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Fundamento pap usos

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Fundamento pap usos

  1. 1. FUNDAMENTO EN COLORACIÓN PAPANICOLAU-USOS BÉJAR VILELA, ROSARIO HONADOMANI SAN BARTOLOME
  2. 2. COLORACIÓN DE PAPANICOLAOU  Creada por George Papanicolaou.  En 1941 publica una técnica de tinciones: Permite correlacionar cambios citológicos vaginales con el ciclo menstrual de las mujeres y con el diagnóstico de casos asintomáticos de neoplasia intrauterina.
  3. 3. COLORACIÓN DE PAPANICOLAOU  Se denomina “CITOLOGIA CERVICO VAGINAL”:Estudian las Células Epiteliales de la Pared Vaginal, Exocervix y Endocervix.  Mx obtenida con el instrumental adecuado: Espéculo y Pipeta de Ayre, la cual garantiza un muestra de las 3 zonas involucradas.
  4. 4. INFORME CITOLÓGICO CERVICO VAGINALINFORME CITOLÓGICO CERVICO VAGINAL Coloración de PapanicolaouColoración de Papanicolaou SISTEMA BETHESDASISTEMA BETHESDA 1.- CALIDAD DE LA MUESTRA Inadecuada para Evaluación: Adecuada para Evaluación: Con Células Endocervicales Sin Células Endocervicales Con Células MetaplásicasSin Células Metaplásicas 2.- CAMBIOS BENIGNOS CAUSADOS POR INFECCIÓN: Ninguno Cándida Cocobacilos Herpes Simple Gardnerella Actinomises Trichomona vaginalis Otros 3.- CAMBIOS ASOCIADOS A: Ninguno Reparativos Atrofia DIU Reactivos Radiación Inflamación: Leve Moderada Severa 4.-ANORMALIDADES CELULARES EPITELIALES: Ninguno: Negativo para Lesión Intraepitelial y/o Neoplasia Maligna Células Escamosas Atípicas ( ASCUS ) Lesión Escamosa Intraepitelial de Bajo Grado: Infección por PVH Lesión Escamosa Intraepitelial de Bajo Grado: Displasia Leve ( NIC I ) Lesión Escamosa Intraepitelial de Alto Grado: Displasia Moderada( NIC II ) Lesión Escamosa Intraepitelial de Alto Grado: Displasia Severa ( NIC III ) Lesión Escamosa Intraepitelial de Alto Grado: Carcinoma In Situ Carcinoma Epidermoide Células Glandulares Atípicas ( AGUS ) Adenocarcinoma 5.-OTROS: COLORACIÓN DE PAPANICOLAOU  “SISTEMA BETHESDA” Ciudad de Bethesda – Maryland (USA) donde desde 1988 hasta el 2001, se reunieron un grupo de profesionales de la salud con: Objetivo establecer un sistema de nomenclaturas y terminologías uniformes para informar resultados Citológicos Cérvico Vaginales.
  5. 5. COLORACIÓN DE PAPANICOLAOU  Núcleo:Núcleo: Nítido, con buena definición del detalle, pudiendo evidenciarse el patrón de cromatina.  Citoplasma:Citoplasma: De aspecto transparente, que permite apreciar los grados de diferenciación celular y actividad metabólica.
  6. 6. 1.-Agua Corriente 5’ => Hidratación 2.-Hematoxilina de Harris 7’ => Tinción Nuclear => Colorante 3.-Agua Corriente 2’ => Tinción Nuclear 4.-Agua Acida 1% 2” => Tinción Nuclear 5.-Agua Corriente 2’ => Tinción Nuclear 6.-Agua Amoniacal 10” => Tinción Nuclear 7.-Agua Corriente 2’ => Tinción Nuclear 8.-Alcohol Etílico de 96% 1’ => Tinción Citoplasmática 9.-Orange G 3’ => Tinción Citoplasmática => Colorante 10.-Alcohol Etílico de 96% 30” => Tinción Citoplasmática 11.-EA50 2’ => Tinción Citoplasmática => Colorante 12.-Alcohol Etílico de 96% 30” => Deshidratación 13.-Alcohol Etílico de 96% 30” => Deshidratación 14.-Alcohol Absoluto 30” => Deshidratación 15.-Alcohol Absoluto 30” => Deshidratación 16.-Xilol 2’ => Aclaramiento 17.-Xilol 1’ => Aclaramiento COLORACIÓN DE PAPANICOLAOU  Comprende 17 pasos agrupados en 5 etapas (hidratación, tinción nuclear, tinción citoplasmática, deshidratación, aclaramiento).  Uso de 3 colorantes (Hematoxilina de Harris, Orange G y EA-50).
