Dra. María Ortiz
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 La cantidad del material debe ser adecuada.
 La muestra debe ser representativa del
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 También es una tinción diferencial. Se denomina tinción
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 La tinción de Ziehl-Neelsen utiliza tres reactivos. El colorante
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 Agar McConkey
 Agar Nutriente
 Agar Levine
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requeridos por el microorganismo que se ...
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ser expuestos a una fuente de iluminación, la cuál no
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 Presión osmótica: generalmente se trabaja
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 Agar-Agar: Sustancia mucilaginosa que se
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 Estado:
 Medios sólidos: Su proporción de Agar es siempre
por encima del 15%.
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 Medio diferencial para la detección,
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una gran variedad de microorganismos
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 El cultivo de sangre constituye la tecnica mas
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 •Descontamine y anestesie el área de la punción.
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 Se realiza extensiones del sedimento
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 En el Agar sangre y Agar chocolate proliferan
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estéril +/- 2cm dentro de la fosa nasal.
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 •La muestra sea tomada en la mañana al levantarse,
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 •Haga que el paciente se enjuague la boca con
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 •Con ayuda de un nebulizador, haga que el
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 •Colecte el espécimen a través de una
traqueotomía o tubo endotraqueal.
 •Con cuidado pase el catéter de polyetileno a
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 Las extensiones de secreciones purulentas o
granulos de esputo teñidas por los metodos
de Gram o para acidoresistentes.
 Los medios de cultivo mas utilizados para
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 •Coloque la muestra dentro de un envase limpio, con
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 Las muestras se suspenden en caldo y se
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 •Limpie la superficie con solución salina estéril.
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 •La timpanocentesis está reservada para casos
complicados, recurrentes, que no responden a
la antibioterapia y otitis me...
 •Tome muestra de cada ojo con diferentes hisopos
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 Liquido abdominal, ascitico, bilis, sinovial, peritoneal,
pericardico, pleural, paracentesis y toracico :
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 Recepción de la muestra: determinar si la muestra
cumple o no los requisitos de calidad necesarios para
ser procesada.
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 Transporte dentro de la institución: Los recipientes que las
contienen deben ser herméticos y a prueba de fugas de
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 Transporte de una institución a otra:
 El sistema de transporte utilizado es el de triple envase, que
consiste en:
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 En los casos en que el transporte pudieran demorar
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Consiste en la preparación de las muestras, la
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medios de cultivo para su...
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patológico y se deposita en un co...
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 El inóculo es introducido con el asa recta hasta
el fondo del medio con un solo movimiento y
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 El inóculo es introducido con el asa recta hasta el
fondo del medio con un solo movimiento y
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tubo se inclina y el material se extrae del asa por
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 Según la manipulación que efectuemos sobre la
muestra a observar y según los colorantes que
empleemos durante el proceso...
 Es el montaje directo húmedo o examen en fresco: las
muestras se extienden directamente sobre la
superficie de un portao...
 Se utiliza un solo colorante, por lo que todas la
estructuras celulares se tiñen con la misma tonalidad
(Tinta china, Az...
 Se utilizan varios colorantes combinados. Las
estructuras celulares se diferencian en función
de los diferentes colorant...
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  1. 1. Dra. María Ortiz
  2. 2.  El metodo de laboratorio por lo comun comprende el estudio microscopico de materiales que se han obtenido sin teñir y tejidos y la preparacion de cultivos en medios idoneos para la prolifereacion de mecanismos muy diversos.  La muestar obtenia de la manera mas adecuada constituye el elemento mas importantes para el diagnostico de una infeccion por que los resultados de los procedimientos de ese tipo en el caso de enfermedad infecciosas dependen de la selección.
  3. 3.  La cantidad del material debe ser adecuada.  La muestra debe ser representativa del cuadro infeccioso.  Es necesario no contaminar la muestra.  La muestra debe ser llevada inmediatamente al laboratorio.  Contar con mestras significativas.
