Este documento describe un seminario sobre la esferocitosis hereditaria. Se define la enfermedad y se explican sus características clínicas, diagnóstico y tratamiento. También se detallan las técnicas de laboratorio para diagnosticar esta patología, como la prueba de resistencia osmótica de los glóbulos rojos y la autohemólisis, las cuales permiten evaluar la fragilidad de las membranas eritrocitarias.

1. Universidad de Concepción
Facultad de Medicina
Carrera de Tecnología Médica
Mención Bioanálisis Clínico, Hematología y Banco de Sangre
Seminario Teórico-Práctico

2. 1. Definición y Clasificación de las Anemias Hemolíticas
2. Características de la Esferocitosis hereditaria:
a) Fisiopatología
b) Sintomatología
c) Diagnóstico
d) Tratamiento
3. Describir las distintas técnicas de laboratorio para el diagnóstico de la
Esferocitosis Hereditaria y otras patologías.
4. Explicar algunas observaciones y factores de error de las técnicas
utilizadas para el diagnóstico de la Esferocitosis Hereditaria.
5. Referirse brevemente a sobre la prueba de la Autohemólisis

3.  “Se refiere a anemia cuando la Concentración
de Hb está por debajo de los valores normales, es
un síntoma y no una enfermedad definida”
 Hombre < 13 g/dl
 Mujer < 12 g/dl
Embarazadas < 11 g/dl
Síntomas
 Disnea (esfuerzo, reposo)
 Fatiga
 Taquicardia, palpitaciones
 Calambres
 Vértigo, mareos
 Síncope
Valoración:
Historia Clínica Examen Físico Hemograma
Palomo, Iván; Pereira, Jaime; Palma, Julia; “Hematologia, Fisiopatología y
Diagnostico”, Pág..106, Editorial Universidad de Talca, Universidad de Talca, 2005

4. Anemia
Morfológica Etiopatogenia
Microcítica Regenerativa Arregenerativa
Alteración del
Normocítica Hemolíticas Hemorrágicas microambiente
Celular
Intra- Déficit
Macrocítica
Corpusculares Carenciales
Extra- Alteración de los
precursores
corpusculares medulares

5.  Anemia Normocítica Normocrómica
 Congénita o Adquirida
 La anemia es producida por un numero disminuido de
eritrocitos, esto debido a su destrucción prematura
La destrucción prematura de los eritrocitos
desencadena un aumento de eritropoyesis en medula
ósea, la cual al ser insuficiente genera la anemia hemolítica

6.  Clínica Etiología
◦ Agudas
◦ Crónicas
Extra
Corpusculares
Corpusculares
 Fisiopatología
◦ Intravasculares
◦ Extravasculares Alteraciones de
Mecánica
la membrana
 Genética
Anemia
◦ Hereditaria hemolítica
Hemoglobinopatías
◦ Adqurida inmune
Anemia
Deficiencias hemolitica no
enzimáticas inmune

7.  Corresponde a una anemia hemolítica crónica intracorpuscular
donde se ve alterada la membrana del eritrocito perdiendo su
bicóncavidad y adquiriendo forma esferocitica. Estos esferocitos
son mas susceptibles a la hemólisis.
 El método diagnostico fundamental de esta anemia lo
constituyen el test de resistencia osmótica y la prueba de
autohemólisis, los cuales son de realización relativamente sencilla
y de bajo costo.

8. Responsable de las propiedades mecánicas y funciones fisiológicas del eritrocito.
 Formada por:
◦ Bicapa Lipídica: Relativamente impermeable al paso de moléculas hidrosolubles
◦ Proteínas
 Integrales: mantiene fluidez
 Periféricas: estabilidad y las propiedades viscoelásticas de la membrana
◦ Hidratos de Carbono
 Forman los glucolípidos. Interacción de la célula con el medio

9.  Función:
1. Transporte de moléculas especificas
2. Catálisis de reacciones asociadas a membrana
3. Unión de membrana a citoesqueleto
4. Recepción y transducción de señales
 Clasificación:
Periféricas Integrales
• Estabilidad • Fluidez
• Viscoelasticidad

10. Bomba Na/K
Glicoforinas GLUT-1 Banda 3
ATPasa
• Determinación • Regulación • Transporte de • Más Abundante
de grupos concentración glucosa • Regulación
sanguíneos Na/K iones Cl – y
• Estabilidad a la • Mantención HCO3-
Membrana Potencial • Fija el
• Participa en el Eléctrico Citoesqueleto a
intercambio la membrana
iónico Lipídica