  7. 7. NUCLEONUCLEO CITOPLASMACITOPLASMA MembranaCelular–MembranaCelular–MembranaCelular H2O H2O H2O H2O H2O H2O H2O H2O H2O H2O H2O H2O Alcohol EterAlcohol Eter FIJACIÓN EN ALCOHOL ETER o Fijador Químico por Deshidratación . o Elimina el agua intracelular, desnaturalizando las proteínas e inactivando las enzimas autodigestivas evitando la Autólisis,. o Es un bactericida:Eliminando las bacterias e impidiendo la Putrefacción.
  8. 8. NUCLEONUCLEO CITOPLASMACITOPLASMA MembranaCelular–MembranaCelular–MembranaCelular Alcohol EterAlcohol Eter OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OHOH OH OH OH OH OH OH OH OH Agua CorrienteAgua Corriente AGUA CORRIENTE  Elimina el Fijador y por arrastre físico los elementos que no son parte de la estructura celular y tisular. Finalmente se obtendrá una célula fijada y llena de moléculas de agua para que a través de esta puedan desplazarse diversos colorantes.
  9. 9. Hematoxilina de HarrisHematoxilina de Harris NUCLEONUCLEO CITOPLASMACITOPLASMA MembranaCelular–MembranaCelular–MembranaCelular HEMATOXILINA DE HARRIS  Las moléculas colorantes de Hematoxilina de Harris penetrarán en la célula y se dirigirán al núcleo de la misma por un proceso Físico Químico del Tipo Atracción Electrostática. Esta unión se debe gracias a los grupos Fosforitos Ácidos (-) del núcleo que le dan carga global Negativa a la estructura celular tiñéndolo de un color violeta.
  10. 10. Hematoxilina de HarrisHematoxilina de Harris NUCLEONUCLEO CITOPLASMACITOPLASMA MembranaCelular–MembranaCelular–MembranaCelular Agua CorrienteAgua Corriente AGUA CORRIENTE  Eliminará por arrastre físico el exceso de colorante intra y extracelular que no este ligado al núcleo.  Solo permanecerán unidos al núcleo las moléculas colorantes unidas por diferencia de cargas eléctricas con este.
  11. 11. Agua CorrienteAgua Corriente NUCLEONUCLEO CITOPLASMACITOPLASMA MembranaCelular–MembranaCelular–MembranaCelular Agua AcidaAgua Acida AGUA ACIDA 1%  Es una dilución del Ácido Clorhídrico al 1%, por lo que presenta una carga fuertemente ácida (-).  Las Cargas Negativas ingresarán a la célula y se unirán por diferencia de carga con las Cargas Positivas, en este caso, con los Grupos Auxocromos (+) de las moléculas de Hematoxilina.
  12. 12. CITOPLASMACITOPLASMA Agua AcidaAgua Acida NUCLEONUCLEO MembranaCelular–MembranaCelular–MembranaCelular AGUA ACIDA 1%  Esta unión le darán carga global negativa a algunas moléculas de Hematoxilina separándolas del núcleo, logrando la decoloración parcial evitando la sobresaturación de colorante en el núcleo que podrían impedir la observación de finos detalles nucleares.
  13. 13. CITOPLASMACITOPLASMA Agua AcidaAgua Acida NUCLEONUCLEO MembranaCelular–MembranaCelular–MembranaCelular Agua CorrienteAgua Corriente AGUA CORRIENTE Eliminará el exceso de Agua Ácida (-) logrando que las moléculas de Hematoxilina intracelulares separadas sean eliminadas por arrastre físico del interior de la célulla. Solo permanecerán al interior de la célula las moléculas de Hematoxilina que se encuentren unidas electrostáticamente al núcleo celular.