  4. 4.  Paso 1. Tinción con cristal violeta. Tras su aplicación todos los microorganismos se tiñen de violeta  Paso 2. Fijación con una solución de yodo. Estabiliza el cristal violeta, todas las bacterias en la preparación permanecen de color púrpura o azul.  Paso 3. Extracción con alcohol u otro solvente. Decolora algunas bacterias (las Gram negativas) y no otras (las Gram positivas).  Paso 4. Tinción de contraste con safranina. Las bacterias gram positivas ya están teñidas con cristal violeta y permanecen de color púrpura. Las bacterias gram negativas se tiñen de color rosa.  A continuación la apariencia de las bacterias se observa bajo el microscopio.
  5. 5.  También es una tinción diferencial. Se denomina tinción ácido-alcohol resistente y es específica para una serie de bacterias con estructura de pared particular, las micobacterias. La pared de las micobacterias no está basada en peptidoglicano como las bacterias gram positivas y gram negativas, sino en ácidos micólicos. Esta particularidad las hace resistentes a la decoloración con ácido y alcohol que no se produce en casi ningún otro tipo bacteriano.
  6. 6.  La tinción de Ziehl-Neelsen utiliza tres reactivos. El colorante primario es la fucsina que tiñe toda la preparación de rojo brillante. Como mordiente se utiliza flameado de la preparación con el colorante. La solución decolorante elimina el colorante primario excepto el los bacilos ácido alcohol resistentes. (BAAR). Por último el azul de metileno tiñe de azul el resto de la preparación.  Esta tinción es útil en la detección de bacterias del género Micobacterium en muestras de esputo. La presencia de bacilos rojos sobre fondo azul constituye un diagnóstico casi definitivo de tuberculosis.
  7. 7.  Agar McConkey  Agar Nutriente  Agar Levine  Agar Chapman  Agar Papa Dextrosa  Agar Salmonella-Shigella  Agar Sabouraud  Agar Sangre  Caldo Nutriente
  8. 8.  Para diseñar un medio de cultivo se debe tener en cuenta no sólo los nutrientes requeridos por el microorganismo que se desea estudiar, sino también las condiciones físicas que le permitan crecer, los cuales son:  Nutrientes: La cantidad y naturaleza de los nutrientes en un medio de cultivo viene determinada por el rendimiento de un producto determinado, además de los requerimientos nutricionales del microorganismo.  pH: Un microorganismo puede alterarse o alterar el pH del medio de cultivo como resultado de las sustancias producidas por el propio microorganismo. Estos cambios pueden llegar a inhibir el crecimiento del microorganismo. Estos cambios se pueden prevenir controlando el pH mediante sistemas tampón, el más utilizado en microbiología es la combinación de KH2PO4 y K2HPO4.  Necesidades de gases: los principales gases que afectan al desarrollo microbiano son el O2 y CO2. Las bacterias presentan una respuesta amplia y variable al O2 libre clasificándose en 4 grupos:  Aerobias: bacterias que se desarrollan en presencia de O2 libre  Anaerobias: bacterias que se desarrollan en ausencia de O2 libre.  Anaerobias facultativas: bacterias que se desarrollan en presencia o ausencia de O2 libre.  Microerobias: bacterias que crecen en presencia de pequeñas cantidades de O2 libre
  9. 9.  Suministro de luz: Los organismos fotosintéticos deberán ser expuestos a una fuente de iluminación, la cuál no debe plantear problemas de variación de temperatura, por lo que suelen usarse lámparas fluorescentes con un desprendimiento mínimo de calor.  Control de temperatura: El desarrollo de las bacterias depende de reacciones químicas y la velocidad con que se efectúan, las cuales están influidas por la temperatura, por lo cuál la temperatura puede, en parte, determinar el crecimiento de los microorganismos en estudio. Cada especie microbiana posee una temperatura óptima de crecimiento clasificándose según esto en:  Psicrófilas: capaces de desarrollarse a 0° C o menos. Su temperatura óptima es alrededor de los 15° C.  Mesófilas: crecen mejor entre 25 y 40° C.  Termófilas: crecen mejor entre 45 y 60° C.
