TÉCNICA MOLECULAR PARA IDENTIFICAR VIRUS PHV

1. CARTURA HIBRIDA PARA
DIAGNOSTICO DE
VIRUS DE PAPILOMA
SANCHEZ ECHAVARRIA PAULA

2. HISTORIA • En 1917, George Nicholas
Papanicolaou (1883-1962)
• En el año 2008, el médico
alemán Harald zur Hausen
(1936-) recibió el Premio
Nobel de Medicina por el
descubrimiento de VPH
como una causa de cáncer
cervical.

3. PVH
• PVH es una de las
INFECCIONES de transmisión
sexual más comunes.
• Es también la causa principal
de los cambios precancerosos
en el cuello uterino y del
cáncer de cuello uterino.
• Por lo menos 1 de cada 3
mujeres jóvenes sexualmente
activas ha tenido una infección
genital por PVH. Cualquier
persona sexualmente activa,
puede contraer PVH.
ADN VIRAL CAPSIDE PM L1

5. PVH EPITELIAL PVH MUCOSO

6. Historia Natural de la Enfermedad
Carcinoma
invasor
TiempoTiempo AñosAñosMeses
Lesiones intraepiteliales
escamosas de bajo grado
(LIEBG)
Lesiones intraepiteliales
escamosas de alto grado
(LIEAG)
Epitelio
normal
Infección VPH,
coilocitosis
NIC I NIC II NIC III
TamizadoTamizado
TratamientoTratamiento
Infección Persistente VPH
Adaptado de Gravitt PE & Jamshidi R. Infect Dis Clin N Am 2005;19:439-58

8. DESANATURALIZACION DEL ADN
SE LLEVA A CABO LA LISIS DE LAS
CELULAS PARA LIBERAR Y
DESNATURALIZAR LA DOBLE CADENA
DE ADN DE LAS CELULAS CERVICALES
DE LA MUESTRA.
•SE AGREGA BUFFER.
•SE LLEVA AL VORTEX.
•BAÑO MARIA 65° 45’

9. HIBRIDIZACION
LA SONDA DE ARN
COMPLEMENTARIA SE UNE A
LA CADENA EXPUESTA DEL
ADN DEL PVH Mx. FORMA
HIBRIDOS ARN-ADN
•SE AGREGA EL RVO CON LA
SONDA
•SE LLEVA A LA MICROPLACA
DE HIBRIDACION A 65° 60’

10. CAPTURA
EN LA FASE SOLIDA O MICRO
PLACA SE UNEN LOS Ac
ESPECIFICOS PARA EL HIBRIDO,
CAPTURANDOLOS.
•SE DISPENSA EL HIBRIDO EN
LA MICRO PLACA
•SE LLEVA EL ROTADOR 60’
1100 RPM.
•SE ELIMINAN LOS
INESPECIFICOS.

11. DETECCION
SE AGREGA EL CONJUGADO DE Ac +
FA. PARA AMPLIFICAR
SIGNIFICATIVAMENTE LA SEÑAL.
PARA DETECTAR MINIMAS
CANTIDADES DE ADN VIRAL.
•RVO 1 Ac + FC
•INCUBACION 30’ A 25°
•SE REALIZA MICRO LAVADO
PARA ELIMINAR EL EXCESO DE
Ac

12. DETECCION DE LA SEÑAL
EN EL LUMINOMETRO SE
CUANTIFICA EL ADN VIRAL.
•SE AGREGA LA SLN
QUIMIOLUMINISCENTE QUE
SE UNE A LOS HIBRIDOS
CAPTURADOS CUBIERTOS
CON ANTICUERPOS
MARCADOS CON FA
PRODUCEN EMISION DE LUZ
QUE ES MEDIDA.

13. LECTURA E INTERPRETACION
SE OBTIENE UN COCIENTE
UNIDADES DE LUZ
RELATIVA SOBRE EL
VALOR DE CORTE.
•>1 POSITIVO
•<1 NEGATIVO.
+ PRESENCIA DE PHV AR
-NO PVH AR EN CANT.
DETECTABLES.

14. CONCLUSIONES
VENTAJAS
• ES UNA PRUEBA MUY SENCIBLE Y
ESPECIFICA PARA SEPARAR PVH
AR DE PVH DE BR.
• TIENE UN ALTO VALOR
PREDICTIVO.
• EVIDENCIA LA PRESENCIA DE
PVH.
• SU APLICACIÓN ESTA
RELACIONADA AL DESARROLLO
DE VACUNA MAS ESPECIFICA.
DESVENTAJAS
• ES MAS COSTOSA QUE EL
PAP.
• NO TIENE UTILIDAD
TERAPEUTICA.

15. GRACIAS