11. Actina Banda 4,1 Banda 4,9 Aducina Tropomiosina
 Espectrina (SP):
◦ Dos subunidades α y β
◦ Proteína mas abundante
del citoesqueleto,
◦ Interacciona con la Banda
4,1 la actina y la Ankirina
◦ Enrejado proteíco
 Ankirina (ANK):
◦ Anclaje del Citoesqueleto
a la bícapa lipídica
◦ Banda 3.
 Interacciones verticales Fijan el citoesqueleto a la bícapa Lipídica
 Esferocitosis Hereditaria
 Interacciones horizontales son responsable de la estabilidad global del citoesqueleto
 Eliptocitosis Hereditaria

12. Proteínas alteradas
Sp+ Ankirina (20- Otras proteínas
Espectrina (30%) Banda 3 (20%)
45%) (5%)
Fisiopatología
Disminución Pérdida de Forma Disminución Amento Aumento de
S/V bicóncavidad esférica Flexibilidad Rigidez la Eritrostasis

13.  La EH es la anemia hemolítica más
frecuente en el mundo y se ha señalado
una prevalencia de 1:2000 en algunos
países.
 El 75 % de las familias afectadas muestran
un patrón autosómico dominante. El 25%
patrón autosómico recesivo o nuevas
mutaciones.
 Homocigoto incompatible con la vida
 Mayor Frecuencia en individuos de Raza
Blanca
 No se consideran los portadores
asintomáticos.
Palomo, Iván; Pereira, Jaime; Palma, Julia; “Hematologia, Fisiopatología y Diagnostico”,
Pág..186, Editorial Universidad de Talca, Universidad de Talca, 2005

14. De acuerdo a severidad del cuadro clínico, cifras de hemoglobina, nivel de bilirrubina y conteo
de reticulocitos
Portador
EH Ligera EH Típica EH Severa
asintomático
• Autosómica • 20-30% de • 50-60% de • 5-10% de
Recesiva prevalencia prevalencia prevalencia
• Autosómica • Hemólisis severa y
• Padres no • Autosómica dominante requieren
presentan dominante • Hemolisis transfusión
alteración compensada • Autosómica
• Hemólisis ligera incompleta recesiva
• Ligero incremento compensada • Anemia ligera o • Crisis
Reticulocitos moderada aplásica, retardo
• Ictericia del crecimiento y
• Asintomáticos de
• Esplenomegalia en maduración sexual
• F.O alterada difícil diagnóstico
más del 50% de • Ictericia marcada
los casos • Esplenoctomía
• Anemia y
• Transfusiones como tratamiento
esplenomegalia
esporádicas de elección
ligera o ausente

15. Parámetro Característica
Frotis Policromatofilia
Rcto reticulocitos Aumentado
Ex médula ósea Hiperplasia
eritroide
Bilirrubina Aum no conjugada
Hb libre Aum +
LDH Aum +
Haptoglobina Dism o ausente
Anemias regenerativas anemias hemolíticas. Dr. Fernando ibieta A.

16.  Hemograma y Frotis sanguíneo
◦ VCM Normal o Bajo
◦ CHCM aumentado
◦ RDW aumentado
◦ Reticulocitosis
◦ Policromatofília
◦ Poiquilocitosis
◦ ESFEROCITOS EN SANGRE PERIFÉRICA +
ESTUDIO FAMILIAR

17. Diagnostico
 Historia clínica
 Estudio sanguíneo
 Resistencia Globular osmótica
 Autohemólisis
Variedades ligeras y portadores asintomáticos de EH no requieren tratamiento
La esplenectomía es el tratamiento estándar en los pacientes con hemólisis sintomática;
con esto se corrige la anemia y la hemólisis. (aun se mantiene el defecto básico,
encontrándose esferocitos)
Transfusiones
Recibir 1 mg/dia de acido fólico

18. Procedimiento de Laboratorio

19. Función
Medición de la resistencia de los eritrocitos Demostrar la disminución de la resistencia
a la hemólisis frente a tensión osmótica. osmótica en los esferocitos
 Resistencia:
1. Relación Superficie/Volumen de los GR
2. Características de la Membrana
 Rigidez y flexibilidad
 Permeabilidad Iónica
Eritrocito Esferocitos
Bicóncavidad Presente Ausente
Volumen 82-98 fl (N) o ↓
Superficie 120-140 um2 ↓↓↓
Rigidez Normal Aumentada
Flexibilidad Normal Disminuida
Permeabilidad al Na Normal Aumentada

20.  Fundamento:
◦ Medición espectrofotométrica de
Disminución Concentración NaCl la Hemoglobina Liberada tras lisis
de los eritrocitos incubados en
soluciones de concentración de
↑ Hipotonicidad NaCl decrecientes.
↑ Absorción de agua por el GR
Aumento de la Turgencia
Resistencia
Lisis eritrocitaria
Osmótica
Eritrocito puede aumentar hasta un 70% su volumen sin romperse