  10. 10.  Grado de humedad  Presión osmótica: generalmente se trabaja en condiciones de isofonía (300 miliosmoles), aunque existen bacterias que pueden crecer en concentraciones hipotónicas e hipertónicas  Esterilidad  Protección: El medio de cultivo debe estar protegido de la contaminación microbiana ambiental
  11. 11.  Agar-Agar: Sustancia mucilaginosa que se extrae de algunas algas rojas o Rodofíceas, frecuentes en el Océano Atlántico, Pacífico e Indico. Es una sustancia amorfa. Se emplea como medio de cultivo en bacteriología, como apresto de sedas, como sustituto de la gelatina, etc.
  12. 12.  Químicamente, el Agar-Agar es una mezcla compleja de sales de polisacáridos, fundamentalmente, galactósidos. Las grandes moléculas que lo constituyen determinan sus cualidades sobresalientes, como coloides y espesantes, que lo han hecho hasta ahora insustituible.   Además de los polisacáridos, el Agar-Agar contiene numerosos cationes asociados, tales como sodio, potasio, calcio, magnesio, etc. De los cuales no esta, claramente, establecida su influencia sobre las propiedades de este producto.
  13. 13.  Estado:  Medios sólidos: Su proporción de Agar es siempre por encima del 15%.  Medios semisólidos: Son medios intermedios entre los medios líquidos y sólidos, su proporción de Agar suele ser suele ser inferior al 5%, pero siempre suele presentar cierta cantidad que le proporcione una consistencia semisólida  Medios líquidos o caldos: No contiene Agar y su composición (además de agua) suele contener al menos una fuente de carbono, sales minerales, y a veces según las características de medio, factores de crecimiento, vitaminas, peptonas, aminoácidos, entre otros.
  14. 14.  Medio diferencial para la detección, aislamiento y enumeración de bacterias coniformes y patógenas intestinales en aguas, productos lácteos y muestras biológicas. Su acción diferencial esta basada en que los microorganismos capaces de fermentar lactosa producen una caída de pH, junto con una absorción del colorante, apareciendo en la colonia el color rojo, las colonias de microorganismos que no fermentan la lactosa permanecen incoloras
  15. 15.  Medio para fines generales que promueve el crecimiento de la mayoría de los microorganismos poco exigentes.
  16. 16.  Medio de propósito general para el cultivo de una gran variedad de microorganismos incluyendo los exigentes. Al añadirle sangre, puede utilizarse para la determinación de las reacciones hemolíticas. El medio esta libre de azucares reductores, ya que estos influirían de forma adversa en reacciones hemolíticas.
  17. 17.  Un formato de uso comun es fijar un anticuerpo de captura que sea especifico para el antigeno en cuestion a las paredes del equipo plastico para microdilucion.  Para detectar el antigeno se utiliza un segundo anticuerpo para el marcado con la enzima. Que permite captar el antigeno fijado por medio de una reaccion colorimetrica.
  18. 18.  Estas pruebas se basan en la capacidad de algunos patógenos (p.ej. el virus de la influenza) para causar la aglutinación de los eritrocitos. Pueden utilizarse para detectar el patógeno (pruebas de hemaglutinación) o los anticuerpos dirigidos contra las hemaglutininas del microorganismo (inhibición de la hemaglutinación). Suelen ser pruebas específicas de serotipo o subtipo y bastante sensibles.
  19. 19.  Las pruebas inmunoenzimáticas se basan en una reacción antígeno anticuerpo que tiene lugar sobre un soporte sólido (normalmente una microplaca de plástico) a la que se ha adsorbido un antígeno o un anticuerpo. La prueba puede desarrollarse en diferentes modalidades pero en todas ellas la reacción final se revela mediante un enzima que modifica un substrato que adquiere color. Se trata de pruebas muy sensibles y específicas
  20. 20.  Se mezclan la muestra clínica que alberga al antígeno con el reactivo que contiene a los anticuerpos específicos. Al entrar en contacto los anticuerpos mediante los dos puntos de unión con el antígeno establecen entramados de muchas moléculas de antígeno y de anticuerpos.  Esta aglutinación de partículas antigénicas forma grumos.  Estas técnicas son extraordinariamente rápidas, ofreciendo resultados en 2-10 minutos, pero en general adolecen de buena sensiblidad.
