Se ha denunciado esta presentación.
Se está descargando tu SlideShare. ×

Citogenetica convencional

Anuncio
Anuncio
Anuncio
Anuncio
Anuncio
Anuncio
Anuncio
Anuncio
Anuncio
Anuncio
Anuncio
Anuncio

Eche un vistazo a continuación

1 de 35 Anuncio
Anuncio

Más Contenido Relacionado

Presentaciones para usted (20)

Similares a Citogenetica convencional (20)

Anuncio

Citogenetica convencional

  1. 1. CITOGENÉTICA CONVENCIONAL Béjar Vilela, Rosario
  2. 2. CITOGENÉTICA CONVENCIONAL  Estudio de cromosomas, estructura y herencia.  Los transtornos cromosómicos constituyen una entidad dentro de las enfermedades genéticas.
  3. 3. Estudio Citogenético/ Cromosómico  Células estén división celular (Mitosis)  Análisis cromosómico (morfología y patrón de bandas) en Metafase.  Algunas células normalmente en proceso de proliferación y diferenciación por lo que no necesitan de un estimulante mitogénico para que entren división.  Otras células ya diferenciadas requieren de un estimulante mitógeno para que entren en mitosis.  Cultivos Indirectos y Cultivos Directos  Cultivos a corto plazo y cultivos a largo plazo
  4. 4. Cultivo Celular Directo La célula no requiere de un estimulante mitogénico para entrar en división celular.  Cultivo de Células Fetales Cultivo a largo plazo (10-14 d) Muestra: Liquido Amniótico obtenido por Amniocentesis alrededor de la 16ª semana de gestación. Dx prenatal de una alteración cromosómica.  Cultivo de Vellosidades Coriales Cultivo corto plazo (24 –48 horas) y Cultivo largo plazo (1014 d) Muestra: Biopsia aspiración de Vellosidades Coriónicas alrededor de la 10ª sem. de gestación. Dx prenatal de una alteración cromosómica.  Cultivo de Restos Endouterinos Cultivo largo plazo (10-14 días) Muestra: Legrado uterino y/o producto abortado Detectar una anomalía cromosómica del producto.
  5. 5. Procedimiento (“Cultivo Directo” de Líquidos Orgánicos )  Centrifugar a 1000 RPM por 10min.  Eliminar sobrenadante y colectar los sedimentos  Adicionar 6 ml. De Solución Hipotónica ( ClK 0.075 M ) agitar con Pipeta Pasteur  Incubar a 37°C por 30 min.  Centrifugar a 1000 RPM por 10 min. Eliminar el sobrenandante.
  6. 6. Procedimiento (“Cultivo Directo” de Líquidos Orgánicos )  Añadir 5 ml de Fijador. Agitar con Pipeta Pasteur y dejar a TA por 30 min.  Centrifugar a 1000 RPM por 10 min, eliminar sobrenandante y añadir 5 ml de Fijador. Repetir este paso 2 o 3 veces.  Colocar 3 a 4 gotas sobre una lámina portaobjeto y fijarlo al calor.  Coloración convencional (Giemsa).  Bandeo Cromosómico (Banda GTG).  Observación Microscópica.
  7. 7. Cultivo Celular Indirecto La célula requiere de un estimulante mitogénico para que entre en división celular.  Cultivo de Linfocitos Cultivo a corto plazo (72 horas) Muestra: Sangre Periférica Se realiza para detectar cualquier alteración cromosómica constitucional (que el defecto cromosómico este presente en todas las células de nuestro organismo). Se utiliza para detectar las autosomopatías (Síndromes Down, Patau, Edwards, etc.) y las Gonosomopatías (Síndromes de Turner, Triple X, Klinefelter, etc.)
  8. 8. Cultivo Celular: MEDIOS DE CULTIVO CELULAR  Contienen todos los aminoácidos, vitaminas, cofactores, coenzimas, enzimas, sales, iones, indicadores de pH. Todo lo necesario para que la célula pueda dividirse in vitro.  Existen distintos medios de cultivo los cuales se seleccionan dependiendo del tipo de muestra o tipo de célula a cultivar y lograr que estos respondan adecuadamente con un crecimiento celular.
  9. 9. Cultivo Celular Medios de Cultivo más Utilizados 1. Medio McCoy’s 5A Modified Cultivo Sangre Periférica (Linfocitos) 2. Medio RPMI 1640: Cultivo Sangre Periférica (Linfocitos) 3. Medio Tc199: Cultivo Sangre Periférica (Linfocitos) 4. Medio Ham F10 ó Ham F12 Cultivo de células fetales