  14. 14. Agua CorrienteAgua CorrienteCITOPLASMACITOPLASMA NUCLEONUCLEO MembranaCelular–MembranaCelular–MembranaCelular Agua AmoniacalAgua Amoniacal AGUA AMONIACAL  Es una solución alcalina (pH: 8) y los Grupos Auxocromos de las moléculas de Hematoxilina son “Indicadores de pH”.  Adopta tonalidad rojiza con pH<3  Tonalidad azulada con pH >3,  Al encontrarse en un pH de 8 el núcleo adopta un color fuertemente azulado, por este motivo a este paso se le conoce también como “Azulamiento”.
  15. 15. Agua CorrienteAgua CorrienteCITOPLASMACITOPLASMA NUCLEONUCLEO MembranaCelular–MembranaCelular–MembranaCelular Agua AmoniacalAgua Amoniacal AGUA CORRIENTE  Eliminará el exceso de Agua Amoniacal evitando que las moléculas de Hematoxilina unidas al núcleo sigan virando su color.  La tinción nuclear de la célula habrá terminado con moléculas de Hematoxilina unidas fuertemente al núcleo y citoplasma con abundantes moléculas de agua.
  16. 16. Agua CorrienteAgua CorrienteCITOPLASMACITOPLASMA NUCLEONUCLEO MembranaCelular–MembranaCelular–MembranaCelular OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH Alcohol Etílico al 96%Alcohol Etílico al 96% ALCOHOL ETÍLICO 96%  El Alcohol Etílico al 96% reemplazará el agua extracelular e intracelular debido a que los colorantes posteriores son más solubles en alcohol que en agua.
  17. 17. CITOPLASMACITOPLASMA NUCLEONUCLEO MembranaCelular–MembranaCelular–MembranaCelular OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH Alcohol Etílico al 96%Alcohol Etílico al 96% Queratina Queratina Queratina Queratina Queratina Orange G Orange G Orange G Orange G Orange G Orange G Orange G Orange G Orange G Orange G Orange G Orange G Orange G Orange G Orange G Orange G Orange G Orange G Orange G Orange G Orange GOrange G ORANGE G  Es un colorante monocromático penetra rápidamente en el citoplasma celular y tiñe específicamente la Queratina de un color naranja brillante.  La Queratina normalmente no se encuentra en el citoplasma de las células normales pero aparece en las células epiteliales cérvico vaginales en Carcinomas Queratinizados
  18. 18. CITOPLASMACITOPLASMA NUCLEONUCLEO MembranaCelular–MembranaCelular–MembranaCelular OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH Alcohol Etílico al 96%Alcohol Etílico al 96% Queratina Queratina Queratina Queratina Queratina Orange G Orange G Orange G Orange G Orange G Orange G Orange G Orange G Orange G Orange G Orange G Orange G Orange G Orange G Orange G Orange G Orange G Orange G Orange G Orange G Orange GOrange G ALCOHOL ETÍLICO 96%  El Alcohol Etílico de 96% al ser soluble en Orange G eliminará el exceso de colorante extracelular e intracelular no ligado a la Queratina.  Solo permanecerán en el interior de la célula, las fibras de Queratina (si las existiera) teñidas por el Orange G.
  19. 19. Alcohol Etílico al 96%Alcohol Etílico al 96%CITOPLASMACITOPLASMA NUCLEONUCLEO MembranaCelular–MembranaCelular–MembranaCelular OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH EA-50EA-50 EA-50  La tinción citoplasmática.  EA50 colorante Policromático soluble en alcohol  Comprende 3 colorantes: Eosina + Light Green + Pardo de Bismark
  20. 20. CITOPLASMACITOPLASMA NUCLEONUCLEO MembranaCelular–MembranaCelular–MembranaCelular EA-50EA-50 EA-50  La Eosina teñirá de rosado el citoplasma de las Células Maduras: Superficiales, al unirse electrostáticamente a las proteínas citoplasmáticas exclusivas de células “Metabolicamente Inactivas”
  21. 21. CITOPLASMACITOPLASMA NUCLEONUCLEO MembranaCelular–MembranaCelular–MembranaCelular EA-50EA-50  El Light Green teñirá de verde azulado el citoplasma de las Células Intermedias y Parabasales, al unirse electrostáticamente a las proteínas citoplasmáticas exclusivas de células “Metabolicamente Activas” EA-50
  22. 22. CITOPLASMACITOPLASMA NUCLEONUCLEO MembranaCelular–MembranaCelular–MembranaCelular EA-50EA-50 EA-50  El Pardo de Bismark teñirá de pardo amarillo las Mucinas (compuestos de proteínas y azucares) ubicadas en el citoplasma de las Células Cancerosas propias de Adenocarcinomas.