  21. 21.  El pus de los abscesos cerrados no drenados,de tejidos blandos, a menudo contienen solo un microorganismo como agente infectante, muy a menud oestan prsente estafilococos, estreptococs o bacilos entericos gramnegativos.  En abscesos abdominales y los que sueguen en la superficie mucosas y en heridas abiertas ,a menudo se identifican microorganismos multiples.
  22. 22.  •Desinfecte el tapón de caucho del frasco de hemocultivos con alcohol etílico al 70%. No utilice solución de yodo para limpiar el caucho.  •Desinfecte el sitio de la venopunción con alcohol etílico al 70 en círculos concéntricos hacia fuera del sitio elegido. Espere que seque y realice la punción sin palpar de nuevo.  •Coleccione la muestra de sangre a razón de 1-5 ml para niños y 5-10 ml para adultos en cada frasco. El volumen de sangre a cultivar es el factor más importante en la recuperación del microorganismo.
  23. 23.  •Cada frasco debe ser servido con una punción diferente a diferentes horas, a menos que utilice a la vez frascos para organismos aeróbicos y anaeróbicos. No llenar todos los frascos con sangre provenientes de una sola punción.  •No tomar sangre del catéter, a menos que se esté realizando un estudio epidemiológico.
  24. 24.  El cultivo de sangre constituye la tecnica mas importante para detectar infecciones sistemicas bacterianas.  La contaminacion de la muestra por flora cutanea normal, muy a menudo depende de errores en la tecnica de obtencion de la muestra
  25. 25.  Factores para que el cultivo de sangre genere resultados positivos.  El volumen de sangre cultivada.- 5 ml  La dilucion de la sangre.- un medio liquido de cultivo 1:300 1:150  Medios de cultivos para anaerobios y aerobios  Duracion de la incubacion – 5-7 dias.
  26. 26.  La proliferacion del mismo microorganismo en cultivos repetidos d material obtenido en fechas diferentes de sitios anatomicos separados.  La proliferacion de cultivos diferentes en recipietes distintos de cultivo sugiere contaminacion  Proliferacion de la flora bacteriana normal(estreptococo coagulasa negativo) sugiere contaminacion.
  27. 27.  EL ESTUDIO BACTERIOLOGICO DE LA ORINA se practica cuando los signod o sintomas clinicos orientan hacia una infeccion de vias urinarias insifusiencia renal o hipertension .  La orina secretada por el riños, es esteril , la orina vesical no contaminada es esteril, pero la uretra tiene flora normal, que al expulsar la orina en forma normal contiene un numero pequeño de bacterias.
  28. 28.  •Se recomienda recoger la primera orina de la mañana al despertar.  •Lave con abundante agua. Secar.  •Dejar escapar la primera porción de orina y a continuación recoger la muestra directamente en un envase estéril.  •Enviar inmediatamente al laboratorio.  •No utilizar orina de receptáculos.  •NO utilizar orina de pool de 24 horas .  •No solicitar cultivo por anaerobios.  •El frotis directo por Gram de orina de mujeres recolectadas por vaciado directo, no es del todo confiable, ya puede estar contaminado por microorganismos de la flora normal vaginal
  29. 29.  •Limpie la porción del capilar donde se va a tomar la muestra de orina con alcohol etílico al 70 %.  •Inserte la aguja dentro del capilar y colecte la orina dentro de la jeringuilla.  •Transfiera la orina a un envase estéril.  •Enviar inmediatamente al laboratorio. En caso contrario refrigerar la orina.  •La colección de la orina por cateterización uretral tiene algún riesgo de forzar hacia la vejiga, parte de la flora normal uretral durante la inserción del catéter.  •No recoja orina de la bolsa del catéter.  •No desconecte el catéter de su bolsa durante la colección de la muestra.
