virus aparentemente se multiplica en los órganos reproductores de la hembra; el Virus Enanismo del Arroz es un ejemplo típico de estos virus. VIRUS TRANSMITIDOS POR ÁFIDOS Los áfidos, llamados comúnmente pulgones, constituyen el grupo más importante como vector de virus que transmiten alrededor del 60 % de todos los virus que se transmiten por insectos y porque además transmiten virus principalmente del tipo no persistente pero también transmiten virus circulativos y propagativo. El ciclo de vida de los pulgones es muy variado y en lugares donde el invierno no es muy frío, se reproducen partenogenéticamente y en las partes donde si hace frío existe reproducción sexual, es decir, los machos fertilizan a las hembras, las cuales ponen huevecillos y de esta forma invernan. Los áfidos generalmente tienen un hospedante perenne que es el hospedante primario y un hospedante secundario que es una planta herbácea; las formas más importantes como transmisores de virus son las aladas aunque las formas ápteras son muy importantes en laboratorio; los pulgones empiezan el vuelo en las mañanas muy temprano y dejan de volar unas cuantas horas antes de que acabe la luz, estos insectos son atraídos por los colores brillantes, principalmente amarillo. Cuando un áfido se coloca en una planta, primeramente realiza inserciones de su estilete de corta duración cuya trayectoria es hacia el interior de las células epidérmicas: Si la planta es de su agrado, posteriormente, para alimentarse, realiza inserciones en la búsqueda de los haces vasculares a través de los espacios intercelulares. El piquete de probado de corta duración es el responsable de la adquisición e inoculación de virus no persistentes. El piquete de alimentación se encarga de la transmisión de virus persistentes. Los áfidos transmiten virus que pueden ser transmitidos manualmente muy fácilmente y cuyos síntomas son generalmente los mosaicos, encontrándose dentro de estos a los Potyvirus, Cucumovirus, Carlavirus, Grupo del Virus Mosaico de la Alfalfa, etc., los cuales los transmite de manera no persistente y de manera xlviii
  49. 49. persistente transmite a los de los grupo Luteovirus, Grupo del Virus Mosaico, Enanismo del Chícharo y a la familia Rhabdoviridae. VIRUS TRANSMITIDOS POR CHICHARRITAS De los homópteros del suborden Auchenorrhincha, las chicharritas (Cicadellidae) transmiten aproximadamente 40 virus distintos y la mayoría de ellos son virus persistentes circulativos propagativos por lo que su período de adquisición es sumamente grande (alrededor de 24 horas), el período de incubación es de una a dos semanas y el período de persistencia es casi toda la vida. También transmiten virus transováricos y los síntomas principales son amarillamientos, enrrollamientos y enchinamientos. Para comprobar que el virus se multiplica dentro del insecto vector, con una microjeringa se extrajo hemolinfa de una chicharrita del genero Ogallia constricta y se inyectó a otra y la infectividad se pasó hasta en ocho generaciones; se comprobó que el virus se multiplicaba en las células del epitelio, intestino, tubos de malpighi, ovarios, hemolinfa, etc. Los virus anteriormente mencionados que son transmitidos por chicharritas están incluidos dentro de las familias Rhabdoviridae y Reoviridae, y los grupos: Geminivirus, Grupo del Virus Rayado Fino del Maíz y Enanismo Clorótico del Maíz, principalmente. VIRUS TRANSMITIDOS POR MOSCA BLANCA Las moscas blancas son un grupo importante en la transmisión de virus ya que se les ha encontrado transmitiendo alrededor de 10 distintos Geminivirus; por lo menos cinco virus en forma de varilla distribuidos en los grupos Closterovirus, Carlavirus y Potyvirus, y otras enfermedades de tipo viral cuya partícula no ha sido observada. En todos los casos, la forma de transmisión es persistente circulativa. Para que la mosca blanca adquiera al virus requiere de un período de alimentación de cuando menos 5 minutos, el cual va a depender del virus que se trate, su concentración en el tejido vegetal, el biotipo, etc. El período de alimentación mínimo para inocularlo en una planta sana es de 5 a 60 minutos y el período de incubación es de 8-12 horas. xlix
  50. 50. El principal vector es Bemisia tabaci y transmiten virus cuyos síntomas principales son: aclareamiento de nervaduras, amarillamientos, enchinamientos, entre otros. Algunos virus transmitidos son el Virus Mosaico Dorado del Frijol, Virus Enchinamiento del Tomate, Virus Mosaico Amarillo de Chile, etc. VIRUS TRANSMITIDOS POR ESCAMAS Las escamas también tienen la capacidad de transmitir virus; aun a pesar de que carecen de movimiento, pero las hormigas las trasladan de un lado a otro. El virus más importante transmitido por estos insectos es el Virus de la Macroyemas del Cacao; al cual no se conoce con certeza su período de incubación, su período de transmisión es de 36 días y tiene una incubación de alrededor de 10 días. VIRUS TRANSMITIDOS POR COLEÓPTEROS Los coleópteros transmiten