Clonacinytransgnesisanimal2006
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Este documento describe los procesos de clonación y creación de animales transgénicos. La clonación se basa en el trasplante nuclear de células somáticas a ovocitos enucleados para producir embriones genéticamente idénticos. Se han clonado con éxito ovejas, vacas, cerdos, cabras y primates. Los animales transgénicos tienen ADN foráneo insertado en su genoma a través de la microinyección de embriones o la transferencia nuclear de células modificadas genéticamente.
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- 2. Clonación Referencias Aplicaciones Animales transgénicos Agrobiotecnología Animales transgénicos Sumario Clonación en distintas especies
- 4. • En los animales, la clonación se basa en el uso de la técnica de transplante nuclear. • Mediante esta técnica, una célula donante . del individuo a clonar se transfiere a un . ovocito previamente enucleado. TRANSPLANTE NUCLEAR La clonación consiste en la producción de individuos genéticamente idénticos Agrobiotecnología Animales transgénicos ovocito embrión sintético célula donante Enucleación Electrofusión
- 5. Para la clonación de bovinos suele partirse de células fetales como donantes del material genético. Los ovocitos pueden provenir de animales sacrificados para consumo ya que sólo aportan el ADN mitocondrial. El embrión obtenido en cultivo debe ser luego transferido a una hembra receptora para completar su desarrollo. Clonación reproductiva de bovinos
- 6. Células donantes • Células fetales - La vida media es de 35 divisiones celulares. Ello permite su manipulación genética. - La tasa de divisiones de 1,3 divisiones por día. - Son muy sensibles a la inhibición por contacto. - Se desarrollan en mayor proporción. • Células adultas - La vida media es de 20 divisiones celulares. - La tasa de divisiones de 0,8 divisiones por día. - Son muy sensibles a la inhibición por contacto. - Se desarrollan en menor proporción. cortar el tejido explanto
- 7. OVOCITOS MADUROSOVOCITOS INMADUROS • Los ovocitos obtenidos de ovarios de animales sacrificados para consumo deben ser madurados in vitro. • La maduración consiste en el avance de la división meiótica hasta la metafase II. • En este estadío se observa la extrusión del primer cuerpo polar. Ovocito recipiente Agrobiotecnología Animales transgénicos Expansión de las células del cúmulus 24 hs Primer cuerpo polar
- 8. Para implementar la técnica de transplante nuclear se requiere disponer de micromanipuladores y de un microscopio con accesorios para visualizar fluorescencia. Gentileza de Biosidus S.A. Transplante nuclear Agrobiotecnología Animales transgénicos
- 9. Gentileza de Biosidus S.A. Transplante nuclear Ovocito en MII Enucleación Célula donante Transplante nuclear
- 10. Gentileza de Biosidus S.A. Fusión celular
- 12. Aplicaciones de la clonación Agrobiotecnología Animales transgénicos • La clonación reproductiva tiene distintas aplicaciones en biotecnología animal. - Clonado con fines agropecuarios - Clonado de animales de zoológicos y mascotas - Clonado para introducir modificaciones genéticas • La clonación terapéutica se aplica en medicina humana.
- 13. Clonación en distintas especies Agrobiotecnología Animales transgénicos
- 14. Clonación en ovinos El primer mamífero clonado a partir de una célula somática fue una oveja, la ahora mundialmente conocida Dolly. Tomado de: http://www.roslin.ac.uk/imagelibrary/
- 15. Tomado de: Hill et al., Biol. Reprod., 2000. Uno de los primeros bovinos clonados fue “Second chance” Clonación de bovinos Agrobiotecnología Animales transgénicos
- 16. “Pampa” fue la primera ternera nacida por clonación a partir de fibroblastos fetales en Argentina Clonación de bovinos Agrobiotecnología Animales transgénicos Gentileza de Biosidus S.A.
- 17. A pesar de que su dueño invirtió más de 3 millones de dólares en ello, “Missy” murió en 2002 sin haber sido clonada. Clonación de mascotas http://www.missyplicity.com Agrobiotecnología Animales transgénicos
- 18. Clonación de mascotas Agrobiotecnología Animales transgénicos http://www.savingsandclone.com/clients/our_latest_clones.html Clon de Little Gizmo Clon de Rainbow Clon de Peaches
- 19. Tomado de: Poleiaeva et al., Nature, 2000. Cerdos clonados obtenidos por transferencia nuclear de células somáticas de un animal adulto El clonado de cerdos requirió modificar la técnica habitual de transplante nuclear.
- 20. Tomado de: Meng et al., Biol. Reprod.,1997. Clonación de primates Agrobiotecnología Animales transgénicos ”Neti” y “Ditto”
- 21. • La clonación reproductiva carece de justificación médica. • Su aplicación masiva es totalmente improbable en las condiciones actuales ¿Clonación de humanos? Agrobiotecnología Animales transgénicos
- 22. Clonación terapéutica • La denominada clonación terapéutica permite generar tejidos de reemplazo a partir de células del paciente. Ovocito (donado) Tejido normal (ej. fibroblastos) Transplante nuclear Embrión (?) sintético Células embrionarias (pluri o totipotenciales) Factores de crecimiento Matriz extracelular Células precursoras del tejido dañado Autotransplante
- 24. • Un animal transgénico es aquel que tiene una porción de ADN foráneo en su genoma. Animales transgénicos Agrobiotecnología Animales transgénicos Hembra superovuladaMacho fértil X Inyección con ADN foráneo Promotor Colecta de embriones Implantación de los embriones en hembras seudopreñadas Extracción del ADN y detección de la presencia del transgen Crías Hembra superovuladaMacho fértil X Inyección con ADN foráneo Promotor Colecta de embriones Implantación de los embriones en hembras seudopreñadas Extracción del ADN y detección de la presencia del transgen Crías - Los primeros animales transgénicos producidos fueron ratones, obtenidos mediante microinyección de cigotas
- 25. Elementos requeridos en una construcción genética Agrobiotecnología Animales transgénicos exones ADN copia Promotor original del gen a expresar ADN genómico intrones ARN mensajero intrónPromotor regulable o tejido específico Gen recombinante
- 26. Agrobiotecnología Animales transgénicos La técnica de microinyección de cigotas resulta muy poco eficiente en bovinos Microinyección de cigotas bovinos Eficiencia en la producción de animales Transgénicos por microinyección Eficiencia en la producción de animales Transgénicos por microinyección Cigotas microinyectadas 2.800 Sobreviven la microinyección 2.500 Embriones transferidos a receptoras 250 Preñeces 50 Terneros transgénicos 1
- 27. La introducción de genes por transfección y posterior selección de células totipotenciales permite producir animales transgénicos con muy alta eficiencia. Agrobiotecnología Animales transgénicos Clonación y transgénesis Gentileza de Biosidus S.A.