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la culture in vitro d'une cellule animal avec un eemple

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la culture in vitro d'une cellule animal avec un eemple

  1. 1. Université Mohamed-Khaider Biskra Faculté des sciences exactes es des sciences de la nature et de la vie Département des sciences de la nature et de la vie Filière : Biologie Spécialité: Biochimie master 1 Préparée par : Lemsara ibtissam Guercif ilham Lamamra aya Leuli yousra Meddas khaoula Année universitaire :2021 /2022 Dirigé par : Dr ATHAMENA Ahmed Groupe : 07
  2. 2. 1- la culture cellulaire 2-Les techniques d'obtention des cellules. 3- les types des cultures. 4-Les besoins nutritionnels 5-les conditions de culture. 6-les matériels . 7-l'exemple. 8-conclusion. Plan de travaille:
  3. 3. La culture cellulaire est devenue un des outils majeurs utilise aujourd'hui dans les sciences de la vie. Ce guide est conçu pour servir d'introduction basique à la culture de cellules animales. Il convient parfaitement aux personnels de laboratoire qui utilisent cette technique pour la première fois, ainsi qu'à ceux qui collaborent avec les chercheurs en culture cellulaire et qui désirent mieux comprendre les concepts clés et la terminologie de ce domaine passionnant et en pleine expansion. La culture cellulaire ou culture in vitro est un ensemble de techniques qui combinent l’asepsie à un environnement parfaitement contrôlé (milieu défini). Ces méthodes s’appliquent aux plants, aux cellules animales mais aussi aux tissu et bien entendu à des cellules plus ou moins isolées.
  4. 4. Les technique d’obtention des cellules Les cellules organisées en tissu, en cohésion les unes avec les autres. Les cellules libres et circulants ex les cellules du sang Obtention Peuvent être devisée en 2 méthodes : la méthode de dissection  la méthode enzymatique
  5. 5. les types des cultures Culture stationnaire ou monocouche: Ce type de culture est basé sur l’affinité des cellules pour un support . Celui-ci peut être du verre ou du plastique , il peut être recouvert ou non de collagène , de gélatine Culture en suspension: Sont généralement cultivées: Dans des flacons spinner ou dans Erlenmeyers agité dans lesquels les cellules sont activement gardées en suspension dans le milieu
  6. 6. Les conditions de culture la température • La température optimale de croissance est de 37 °C pour les cellules de mammifères et de 27 °C pour les cellules d’insectes PH • Les cellules animales ne tolèrent que de faibles variations de pH et doivent ainsi être cultivées dans un milieu dont le pH reste compris entre 6,5 et 7,8 selon les cellules, la valeur optimale se situant généralement autour de 7,3 OS • L’osmolarité optimale pour la culture de cellules animale est de l’ordre de 300 mOsm . kg-1
  7. 7. Les besoins nutritionnels La partie "nourriture" du milieu de culture est Constituée Ils permettent aux cellules de construire de nouvelles protéines et autres composants essentiels à la croissance et aux fonctions et apportent l'énergie nécessaire au métabolisme Acides amines Vitamines Sel minéraux glucides
  8. 8. Le matériel utilisées Bioréacteur en verre 5l Un post de sécurité(hotte stérile Un Microscope Une centrifugeuse Un bain-marie à 37 ° C
  9. 9. Exemple: Culture de neurones corticaux de rat •Les cultures de cellules neuronales corticales constituent un système modèle important pour l'étude du développement et de la fonction neuronale, la découverte de médicaments et les mécanismes des maladies neurologiques. Ce protocole fournit des instructions étape par étape pour disséquer et cultiver des neurones corticaux à partir de ratons embryonnaires Milieu de culture: .PBS, antibiotique • Cultrex® Poly-D-Lysine • (milieu de base neuronal •Cultrex poly D_lysine •Cultrex® Mouse Laminin I
  10. 10. Expérience Jour 1 Préparer les plaques de culture cellulaire en les enduisant de poly-D- Lysine et de laminine de souris.I Jour 2 Récupérer les embryons de rat. Décapiter. Retirer les cerveaux des têtes et les placer sur de la glace dans du PBS froid. petits ciseaux chirurgicaux Séparez les hémisphères corticaux et jeter le tronc cérébral et le cervelet. éliminer le tronc cérébral et le cervelet
  11. 11. Enlevez les méninges des deux hémisphères et jetez-les. Découpez l'hippocampe en deux hémisphères et le jeter. Couper le tissu cortical isolé. isolé en petits morceaux #5 Pinces fines rejeter hippocampe
  12. 12. Pour les tissus embryonnaires Tissu cortical Transférez le tissu cortical. Triturer délicatement. Centrifuger. Décanter le surnageant. Remettre les cellules en suspension. Centrifuger. Décanter le surnageant. 5 mL chauffés Neuronal de base 5 mL chauffés Neuronal de base Laver les cellules deux fois. Centrifuger. Décanter le surnageant 10ml chauffés neuronal de base
  13. 13. Reconstituer les neurones corticaux avec milieu de culture complet pour neurones corticaux milieux de culture Ensemencer les neurones sur plaques de culture cellulaire revêtues Culture de neurones corticaux pendant la durée souhaitée Changer de milieu tous les 3-4 jours suspension de cellules
  14. 14. On conclure que la culture des cellules animales jouent un grand rôle dans l’étude des mécanismes de la physiologie cellulaire, dans la médicine humaine, et dans l’industrie pharmaceutique. Leur études se faire à l’aide de plusieurs moyennes, comme la microscope de fluorescence.
  15. 15. Merci pour votre attention

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