  30. 30.  •Descontamine y anestesie el área de la punción.  •Introduzca la aguja calibre 22 dentro de la vejiga entre el pubis y el ombligo.  •Aspire alrededor de 20 ml de la vejiga y transfiera la orina asépticamente a un envase estéril o tape la aguja y envíe la jeringuilla.  •Enviar inmediatamente al laboratorio, o refrigerar.  •Esta técnica evita la contaminación de la orina por microorganismos de la uretra o perianales.  •Es útil cuando se sospecha infección por anaerobios, en pacientes pediátricos si hay problema en la colección de la orina, pacientes con trauma en la médula espinal y en general en aquellos en que el método del vaciado directo o cateterización no ha sido posible.  •Indique en la orden médica cuando la orina ha sido colectada por punción suprapúbica
  31. 31.  Una gota de orina recien obtenida no centrifugada, llevada a laminilla y cuebierta con cubreobjetos y examinada con la intensidad restringida de luz con el objetivo seco de alta amplificacion, puede indicar la presencia de leucocitos, celulas epiteliales y bacterias.  la presencia dde bacilos gramnegativos en una muestra de orina no centrifugada de itad de chorroen una extension teñida por metodo de Gram, conlleva diagnostico de infeccion de vias urinarias
  32. 32.  El metodo corriente es inocular 0.001 a 0.05 ml de orina sin diluir en cajas de agar sangre y otros medios solidos, para el cultivo cuantitativo, se incuban durante la noche a 37ºC despues se comparan el numero de microorganismos que proliferaron con fotografias don diferentes ejemplos del mismo parametro en el caso de bacterias similares y así se obtiene datos semicuantitativos.
  33. 33.  •Desinfecte con tintura de yodo al 2%.  •Inserte una aguja con estilete en el interespacio L3-L4, L4-L5 ( niños ) ó L5-S1.  •Coleccione de 1 – 2 ml de LCR en 3 tubos estériles previamente rotulados.
  34. 34.  •Si no logra obtener suficiente líquido, envíe lo colectado al laboratorio de microbiología primero.  •Envíe inmediatamente al laboratorio.  Nunca refrigere el líquido cefalorraquídeo.  •En la requisición con los datos del paciente indique la edad y si ha habido antibioterapia previa.
  35. 35.  Se realiza extensiones del sedimento delliquido cefaloraquideo centrifugado. La extension se tiñe con el metodo Gram  Se observa con el objetivo de inmersion en aceite, se pueden identificar diplococs gramnegativos intracelualres, siplococos gram negativo intracelulares y extracelulares.
  36. 36.  En el Agar sangre y Agar chocolate proliferan casi todas las bacterias y hongos causantes de meninguitis.
  37. 37.  •Inserte un hisopo humedecido con solución salina estéril +/- 2cm dentro de la fosa nasal.  •Rote el hisopo contra la mucosa nasal.  •Envíe al laboratorio  •El cultivo de la fosa nasal anterior, solo está reservado para la detección de portadores de Stafilococcus aureus y/o Estreptococos betahemolíticos o en caso de lesión.  •No refrigere la muestra.  •El cultivo nasal no predice el agente etiológico de infecciones en oído medio o el tracto respiratorio inferior.
  38. 38.  •Lentamente inserte un hisopo de alginato de calcio dentro de la Nasofarínge posterior, vía las fosas nasales. Puede usar un especulo.  •Rote lentamente el hisopo para absorber secreción.  •Inocule en medios de agar sangre y agar chocolate en el sitio o envíe al laboratorio.  •La muestra nasofaríngea es muy útil para detectar portadores de Meningococos o en caso de sospecha de tos ferina.  •El cultivo rutinario de la Nasofarínge no es recomendado.
  39. 39.  •La muestra sea tomada en la mañana al levantarse, bajo supervisión de la enfermera o el médico.  •Haga que el paciente se enjuague la boca con agua antes de expectorar, para remover la flora superficial oral. Si el paciente tiene dentadura postiza, se la debe quitar.  •Instruya al paciente para que tosa con fuerza y profundo, tal que obtenga un esputo que provenga del tracto respiratorio inferior.  •Depositarlo directamente en un envase estéril.
  40. 40.  •Haga que el paciente se enjuague la boca con agua.  •Con ayuda de un nebulizador, haga que el paciente inhale 25 ml de solución salina estéril al 3-10%.  •Colecte el esputo inducido en un envase estéril.
