Secuenciación por el método de Sanger, método automático y método de pirosecuenciación

1. SECUENCIACION DE ADN
(METODO DE SANGER,MÉTODO AUTOMÁTICO Y PIRO
SECUENCIACION)
UNIVERSIDAD DEL ATLANTICO
BIOLOGIA MOLECULAR
GRUPO #2

2. :
Secuenciación por el método de Sanger,
método automático y método de
pirosecuenciación

3. OBJETIVOS
• Explicar los
conceptos de
secuenciación de
ADN por el método
de Sanger.
• Identificar el
método de Sanger
como técnica propia
de la ingeniería
genética en la
determinación de la
secuencia de ADN.

4. INTRODUCCION
• La secuenciación de ADN es un conjunto de
métodos y técnicas utilizadas tanto biológica
como químicamente para determinar el orden de
los nucleótidos en un oligonucleótido.
• El método de secuenciación ideado por Sanger está
basado en el empleo dideoxinucleótidos que
carecen de uno de los grupos hidroxilo

5. COMPUESTOS NECESARIOS PARA
OBTENER LAS BASES NITROGENADAS
- El ADN molde o segmento que se desea
secuenciar.
- Una enzima que replique el ADN.
- Un cebador o primer.
- Los cuatro nucleótidos trifosfato (dATP,
dCTP, dGTP y dTTP).
- Por último, se necesitan nucleótidos
didesoxi (ddATP, ddTTP, ddCTP y ddGTP)

6. cebador desoxinucleotidos didesoxinucleótidos

8. PROCESO DE SECUENCIACION
DE ADN
En primer lugar, deben realizarse en
cuatro tubos diferentes, cuatro
mezclas de reacción.
se producen una serie de moléculas
de ADN de nueva síntesis de
diferente longitud que terminan
todas en el mismo nucleótido
Los fragmentos de ADN de nueva
síntesis obtenidos en cada mezcla
de reacción se separan por tamaños
mediante electroforesis en geles
Una vez terminada la electroforesis,
el gel se pone en contacto con una
película fotográfica de
autorradiografía

9. 1 2
3 4

10. Teniendo en cuenta que el ADN de nueva síntesis crece en la dirección 5' 3', si
comenzamos a leer el gel por los fragmentos de menor tamaño (extremo 5') y avanzamos
aumentando el tamaño de los fragmentos (hacia 3'), obtendremos la secuencia del ADN de
nueva síntesis en la dirección 5' 3'.

12. La Reacción con ddATP
5’TTATCG
3’AATAGCATGGTACTGATCTTACGCTAT5’
5’TTATCGTACCATGACTAGATGCGA
5’TTATCGTACCA
5’TTATCGTACCATGACTA
5’TTATCGTA
5’TTATCGTACCATGA
5’TTATCGTACCATGACTAGATGCGATA
5’TTATCGTACCATGACTAGA
Pol.
5’TTATCGTA Ya no
puedes!
Pol.
5’TTATCGTACCATGA
Otra
vez!
Pol.
5’TTATCGTACCATGACTAGA
No
De nuevo!
Pol.
5’TTATCGTACCATGACTAGATGCGATA
A que la!

13. GRACIAS…