virus circulativos y a diferencia de los homópteros, poseen un aparato bucal del tipo masticador y en lugar de glándulas salivales poseen glándulas gnetales las cuales secretan un jugo enzimático en el tracto digestivo. Todos los virus transmitidos por estos insectos conservan su infectividad ante la acción de estas enzimas lo que no ocurre con otros virus. El período de adquisición de estos insectos es mayor de 5 minutos y el período de persistencia o transmisión es de días a semanas. Cualquier virus adquirido por un coleóptero es detectado en el excremento, la hemolinfa y en el regurgitado que genera el insecto en su alimentación y que se piensa es la forma de transmisión. Las partículas de los virus trasmitidos por escarabajos son de forma poliédrica y miden alrededor de 30 nm de diámetro, son relativamente estables en el laboratorio y usualmente causan mosaicos y moteados. Casi todas las especies vectoras pertenecen a la familia Crysomelidae (Alticinae y Galerucinae) pero también la familia Coccinelidae y Curculionidae (picudos) transmiten virus; la mayoría de los virus transmisibles por coleópteros se encuentran en los grupos Comovirus y Tymovirus, encontrándose principalmente al Virus Mosaico de la Calabaza ( Acalymma trivittata, Diabrotica undecimpunctata y Ceratoma trifurcata), Virus Mosaico Sureño del Frijol (Ceratoma spp., Diabrotica balteata y Epilachna varivestis), Virus Mosaico del Nabo, etc. l
  51. 51. VIRUS TRANSMITIDOS POR TRIPS Los trips presentan dos estadios larvarios ápteros los cuales se alimentan de su planta hospedante. Los siguientes dos o tres estadios larvarios muestran pequeñas protuberancias de alas, son inactivos y no se alimentan. El último estadio preadulto es una pupa encerrada en un capullo del cual sale el adulto. El virus más ampliamente estudiado, transmitido por estos insectos es el Marchitez Manchada del Tomate, el cual se encuentra ampliamente distribuido, tiene un amplio rango de hospedantes y es transmitido por Thrips tabaci, T. setosus, Frankiniella schultzei, Frankiniella fusca, F. occidentalis y Scritothrips dorsalis; los cuales lo adquieren en un período de 30 minutos, su latencia es de 5 a 12 días y su período de persistencia es alrededor de tres semanas. Solamente las partículas virales adquiridas por el insecto durante los primeros estadios larvales atraviesan el tracto digestivo y llegan a las glándulas salivales para ser transmitidos en la etapa adulta. A pesar de que el estado adulto no es virulífero (virulento), éste puede adquirir al virus pero no logra trasmitirlo, supuestamente debido a que conforme aumenta la edad del insecto, decrece la permeabilidad del intestino. Otros virus reportados que pueden ser transmitidos por estos insectos son el Virus Mancha Anular del Tabaco y el Virus Mosaico del Chícharo. VIRUS TRANSMITIDOS POR OTROS INSECTOS Varias especies de piojos harinosos (Homóptera: Pseudococcidae), han sido reportadas como transmisores de algunas razas del Virus de la Macroyemas del Cacao, el virus puede ser adquirido en una hora e inoculado en 15 minutos y persiste por tres o cuatro días. El transmisor de este virus es Planococcoides njalensis y el virus se caracteriza por ser de forma baciliforme, se transmite muy fácilmente mecánicamente y posee un rango moderado de plantas. Dos especies de tingidos son reconocidos como transmisores de virus en remolacha, uno se encuentra reportado en Europa y otro en Norteamérica. 3.2.5.2. TRANSMISIÓN DE VIRUS POR HONGOS li
  52. 52. Desde hace mucho tiempo se empezó a manejar la posibilidad de que los hongos transmitieran enfermedades virales, sin embargo, los trabajos se iniciaron en la década de los 70's y fue Olpidium brassicae, el primer hongo reportado transmitiendo al Virus de la Necrosis del Tabaco. Existen dos grupos de hongos, ambos de la clase Phycomycetes, que se han reportado como transmisores de enfermedades virales; en los Chytridiales, Olpidium brassicae, transmite al Virus Satélite de la Necrosis del Tabaco, Virus Necrosis del Pepino, Virus Macronervaduras de la Lechuga y Achaparramiento del Tabaco; en los Plasmodiophorales, Polymyxa graminis transmite al Virus Mosaico del Trigo, Mosaico de la Avena y Virus Mosaico Amarillo de la Cebada , y Spongospora subterranea, transmite al Virus Mop-top de la Papa. También se reporta que una especie de Pythiaceae (Pythium ultimum) transmite al Virus X de la Papa. El hongo adquiere al virus y lo retiene indefinidamente en el esporangio (se ha comprobado que los esporangios de reposo de Olpidium brassicae pueden sobrevivir hasta ocho años y mantener al virus) y después es diseminado por las zoosporas. 