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Cytometry

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Funcionamiento general de citómetro

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  1. 1. Introduction to Flow Cytometry: A Learning Guide. BD Biosciences, 2002. http://www.bu.edu/flow-cytometry/files/2010/10/BD-Flow-Cytom- Learning-Guide.pdf Recuperado: 19/10/16.
  2. 2. • Identificación de marcadores celulares con anticuerpos. • Fenotipificación por antígenos de superficie. • Detección intracelular de iones o moléculas. • Citometría de bacterias. • Análisis de DNA: ciclo celular, tamaño del genoma y aneuploidías. • Estudios de inducción de apoptosis. Proliferación celular mediante marcaje. • Expresión génica. • Separación (sorting) para: estudios funcionales en subpoblaciones definidas, cultivo de células transfectadas, clonación de células y enriquecimiento celular. http://labnalcit.org/que-es-la-citometria-de-flujo/
  3. 3. • Single cells suspensions (células disgregadas) • Genera mediciones discretas • Provee la distribución de las características.
  4. 4. • Tres partes básicas: Fluídica Óptica Electrónica
  5. 5. • La muestra se inyecta en un sheath fluid • Enfoque hidrodinámico • Pasa por el haz • Solo una partícula pasa frente al laser
  6. 6. Menor flujo: -Más precisión -Muy Tardado. Mayor flujo: -Menos precisión -Rápido.
  7. 7. Sistemas acústicos
  8. 8. • Formados por una fuente, espejos lentes y filtros que dirigen el haz • Se usan láser:(The argon ion laser is commonly used in flow cytometry because the 488-nm light that it emits excites more than one fluorochrome ) -Que emiten longitudes estándar. • Al entrar en contacto con una célula la luz es espaciada (scattered y varias direcciones Foward y Side Scatter)
  9. 9. • Pulsos de Voltaje • Analiza altura, área y la longitud del pulso • Trasfiere los datos
  10. 10. • El fluorocromo interacciona con el láser y emite energía radiante, la luz emitida es de menor energía obteniendo diferencia entre la longitud de onda de absorción y emisión • El uso de fluorocromos se puede detectar hasta 3 colores por láser.
  11. 11. • La muestra a analizar debe encontrarse en suspensión. • Hay muestras como la sangre periférica, médula ósea, o otros fluidos biológicos, que precisan de un mínimo procesamiento; • Otras muestras necesitan disgregación (mecánica, enzimática, etc.)
  12. 12. Referencias. • Introduction to Flow Cytometry: A Learning Guide. BD Biosciences, 2002. http://www.bu.edu/flow-cytometry/files/2010/10/BD-Flow-Cytom-Learning- Guide.pdf Recuperado: 19/10/16 • http://labnalcit.org/ Fecha de consulta:18/10/16, http://labnalcit.org/equipos-2/ • Jacob Frelinger, Thomas B Kepler, Cliburn Chan. Flow: Statistics, visualization and informatics for flow cytometry, Source Code Biol Med. 2008. • [Thermo,Fisher Scientific].(2/10/2012), The Discovery of Acoustic Focusing & the Attune® Flow Cytometer. Recuperado de: https://www.youtube.com/watch?v=b2ilHEnugE0 • [Thermo,Fisher Scientific].(14/04/2011), Attune® Acoustic Focusing Cytometer Tutorial Recuperado de: https://www.youtube.com/watch?v=kpkL2EEJDsU

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