  23. 23. Alcohol Etílico al 96%Alcohol Etílico al 96%CITOPLASMACITOPLASMA NUCLEONUCLEO MembranaCelular–MembranaCelular–MembranaCelular OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH EA-50EA-50 ALCOHOL ETÍLICO 96%  Los componentes del EA-50 (Eosina – Light Green – Pardo Bismark) al ser solubles en Alcohol Etílico, y si no están ligados a ningún componente proteico citoplasmático serán desplazados de la célula.
  24. 24. CITOPLASMACITOPLASMA NUCLEONUCLEO MembranaCelular–MembranaCelular–MembranaCelular EA-50EA-50 ALCOHOL ETÍLICO 96%  En caso de tratarse de una Célula Superficial: “Metabolicamente Inactiva” en el citoplasma solo se encontrarán proteínas inactivas que serán teñidas por la Eosina adoptando el citoplasma una tonalidad rosada, culminando en este paso la coloración nuclear y citoplasmática
  25. 25. CITOPLASMACITOPLASMA NUCLEONUCLEO MembranaCelular–MembranaCelular–MembranaCelular Alcohol Etílico al 96%Alcohol Etílico al 96% OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH Alcohol Etílico al 96%Alcohol Etílico al 96% OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH ALCOHOL ETÍLICO 96%  Un segundo baño de alcohol etílico asegura la eliminación completa del colorante
  26. 26. CITOPLASMACITOPLASMA NUCLEONUCLEO MembranaCelular–MembranaCelular–MembranaCelular Alcohol Etílico al 96%Alcohol Etílico al 96% OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH Alcohol AbsolutoAlcohol Absoluto OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH ALCOHOL ABSOLUTO  Un primer baño de Alcohol Absoluto busca eliminar el agua intra y extracelular, ya que los posteriores procesos de Aclaramiento y Montaje emplean insumos que nos son miscibles en Agua.
  27. 27. CITOPLASMACITOPLASMA NUCLEONUCLEO MembranaCelular–MembranaCelular–MembranaCelular Alcohol AbsolutoAlcohol Absoluto OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH Alcohol AbsolutoAlcohol Absoluto OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH ALCOHOL ABSOLUTO  Un segundo baño de Alcohol Absoluto asegura la eliminación completa del Agua.
  28. 28. CITOPLASMACITOPLASMA NUCLEONUCLEO MembranaCelular–MembranaCelular–MembranaCelular Alcohol AbsolutoAlcohol Absoluto OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH XilolXilol XILOL  Un primer baño de Xilol al ser misicble con el alcohol, busca su eliminación de los espacios intra y extracelulares, ya que el posterior proceso de Montaje emplean sustancias que nos son miscibles en Alcohol.  El Xilol cambia el Índice de Refracción de la Célula transparentándola y permitiendo una mejor observación de detalles celulares.
  29. 29. CITOPLASMACITOPLASMA NUCLEONUCLEO MembranaCelular–MembranaCelular–MembranaCelular XilolXilolXilolXilol XILOL  Un segundo baño de Xilol asegura la completa eliminación del alcohol y culmina con el proceso de transparentar las estructuras celulares.
  30. 30. MONTAJE  Impide la resequedad y desintegración de las células, preservando la lamina citológica para su archivamiento posterior a la lectura microscópica.  Consiste en la unión de la lamina portaobjeto con la laminilla cubreobjeto mediante una resina lo más transparente posible y cuyo Índice de Refracción sea semejante a la del vidrio.
  31. 31. GRACIAS

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