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  1. 1. FACULTAD DE INGENIERÍA MARÍTIMA Y CIENCIAS DEL MAR FICHA DE LA PRÁCTICA PARA LABORATORIO FMAR03749 Hoja 1 de 5 CÓDIGO MATERIA Microbiología FMAR03749 NOMBRE David Quiñonez Acosta PARALELO 1 TEMA DE LA PRÁCTICA Diluciones seriadas OBJETIVOS GENERALES:  Cultivo microbiano con método de diluciones seriadas.  Preparar cultivo de bacterias con muestra de sedimento y agua.  Conocer propiedades del agar cetrimide y mueller hinton. INTRODUCCIÓN: Diluciones seriadas: Técnica que consiste en obtener una suspensión de la mezcla de microorganismos y hacer diluciones seriadas que se vierten en una placa Petri hasta conseguir colonias aisladas. (Valera, 2015) Ci = N x D x 10 Ci = Concentración inicial (unidades: número de células / ml) N = nº de colonias D = dilución Fig1. Ilustración del método de diluciones seriadas que usaremos en la práctica.
  2. 2. FACULTAD DE INGENIERÍA MARÍTIMA Y CIENCIAS DEL MAR FICHA DE LA PRÁCTICA PARA LABORATORIO FMAR03749 Hoja 2 de 5 Agar Cetrimide Malder Hilton: Se utilizaparael aislamientoselectivode Pseudomonasaeruginosaapartir de muestras clínicas. (BD, 2013) Agar Mueller hinton: Este medio de cultivo ha sido recomendado universalmente para la prueba de sensibilidad a los antimicrobianos. Además es útil con el agregado de sangre para el cultivo y aislamiento de microorganismos nutricionalmente exigentes. (britanialab, 2015) EQUIPOS Y MATERIALES:  Caja Petri  Pipeta de Pasteur  Matraz  Medios de agar (cetrimide y mueller hinton)  Mecheros Fisher  H2O  Sedimentos(lodo, tierra)  Guantes  Parrilla de calentamiento PROCEDIMIENTO: 1. Identificamosyprepararnosel tipode agara utilizar (Cetrimide yMuellerHinton) para la preparación de mediosde cultivo,mediante unaestufade calentamientoprocurandoque no sobrepase los 40°C-45°C esta estimaciónse lo realizocolocandolafiola(caliente)enla parte anterior de lo muñeco (soportando el calor que se produce) moviendo continuamente el matroz. 2. En los tubos de ensayo ya preparados previamente con agua destilada 9ml en cada uno, se procede a colocar 1ml de agua (de grifo) en el primer tubo de ensayo, al cual lo rotularemos como 10° este procedimiento se lo hace preferiblemente lo más cerca del mechero para evitar el mayor grado de contaminación posible. 3. Esta muestra se la denominara como muestra madre, de lo cual tomaremos 1ml y se lo añadimos al siguiente tubo, esto dilución tendrá una concentración de 101 . 4. Continuamoscon el procedimiento anterior hasta (lograr una concentración de 103 esto con la muestra de agua de grifo. 5. Para el sedimento, en un mortero se colocó una pequeña muestro de lodo paro su continuo maceramientode lotexturay evitar que pueda obstruir lo punta de la pipeta al momento de colocarlo en uno dilución de aguo destilada, esto dilución serio considerada como el tubo madre. 6. A continuación se realizó el mismo procedimiento que se utilizó con el aguo de grifo y se procede a preparar el medio agar en el que serán cultivados. 7. Para lapreparacióndel medio agarse coloca en las cajasPetri la solución de malder Hilton previamente esterilizado en autoclave. Estos medios son colocados cerco del mechero para evitar contaminación y
  3. 3. FACULTAD DE INGENIERÍA MARÍTIMA Y CIENCIAS DEL MAR FICHA DE LA PRÁCTICA PARA LABORATORIO FMAR03749 Hoja 3 de 5 entradade microorganismospresentesenel aire.Unavezsolidificadosel agarenlo caja Petri,se procede a colocar las muestras 3 para las primeros diluciones agua y 3 para las diluciones con sedimento. 8. Se homogenizalasmuestraspormedio del hazade cristal previamente esterilizadocon etanol al 70%, se las cierra cuidadosamente, se las rótula con cada uno de sus concentraciones y se las coloca en la incubadora a 26.5° C y se les dejo reposar por 24 horas. 9. Uno veztranscurridolos24 horas se procede a cuantificar las colonias de microorganismos encontradas en el medio. ANEXO: Fig2.-Materiales que utilizaremos para la practica.
  4. 4. FACULTAD DE INGENIERÍA MARÍTIMA Y CIENCIAS DEL MAR FICHA DE LA PRÁCTICA PARA LABORATORIO FMAR03749 Hoja 4 de 5 Fig3.-preparcacion de tubo con cada una muestra madre (agua y sedimentos), y cajas Petri con el agar. Fig4.- incubación de las muestras con las diluciones seriadas.
  5. 5. FACULTAD DE INGENIERÍA MARÍTIMA Y CIENCIAS DEL MAR FICHA DE LA PRÁCTICA PARA LABORATORIO FMAR03749 Hoja 5 de 5 Fig5.- Muestras ya cultivadas de agua y sedimentos. Observaciones:  Al momento de comenzar hacer las diluciones tener en cuenta que de cada una se saca un 1ml y se le agrega a la otra y así sucesivamente.  Recordar que cuando pongamos el caldo de cultivo en la caja Petri no rebosar esta.  Macerar bien el sedimento ya que si este sigue grumoso puede taponar la pipeta.  Rotular las cajas Petri para diferenciar de la muestra con agua y sedimento. Conclusión:  Se aprendió como hacer diluciones seriadas.  Las diluciones seriadas siempre tienen una muestra madre de la cual se extraerá una pequeña porción para colocar a otra y de esa a otra y así sucesivamente.  Se utilizó otro caldo nutritivo el cual tiene propiedades específicas para las muestras que trabajamos. Bibliografía BD. (Abril de 2013). https://www.bd.com. Obtenido de https://www.bd.com: https://www.bd.com/resource.aspx?IDX=8794 britanialab. (11 de Junio de 2015). http://www.britanialab.com.ar. Obtenido de http://www.britanialab.com.ar: http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/muellerhintonagar.htm Valera, D. F. (2015). http://egg.umh.es/. Obtenido de http://egg.umh.es/: http://egg.umh.es/frvalera/manualDePracticas.pdf

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