3.2.5.3. TRANSMISIÓN DE VIRUS POR NEMATODOS La transmisión de virus por nematodos fue reportada desde 1958 por Hewitt, Rashi y Gehen, demostrando que el nematodo Xiphinema index transmitía al Virus de la Hoja de Abanico de la Vid. Actualmente, dos grupos de virus son transmitidos por estos habitantes del suelo; los Nepovirus, los cuales tienen partículas isométricas que miden alrededor de 30 nm de diámetro y los Tobravirus, los cuales la gran mayoría son de partículas tubulares. Los nematodos vectores de estos dos grupos de virus corresponden al orden Dorylaimida, los cuales incluyen relativamente pocas especies conocidas como parásitos de plantas y los géneros más comunes como transmisores de virus son Xiphinema y Longidorus (para Tobravirus) y Trichodorus (para Nepovirus). Tanto los Nepovirus como los Tobravirus pueden ser adquiridos de 15 minutos a una hora y puede ser inoculados en un período más o menos similar, ambos grupos son retenidos por sus vectores por semanas y son transmitidos tanto por las larvas como por los adultos, no existe evidencia de transmisión transovarial, ni de multiplicación del virus en el vector, se transmiten muy fácilmente lii
  53. 53. mecánicamente, por semilla, y los síntomas generalmente son mosaicos y manchas anulares. Algunos virus que son transmitidos por estos vectores son: Virus de la Hoja de Abanico de la Vid (Xiphinema index y X. diversidaudatum), Mancha Anular del Tabaco (X. americanus), Virus Anillo Negro del Tomate (Longidorus elongatus), Virus Cascabeleo del Tabaco (Trichodorus pachydermus) y el Virus Bronceado Temprano del Chícharo (T. teres). 3.2.5.4. TRANSMISIÓN DE VIRUS POR ÁCAROS Los ácaros transmisores de virus se encuentran en las familias Eriophydae y Tetranychidae y se cree que transmitan virus del tipo circulativo ya que cuando estos artrópodos mudan no se pierde la infectividad. El cuerpo de los adultos (que son los transmisores de virus) es alargado y mide alrededor de 2 mm de longitud, se alimentan principalmente de hojas y otras partes de las plantas y con su estilete y dos pares de apéndices que tienen en el rostro succionan, la savia de las células de las plantas. Cuatro de los virus transmitidos por Eriophydae tienen partículas filamentosas de alrededor de 700 nm de longitud, son transmisibles por savia y los síntomas que causan son principalmente mosaicos y moteados. El caso más conocido es Virus Mosaico del Trigo que es transmitido por Aceria tulipae; el virus puede ser adquirido en 15 minutos, persiste alrededor de 9 días y puede ser transmitido después de 15 minutos. Los adultos no adquieren al virus pero si lo transmiten. Otros virus transmitidos por ácaros son el Virus Mosaico del Higo (Aceria ficus), Virus Mosaico del Durazno (Eriophyes insidiosus), el Virus Y de la Papa (Tetranychus telarius) y el Virus Mancha Anular del Tabaco (Tetranychus spp). 3.2.5.5. TRANSMISIÓN DE VIRUS POR PLANTAS PARÁSITAS En principio, la transmisión por injerto y la transmisión por plantas parásitas es de manera similar, ya que ambos métodos se pone en contacto el sistema vascular y las células. La transmisión se realiza por medio de unas estructuras que poseen estas plantas llamados haustorios. Alrededor de 20 especies de Cuscuta han sido usadas para transmitir virus, sin embargo, Cuscuta campestris y Cuscuta subinclusa, son las especies más importantes al transmitir 24 y 12 virus, respectivamente. Los liii
  54. 54. virus más importantes transmitidos por plantas parásitas son el Virus Mosaico del Pepino, Mosaico del Tabaco y Virus Mosaico del Melón. 3.2.5.6. VIRUS TRANSMITIDOS POR VERTEBRADOS Dentro de los vertebrados transmisores de virus el hombre es considerado factor de diseminación más importante ya que transmite virus por semilla (transporte), partes vegetativas y labores culturales. Todos los animales vertebrados que se conocen pueden transmitir virus de manera mecánica. 3.3. IDENTIFICACIÓN DE VIRUS La identificación de virus es considerado como el proceso mediante el cual se diagnostica con precisión la presencia real del ó de los virus presentes en una planta hospedante. Para diagnosticar una enfermedad, lo primero que hay que conocer es la naturaleza de la misma, ya que será la base primaria de identificación del patógeno causante y por tanto se implementarán las medidas de control pertinentes. Cuando se nos presenta un problema en campo, en donde se especula la presencia de patógenos; la primera muestra de que la planta está enferma será basándose en la sintomatología que ésta manifiesta. Aún a pesar de que los síntomas no son un criterio básico para determinar al agente causal de una enfermedad, si son de gran utilidad para algunos, ya que los síntomas difieren del resto de los demás. Comprobar la naturaleza infecciosa de la enfermedad Antes que nada debe de determinarse que la enfermedad se puede transmitir de una planta enferma a una sana, ya que solo las enfermedades de naturaleza biótica son infecciosas. Este aspecto se prueba haciendo injertos de brotes de plantas enfermas en plantas sanas cultivadas en invernadero. Es obvio que el invernadero deberá estar protegido para evitar el acceso de vectores. A continuación se mencionan algunas características para la identificación de los virus fitopatógenos. liv

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