  41. 41.  •Colecte el espécimen a través de una traqueotomía o tubo endotraqueal.  •Con cuidado pase el catéter de polyetileno a través del sitio dentro de la tráquea.  •Aspire el material de la tráquea utilizando una jeringuilla o un succionador intermitente.  •Remueva el catéter y descarte la jeringuilla.  •Envíe al laboratorio.  •No refrigere la muestra.
  42. 42.  Las extensiones de secreciones purulentas o granulos de esputo teñidas por los metodos de Gram o para acidoresistentes.
  43. 43.  Los medios de cultivo mas utilizados para esputo son los adecuados para la proliferacion de bacterias y micobacterias y otros microorganismos.  Tales como Agar sangre, agar chocolate, agar macConkey.
  44. 44.  •Coloque la muestra dentro de un envase limpio, con cierre hermético y no necesariamente estéril.  •No cultive si la muestra es dura o bien formada.  •No se recomienda el uso de Culturette, salvo para infantes y pacientes con diarrea activa. Si lo utiliza, recolecte mas de 2 g de muestra.  •Para estudios por Rotavirus y Cl. difficile, envíe solo muestra diarreica, y no utilice hisopo.
  45. 45.  Las muestras se suspenden en caldo y se cultivan enmedios corrientes y en los diferenciales(como Agarres de MacConkey o chocolate)qu permiten la separacion de bacilos gramnegativos que no fermentan la lactosa respecto de otras bacterias entericas.  En caso de sospechar de salmonelosis se debera colocar en un medio enrriquecido durantes 18 hrs.antes de inocularlo en medios diferenciales(agar shiguella- salmonella)
  46. 46.  •Visualice el cerviz utilizando un especulo sin lubricante.  •Remueva la mucosa y secreción del canal con un hisopo y descártelo.  •Con un nuevo hisopo estéril de alginato de calcio, dacrón o algodón no tóxico, obtenga muestra del canal endocervical.  •Preferiblemente inocule la muestra en un plato de Thayer- Martin y el resto envíelo al laboratorio.  •Con otro hisopo coleccione muestra para colocarla en una placa para frotis.  •Un cultivo anal puede ser colectado para acompañar la muestra cervical cuando se sospecha N.gonorrhoeae, ya que el recto podría ser el único sitio positivo post-tratamiento.  •No refrigere la muestra. Envíe pronto al laboratorio de microbiología. 
  47. 47.  •El cultivo rutinario de secreción vaginal no es apropiado debido a la presencia de alto número de microorganismos saprófitos en el área que hacen difícil la interpretación del cultivo.  •Descarte el exceso de secreciones externas  •Obtenga la secreción de la mucosa vaginal  con un palillo estéril no tóxico o con una pipeta.  •Con otro palillo obtenga muestra y colóquela  en una placa para frotis directo.  Esta placa puede servir también para confirmar  vaginitis bacteriana.
  48. 48. •Limpiar y desbridar la superficie de la quemadura antes de proceder a coleccionar la muestra.  •Una pequeña cantidad de tejido puede ser apropiada para el cultivo.  •Si hay supuración utilice un hisopo.  •Solicite cultivo aerobio solamente.
  49. 49.  •Limpie la piel alrededor del catéter con alcohol etílico al 70%.  •Asépticamente remueva el catéter y corte 5 cm de la punta distal y colóquela en un tubo o envase estéril sin medio de cultivo.  •Transporte inmediatamente al laboratorio para prevenir la desecación.  •Catéteres i.v aceptables para cultivos semicuantitativos son:  Central, periférico, arterial, umbilical.
  50. 50.  •Limpie la superficie con solución salina estéril.  •Tome una muestra de biopsia de tejido o un aspirado con jeringuilla de la lesión.  •Un hisopo no es la mejor escogencia para colectar la muestra, sin embargo, cuando no es posible de otra forma, presione vigorosamente el palillo en la base de la lesión para tomar la muestra.