21. Normal
0,85% 0,50% 0,10%
NaCl NaCl NaCl
Biconcavidad: Mayor Superficie, Aumento hasta el 70% del volumen eritrocitarios
Normalidad: Lisis a Concentración 0,50% de NaCl
Aumento de la Fragilidad osmótica (Esferocitosis Hereditaria)
0,85% 0,65% 0,10%
NaCl NaCl NaCl
Mayor rigidez superficial, menor relación S/V Menor influjo volumen de Agua para alcanzar la lisis
Lisis Precoz : 0,65% de NaCl

22.  Materiales:
1. Sangre desfibrinada o con Heparina Sódica
2. Reactivo NaCl (1%)
3. Agua destilada
4. Pipetas varias y propipetas
5. 12 Tubos de vidrio limpios( >10 ml)
6. Centrífuga
7. Gradilla
8. Guantes (S,M,L)
9. Timer
10. Lápiz Marcador indeleble

23. NaCl 90 g.
Fosfato de Sódio Monobásico (PO4H2Na) x 2H2O 2,43 g.
Fosfato de Sódio Dibásico (PO4H2Na2) 13,65 g.
Agua destilada 1000 mL
10 mL de la solución Stock y enrazar
en matraz aforado de 100 mL
Almacenamiento a 4°C

24. TUBO NaCl Solución 1,0% Agua destilada
1 0,85% 8,5 ml 1,5 ml
2 0,75% 7,5 ml 2,5 ml
3 0,65% 6,5 ml 3,5 ml
4 0,60% 6,0 ml 4,0 ml
5 0,55% 5,5 ml 4,5 ml
6 0,50% 5,0 ml 5,0 ml
7 0,45% 4,5 ml 5,5 ml
8 0,40% 4,0 ml 6,0 ml
9 0,35% 3,5 ml 6,5 ml
10 0,30% 3,0 ml 7,0 ml
11 0,20% 2,0 ml 8,0 ml
12 0,10% 1,0 ml 9,0 ml

25.  Procedimiento 1:  Procedimiento 2:
1. Mezclar adecuadamente las 1. Pesar 0,10 g de NaCl y llevarlo a
soluciones preparadas mediante un volúmen final de 100 mL (0,10
inversión %).
2. Agregar a cada tubo una gota de 2. Preparar de la misma forma las
sangre total usando siempre la concentraciones necesarias
misma pipeta. (0,20%- 0,30% - 0,35%, etc.)
3. Mezclar Bien 3. Tomar los 12 tubos y agregar a
4. Dejar reposar 30 minutos a cada uno en orden decreciente 5
Temperatura ambiente mL de las concentraciones de NaCl
5. Volver a mezclar por inversion 4. Agregar a cada tubo una gota de
6. Centrifugar 10 minutos a 2000 sangre total siempre con la misma
r.p.m pipeta
7. Obtener el sobrenadante y leer 5. Seguir el Procedimiento 1.
espectrofotométricamente a 540
nm utilizando como blanco el tubo
de 0,85%
8. Realizar cálculos correspondientes
y curva con los valores obtenidos.
Se recomienda hacer paralelamente con una muestra normal

26. Solución Agua
Tubo NaCl (%) Absorbancia % Hemólisis
1,0% (ml) destilada
1 0,85 8,5 1,5 ml 0 0,00
2 0,75 7,5 2,5 ml 0,003 0,43
3 0,65 6,5 3,5 ml 0,002 0,29
4 0,60 6 4,0 ml 0,006 0,87
5 0,55 5,5 4,5 ml 0,008 1,16
6 0,50 5 5,0 ml 0,032 4,62
7 0,45 4,5 5,5 ml 0,212 30,64
8 0,40 4 6,0 ml 0,432 62,43
9 0,35 3,5 6,5 ml 0,591 85,40
10 0,30 3 7,0 ml 0,687 99,28
11 0,20 2 8,0 ml 0,682 98,55
12 0,10 1 9,0 ml 0,692 100,00
Valores Normales
o NaCl 0,85% = 0% de Hemólisis
oNaCl 0,50% = ≤6% de Hemólisis
oH2O destilada= 100% de Hemólisis

27.  Tabla 1: 12 puntos
110.00
100.00
90.00
80.00
70.00
Hemólisis (%)
60.00
50.00
40.00
30.00
20.00
10.00
0.00
1.00 0.95 0.90 0.85 0.80 0.75 0.70 0.65 0.60 0.55 0.50 0.45 0.40 0.35 0.30 0.25 0.20 0.15 0.10 0.05
Cocentración NaCl (%)

28. Solución Agua %
TUBO NaCl (1%) Absorbancia
1,0% (ml) destilada Hemólisis
1 0,85 8,5 1,5 ml 0 0,00
4 0,60 6 4,0 ml 0,004 0,63
6 0,50 5 5,0 ml 0,028 4,43
9 0,35 3,5 6,5 ml 0,573 90,66
12 0,10 1 9,0 ml 0,632 100,00
Valores Normales
o NaCl 0,85% = 0% de Hemólisis
oNaCl 0,50% = ≤6% de Hemólisis
oH2O destilada= 100% de Hemólisis