  10. 10. Cultivo Celular SUPLEMENTOS Las células requieren para su crecimiento y división celular de suplementos, los cuales serán utilizados dependiendo del tipo de células que se desea cultivar y del tipo de estudio citogenético requerido. 1.- SUERO BOVINO FETAL (SBF) : Se utiliza a diferentes concentraciones: 20% para el cultivo de SP 30% para el cultivo de células fetales
  11. 11. Cultivo Celular 2.- PENICILINA + ESTREPTOMICINA: Utilizado como antibióticos para evitar la contaminación bacteriana. 3.- ANTIMICOTICOS: Fungizona para evitar el crecimiento de hongos, si es que fuera necesario. 4.- L- GLUTAMINA: Aa que en su forma levógira mejora el crecimiento celular. 5.- ESTIMULANTE MITOGENICO: Utilizado para estimular el proceso de mitosis en el cultivo de linfocitos. Fitohemaglutinina (PHA)
  12. 12. Cultivo Celular Medios de Cultivo y Suplementos Formas de presentación :Medio Líquido y en polvo
  13. 13. CULTIVO DE SANGRE PERIFERICA (LINFOCITOS) Toma de Muestra . Condiciones de asepsia . Anticoagulante heparina . Volumen de muestra
  14. 14. CULTIVO DE SANGRE PERIFERICA (LINFOCITOS) Selección de los medios de cultivo y suplementos
  15. 15. CULTIVO DE SANGRE PERIFERICA (LINFOCITOS) Sedimentar la mx 2h aprox.
  16. 16. CULTIVO DE SANGRE PERIFERICA (LINFOCITOS) Eliminar el P.G (dejar un pequeño remanente) dejando la interfase (Globulos blancos) y el plasma.
  17. 17. CULTIVO DE SANGRE PERIFERICA (LINFOCITOS) Se utilizará para la siembra( 20 gotas).
  18. 18. CULTIVO DE SANGRE PERIFERICA (LINFOCITOS) . Incubar a 37ºc por 72 horas
  19. 19. CULTIVO DE SANGRE PERIFERICA (LINFOCITOS) . El índice máximo de mitosis se obtiene a las 70-72horas. Por lo tanto habrán más células en metafase
  20. 20. CULTIVO DE SANGRE PERIFERICA (LINFOCITOS) . Diariamente se debe mezclar el frasco de cultivo. . Controlar cambios de color que indica cambios del ph o turbidez que indica contaminación.
  21. 21. CULTIVO DE SANGRE PERIFERICA (LINFOCITOS) . COSECHA 1. Colchicinización . Agregar Colchicina 100 uL. Mezclar suavemente
  22. 22. CULTIVO DE SANGRE PERIFERICA (LINFOCITOS) . Incubar a 37ºC por 15 minutos
  23. 23. CULTIVO DE SANGRE PERIFERICA (LINFOCITOS) Eliminar el sobrenadante. Trabajar siempre con el sedimento
  24. 24. CULTIVO DE SANGRE PERIFERICA (LINFOCITOS) 2. Hipotonización . Adicionar solución hipotónica: Cloruro de Potasio 0.075 M 7mL y homogenizar.
  25. 25. CULTIVO DE SANGRE PERIFERICA (LINFOCITOS) . Incubar a 37ºC por 12 minutos.
  26. 26. CULTIVO DE SANGRE PERIFERICA (LINFOCITOS) 3. FIJACIÓN: . Adicionar Fijador (Metanol +Acido Acético Glacial ) V/V . Sacar el tubo de la estufa y adicionar 5 mL de fijador Carnoy para detener la acción de la solución hipotónica. Observar color marrón oscuro. . Homogenizar . Centrifugar 2500 RPM por 12 minutos.
  27. 27. CULTIVO DE SANGRE PERIFERICA (LINFOCITOS) . Eliminar el sobrenadante y repetir el paso anterior 3 veces hasta que ya no haya turbidez. El último sedimento resuspender con 1mL de fijador.
  28. 28. CULTIVO DE SANGRE PERIFERICA (LINFOCITOS) 4. Preparado Cromosómico . Adicionar 3 a 4 gotas sobre una lámina portaobjetos helada. . Secar al calor de un mechero. . Guardar en una gradilla
  29. 29. CULTIVO DE SANGRE PERIFERICA (LINFOCITOS) Coloración Convencional: Bandeo GTG - Tripsina 1% (buffer) - Solución Salina Fisiológica - Giemsa 4%
  30. 30. CULTIVO DE SANGRE PERIFERICA (LINFOCITOS) Cromosomas con Bandas G
  31. 31. CULTIVO DE SANGRE PERIFERICA (LINFOCITOS)
  32. 32. CULTIVO DE SANGRE PERIFERICA (LINFOCITOS) Elaboración del Cariograma
  33. 33. GRACIAS

×