  51. 51.  •La timpanocentesis está reservada para casos complicados, recurrentes, que no responden a la antibioterapia y otitis media crónica.  •El espécimen de escogencia es un aspirado del tímpano, ya que éste fluido representa el proceso infeccioso, no así la flora del canal externo del oído.  •El hisopo no es recomendado. Solo en caso de rompimiento de tímpano, se puede usar el hisopo para recoger el líquido.Se debe limpiar previamente con un antiséptico el canal del oído externo.  •Indique en la orden médica si se trata de secreción de oído interno, o externo o líquido de timpanocentesis.
  52. 52.  •Tome muestra de cada ojo con diferentes hisopos previamente humedecidos con solución salina estéril, rotando el algodón por la superficie de la conjuntiva.  •Indique en la muestra ,los medios y la orden médica, si es ojo derecho o izquierdo. Sea más específico al describirla: Secreción conjuntival, secreción corneal, secreción acuosa o vítrea  •Inocule directamente en medios de cultivo  •Utilice otro hisopo para colectar muestra para frotis , el cual debe ser inmediatamente colocado en la placa.
  53. 53.  Liquido abdominal, ascitico, bilis, sinovial, peritoneal, pericardico, pleural, paracentesis y toracico :  •Desinfecte el área con tintura de yodo al 2%.  •Obtenga la muestra vía aspiración con aguja percutanea o cirugía.  •Transporte inmediatamente al laboratorio.  •Puede enviar la muestra para cultivo inoculándola en una botella para hemocultivos.  •Siempre envíe una apropiada cantidad de líquido, dependiendo de las pruebas que requiera.  •Nunca envíe la muestra en hisopo. 
  54. 54.  Recepción de la muestra: determinar si la muestra cumple o no los requisitos de calidad necesarios para ser procesada.  Estos requisitos incluyen: la correcta identificación de la muestra, la valoración sobre si existe una cantidad adecuada para el estudio solicitado y la comprobación de las condiciones adecuadas de transporte y conservación. Cada laboratorio debe elaborar y distribuir los criterios de aceptación y rechazo de las muestras.
  55. 55.  Transporte dentro de la institución: Los recipientes que las contienen deben ser herméticos y a prueba de fugas de líquido.  Pueden ser de plástico o de vidrio debidamente identificados, y sin restos de material biológico en la superficie externa del envase.  Toda indicación con el nombre, número de historia clínica, tipo de análisis y/o breve descripción del cuadro clínico, no se debe envolver alrededor del tubo, sino que se coloca por separado preferentemente en bolsas plásticas.  Si el recipiente es un tubo, debe tener cierre hermético con tapa a rosca y se debe colocar en gradillas de manera que conserven su posición vertical.
  56. 56.  Transporte de una institución a otra:  El sistema de transporte utilizado es el de triple envase, que consiste en:  a) Recipiente primario: es un envase resistente al agua, con cierre hermético para evitar cualquier derrame o fuga, que contiene la muestra. Envuelto en material absorbente. Es fundamental que el exterior no esté contaminado con materiales biológicos.  b) Recipiente secundario: es un envase resistente, impermeable, que contiene y protege al recipiente primario. Este embalaje resistente a roturas o perforaciones que dejen escapar el contenido al envoltorio externo.  c) Envoltorio externo: el recipiente secundario se coloca en un envoltorio externo que lo protege a él y a su contenido de influencias externas como daño físico y agua mientras está en tránsito.
  57. 57.  En los casos en que el transporte pudieran demorar  Condiciones de temperatura para algunos tipos de muestras:  •Mantenimiento a 4 °c :  Tejido de autopsia, lavado bronquial, catéter i.v , biopsia de pulmón ,líquido pericardico, esputo, orina., Quemaduras, oído externo.  •Mantenimiento a temperatura ambiente :  LCR, Líquido sinovial,, abdominal y amniótico, bilis, cul- de-sac,aspirado de pulmón, lesión, placenta, nasal, aspirado transtraqueal, orina suprapúbica, raspado corneal, sangre, humor vítreo, médula ósea, cérvix, conjuntiva, genitales, heces, nasofaríngeo, tracto respiratorio superior., heridas, cultivos por anaerobios, ocular, genital, oído interno.