29.  Tabla 2: 5 puntos
110.00
100.00
90.00
80.00
Hemólisis (%)
70.00
60.00
50.00
40.00
30.00
20.00
10.00
0.00
0.90 0.85 0.80 0.75 0.70 0.65 0.60 0.55 0.50 0.45 0.40 0.35 0.30 0.25 0.20 0.15 0.10 0.05
Concentración NaCl (%)

30. A  Talasemia
◦ ↓ RO . La gran >↑ R.O
B  Resistencia osmótica Normal
C Esferocitosis Hereditaria
 Deficiencia de fierro  Enzimopatías
 Ictericia Obstructiva  Esplenomegalia
 B –Talasemias Heterocigotos  Anemia microangiopática
Hematología: fundamentos y aplicaciones clínicas. Bernadette F. Rodak

31.  La Técnica requiere un mínimo equipamiento.
 La cantidad de sangre depositada debe ser siempre la misma (1 gota) y siempre
realizarla con la misma pipeta.
 El volumen de solución salina debe ser lo más exacto posible.
 De acuerdo a la cantidad de sangre se pueden realizar diluciones
 La Lectura debe ser cuidadosa
 Prevenir la agitación del tubo post-centrifugación
 Carencia de fierro e Ictero Obstructivo
◦ Carencia de fierro: normaliza la Fragilidad Anormal y la forma de los esferocitos pero
no mejora la sobrevida de estos
◦ Ictero obstructivo: Desaparece la Esferocitosis por acumulación de colesterol y
fosfolípidos en la membrana
 El aumento de los reticulocitos puede enmascarar una Fragilidad
osmótica aumentada
◦ Membrana reticulocitos más resistente
 Hipocromía
◦ Aumento de la Resistencia osmótica

32.  Elección de Anticoagulante
 Tiempo
◦ Antes de dos horas tomada la muestra
◦ Antes de las 6 horas si ha sido conservada a 4°C Beorteck Inc.
 Preparación del Reactivo/ Pureza del Reactivo
◦ Aumento de la hemólisis
 pH solución de Trabajo
◦ (↓) de pH provoca un (↑) de la Fragilidad.
 Temperatura de Trabajo
◦ (↑) de Temperatura provoca un (↑) de la Fragilidad.
 Relación volumen de sangre/ solución hipotónica
Humalyzer 2000

33. Hemólisis espontánea desarrollada en sangre
incubada a 37° durante 48 horas

34.  Fundamento: mide el porcentaje de hemólisis espontánea que ocurre después de
incubar los eritrocitos durante 48 horas a 37°C, en condiciones estériles.
Incubación GR en su
propio suero
Esferocitos Hereditaria
la lisis se inicia antes y Esterilidad. Durante
progresa rápidamente 24-48 horas
Al añadir glucosa Lisis Muy pequeña y
disminuye la Lisis ocurre gradualmente

35. • Dos con glucosa y dos sin glucosa
4 tubos
• Incubar 48 horas a 37°C
Resuspender los • Medir hematocrito
eritrocitos • Centrifugar y obtener sobrenadante
Leer • 540 nm
espectrofotométric • Calcular el % de Hemólisis
amente
LT * (100- HTO) = % Hemolisis LT= Lectura del suero diluido
HTO= hematocrito a las 48 Horas
LO * X LO= lectura del Estándar
X= Dilución del estándar dividido por dilución del suero
Valores normales
Sin glucosa añadida: 0,2- 2,0 %
Con glucosa Añadida: 0,0 – 0,9 %

36. Membranopatías: Diagnóstico en el Laboratorio. Hospital Nacional Prof. A Posadas. Dr. René Leonor Crisp

37.  Anemia esferocitica hereditaria, producida por alteración en proteínas de
membrana  Cuadro clínico variable, importancia de diagnostico
 Resistencia osmótica y Autohemólisis  Técnicas sencillas, económicas y
de gran valor diagnóstico
Resistencia osmótica
o Capacidad de resistir la hemolisis frente a un medio Correlacionar
hipotónico resultados con
Autohemólisis otros exámenes
o Medición del grado de hemólisis espontánea de la de laboratorio
sangre incubada a 37°C duante 48 horas
 El uso de 12 tubos puede ser reemplazado por el uso de 6 tubos en el caso
de la resistencia osmótica, obteniéndose valores similares entre ambas
determinaciones

38. Universidad de Concepción
Facultad de Medicina
Carrera de Tecnología Médica
Mención Bioanálisis Clínico, Hematología y Banco de Sangre
Seminario Teórico-Práctico