  58. 58. Consiste en la preparación de las muestras, la realización de tinciones, y la inoculación en los medios de cultivo para su posterior incubación. En este proceso es preciso considerar:  a) el tipo de muestra enviada  b) el diagnóstico clínico del paciente  c) la petición solicitada.  El tipo de muestra enviada determina si requiere o no pretratamiento (centrifugación, homogeneización) previo a la inoculación de los medios de cultivo.
  59. 59.  Con el asa ya esterilizada, se toma una gota de líquido o de una emulsión del producto patológico y se deposita en un costado del agar de una placa Petri, se estría a partir de ese punto pasando suavemente el asa en zig-zag por la superficie del agar sin rasparlo, rotar la placa en 1/3 y repetir el procedimiento 2 a 3 veces.
  60. 60.  El cuello del tubo debe ser flameado antes y después de ser sembrado. Con el asa previamente esterilizada a la llama, se toma una pequeña cantidad de la muestra y se lleva al fondo del tubo, luego se estría suavemente la superficie del medio en forma ondulante. Antes de introducir el tubo a la estufa de cultivo, debe dejarse suelto el tapón de goma para evitar que los gases expulsen el tapón.
  61. 61.  El inóculo es introducido con el asa recta hasta el fondo del medio con un solo movimiento y teniendo cuidado en hacer el mismo trayecto de entrada que de salida. Debe flamearse la boca del tubo antes y después de la siembra. Antes de introducir el tubo a la estufa de cultivo debe soltarse el tapón de goma para evitar que los gases expulsen el tapón.
  62. 62.  El inóculo es introducido con el asa recta hasta el fondo del medio con un solo movimiento y teniendo cuidado en hacer el mismo trayecto de entrada que de salida, se retira hacia la superficie inclinada del agar haciendo suavemente una estría ondulada. Debe flamearse la boca del tubo antes y después de la siembra. Antes de introducir el tubo a la estufa de cultivo debe soltarse el tapón de goma para evitar que los gases expulsen el tapón
  63. 63.  Al inocular un medio líquido como es el tioglocolato, el tubo se inclina y el material se extrae del asa por frotamiento contra la pared del tubo, cuando éste se endereza el material se encuentra bajo la superficie del medio.  Al inocular el medio líquido con tórula o con inóculo líquido se deposita este en el fondo del tubo. Debe flamearse la boca del tubo antes y después de efectuada la siembra. Antes de introducir el tubo ala estufa de cultivo debe soltarse el tapón de goma para evitar que los gases expulsen el tapón.
  64. 64.  Según la manipulación que efectuemos sobre la muestra a observar y según los colorantes que empleemos durante el proceso, podemos hablar de diferentes modalidades de tinción.
  65. 65.  Es el montaje directo húmedo o examen en fresco: las muestras se extienden directamente sobre la superficie de un portaobjetos para su observación. Se puede diluirse con igual volumen de solución salina fisiológica estéril. Se deposita suavemente un cubreobjetos sobre la superficie del material.  Este tipo de preparación se emplea para detectar trofozoítos móviles de parásitos intestinales como Giardia, Entamoeba, huevos y quistes de otros parásitos, larvas y gusanos adultos, Trichomonas, hifas de hongos, etc  CANDIDA SP EN UN EX. AL FRESCO
  66. 66.  Se utiliza un solo colorante, por lo que todas la estructuras celulares se tiñen con la misma tonalidad (Tinta china, Azul Metileno de Loeffler, Azul de lactofenol).  El Hidróxido de potasio al 10% (solución de KOH) digiere parcialmente los componentes proteicos(de la célula huésped)pero no actúa sobre los polisacáridos de las paredes celulares de los hongos.La tinta china permite observar células levaduriformes capsuladas (Cryptococcus), sobre todo en LCR.
  67. 67.  Se utilizan varios colorantes combinados. Las estructuras celulares se diferencian en función de los diferentes colorantes que fijan de acuerdo con su propia constitución química.  Los ejemplos clásicos sería la tinción de GRAM o la de Ziehl-Neelsen
  68. 68.

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